Fiebre hemorrágica Chapare: una enfermedad zoonótica emergente producto de la expansión agrícola / Chapare hemorrhagic fever: an emerging zoonotic disease as a result of agricultural expansion

Chapare hemorrhagic fever is an emerging zoonotic disease caused by a Mammarenavirus, of the Arenaviridae family, called Chapare virus. Its name refers to the region in which it first appeared. This virus is transmitted through direct contact with the excreta of wild rodents that interact with humans by invading homes close to a rural area and when humans enter the jungle for various reasons such as agriculture and tourism, among others. This virus has been classified by the World Health Organization as biosafety level IV, where pathogens with the highest risk for humans are included and for which there are no vaccines available. It produces a febrile and hemorrhagic picture that leads to death two weeks after the onset of symptoms. There is no vaccine or standardized treatment to treat this disease. The bio ecological aspects of the reservoir are not known, nor are the factors that could be related to the emergency in the area. An investigation should be carried out focused mainly on knowing the circulation of the Chapare virus in the Bolivian tropics, knowing the bioecological characteristics of the reservoir to produce and contribute with reliable information for the design of future surveillance and control strategies with community participation, as well as to strengthen laboratory diagnostic capacities in health establishments in the municipality of Villa Tunari.

La fiebre hemorrágica Chapare es una enfermedad zoonótica emergente causada por un Mammarenavirus de la familia Arenaviridae, llamado virus Chapare; su nombre se debe a la región en la cual apareció por primera vez. Este virus es transmitido por medio del contacto directo con las excretas de los roedores silvestres que interactúan con el ser humano, al invadir las viviendas que se encuentran cercanas al área silvestre y cuando el hombre incursiona a la selva por diversas razones, como las actividades de agricultura o turismo, entre otras. Este virus ha sido catalogado por la Organización Mundial de la Salud como nivel de bioseguridad IV, en el cual se ubican los patógenos de mayor riesgo para el ser humano y para los cuales no existen vacunas disponibles. Produce un cuadro febril y hemorrágico que lleva al fallecimiento a las dos semanas de haber iniciado los síntomas. No existe vacuna ni tratamiento estandarizado para tratar esta enfermedad, no se conocen los aspectos bioecológicos del reservorio y tampoco los factores que podrían estar relacionados con la emergencia en la zona. Se deberá realizar una investigación enfocada principalmente en conocer la circulación del virus Chapare en la región del trópico boliviano, conocer las características bioecológicas del reservorio con el propósito de producir y aportar con información fehaciente para el diseño de futuras estrategias de vigilancia y control con participación comunitaria, así como fortalecer las capacidades de diagnóstico de laboratorio en los establecimientos de salud del municipio de Villa Tunari.

Estabilidad de la vacuna Candid#1 para prevenir la fiebre hemorrágica Argentina / Stability of Candid#1 vaccine to prevent Argentine Hemorrhagic Fever

Candid#1 es la primera vacuna a virus vivo atenuado producida y registrada en Argentina. Se produce en el INEVH desde 2003 para prevenir la fiebre hemorrágica argentina y se obtiene mediante cosecha de sobrenadantes de cultivos de células diploides infectadas con una cepa atenuada del virus Junín, formulación y posterior liofilización. Su estabilidad es crucial para asegurar su efectividad. El objetivo de este trabajo fue evaluar la estabilidad de Candid#1 exponiéndola a distintas condiciones de temperatura y tiempo. Tres lotes producidos en 2003 fueron sometidos al siguiente esquema de almacenamiento: (a) vacuna reconstituida conservada entre 2 °C y 8 °C durante 8 días, (b) vacuna liofilizada conservada entre 2 °C y 8 °C durante 6 meses, y (c) vacuna liofilizada conservada entre -18 °C y -20 °C durante 10 años. La potencia fue evaluada en monocapa de células Vero bajo agar. Los resultados fueron: (a) Candid#1 reconstituida fue estable 8 días entre 2 °C y 8 °C, (b) Candid#1 liofilizada fue estable 2 meses entre 2 °C y 8 °C y (c) Candid#1 liofilizada fue estable 9 años entre -18 °C y -20 °C manteniendo todos sus atributos. Estos resultados permitieron establecer las siguientes condiciones de almacenamiento: reconstituida 12 horas entre 2 °C y 8 °C, liofilizada 30 días entre 2 °C y 8 °C y 9 años entre -18 °C y -20 °C. A la luz de estos resultados, se generaron cambios favorables en las condiciones de transporte, almacenamiento y distribución de la vacuna. Se implementó la instalación de freezers domésticos en centros estratégicamente distribuidos, permitiendo preservar stocks de vacuna y distribuir las dosis necesarias a vacunatorios.

