Differential therapeutic effects of Crataegus aronia and simvastatin on the hepatocyte ultrastructure in hepatic steatosis / Efectos terapéuticos diferenciales de Crataegus aronia y simvastatina sobre la estructura del hepatocito en la esteatosis hepática

Complications of fat accumulation in liver, hepatic steatosis such as liver cirrhosis and liver failure are among the common public health problems. We sought to investigate the damage to the hepatocyte ultrastructure induced by high fat diets (HFD) and compared the therapeutic effects at the cellular level of two antioxidant and lipid lowering agents; Crataegus aronia extracts and simvastatin on hepatic steatosis. Rats were either fed with HFD (model group) or low fat diets (LFD) (control group) for 15 weeks before being sacrificed and therapeutic groups started the treatment with these agents after week 11 until the sacrifice day. Harvested liver tissues were examined using transmission electron microscopy (TEM) and liver homogenates were assayed for markers of anti-oxidative stress that are known to be modulated in liver injury. TEM examinations of the model group showed a profound damage to the hepatocytes compared to the control group as demonstrated by steatosis, damaged mitochondria and vaculated cytoplasm, disrupted rough and smooth endoplasmic reticulum and nuclear membrane, dilated intercellular space between hepatocytes, and alterations in lysosomes. In addition, HFD ameliorated the anti-oxidant glutathione (GSH) and augmented the oxidative stress TBARS biomarkers. Both Crataegus aronia and simvastatin significantly reduced lipids and TBARS, and treated damage to hepatic cells, but hepatocyte structures were differentially responded to these agents. However, only Crataegus aronia induced GSH (p=0.001). We conclude that HFD-induced hepatic steatosis caused a substantial damage to the hepatocyte's ultrastructures, and Crataegus aronia and simvastatin treatments differentially reversed hepatic injuries.

Las complicaciones de la acumulación de grasa en el hígado, la esteatosis hepática como la cirrosis hepática y la insuficiencia hepática se encuentran entre los problemas comunes de salud pública. Se intentó investigar el daño a la ultraestructura de los hepatocitos inducido por la dieta alta en grasas (DAG) y se compararon los efectos terapéuticos a nivel celular de dos antioxidantes y agentes hipolipemiantes; Extracto de Crataegus aronia y simvastatina sobre esteatosis hepática. Las ratas fueron alimentadas con DAG (grupo modelo) o dieta baja en grasa (DBG) (grupo control) durante 15 semanas antes de sacrificarse y los grupos terapéuticos comenzaron el tratamiento con estos agentes después de la semana 11 hasta el día del sacrificio. Se examinaron los tejidos hepáticos usando microscopía electrónica de transmisión (MET) y se analizaron homogeneizados de hígado para marcadores de estrés anti-oxidativo, que se sabe están modulados en la lesión hepática. Los exámenes MET del grupo DAG mostraron un grave daño de los hepatocitos en comparación con el grupo control, demostrado por esteatosis, daño mitocondrial y citoplasma vacío, retículo endoplásmico rugoso y liso y membrana nuclear, el espacio intercelular dilatado entre hepatocitos y alteraciones en los lisosomas. Además, DAG mejoró el anti-oxidante glutatión (GSH) y aumentó el estrés oxidativo TBARS biomarcadores. Tanto Crataegus aronia como simvastatina redujeron significativamente los lípidos y TBARS, trataron el daño a las células hepáticas, pero las estructuras de hepatocitos respondieron diferencialmente a estos agentes. Sin embargo, sólo Crataegus aronia indujo GSH (p = 0,001). Concluimos que la esteatosis hepática inducida por HFD causó un daño sustancial a la ultraestructura del hepatocito y los tratamientos de Crataegus aronia y simvastatina diferenciaron las lesiones hepáticas.

