Diagnosing schistosomiasis: where are we?

In light of the World Health Organization's initiative to extend schistosomiasis morbidity and mortality control programs by including a disease elimination strategy in low endemic settings, this paper reviews diagnostic tools described during the last decades and provide an overview of ongoing efforts in making an efficient diagnostic tool available worldwide. A literature search on PubMed using the search criteria schistosomiasis and diagnosis within the period from 1978 to 2013 was carried out. Articles with abstract in English and that used laboratory techniques specifically developed for the detection of schistosomiasis in humans were included. Publications were categorized according to the methodology applied (parasitological, immunological, or molecular) and stage of development (in house development, limited field, or large scale field testing). The initial research generated 4,535 publications, of which only 643 met the inclusion criteria. The vast majority (537) of the publications focused on immunological techniques; 81 focused on parasitological diagnosis, and 25 focused on molecular diagnostic methods. Regarding the stage of development, 307 papers referred to in-house development, 202 referred to limited field tests, and 134 referred to large scale field testing. The data obtained show that promising new diagnostic tools, especially for Schistosoma antigen and deoxyribonucleic acid (DNA) detection, which are characterized by high sensitivity and specificity, are being developed. In combination with international funding initiatives these tools may result in a significant step forward in successful disease elimination and surveillance, which is to make efficient tests accessible and its large use self-sustainable for control programs in endemic countries.

Glomerulopatia esquistossomótica: comportamentos das alterações em camundongos infectados pelo schistosoma mansoni, antes e depois do tratamento com praziquantel / Schistosomal glomerulopathy: behavior changes in mice infected with schistosoma mansoni before and after treatment with praziquantel

A esquistossomose é um grave problema de saúde pública causado pelo helminto Schistosoma mansoni, sendo uma das endemias parasitárias de maior prevalência no Brasil. Apresenta diversas formas clínicas passíveis de serem reproduzidas em modelos experimentais. A lesão renal da glomerulopatia esquistossomótica está associada ao antígeno parasitário que, em consequência da presença de hipertensão portal e formação da circulação colateral, permitem que complexos imunes sejam depositados em glomérulos renais, desencadeando um processo inflamatório progressivo. O objetivo do trabalho foi avaliar o comportamento das alterações renais em camundongos infectados pelo S. mansoni, antes e após o tratamento com praziquantel, a fim de observar a resposta à presença dos complexos imunes e ao processo inflamatório formado na glomerulopatia. Foram organizados 3 grupos de camundongos BALB/c de ambos os sexos: grupo controle intacto (10 animais), grupo de reinfectados tratados (35 animais) e grupo de reinfectados não tratados (35 animais). A avaliação da estrutura renal foi analisada através da microscopia óptica, observando a histologia glomerular com as colorações de HE, PAS e PIFG, através da imunofluorescência marcando IgG e antígeno de Nash, e da microscopia eletrônica de transmissão com emprego da morfometria para avaliar áreas de depósito de complexos imunes. Foram analisadas, também, a carga parasitária, o peso do fígado, a presença dos vermes nas veias mesentéricas e a estrutura física dos órgãos. Os resultados demonstraram significativa redução da carga parasitária, do peso do fígado, das alterações estruturais nas observações histológicas e dos depósitos de complexos imunes em área e marcação no tecido renal, após tratamento com praziquantel. O tratamento específico reverteu os processos iniciais de agressão renal na glomerulopatia do modelo experimental, embora em alguns poucos camundongos, após a quimioterapia, a doença se manteve. Os achados deste trabalho reforçam a possibilidade de que o estado normal de estrutura renal pode ser restabelecido com o tratamento antiparasitário, desde que ministrado logo que se instala a glomerulopatia esquistossomótica clínica.

Schistosomiasis is an important public health problem due to infection with the helminth Schistosoma mansoni, which is also one the parasitic diseases listed as highly prevalent in Brazil. It presents several clinical forms, which are susceptible of experimental reproduction in mice. The lesion involving the kidney – Schistosomal glomerulopathy – is related to the presence of circulating parasite antigens, which can be attached to circulating antibodies to form antigen-antibody complexes with glomerular deposition. However, in the presence of portal hypertension and collateral circulation, these antigen complexes, can bypass macrophage clearance and reach the systemic circulation, thus coming to be deposited within the renal glomeruli, starting a progressive inflammatory process. The aim of this research was to evaluate renal changes in mice infected with S. mansoni, before and after treatment with praziquantel, through the presence of immune complexes in the glomeruli, and its correlation with the glomerular changes shown. BALB/c mice infected, infected and treated mice and non-infected groups were evaluated. Besides the evaluation of the renal changes by optical microscopy (HE, PAS, PIFG), immunofluorescence (IgG and Nash antigen) and transmission electron microscopy, a morphometric study of the areas containing immune complexes was also attempted. Besides parasite burden, liver weigh, number of worm pairs within mesenteric veins, and organs physical structure, were also evaluated.

