Evaluación de la actividad antifúngica de extractos liquénicos e identificación de sus metabolitos / Evaluation of the fungicide activity from lichens extracts and identification their metabolites

Los líquenes son los hongos que establecen una relación simbiótica con un alga o cianobacteria. En esta simbiosis se producen por parte del hongo, una serie de metabolitos secundarios conocidos como sustancias liquénicas; las cuales presentan una marcada actividad antibiótica. En Cuba no se tienen antecedentes sobre estudios de metabolitos liquénicos por lo que se propone; evaluar el efecto fungicida de extractos liquénicos producidos por especies cubanas así como identificar sus metabolitos. Se emplearon líquenes de diferentes zonas del país (Parmotrema dilatatum, P. tinctorum, P. praesorediosum P. cristiferum, Ramalina americana, Cladonia ceratophylla y Cladonia portentosa spp. pacífica), a los cuales se les extrajo con acetona, las sustancias liquénicas almacenadas en el talo. Los extractos fueron probados contra los hongos fitopatógenos Rhizoctonia solani y Phythophtora nicotianae; por el método de envenenamiento del medio de cultivo agar papa dextrosa a concentraciones de: 0,01 por ciento; 0,03 por ciento y 0,07 por ciento. Se utilizó un control negativo de dimetilsufóxido al 0,07 por ciento y se determinaron los porcentajes de inhibición, cuyos resultados fueron analizados estadísticamente. Los metabolitos secundarios presentes en los extractos se identificaron por cromatografía de capa fina (TLC). Exceptuando el extracto liquénico de P. cristiferum, todos los demás mostraron más de un 50 por ciento de inhibición del crecimiento de ambos hongos a la concentración de 0,07 por ciento, mientras que a las restantes concentraciones los valores fueron variados con diferencias significativas con respecto al control. Se lograron identificar tres metabolitos liquénicos: metil 2‘-O- metilmicrofilinato, 4-O-Demetilmicrofilinico y el ácido ramaniloico.

Lichens are fungi that establish a symbiotic relationship with an alga or cyanobacterium. This symbiosis produced by the fungus, a series of secondary metabolites known as lichen substances; which show a strong antibiotic activity. In Cuba there is no background on the studies above lichen metabolites so it is proposed; evaluate the fungicidal activity of lichen extracts produced by Cuban species and to identify metabolites. Lichens from different areas of the country (Parmotrema dilatatum, P. tinctorum, P.praesorediosum, P. cristiferum, Ramalina americana, Cladonia ceratophylla and Cladonia portentosa spp. pacífica), to which it extracted with acetone, the lichen substances stored in tallus. The extracts were tested against the fungal pathogens Rhizoctonia solani and Phythophtora nicotianae; poisoning by the method of culture medium potato dextrose agar at concentrations of 0.01 percent; 0.03 percent and 0.07 percent. A negative control to 0.07 percent dimethylsulfoxide was used and the percentage of inhibition, the results were analyzed statistically determined. Secondary metabolites present in the extracts were identified by thin layer chromatography (TLC). Except P. cristiferum lichen extract, all others showed more than 50 percent growth inhibition of both fungi at concentration of 0.07 percent, while the remaining concentrations were varied values with significant differences from the control. Was made to identify three lichen metabolites metilmicrofilinato 2‘ methyl-O, 4-ODemetilmicrofilinico and ramaniloico acid.

Variability in Galactomannan detection by platelia Aspergillus EIA™ according to the Aspergillus species / Variabilidade na detecção de galactomanana pelo Platelia Aspergillus EIA® de acordo com a espécie de Aspergillus

Here we investigate the extent to which different Aspergillus species release galactomannan (GM) in vitro. Marked variability was observed in GM reactivity between and within Aspergillus species, with A. terreus strains showing the highest GM indexes. The in vivo significance of these findings remains to be determined.

O estudo objetivou investigar a liberação in vitro de galactomanana (GM) em distintas espécies patogênicas de fungos do gênero Aspergillus. Grande variabilidade foi detectada tanto intra quanto inter espécies, sendo as cepas da espécie A. terreus relacionadas aos maiores índices de GM detectados. O significado in vivo destes achados permanece em aberto, porém merece investigação.

The role of a commercial enzyme immuno assay antigen detection system for diagnosis of C. trachomatis in genital swab samples.

In the present pilot study, endocervical and urethral swabs collected from 100 patients attending sexually transmitted disease (STD) clinics and regional centre for STD in two referral hospitals in New Delhi were analyzed by enzyme immune assay (EIA), polymerase chain reaction (PCR) and direct fluorescent antibody (DFA) for detection of C. trachomatis. It was found that EIA could detect a very low number of cases (3/100) as against DFA (11/100) and PCR (9/100). Thus, in spite of the widespread availability, lower cost and ease of performance of the enzyme-linked-immunosorbent serologic assay, the present study highlights the need to employ sophisticated diagnostic tools like DFA and PCR for detection of Chlamydia trachomatis in STD patients.