Effect of statins and aerobic physical exercise on liver function in dyslipidemic rats: morphometric study / Efecto de las estatinas y ejercicio físico aeróbico sobre la función hepática en ratas dislipémicas: estudio morfométrico

The present study was carried out to evaluate the effect of statins associated with physical exercise (PE) in liver cells in dyslipidemic rats through cariometry. The animals were divided into six groups: animals subjected to a hypercholesterolemic diet (HD), simvastatin, with (G1) and without (G2) physical exercise (PE); HD submitted (G3) or not (G4) to PE, and commercial food diet (F) with (G5) and without (G6) PE. Histological analysis of the liver was performed by staining the slides with hematoxylin and eosin. The cariometric study included measuring the major and minor diameters of the hepatocytes nuclei. The Shapiro-Wilk test was also performed. To determine the differences among the groups, the Kruskal-Wallis Test with Dunn's post-test were conducted. The significance level was set at 5 percent. No difference was found in the hepatocytes nuclei between G5 and G6. When these groups were related with G3 and G4, reduced nuclei were observed. There was no difference between G1 and G6. The comparison between G6 and G2 showed that the nuclei in G2 were smaller. No difference was detected between G5 and G1. Changes were observed in the nuclei shape in G2 in comparison to G1. Considering G2 and G3, a decrease in the size of nuclei was observed in G3. On the other hand, G2 showed changes in shape in the comparative analysis with G4. The size and shape of G1 nuclei were larger than G3 as well as changes in shape were observed when compared to G4. G4 showed smaller nuclei than G3. Therefore, F, associated or not with the practice of PE, does not alter the size and shape of the hepatocytes nuclei; HD combined with sedentarism influences changes in the morphometric parameters of hepatocytes; and the association of simvastatin and PE seems to protect the hepatocytes nuclei with regard to HD.

El presente estudio se realizó con la finalidad de evaluar el efecto de las estatinas asociadas con el ejercicio físico (PE) en las células del hígado, en ratas con dislipidemia a través de cariometría. Los animales fueron divididos en seis grupos: animales sometidos a una dieta hipocolesterolemiante (HD), simvastatina, con (G1) y sin (G2) ejercicio físico (PE); HD enviado (G3) o no (G4) para educación física y dieta comercial (F) con (G5) y sin (G6) PE. El análisis histológico del hígado se realizó por tinción de los portaobjetos con hematoxilina y eosina. El estudio cariométrico incluyó la medición de los diámetros mayor y menor de los núcleos de hepatocitos. Se realizó la prueba de Shapiro-Wilk. Para determinar las diferencias entre los grupos, se realizó la prueba de Kruskal-Wallis con Dunn. El nivel de significación se fijó en 5 por ciento. No se encontraron diferencias en los núcleos de hepatocitos entre G5 y G6. Los núcleos fueron observados cuando estos grupos estaban relacionados con G3 y G4. No hubo diferencia entre G1 y G6. La comparación entre G6 y G2 mostró que los núcleos en G2 eran más pequeñas. No se detectaron diferencias entre el G5 y G1. Se observaron cambios en la forma núcleos en G2 en comparación con G1. Considerando G2 y G3, se observó en G3 una disminución en el tamaño de los núcleos. En el análisis comparativo con G4, G2 mostró cambios en la forma . El tamaño y forma de los núcleos G1 eran más grandes que G3, así como cambios en la forma se observaron cuando se compararó con G4. G4 mostraron núcleos menores que G3. Por tanto, F, asociados o no a la práctica de PE, no altera el tamaño y la forma de los núcleos de hepatocitos; HD combinada con influencias sedentarismo cambios en los parámetros morfométricos de los hepatocitos, y la asociación de simvastatina y PE parece proteger a los hepatocitos con respecto a la HD.

Sinvastatina e lesão renal aguda isquêmica em ratos / Simvastatin and acute ischemic renal injury in rats

OBJETIVOS: O estudo visou verificar a ação renoprotetora da sinvastatina em modelo animal de isquemia/reperfusão por 30 minutos. MÉTODOS: A isquemia foi obtida por meio do clampeamento dos pedículos renais bilaterais por 30 minutos, seguida de reperfusão. Ratos Wistar, machos foram usados pesando entre 250-300g, distribuídos nos seguintes grupos: SHAM (controle, sem clampeamento renal); Isquemia (isquemia renal por 30 minutos); Isquemia+Estatina (sinvastatina 0,5 mg/kg, via oral durante três dias). A função renal (clearance de creatinina, método de Jaffé), a osmolalidade urinária, os peróxidos urinários foram avaliados. RESULTADOS: Os resultados mostraram que a estatina melhorou a função renal, a osmolalidade urinária e reduziu a excreção de PU. CONCLUSÃO: Em síntese, o estudo confirmou o efeito renoprotetor da estatina, com ação antioxidante de proteção renal.