Candid#1 is the first live attenuated vaccine produced and registered in Argentina. Produced since 2003 at the INEVH to prevent Argentine hemorrhagic fever, it is obtained by harvesting supernatants of diploid cells infected with an attenuated strain of Junin virus and subsequent lyophilization. The stability of this vaccine is crucial to ensure its effectiveness. This study was aimed to evaluate the stability of Candid#1 by exposing it to different time and temperature conditions. Three vaccine batches produced in 2003 were analysed according to the following storage scheme: (a) reconstituted vaccine at 2 °C to 8°C for 8 days; (b) lyophilized vaccine at 2 °C to 8 °C for 6 months; (c) lyophilized vaccine at -18 °C to -20 °C for 10 years. The potency was assessed in Vero cell monolayers under agar. The results were: (a) reconstituted vaccine was stable between 2 °C and 8 °C for 8 days, (b) lyophilized vaccine was stable between 2 °C and 8 °C for 2 months, and (c) lyophilized vaccine was stable 9 years between -18 °C and -20 °C, keeping all its properties. These results allowed us to establish the following storage conditions and expiration times for Candid#1: (a) reconstituted: 12 hours between 2 °C and 8 °C, (b) lyophilized: 30 days between 2 °C and 8 °C and (c) lyophilized: 9 years between -18 °C and -20 °C. Based on our results, favorable changes were made in the conditions of transport, storage and distribution of the vaccine. Domestic freezers in strategically located centers were installed, allowing the preservation of vaccine stocks for distribution to secondary vaccination centers.

Keeping track of hidden dangers - The short history of the Sabiá virus

Abstract Emerging infectious diseases are a global threat. In countries like Brazil, where biodiversity is high and public health conditions in terms of infrastructure and medical care are often precarious, emerging diseases are particularly worrisome. The lack of monitoring strategies to identify pathogens with the potential to cause outbreaks or epidemics is another problem in Brazil and other developing countries. In this article, we present the history of the Sabiá virus (SABV), a pathogen that was described in the 1990s in Brazil. Several aspects of the biology and ecology of the SABV remain unknown. The SABV has the potential to cause hemorrhagic fever in humans. To date, four cases of human infections have been reported worldwide; two were naturally acquired (both in Brazil), whereas the other two were linked to occupational exposure in the laboratory environment (one in Brazil and one in the USA). In this review, we summarize the basic biological and ecological characteristics of the SABV. This is the first work to gather all available data on the historical aspects involving the cases of SABV infection along with an update on its characteristic features.

Frequência de anticorposs para arenavirus em roedores silvestres capturados nas regiões centro-oeste, sudeste e sul do Brasil / Frequency of antibodies to arenavirus in wild rodents captured in the midwest, southeast and south regions of Brazil