Patogenia e inmunoterapia en la sinusitis alérgica fúngica (SAF) / Pathogeny and immunotherapy of allergic fungal sinusitis

Allergic fungal sinusitis is an atopic condition close related to fungus allergens that initiate a chronic inflammation dependent of the IgE system and LTCD4-TH2 cells whose cytokines and chemokines induced the clinical symptoms. Specific immunotherapy is recommended to avoid the recurrences and to improve the benefits of the surgical procedures of the affected sinuses. We suggest that Bipolaris sp Drechslera sp extracts must be included in the skin testing of the atopic patients suffering rhinosinusal symptoms as well as those who reveal intense response to fungal allergens in general.

Caracterização da glicoproteína de 70 kDa de Sporothrix schenckii e sua participação na regulação da resposta imune na esporotricose experimental / Characterization of the glycoprotein of 70 kDa of Sporothrix schenkii and its participation in the immune response in experimental sporotrichosis

A esporotricose é uma micose subcutânea de caráter crônico e de ampla distribuição mundial, cujo agente patogênico é o fungo dimórfico térmico, Sporothrix schenckii. Esse trabalho teve como principal objetivo a caracterização da atividade biológica da glicoproteína de 70 kDa (gp70), secretado pelas células leveduriformes de S. schenckii, visando à produção de anticorpos monoclonais e estudos de imunização passiva. Para atingir tais objetivos, foi produzido um hibridoma secretor de anticorpos monoclonais contra a fração de 70 kDa, denominado de AcMo P6E7. Através de ensaios de imunização passiva, foi observado que a administração do AcMo P6E7 em camundongos BALB/c foi capaz de modificar o curso da infecção experimental por S. schenckii, protegendo esses animais contra a infecção. Através de ensaios de imunofluorescência foi verificado que a gp70 está presente na superfície das células leveduriformes de S. schenckii e é uma adesina putativa para fibronectina e laminina...

Enzyme-linked immunosorbent assay for detection and quantification of Cryptococcus neoformans antigen

An enzyme-linked immunosorbent assay was standardized for the detection of cryptococcal antigen in serum and cerebrospinal fluid. The system was evaluated in clinical samples from patients infected by human immunodeficiency virus with and without previous cryptococcosis diagnosis. The evaluated system is highly sensitive and specific, and when it was compared with latex agglutination there were not significant differences. A standard curve with purified Cryptococcus neoformans antigen was settled down for the antigen quantification in positive samples

Obtención, caracterización de antígenos y evaluación de la tÚcnica de inmunotransferencia para la detección de candidiasis sistémica / Obtention, characterization of antigens and evaluation of the immunotransfer technique for the detection of systemic candidiasis

A culture media containing peptone, glucose, yeast extract and serum was evaluated to promote the development of the mycelium formation in Candida albicans and it was compared with the commercial media Tc 199. No significant difference was found between them. Somatic antigens characterized by PAGE-SDS were obtained from yeast and mycelial forms. Proteins reported as having high diagnostic value were expressed in both antigens. It was determined by immunotransference that the antigenic proteins predominating in the mycelium formation had molecular weights of 19, 21, 27 and 57 Kda. The immunotransference was standardized for detecting antibodies in patients with systemic candidiasis. 24 positive sera were evaluated by this technique and it was compared with the ELISA technique, which proved to be more sensitive and less specific. The most recognized proteins were those of 136 and 21 Kda and the complex from 42 to 45 Kda.

Biochemical analysis of the methylic antigen of Paracoccidioides brasiliensis

Yeast forms of five strains of Paracoccidioides brasiliensis (SN, 2, 18, 192 and JT-1) were cultured in a synthetic medium for obtaining methylic antigens. These antigens were lyophilized and studied for each strain, to determine their partial biochemical composition, through measurements of total lipid, protein and carbohydrate contents. Lipids of methylic antigens were purified and analysed for sterols, phospholipids, glycolipids, lipoproteins, and partial characterization of sterols. Significant differences were found among antigenic preparations derived from distinct P. brasiliensis strains, in relation to the quantitative determinations. On the other hand, sterol analysis revealed the presence of ergosterol, lanosterol and squalene in all samples. The diversity verified in the biochemical characteristics of antigens derived from different P. brasiliensis strains, confirm the need of using a pool of fungal samples in order to produce antigen preparations for serological procedures without hampering their sensitivity

Latex agglutination test for diagnosing cryptococcosis.

