RESUMO
Abstract In the current context of emerging drug-resistant fungal pathogens such as Candida albicans and Candida parapsilosis, discovery of new antifungal agents is an urgent matter. This research aimed to evaluate the antifungal potential of 2-chloro-N-phenylacetamide against fluconazole-resistant clinical strains of C. albicans and C. parapsilosis. The antifungal activity of 2-chloro-N-phenylacetamide was evaluated in vitro by the determination of the minimum inhibitory concentration (MIC), minimum fungicidal concentration (MFC), inhibition of biofilm formation and its rupture, sorbitol and ergosterol assays, and association between this molecule and common antifungal drugs, amphotericin B and fluconazole. The test product inhibited all strains of C. albicans and C. parapsilosis, with a MIC ranging from 128 to 256 µg.mL-1, and a MFC of 512-1,024 µg.mL-1. It also inhibited up to 92% of biofilm formation and rupture of up to 87% of preformed biofilm. 2-chloro-N-phenylacetamide did not promote antifungal activity through binding to cellular membrane ergosterol nor it damages the fungal cell wall. Antagonism was observed when combining this substance with amphotericin B and fluconazole. The substance exhibited significant antifungal activity by inhibiting both planktonic cells and biofilm of fluconazole-resistant strains. Its combination with other antifungals should be avoided and its mechanism of action remains to be established.
Resumo No atual contexto de patógenos fúngicos resistentes emergentes tais como Candida albicans e Candida parapsilosis, a descoberta de novos agentes antifúngicos é uma questão urgente. Esta pesquisa teve como objetivo avaliar o potencial antifúngico da 2-cloro-N-fenilacetamida contra cepas clínicas de C. albicans e C. parapsilosis resistentes a fluconazol. A atividade antifúngica da substância foi avaliada in vitro através da determinação da concentração inibitória mínima (CIM), concentração fungicida mínima (CFM), ruptura e inibição da formação de biofilme, ensaios de sorbitol e ergosterol, e associação entre esta molécula e antifúngicos comuns, anfotericina B e fluconazol. O produto teste inibiu todas as cepas de C. albicans e C. parapsilosis, com uma CIM variando de 128 a 256 µg.mL-1, e uma CFM de 512-1,024 µg.mL-1. Também inibiu até 92% da formação de biofilme e causou a ruptura de até 87% de biofilme pré-formado. A 2-cloro-N-fenilacetamida não promoveu atividade antifúngica pela ligação ao ergosterol da membrana celular fúngica, tampouco danificou a parede celular. Antagonismo foi observado ao combinar esta substância com anfotericina B e fluconazol. A substância exibiu atividade antifúngica significativa ao inibir tanto as células planctônicas quanto o biofilme das cepas resistentes ao fluconazol. Sua combinação com outros antifúngicos deve ser evitada e seu mecanismo de ação deve ser estabelecido.
RESUMO
In the current context of emerging drug-resistant fungal pathogens such as Candida albicans and Candida parapsilosis, discovery of new antifungal agents is an urgent matter. This research aimed to evaluate the antifungal potential of 2-chloro-N-phenylacetamide against fluconazole-resistant clinical strains of C. albicans and C. parapsilosis. The antifungal activity of 2-chloro-N-phenylacetamide was evaluated in vitro by the determination of the minimum inhibitory concentration (MIC), minimum fungicidal concentration (MFC), inhibition of biofilm formation and its rupture, sorbitol and ergosterol assays, and association between this molecule and common antifungal drugs, amphotericin B and fluconazole. The test product inhibited all strains of C. albicans and C. parapsilosis, with a MIC ranging from 128 to 256 µg.mL-1, and a MFC of 512-1,024 µg.mL-1. It also inhibited up to 92% of biofilm formation and rupture of up to 87% of preformed biofilm. 2-chloro-N-phenylacetamide did not promote antifungal activity through binding to cellular membrane ergosterol nor it damages the fungal cell wall. Antagonism was observed when combining this substance with amphotericin B and fluconazole. The substance exhibited significant antifungal activity by inhibiting both planktonic cells and biofilm of fluconazole-resistant strains. Its combination with other antifungals should be avoided and its mechanism of action remains to be established.