As febres hemorrágicas virais causadas por arenavirus são zoonoses emergentes e graves . Os humanos são acidentalmente infectado s principalmente pela exposição da mucosa a aerossóis formados a partir de excretas de roedores reservatórios. Nos reservatórios, a presença de anticorpos pode indicar a circulação viral em uma população de uma região específica, e esse dado pode ser utili zado como indicador para investigações posteriores por meio de técnicas moleculares. Até o presente momento não se detectou a espécie reservatório do vírus Sabiá agente etiológico da Febre Hemorrágica Brasileira. Com a finalidade de ampliar as regiões de busca por espécies de roedores silvestres envolvidos na transmissão de arenavírus 2.243 amostras de sangue de roedores coletados entre 1998 e 2008 selecionadas aleatoriamente, foram analisadas por meio de ELISA para detecção de anticorpos IgG específicos pa ra arenavírus. Um tota l de 2230 amostras apresent aram resultados não reagente, 10 apresentaram resultados reagentes e 3 apresentaram resultados indeterminados. As espécies soropositivas foram de Necromys lasiurus 0,6% 6/1012), Calomys callosus, 0,3% 2/94) Akodon sp 0,3% (2/ 723). Obtivemos uma amostra positiva proveniente do Estado de Goiás, cinco do Estado do Mato Grosso do Sul e seis do Estado de São Paulo. Os municípios de Campo Alegre de Goiás, Bodoquena, Nuporanga e Mogi das Cruzes, podem futurame nte ser localidades definidas para ampliar as análises com novas expedições de campo e coleta de amostras biológicas, objetivando a pesquisa de evidencias da circulação viral.

Pinhal virus, a new arenavirus isolated from calomys tener in Brazil

Arenavirus Sabiá was originally isolated from a fatal human infection in Brazil, and after the occurrence of the second fatal human case in São Paulo state, epidemiologic and virologic studies were performed in the area where the patient lived, aiming at the identification of the Sabiá natural rodent reservoir. A broadly cross-reactive enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was used to screen for antibody-positive samples. Antibodies to arenavirus were detected in two of the 55 samples of Calomys tener, and from these results, samples of rodents were analyzed by a broad RT-PCR assay. RT-PCR amplification detected arenavirus sequences in five of the 55 C. tener samples, and sequencing showed that this virus is a distinct form of Sabiá virus. Thus, we describe here the evidence for the circulation of a new arenavirus in Brazil (proposed name Pinhal virus) and its genetic characterization compared to other arenaviruses. This study also suggests C. tener as a probable rodent reservoir for this virus and associates this new virus with the lineage C of New World arenaviruses. Although we have defined some characteristics of this virus, so far, there is no evidence of its involvement in human disease.

Isolamento no território federal do Amapá de um vírus nôvo relacionado sorològicamente aos agentes responsáveis pelas febres hemorrágicas da Argentina e da Bolívia / Isolation in the Federal Territory of Amapá of a new virus serologically related to the agents responsible for hemorrhagic fever in Argentina and Bolivia

Um nôvo membro do grupo Tacaribe, o vírus Amapari, tem sido inoculado repetidas vêzes das vísceras e sangue de Oryzomys e Neacomys, capturados em SN, Território Federal do Amapá. Um único isolamento foi obtido da urina das crias e de ectoparasitos dêsses animais. Os autores analisam algumas implicações ecológicas, bem como do ponto de vista de patogenicidade humana do referido agente. Referem, ainda, a importância da prova de FC’ como recurso de grande valor no isolamento dêste vírus, uma vez que os camundongos inoculados com os espécimens provenientes de animais infectados freqüentemente desenvolvem infecção inaparente.

A new member of the Tacaribe group, Amapari virus, has been repeatedly isolated from the viscera and blood of rodents belonging to the genera Oryzomys and Neacomys captured in the Serra do Navio region, Federal Territory of Amapá, Brazil. Single isolations were also obtained from the urine, young, and ectoparasites of these animals. The authors discuss certain aspects of the epizootiology of the above mentioned virus, with special reference to its pathogenicity in man. They also refer the importance of FC’ test as a tool of great value for isolation of this virus, since mice inoculated with specimens obtained from infected animals frequently develop inapparent infection.