Salmonelose septicêmica prolongada associada à esquistossomose: evolução do conhecimento e mecanismos imunopatogênicos: [revisão] / Schistosoma-associated chronic septicemic salmonellosis: evolution of knowledge and immunopathogenic mechanisms: [review]

A salmonelose septicêmica prolongada é uma entidade clinicamente individualizada caracterizada por febre prolongada com hepatoesplenomegalia que ocorre em indivíduos esquistossomóticos coinfectados com salmonelas. Os mecanismos imunopatogênicos são vários e dependem das peculiaridades das interações entre as salmonelas e várias espécies do gênero Schistosoma. As modificações ocasionadas no sistema imunitário pela infecção parasitária são responsáveis pela evolução do quadro da doença. Nesta revisão, analisamos a evolução do conhecimento sobre a entidade e discutimos os possíveis mecanismos imunofisiopatogênicos que concorrem para seu desenvolvimento.

Chronic septicemic salmonellosis is an individualized clinical entity characterized by prolonged fever with enlargement of the liver and spleen that occurs in Schistosoma-infected individuals who are coinfected with Salmonella. Several immunopathogenic mechanisms are involved, and they depend on the peculiarities of the interactions between Salmonella and various species of the genus Schistosoma. The modifications to the immune system that are caused by parasite infection are responsible for the evolution of the disease. In this review, we analyze the evolution of the knowledge on this entity and discuss the possible immuno-physiopathogenic mechanisms that contribute towards its development.

Inter-relação entre asma, atopia e infecções helmínticas / Interrelationship among asthma, atopy, and helminth infections

Este estudo teve como objetivo descrever as principais evidências encontradas na literatura acerca da inter-relação entre infecções helmínticas, atopia e asma. Foi feita uma revisão não sistemática da literatura. Encontramos numerosas publicações sobre o tema nas quais se verifica controvérsia quanto à capacidade das infecções por geohelmintos de inibir a reatividade ao teste alérgico cutâneo e os sintomas das doenças alérgicas. Por outro lado, estudos em pacientes infectados por Schistosoma spp., apesar de escassos, sugerem que estes helmintos são capazes de inibir a reatividade ao teste alérgico cutâneo e os sintomas de asma. Nos estudos in vitro, as evidências sugerem que as helmintíases inibem as respostas imunes mediadas por linfócitos T auxiliares do tipo 1 e 2, o que abre novas possibilidades terapêuticas para o tratamento de doenças do sistema imunológico.

To describe the principal evidence in the literature regarding the interrelationship among helminth infections, atopy, and asthma, a nonsystematic review of the literature was conducted. Among the publications on the subject, we found a number in which there was controversy regarding the capacity of geohelminth infections to inhibit responsiveness to skin allergy tests and to minimize the symptoms of allergic diseases. However, although small in number, studies of patients infected with Schistosoma spp. suggest that these helminths can inhibit the responsiveness to skin allergy testing and minimize asthma symptoms. Evidence provided by in vitro studies suggests that helminthiases inhibit T helper 1- and T helper 2-type immune responses. This opens new therapeutic possibilities for the treatment of immune system diseases.

Infecção esquistossomótica aguda: produção de citocinas em camundongos desnutridos e deficientes em iNOS / Acute S. mansoni infection: production of citocinas in undernourished and iNOS deficient mice