OBJETIVOS: El estudio tuvo como objetivo verificar la acción renoprotectora de la simvastatina en modelo animal de isquemia/reperfusión por 30 minutos. MÉTODOS: La isquemia se obtuvo por medio del pinzamiento de los pedículos renales bilaterales por 30 minutos, seguida de la reperfusión. Fueron usadas ratas Wistar, machos que pesaban entre 250-300g, distribuidos en los siguientes grupos: SHAM (control, sin pinzamiento renal); Isquemia (isquemia renal por 30 minutos); Isquemia+Estatina (simvastatina 0,5 mg/kg, via oral durante tres días). Fueron evaluadas la función renal (clearance de creatinina, método de Jaffé), la osmolaridad urinaria y los peróxidos urinarios. RESULTADOS: Los resultados mostraron que la estatina mejoró la función renal, la osmolaridad urinaria y redujo la excreción de PU. CONCLUSIÓN: En síntesis, el estudio confirmó el efecto renoprotector de la estatina, con acción antioxidante de protección renal.

OBJECTIVES: The study aimed to verify the protective renal action of simvastatin in an animal model of ischemia / reperfusion for 30 minutes. METHODS: Ischemia was obtained by clamping bilateral renal pedicles for 30 minutes, followed by reperfusion. Male Wistar rats were used, weighing between 250-300g, distributed into the following groups: SHAM (control, without clamping renal), Ischemia (renal ischemia for 30 minutes), Ischemia + Statin (simvastatin 0.5 mg/kg, orally for three days). Renal function (creatinine clearance, Jaffé method), urinary osmolality, and urinary peroxides were evaluated. RESULTS: The results showed that the statin improved renal function, and reduced urinary osmolality along with excretion of PU. CONCLUSION: In summary, the study confirmed the protective renal effects of statins, with an antioxidant action that protects the kidney.

Avaliação da qualidade de cápsulas de sinvastatina de farmácias magistrais / Evaluación de la calidad de cápsulas de sinvastatina de farmacias magistrales / Assessment of the quality of simvastatin capsules from compounding pharmacies

OBJETIVO: Validar metodologia por cromatografia líquida de alta eficiência para determinação do teor de sinvastatina em cápsulas manipuladas. MÉTODOS: Foram avaliadas 18 amostras de cápsulas de sinvastatina 40 mg de farmácias magistrais de São Paulo, Guarulhos, São Bernardo do Campo e Campinas, SP, prescritas para pacientes fictícios. As análises basearam-se na Farmacopéia Brasileira e no método da cromatografia, otimizado e validado de acordo com as normas nacionais e internacionais, para os ensaios de identificação, e quantificação em cápsulas manipuladas. RESULTADOS: O peso médio das cápsulas variou de 70 mg a 316 mg; quatro amostras apresentaram variação de peso em desacordo com a especificação. O teor de sinvastatina nas cápsulas estava de acordo com a especificação em 11 amostras; em seis, esse teor variou entre 4 por cento e 87 por cento do valor declarado, descumprindo os requisitos de teor do princípio ativo; a determinação do teor e uniformidade de conteúdo de uma amostra não foram realizadas. No teste de uniformidade de conteúdo, 15 amostras apresentaram valores menores que 85 por cento e com os desvios-padrões relativos maiores que 6 por cento; três farmácias atendiam a especificação desse ensaio. No ensaio de dissolução, oito amostras apresentaram resultados insatisfatórios no primeiro estágio do ensaio e as demais apresentaram resultados inconclusivos. CONCLUSÕES: O método utilizado mostrou boa adequação para aplicação em controle de qualidade, revelando a falta de qualidade de cápsulas de sinvastatina produzidas por algumas farmácias de manipulação.