Compuestos lisosomotrópicos inhibidores de la multiplicación del virus Junín / Lysosomotropic compounds inhibiting the multiplication of Junin virus

La multiplicación del virus Junín en células Vero fue inhibida por la acción de drogas lisosomotrópicas de carácter básico como cloruro de amonio, clorhidrato de procaína y clorofeniramina. El efecto inhibitorio del cloruro de amonio (15mM) es máximo cuando la droga es agregada junto con el inóculo viral o inmediatamente después de la infección, pero aun agregado 8 horas después de la infección produce una inhibición significativa del 97,8%. Estos resultados indicarían que la droga actúa fundamentalmente sobre una etapa temprana del ciclo de multiplicación viral. Por lo tanto, el mecanismo de entrada del virus Junín a la célula transcurriría a través de una endocitosis mediada por receptor

Patterns of transient expression of the arenavirus nucleocapsid protein gene in transfected cells

Los genes clonados de las proteínas de nucleocápside, N, de los arenavirus Junín y LCM (choriomeningitis linfocitaria) se insertaron en el vector de expresión pKG4 regulado por el promotor tardío del virus SV40. Cuando estas construcciones se utilizaron para transfectar las líneas celulares BHK-21 (fibroblastos de hamster lactante) y CV-1 (fibroblastos de riñón de mono verde africano) se observó la expresión transiente de un polipéptido de tamaño e inmunoreactividad indistinguible de la proteína N sintetizada durante una infección viral. El análisis por inmunofluorescencia reveló un patrón de distribución intracelular semejante al observado en células infectadas. Este patrón presentó variaciones desde una tinción citoplásmica difusa hasta gránulos citoplásmicos dispersos o concentrados en la zona perinuclear. La asociación de la proteína N con gránulos basófilos es semejante a la descripta en el efecto citópático causado por los arenavirus en las células infectadas, y podría relacionarse con las características fisicoquímicas de la proteina N, que contiene numerosas secuencias de aminoácidos básicos capaces de interactuar con ácidos ribonucleicos celulares

Inmonopatología inducida en la rata por virus Junín / Immunopathology induced in the rat by Junin virus

La infección de la rata de 10 días de vida por vía intracerebral con la cepa XJ del virus Junín, da lugar a un cuadro encefalítico con un 100% de mortalidad. Los presentes experimentos con suero antitimocito (SAT) demuestran la participación de la respuesta celular en la patología de este grupo etario. En cuanto al tratmiento con SAT, se utilizaron tres esquemas, siendo el más efectivo el que consistió en dosis desde el día -1 hasta el día +9, y en los días +12, +14 y +16, siendo el día 0 el de la inoculación de virus. Se alcanzó un 54% de sobrevida y un retraso en el día promedio de muerte de 12 días. No hubo diferencias en el título en cerebro de los animales tratados y los controles infectados. Las ratas de 2 días de vida al recibir el virus presentan persistencia. Cuando a estos animales se les transfirieron esplenocitos de ratas infectadas a los 10 días de edad se produjo una mortalidad de 40% en los receptores. Por lo tanto puede concluirse que: a) la encefalitis en el animal de 10 días de vida es de origen inmunológico y b) la rata de 10 días presenta una población linfocitaria que al ser transferida al animal persistente, provoca enfermedad y muerte

Variacion de parametros sanguineos en Calomys musculinus infectados con virus Junin, cepa XJCL3 / Blood parameters variation in Calomys musculinus infected with Junin virus, strain XJCL3

Se investigó la eolución virológica, hematológica y de los nveles de glucemia de Calomys musculinus neonatos infectados con virus Junin, cepa XJCi3 por vía intraperitoneal. Como controles se utilizaron animales sanos y cricétidos inoculados con un homogeneizado de cerebro de ratón blanco no infectado. Los cricétidos que recibieron virus Junin desarrollaron el cuadro característico de la infección aguda, muriendo entre 50-70%. Se aisló virus del cerebro de los animales infectados, durante la fase aguda de la enfemedad, a partir del 6ª día post infectión, siendo el título de alrededor de 10***8 DL50/ml a los 12 días post infección. A partir del día 11 pi. todos los animales infectados presentaron anticuerpos neutralizantes que perduiraron durante el estado crónico de la infección, iniciado después del día 24 pi. Del análisis de los valores hematolóficos obtendos durante la fase aguda, se concluye que aproximadamente el 40% de los animales inoculados presentan linfopenia y neutrofilia, mientras que en la fase crónica nose encontraron modificaciones. Los estudios de glucemia realizados durante la infección aguda demostraron hipoglucemia (X=3,52mmol/VI) en el lote de animales infectados respecto del grupo control (X = 6,15 mmol/l) con una p < 0,01)