No atual contexto de patógenos fúngicos resistentes emergentes tais como Candida albicans e Candida parapsilosis, a descoberta de novos agentes antifúngicos é uma questão urgente. Esta pesquisa teve como objetivo avaliar o potencial antifúngico da 2-cloro-N-fenilacetamida contra cepas clínicas de C. albicans e C. parapsilosis resistentes a fluconazol. A atividade antifúngica da substância foi avaliada in vitro através da determinação da concentração inibitória mínima (CIM), concentração fungicida mínima (CFM), ruptura e inibição da formação de biofilme, ensaios de sorbitol e ergosterol, e associação entre esta molécula e antifúngicos comuns, anfotericina B e fluconazol. O produto teste inibiu todas as cepas de C. albicans e C. parapsilosis, com uma CIM variando de 128 a 256 µg.mL-1, e uma CFM de 512-1,024 µg.mL-1. Também inibiu até 92% da formação de biofilme e causou a ruptura de até 87% de biofilme pré-formado. A 2-cloro-N-fenilacetamida não promoveu atividade antifúngica pela ligação ao ergosterol da membrana celular fúngica, tampouco danificou a parede celular. Antagonismo foi observado ao combinar esta substância com anfotericina B e fluconazol. A substância exibiu atividade antifúngica significativa ao inibir tanto as células planctônicas quanto o biofilme das cepas resistentes ao fluconazol. Sua combinação com outros antifúngicos deve ser evitada e seu mecanismo de ação deve ser estabelecido.
Assuntos
Técnicas In Vitro , Candida albicans , Fluconazol , Candida parapsilosis , AntifúngicosRESUMO
A total of 101 (20.0%) yeast samples were isolated from vaginal fluids of 504 non-hospitalized patients in Maringá, Paraná State, Brazil and Candida albicans was more frequent specie (93.1%) identified by seminested PCR method. All the isolates were susceptible to amphotericin B and nystatin, and 93.1% of them were susceptible to fluconazole. The acid proteinase, hemolytic and phospholipase activities were observed in 99.0, 90.0, and 88.0% of Candida spp., respectively. Around 67.0% of the strains had adherence indexes of 0.5 to 1.5 yeasts by Vero cell, and most of them showed a hydrophilic profile. Correlation studies indicated hydrophilic yeasts presented higher adherence index, proteinase, and phospholipase activities; and a positive correlation between all enzymes was also observed. In addition, the isolates with high hemolytic activity were less susceptible to fluconazole and amphotericin B. These results of Candida prevalence and antifungal susceptibility corroborate with literature's datas and correlation between virulence factors and MIC values suggest Candida isolates from vaginal fluid less susceptible to antifungal and with higher extracellular enzymes production can be more virulent to cause tissue damage.
Cento e uma leveduras foram isoladas de fluido vaginal de 504 pacientes não hospitalizados em Maringá, Estado do Paraná, Brasil e Candida albicans foi a espécie mais freqüente (93,1%) identificada pelo método seminested PCR. Todos os isolados foram susceptíveis a anfotericina B e a nistatina, e 93,1 % susceptíveis ao fluconazol. Atividades da proteinase ácida, hemolisina, e fosfolipase foram observadas em 99,0, 90,0 e 88,0% dos isolados de Candida spp., respectivamente. Aproximadamente 67,0% das cepas apresentaram índices de aderência de 0,5 a 1,5 leveduras por célula Vero, sendo que a maioria dos isolados mostrou um perfil hidrofílico. Estudos de correlação indicaram que leveduras hidrofílicas apresentaram maiores índices de aderência e atividade da proteinase e fosfolipase; e uma correlação positiva entre todas as enzimas, também, foi observada. Adicionalmente, os isolados com alta atividade hemolítica foram menos susceptíveis aos fluconazol e a anfotericina B. Esses resultados de prevalência de leveduras do gênero Candida e de susceptibilidade aos antifúngicos corroboram com dados da literatura; e as correlações observadas entre os fatores de virulência e valores de CIM sugerem que Candida spp. isoladas de fluido vaginal menos susceptíveis aos antifúngicos e com alta produção de enzimas extracelulares podem ser mais virulentas para causar dano tecidual.