A esquistossomose está presente em 76 países, dentre eles o Brasil, atingindo 19 estados, estando Pernambuco entre os estados com maior número de casos. Em zonas endêmicas para o Schistosoma mansoni, observa-se, freqüentemente, uma sobreposição de subnutrição e infecção parasitária. Em estudos imunológicos em animais infectados pelo S. mansoni, ocorre um predomínio inicial da resposta Th1 que contribui para a formação do granuloma agudo, com a oviposição e sua deposição nos tecidos do hospedeiro. Essa resposta Th1 sofre uma substituição progressiva por uma resposta Th2. Diante disso, este trabalho teve como objetivo estudar a resposta imune celular em camundongos deficientes em iNOS, desnutridos e com infecção esquistossomótica aguda. Foram utilizados 200 animais subdivididos em C57BL/6 KO iNOS e C57BL/6 controles submetidos às dietas hipoprotéica ou controle e infectados com 30 cercárias de S. mansoni ou não infectados. A metodologia consistiu de análise da carga parasitária, da histopatologia e morfometria do fígado, cultura de células esplênicas para se obter os sobrenadantes e dosar as citocinas (IFN- , IL-4 e IL-10). Os resultados não revelaram diferenças quanto à recuperação dos vermes nos diferentes grupos. A análise histopatológica sugere que relacionado à variável deficiência em iNOS, esta atua inibindo a resposta inflamatória dos granulomas no início da infecção. Ainda em relação a variável deficiência de iNOS, no grupo KO EI, o único parâmetro morfométrico hepático mais elevado foi o volume dos granulomas em relação ao seu controle C57 EI, salientando que a ausência de óxido nítrico sugere um aumento da reação celular em torno dos ovos. O fator dieta não interfere na resposta inflamatória entre os animais deficientes em iNOS, em todos os tempos analisados. Em relação às citocinas de um modo geral, o fator deficiência em iNOS não aumentou a resposta Th2 (IL-4 e IL-10), e por isso a resposta Th1 (IFN-g) permaneceu maior nos grupos com deficiência em iNOS. No entanto, quando a dieta hipoprotéica é associada a essa deficiência ocorre uma diminuição da resposta Th2, no início da infecção. Portanto, o fator dieta e a deficiência em iNOS não parecem atuar sinergicamente e em algumas etapas sugere efeitos conflitantes.

Schistosome vaccines: a critical appraisal

An effective schistosome vaccine is a desirable control tool but progress towards that goal has been slow. Protective immunity has been difficult to demonstrate in humans, particularly children, so no routes to a vaccine have emerged from that source. The concept of concomitant immunity appeared to offer a paradigm for a vaccine operating against incoming larvae in the skin but did not yield the expected dividends. The mining of crude parasite extracts, the use of monoclonal antibodies and protein selection based on immunogenicity produced a panel of vaccine candidates, mostly of cytoplasmic origin. However, none of these performed well in independent rodent trials, but glutathione-S-transferease from Schistosoma haematobium is currently undergoing clinical trials as an anti-fecundity vaccine. The sequencing of the S. mansoni transcriptome and genome and the development of proteomic and microarray technologies has dramatically improved the possibilities for identifying novel vaccine candidates, particularly proteins secreted from or exposed at the surface of schistosomula and adult worms. These discoveries are leading to a new round of protein expression and protection experiments that will enable us to evaluate systematically all the major targets available for immune intervention. Only then will we know if schistosomes have an Achilles' heel.

CD4 T cells producing pro-inflammatory interleukin-17 mediate high pathology in schistosomiasis

In murine schistosomiasis mansoni, pronounced CD4 T cell-mediated, egg-induced, hepato-intestinal immunopathology and death, whether genetically determined or elicited experimentally, are associated with failure to down-regulate a net pro-inflammatory immune response. Important evidence contributing to this notion comes from the observation that immunization with schistosome egg antigens in CFA (SEA/CFA) causes low pathology C57BL/6 mice to develop an exacerbated form of disease and death in a cytokine milieu characterized by elevated interferon (IFN)-gamma levels. Since such a pro-inflammatory environment presumes a signaling pathway involving interleukin (IL)-12, the SEA/CFA immunization model was used to examine the extent of hepatic immunopathology in the absence of this cytokine. Surprisingly, the IL-12p40 subunit was an absolute requirement for the development of exacerbated disease, whereas the IL-12p35 subunit was not. Moreover, significantly elevated in vitro production of IL-17, but not of IFN-gamma, correlated with the high pathology, and neutralization of IL-17 in vivo resulted in a significant reduction of hepatic inflammation. Our findings clearly demonstrate the pathogenic potential of the novel IL-17-producing T cell subpopulation (ThIL-17), previously shown to mediate chronic inflammation in autoimmune disease. They also imply that IL-23, but not IL-12, is the critical signal necessary to support the pro-inflammatory ThIL-17 subset involved in high pathology schistosomiasis.

Preliminar evaluation of cytokines in the hepatitis C-schistosomiasis co-infection

Evaluation of hepatic fibrosis is usually performed by histopathological examination of biopsies. However, this is an invasive and potentially dangerous procedure. Several studies have proposed serum biological markers of hepatic fibrosis. This communication evaluates the use of serum cytokines as markers of hepatic fibrosis in hepatitis C, schistosomiasis, and co-infection.