Infeccíon intracerebral de ratones atímicos con una cepa atenuada de virus Junín / Intracerebral infection of athymic mice with an attenuated strain of junín virus

La infección del ratón lactante inmunocompetente eutímico (nu/+) con la cepa XJ del viru Junín provoca una encefalitis mortal debida a la respuesta inmune celular del huésped. Por el contrario, esa cepa inoculada en ratones atímicos (nu/nu) induce una infección persistente asintompatica. El objetivo del presente trabajo fue determinar el comportamiento de la cepa atenuada XJCl3 en el ratón nu/nu. Se inocularon por vía intracerebral (ic) 55 ratones lactantes nu/nu y 45 nu/+ con 10**3 UFP de la cepa XJCl3. Como controles se utilizaron 20 ratones nu/nu y 20 nu/+ infectar. Se observó en los ratones nu/nu y nu/+ una mortalidad similar (86%, respectivamente), mientras que no se observó mortalidad en los controles, que se mantuvieron en el mismo bioterio. Se detectaron altos títulos virales en cerebro y pulmón de los nu/nu infectados a los 7, 14, 21 y 70 días pi. Los títulos de virus en sangre fueron de 1 a 2 log más que en esos órganos. Estudios inmunohistoquímicos de cerebro mostraron antígeno viral intracitoplasmático en neuronas corticales a los 21 y 70 días pi. En el estudio histopatológico de pulmón de los nu/nu infectados se observó una neurmonbitis intersticial con focos de hemorragia a los 7 y 21 días pi. En cerebro y bazo no se detectó patología. Se muestra así que la cepa XJCl3 se comporta en el ratón lactante nu/nu en forma muy diferente a la cepa patógena XJ, siendo necesarios otros estudios para determinar cuáles son los mecanismos patogénicos involucrados

Protección contra la encefalitis producida en ratas por una cepa patógena de virus Junín por inoculación periférica con una cepa atenuada / Protection against encephalitis in rats caused by a pathogenic strain of the Junin virus, using peripheral inoculation of an attenuated strain

La rata recién nacida infectada con la cepa atenuada XJC13 del virus Junín por vía ip, no desarrolla enfermedad, mientras que los animales inoculados ic a los 8-12 días de vida con la cepa prototipo XJ presentan un 100% de mortalidad con signos neurológicos. El objetivo de este estudio fue lograr una protección en este modelo neurológico y tratar de determinar los mecanismos involucrados en la misma. El mayor porcentaje de sobrevida 75%, se obtuvo cuando a ratas recién nacidas se les administró la cepa XJC13 por vía ip y a los 12 días de edad se les desafió con la cepa XJ por vía ic. Para determinar los mecanismos involucrados en la protección se estudió en los animales protegidos: a) Título de virus en cerebro: fue de 3 log menos que los controle infectados solamente con XJ. Las ratas que recibieron sólo XJC13 presentaron bajos títulos. b) Título de anticuerpos neutralizantes: no fueron diferentes entre ambos grupos, lo que indica que no habría un efecto de respuesta secundaria en los animales protegidos. c) La administración de suero de ratas inoculadas con XJC13 y obtenido 10 días más tarde o de interferón alfa endógeno o oxógeno, no alteraron la mortalidad de animales que fueron infectados ic con XJ a los 12 días de vida. d) La transferencia de esplenocitos de ratas infectadas con la cepa atenuada 10 días antes, protegió contra el desafío con XJ, disminuyendo la mortalidad en un 55% con respecto al grupo control. Tratando los esplenocitos con suero antimocito más complement ...