OBJETIVO: Validar metodología por cromatografía líquida de alta eficiencia para determinación del tenor de sinvastatina en cápsulas manipuladas. MÉTODOS: Fueron evaluadas 18 muestras de cápsulas de sinvastatina 40 mg de farmacias magistrales de Sao Paulo, Guarulhos, Sao Bernardo do Campo y Campinas, Sureste de Brasil, prescriptas para pacientes ficticios. Los análisis se basaron en la Farmacopéia Brasileña y en el método de la cromatografia, optimizado y validado de acuerdo con las normas nacionales e internacionales, para los ensayos de identificación, y cuantificación en cápsulas manipuladas. RESULTADOS: El peso promedio de las cápsulas variaron de 70 a 316 mg; cuatro muestras presentaron variación de peso en desacuerdo con la especificación. El tenor de sinvastatina en las cápsulas estaba de acuerdo con la especificación en 11 muestras; en seis, ese tenor varió entre 4% y 87% del valor declarado incumpliendo los requisitos de tenor del principio activo; la determinación del tenor y uniformidad de contenido de una muestra no fue realizada. En la prueba de uniformidad de contenido, 15 muestras presentaron valores menores que 85% y con los desvíos-patrones relativos mayores que 6%; tres farmacias atendían la especificación del ensayo. En el ensayo de disolución, ocho muestras presentaron resultados insatisfactorios en la primera fase del ensayo, y las demás presentaron resultados inconclusitos. CONCLUSIONES: El método utilizado mostró buena adecuación para aplicación en control de calidad, revelando la falta de calidad de cápsulas de sinvastatina producidas por algunas farmacias de manipulación.

Las estatinas afectan la viabilidad de líneas celulares de leucemia y linfoma humanas in vitro / Statins affect the viability of leukemia cell lines in vitro and human lymphoma

Se ha propuesto que las estatinas inducen apoptosis sobre células tumorales. Para probar dicha hipótesis, se analizó el efecto de las estatinas atorvastatina, fluvastatina, lovastatina, mevastatina, pravastatina y simvastatina en el rango de concentraciones de 1 pM hasta 100 µM, sobre la viabilidad de las líneas celulares humanas Jurkat E6.1, Jurkat D1.1 (Linfoma T) , Daudi (Linfoma B), U937 (leucemia monocítica) y HL-60 (leucemia promielomonocítica) in vitro en cultivos de 48 horas, analizados por la técnica de hidrolización del compuesto bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difenilltetrazolio (MTT). Lovastatina y mevastatina son los más potentes inductores de muerte celular independientemente del tipo celular (Ic 50 entre 12 y 50 µM). Para las otras estatinas se observan diferencias en el Ic50 según la línea celular atorvastatina (38,1 y 48,6 µM Jurkats, 55,3 µM Daudi y 100 µM para las otras líneas), pravastatina (25 µM HL-60, 55,6 y 60,7 µM Jurkats y > 100 µM Daudi y U937), simvastatina (25,1 µM Jurkat D1.1, 50,2 µM Jurkat E6.1, 45,2 µM Daudi y 51,3 µM HL-60, y > 100 µM U937) y para fluvastatina en todos los casos > 100 µM. La disminución de la viabilidad celular se revierte completamente cuando las células son incubadas con 10 µM mevalonato. Se concluye que la lovastatina y mevastatina son las más potentes inductoras de muerte seguida por atorvastatina, pravastatina y simvastatina cuyo efecto depende del tipo de línea celular y la fluvastatina no tiene efectos importantes en la viabilidad de las líneas celulares estudiadas

Statins have been proposed to induce apoptosis of tumor cells. In order to test this hypothesis, the effect of atorvastatin, fluvastatin, lovastatin, mevastatin, pravastatin, simvastatin on cell viability was assessed by in vitro culture for 48 hr, at concentrations ranging from 1 pM to 100 µM on human cell lines Jurkat E6.1, Jurkat D1.1 (T cell lymphoma), Daudi (B cell lymphoma), U937 (monocitic leukemia) and HL-60 (pro mielomonocitic leukemia) and analyzed the oxidation of (3-(4.5-Dimethylthiazol-2-yl)-2.5- diphenyltetrazolium bromide (MTT). Lovastatin and mevastatin are the most potent inductors of cell death independently of the cell type (Ic 50 between 12 and 50 µM). Differences in the Ic50 are observed depending on the cell line: atorvastatina (38.1 and 48.6 µM Jurkats, 55.3 µM Daudi y 100 µM for the others lines), pravastatin (25 µM HL-60, 55.6 y 60.7 µM Jurkats and > 100 µM Daudi and U937), simvastatin (25.1 µM Jurkat D1.1, 50.2 µM Jurkat E6.1, 45.2 µM Daudi and 51,3 µM HL-60, and > 100 µM U937) and for fluvastatin > 100 µM in all cases. The decrease in cell viability is reverted completely when the cells were incubated with 10 µM mevalonate. It is concluded that lovastatin and mevastatin are the most potent inductors of cell death followed by atorvastatin, pravastatin and simvastatin whose effect depends upon the cell type and fluvastatin does not have any important effects on cell viability on the cell lines studied