Diagnóstico da infecção por trematódeos em moluscos através de Multiplex-PCR

A Fasciola hepatica têm despertado interesse médico e veterinário nos últimos anos, uma vez que, os casos de fasciolose humana e animal se tornam cada vez mais freqüentes em todo o mundo. Da mesma forma, o S. mansoni continua sendo estudado em decorrência de seu grande impacto sócio-econômico e na saúde pública. O diagnóstico clássico da infecção de S. mansoni em Biomphalaria bem como de F. hepatica em limneídeos é feito rotineiramente em laboratório através de exames dos moluscos após estímulo luminoso (exposição à luz artificial) para observação de cercárias, e/ou dissecando ou esmagando os moluscos, onde além de se observar cercárias também observa-se a presença de rédias (no caso de F. hepatica) e esporocistos, principalmente se estes estiverem localizados na glândula digestiva. Entretanto o encontro de larvas de helmintos em moluscos quase sempre traz resultados inconclusivos, uma vez que existe uma grande semelhança morfológica entre formas intramolusco de trematódeos. No presente trabalho, foi desenvolvido um diagnóstico molecular rápido e eficaz capaz de detectar F. hepatica e S. mansoni em seus hospedeiros intermediários

Com o intuito de detectar a infecção de S. mansoni e, simultaneamente identificar a espécie de Biomphalaria, utilizamos a Multiplex-PCR para amplificar a região ITS2 dos caramujos e a região do DNAmt desse trematódeo, utilizando simultanemente 6 iniciadores. Esse procedimento permitiu diagnosticar a infecção pelo S. mansoni e realizar a identificação espécie-específica do molusco parasitado, em uma única reação (artigo 1). Para a detectar a infecção de limneídeos por F. hepatica realizamos a Multiplex-PCR, utilizando 4 iniciadores em uma única reação, sob condições de alta estringência, permitindo a amplificação específica do DNA do trematódeo e do molusco (artigo 2). Este método foi altamente sensível, detectando a infecção por até um miracídio de F. hepatica no período pré-patente da infecção, não amplificando DNA de outros trematódeos. Além da especificidade, a Multiplex-PCR também permite o uso de um eficiente controle interno da reação pela amplificação do DNA do molusco. A via migratória e as alterações histopatológicas causadas por helmintos em moluscos têm sido estudadas através de técnicas histológicas

Diante das dificuldades encontradas em se identificar especificamente a presença de trematódeos em limneídeos através apenas da análise de cortes histológicos sob microscópio de campo claro, padronizamos um método sensível capaz de extrair DNA de cortes histológicos em lâminas que foram previamente fixados em formalina, embebidos em parafina e corados com HE (artigo 3). Essa metodologia permitiu detectar a presença de F. hepatica em L. viatrix através da Multiplex-PCR, que mostrou ser um método rápido, seguro e específico, altamente sensível capaz de amplificar DNA de tecidos fixados, a despeito da baixa quantidade de DNA e da degradação causada pelo processo de fixação, possibilitando detecção da presença da F. hepatica mesmo em lâminas onde não era possível observar estágios larvais desse trematódeo através da análise sob microscópio óptico. Dessa forma, as metodologias moleculares, propostas no presente trabalho, para identificação de trematódeos em seus hospedeiros intermediários contribuirão para um avanço em estudos epidemiológicos e de controle da fasciolose e da esquistossomose

Diagnóstico da infecção por trematódeos em moluscos através de Multiplex-PCR / Diagnosis of infection by trematodes in snails by Multiplex-PCR

A Fasciola hepatica têm despertado interesse médico e veterinário nos últimos anos, uma vez que, os casos de fasciolose humana e animal se tornam cada vez mais freqüentes em todo o mundo. Da mesma forma, o S. mansoni continua sendo estudado em decorrência de seu grande impacto sócio-econômico e na saúde pública. O diagnóstico clássico da infecção de S. mansoni em Biomphalaria bem como de F. hepatica em limneídeos é feito rotineiramente em laboratório através de exames dos moluscos após estímulo luminoso (exposição à luz artificial) para observação de cercárias, e/ou dissecando ou esmagando os moluscos, onde além de se observar cercárias também observa-se a presença de rédias (no caso de F. hepatica) e esporocistos, principalmente se estes estiverem localizados na glândula digestiva. Entretanto o encontro de larvas de helmintos em moluscos quase sempre traz resultados inconclusivos, uma vez que existe uma grande semelhança morfológica entre formas intramolusco de trematódeos. No presente trabalho, foi desenvolvido um diagnóstico molecular rápido e eficaz capaz de detectar F. hepatica e S. mansoni em seus hospedeiros intermediários.