Fourteen cases of systemic cryptococcosis were admitted to Siriraj Hospital during 1987 to 1989. These included 5 male and 9 female patients aged 4-65 years. The most significant manifestation was cryptococcal meningitis and systemic lupus erythematosus was the most common underlying disease. Culture test for C. neoformans was negative after 28 days of treatment and the latex agglutination test decreased to 1+ agglutination within 49 days of treatment. The latex agglutination test may also be positive in other bacterial, fungal, connective tissue and malignant diseases. A definite diagnosis must, therefore, rely on conventional methods (finding organisms in specimens, culture for the organism). The latex agglutination test is valuable for monitoring patients (decreasing titer indicates a good response). The disease recurred in 4 cases. In cases of cryptococcal meningitis, lumbar puncture should periodically be performed to obtain cerebrospinal fluid for mycological study. In addition the patients should be observed for symptoms and signs.

Contribuiçäo ao conhecimento da composiçäo antigênica do Paracoccidioides brasiliensis: estudo de 5 amostras

Foram estudadas 5 amostras de Paracoccidioides brasiliensis. Para cada amostra do fungo foram imunizados 3 coelhos, obtendo-se 15 soros hiperimunes. Utilizando-se estes anti-soros e antígenos filtrados e lisados, obtidos separadamente de cada amostra, processaram-se estudos imunoquímicos através das reaçöes de dupla difusäo em gel de ágar, imunoeletroforese e imunoeletrosmoforese. Foi possível demonstrar diferenças quanto às respostas dos animais imunizados com a mesma amostra do fungo. Demonstrou-se, também, que as diferentes amostras do fungo apresentavam alguns componentes antigênicos comuns da espécie e componentes próprios de cada amostra. Discute-se a importância da utilizaçäo de antígenos complexos no estudo imunológico dos pacientes de paracoccidioidomicose

Utilizaçäo do Bouin e do Picrosirius para identificaçäo do Cryptococcus Neoformans nos tecidos humanos / The use of Bouin and Picrosirius to identify Cryptococcus neoformans in human tissue

O estudo de dois casos de criptococose humana mostra que a fixaçäo pelo líquido de Bouin conserva melhor que o formol as estruturas do fungo, permitindo sua fácil identificaçäo nos tecidos corados pela hematoxilina-eosina, evidenciando um corpo basófilo arredondado (núcleo) e envoltório (cápsula) que se mostra intensamente eosinófilo ou anfófilo. A técnica do picrosirius associada à microscopia de luz polarizada, permite observar anéis birrefringentes de brilho amarelado no envoltório, que säo vistos em praticamente todas as células fúngicas quando fixador utilizado era o Bouin

Criptococosis subaguda experimental en ratas Wistar

Se presentan los resultados obtenidos con la inoculación intracardíaca de 2x10**5 o 3x10**5 células de Cryptocococcus neofarmans en ratas Wistar. Se produjo una enfermedad subaguada y uniformemente mortal con compromiso de los pulmones, cerebro y timo en todos los casos. En menor proporción hubo ataque del hígado, bazo, pericardio y diafragma. El lapso de sobrevida y la rapidez con que la infección se diseminó hacia los órganos abdominales fueron influidos por la cantidad de Cryptococcus inoculados. La respuesta inmunitaria fue semejante a la observada en la enfermedad humana, con baja frecuencia de anticuerpos circulantes y elevado índice de antigenemias positivas. Las pruebas de hipersensibilidad retardada fueron positivos en el 78% y todos los órganos, menos el cerebro, mostraron una reacción inflamatoria productiva, con formación de granulomas de células epitelioides y gigantes que exhibieron una definida tendencia a bloquear la infección. Por el contrario, en el cerebro, la respuesta inflamatoria fue escasa, se produjeron lesiones seudoquísticas de crecimiento sostenido que condujeron finalmente a la muerte

Coaglutinación para la determinación de antígeno capsular de Cryptococcus neoformans en fluídos biológicos / Coagglutination for the detection of capsular antigen of Cryptococcus neoformans in body fluids

Se realizó un estudio comparativo de especificidad y sensibilidad entre las técnicas de coaglutinación (CoA) y aglutinación de látex, (A.L.), para la detección de antígeno capsular de Cryptococcus neoformans en fluidos orgánicos. Fueron estudiados en total 8 sueros de rata con criptococosis experimental, 23 sueros humanos y 19 muestras de L.C.R. Se observaron reacciones positivas en las 8 muestras de suero de rata, en 5 muestras de suero de enfermos de criptococosis y en 10 muestras de L.C.R., todas ellas pertenecientes a pacientes con criptococosis comprobada. Los resultados de ambas técnicas fueron en general coincidentes; 1 muestra de suero perteneciente a un caso de criptococosis por Cryptococcus albidus var. diffluens dio A.L. positiva y CoA negativa y un L.C.R. con criptococosis confirmada dio A.L. negativa y CoA positiva. La CoA parece un procedimiento útil para demostrar la presencia de antígeno capsular, es más económica y de ejecución más simple que la A.L.

