Effects of Epstein-Barr virus on the development of dendritic cells derived from cord blood monocytes: an essential role for apoptosis

OBJECTIVE: Epstein-Barr virus (EBV) is a ubiquitous human γ-herpes virus, which can adapt and evade host immune defense. Dendritic cells (DCs) play a pivotal role in the initiation and maintenance of immune responses. This study investigated the effects of EBV on cord blood monocytes derived DCs (CBDC). METHODS: Monocytes were isolated from cord blood and cultured in medium containing recombinant IL-4 and GM-CSF to induce DCs development. B95-8 supernatant was added in monocytes culture medium for EBV infection at day 0. Phenotypic characterization of DCs, apoptotic cells, and mitochondrial membrane potential (MMP) were detected by flow cytometry. The morphology was observed by Hoechst 33258 staining and TUNEL staining, the expression of X-linked inhibitor of apoptosis protein (XIAP) was detected by Western blotting assay and caspase 3, 8 and 9 activity was measured. RESULTS: Phenotypic characterization of DCs was changed in EBV-treated group. Chromatin condensation and DNA fragmentation were observed in EBV induced CBDC apoptosis. In addition, caspase 3, caspase 8, and caspase 9 activation were enhanced in the EBV-treated group. This was accompanied by the loss of MMP. Furthermore, XIAP expression was down-regulated in the EBV-treated group and compared to mock-infected group. CONCLUSION: These results suggested that EBV could inhibit CBDC phenotypic differentiation, and induce CBDC apoptosis in caspase-dependent manner with involvement of the mitochondrial pathway. This might help EBV to evade host immune responses to establish persistent infection.

Apoptosis in Vero cells infected with Akabane, Aino and Chuzan virus

Akabane, Aino and Chuzan virus are arthropod-borne (arbo)viruses mainly associated with reproductive failures in cattle. We investigated apoptosis in Vero cells (C-1586) infected with Akabane, Aino and Chuzan virus. The fragmentation of chromosomal DNA was simultaneously detected with the progress of cytopathic effect from 48 hr to 72 hr post infection, depending on viruses. Although the treatment of cycloheximide blocked apoptosis in Vero cells infected with three viruses, actinomycin D did not prevent DNA oligomerization, thus indicating that de novo viral protein synthesis is critical for viral apoptosis. In addition, the activation of caspase-3 was also detected in Vero cells by indirect fluorescent assay. From the present results, it is of future interest whether apoptotic characteristics of these viruses are related to pathogenecity in vivo.

Isolation of the wild-type rubella virus in rabbit kidney cell line RC-IAL

O presente estudo descreve o isolamento e o crescimento do vírus selvagem da rubéola na linhagem celular RC-IAL. A susceptibilidade da linhagem celular RC-IAL (rim de coelho, Instituto Adolfo Lutz) para o vírus-padrão da rubéola RA 27/3 foi anteriormente descrito por nós(4). Amostras de 20 pacientes com suspeita de infecção por rubéola foram testadas por sorologia, isolamento viral e nested PCR. Os soros foram testados por Elisa para detecção de anticorpos reagentes para rubéola e nested PCR para detectar o RNA viral. As amostras clínicas de sangue, urina, fragmento de placenta e líquido amniótico foram inoculadas nas linhagens celulares RC-IAL (rim de coelho, Instituto Adolfo Lutz) e Sirc (córnea de coelho). O vírus da rubéola foi isolado das amostras clínicas de quatorze pacientes. O efeito citopático (ECP) foi examinado por microscopia de contraste de fase, e o RNA do vírus da rubéola foi amplificado por nested PCR. Os resultados obtidos mostram que a linhagem celular RC-IAL é um excelente substrato para isolamento do vírus da rubéola. Estes dados são importantes, pois poucas linhagens descritas na literatura apresentam efeito citopático que possibilite seu uso para isolar o vírus da rubéola de material clínico.

Candidíase e tricomoníase interferindo na variabilidade interobservadores no diagnóstico de ASCUS e SIL / Candidiasis and trichomoniasis interfering in interobserver variability in ASCUL and SIL diagnostic

Alterações citopáticas causadas pela Candida sp ou Trichomonas vaginalis são bem conhecidas em esfregaços cervicais. Atenção especial deve ser considerada nestes casos para evitar resultados falso-positivos. Objetivo deste estudo foi identificar os parâmetros morfológicos principais utilizados no diagnóstico de ASCUS ou SIL com Candida sp ou Trichomonas vaginalis. Foram selecionados 78 casos consecutivos com diagnóstico de ASCUS ou SIL que apresentavam infecção por Candida sp ou Trichomonas vaginalis. Estes casos foram revistos por três observadores em estudo cego e as alterações principais foram registradas. As alterações mais freqüentemente observadas foram: halo perinuclear e aumento do volume nuclear (100 por cento); hipercromasia discreta (70,8 por cento); binucleação (47,2 por cento); multinucleação (34,7 por cento); disqueratose (22,2 por cento). Outros achados citológicos como: células escamosas metaplásicas (84,7 por cento) e infiltrado leucocitário (61,5 por cento). Alterações citopáticas causadas pela infecção por Candida sp ou Trichomonas vaginalis podem reproduzir alguns critérios utilizados no diagnóstico de ASCUS ou SIL, e também simular algumas alterações morfológicas relacionadas ao HPV. Estas alterações celulares devem ser cuidadosamente consideradas, uma vez Palavras-chave ASCUS; SIL; Candida sp; Trichomonas vaginalis; secreção cervical.que podem ser observados resultados falso-positivos.