A comparative study of the immunoantigenicity of eight Paracoccidioides brasiliensis isolates

Para se detectar diferenças imuno-antigênicas entre 8 amostras de P. brasiliensis isoladas de diferentes áreas endêmicas (Botucatu: Pb 1, 2 e 3; Säo Paulo: Pb: 18,192 e 265; Venezuela: Pb 9 e 73), estudaram-se: 1. A reatividade antigênica de cada amostra nas reaçöes de imunofluorescência indireta (II) e de imunodifusäo dupla em gel de ágar (ID) contra painel de 20 soros controles positivos para paracoccidioidomicose; 2. A capacidade de induzir resposta imune humoral (medida por imunodifusäo) e celular (medida pelo teste de coxim plantar) em camundongos imunizados com antígenos de cada amostra. Observamos: 1. As amostras Pb 265 e Pb 9 mostraram-se mais reativas na II; 2. Os antígenos das amostras Pb 192 e Pb 73 foram significativamente mais reativas na ID; 3. Estes dados demonstram diferenças de antigenicidade entre estas amostras; 4. A amostra Pb 18 mostrou baixo poder indutor de resposta imune celular e alta capacidade de induçäo de resposta imune humoral em camundongos imunizados, revelando dissociaçäo de sua imunogenicidade. Estas diferenças podem indicar a existência de cepas distintas do fungo ou refletir modificaçöes do parasita no hospedeiro ou durante seu cultivo

Puesta a punto de la técnica ELISA en coccidioidomicosis experimental / Standardization of ELISA technic in experimental coccidioidomycosis

Se presenta la estandarización de una reacción de E.L.I.S.A. para el diagnóstico serológico de la coccidioidomicosis. Fue empleado como antígeno un reactivo obtenido por lisado de la fase micelial y se utilizaron sueros de ratones Rockland normales e inoculados con Coccidioides immitis, Histoplasma capsulatum y Paracoccidioides brasiliensis en número de 24,14 y 8 respectivamente. Los resultados obtenidos permiten concluir que esta técnica es de realización sencilla, economiza antígeno, tiene una muy alta sensibilidad y aceptable especificidad. Se observaron reacciones cruzadas con sueros de ratones inoculados con Histoplasma capsulatum, con títulos relativamente bajos

Estudio biológico de un exoantigeno del Coccidioides immitis / Biological study of an exoantigens of Coccidioides immitis

Se presenta el estudio químico preliminar y de actividad biológica de un antígeno del Coccidioides immitis preparado mediante una modificación de la técnica de Standard y Kaufman. Su utilidad para pruebas de hipersensibilidad retardada fue demostrada en 28 ratas Wistar con coccidioidomicosis experimental de más de 40 días de evolución. La sensibilidad y especificidad para reacciones de inmunoprecipitación en medios gelosados fue estudiada por medio de la realización de pruebas de inmunodifusión y contrainmunoelectroforesis con sueros de 75 animales experimentalmente infectados con C. imitis y 48 sueros humanos de pacientes afectados por otras micosis profundas. Pudo comprobarse que este antígeno posee dos componentes protéicos, es útil tanto para intradermorreacciones como para pruebas serológicas, goza de una aceptable especificidad, el dosaje químico de proteínas totales guarda relación con su actividad biológica y el estudio de tres lotes del reactivo mostró resultados reproducibles

Relación entre los resultados de las precipitinas para Candida y algunos parametros clinicos / Relation between of the precipitins results to Candida and some clinical parameters

Se procesaron 268 sueros para detectar la presencia de anticuerpos y antígenos de Candida por inmunodifusión en gel de agar o contrainmunoelectroforesis. Cuarenta y dos sueros dieron resultados positivos: 37 para anticuerpos, 4 para antígeno y 1 para ambos. Fueron comparados los datos clínicos de los pacientes que tuvieron resultados positivos, con los correspondientes al total de los enfermos cuyos sueros fueron analizados. La significación estadística de las diferencias encontradas, fue determinada por el método de X2. Pudo observarse un aumento significativo de la incidencia de resultados positivos en pacientes de edad avanzada (71-80 años), en los materiales procedentes de hospitales oncológicos, de servicios de cirugía o de terapia intensiva. También fue elevada la frecuencia de resultados positivos en pacientes diabéticos, con neumopatías y con tumores sólidos. Por el contrario, la incidencia de serologías positivas fue significativamente más baja en los sueros procedentes de hospitales pediátricos, en niños de 4 a 10 años, en los portadores de leucemias y en los pacientes inmunosuprimidos