Com o intuito de detectar a infecção de S. mansoni e, simultaneamente identificar a espécie de Biomphalaria, utilizamos a Multiplex-PCR para amplificar a região ITS2 dos caramujos e a região do DNAmt desse trematódeo, utilizando simultanemente 6 iniciadores. Esse procedimento permitiu diagnosticar a infecção pelo S. mansoni e realizar a identificação espécie-específica do molusco parasitado, em uma única reação (artigo 1). Para a detectar a infecção de limneídeos por F. hepatica realizamos a Multiplex-PCR, utilizando 4 iniciadores em uma única reação, sob condições de alta estringência, permitindo a amplificação específica do DNA do trematódeo e do molusco (artigo 2). Este método foi altamente sensível, detectando a infecção por até um miracídio de F. hepatica no período pré-patente da infecção, não amplificando DNA de outros trematódeos. Além da especificidade, a Multiplex-PCR também permite o uso de um eficiente controle interno da reação pela amplificação do DNA do molusco. A via migratória e as alterações histopatológicas causadas por helmintos em moluscos têm sido estudadas através de técnicas histológicas.

Diante das dificuldades encontradas em se identificar especificamente a presença de trematódeos em limneídeos através apenas da análise de cortes histológicos sob microscópio de campo claro, padronizamos um método sensível capaz de extrair DNA de cortes histológicos em lâminas que foram previamente fixados em formalina, embebidos em parafina e corados com HE (artigo 3). Essa metodologia permitiu detectar a presença de F. hepatica em L. viatrix através da Multiplex-PCR, que mostrou ser um método rápido, seguro e específico, altamente sensível capaz de amplificar DNA de tecidos fixados, a despeito da baixa quantidade de DNA e da degradação causada pelo processo de fixação, possibilitando detecção da presença da F. hepatica mesmo em lâminas onde não era possível observar estágios larvais desse trematódeo através da análise sob microscópio óptico. Dessa forma, as metodologias moleculares, propostas no presente trabalho, para identificação de trematódeos em seus hospedeiros intermediários contribuirão para um avanço em estudos epidemiológicos e de controle da fasciolose e da esquistossomose.

Immunolocalization of B7-z and CD28 costimulatory molecules in schistosomal soluble egg antigra -induced granulomatous hyporesponsiveness

In this work, the changes in expression of the costimulatory molecules [B7-2/CD28] were studied at 6, 8 and 16 weeks p.i. on immuno-inflammatory cells of livers in S. mansoni-infected and SEA-sensitized mice model by immunohistochemistry. Both B7-2 and CD28 were only expressed positively at 6 weeks p.i. in both groups with significantly lower cell counts in SEA group compared to infected control group. The distribution of B7-2 was concentrated towards the periphery of the granulomas, while that of CD28 was homogeneously distributed all through the granulomas. The present data showed that repeated i.v. injection of SEA before infection resulted in the drop of B7-2/CD28 to lower levels than its expected natural course. This drop may explain the decrease of host immunopathological reaction to S. mansoni eggs in the SEA group than infected control group

The identification and characterization of new immunogenic egg components: implications for evaluation and control of the immunopathogenic T cell response in schistosomiasis

In schistosomiasis, granuloma formation to parasite eggs signals the beginning of a chronic and potentially life-threatening disease. Granulomas are strictly mediated by CD4+ T helper (Th) cells specific for egg antigens; however, the number and identity of these T cell-sensitizing molecules are largely unknown. We have used monoclonal T cell reagents derived from egg-sensitized individuals as probes to track down, isolate and positively identify several egg antigens; this approach implicitly assures that the molecules of interest are T cell immunogens and, hence, potentially pathogenic. The best studied and most abundant egg component is the Sm-p40 antigen. Sm-p40 and its peptide 234-246 elicit a strikingly immunodominant Th-1-polarized response in C3H and CBA mice, which are H-2k strains characterized by severe egg-induced immunopathology. Two additional recently described T cell-sensitizing egg antigens are Schistosoma mansoni phosphoenolpyruvate carboxykinase (Sm-PEPCK) and thioredoxin peroxidase-1 (Sm-TPx-1). In contrast to Sm-p40, both of these molecules induce a more balanced Th-1/Th-2 response, and are relatively stronger antigens in C57BL/6 mice, which develop smaller egg granulomas. Importantly, Sm-p40 and Sm-PEPCK have demonstrated immunogenicity in humans. The findings in the murine model introduce the important notion that egg antigens can vary significantly in immunogenicity according to the host's genetic background. A better knowledge of the principal immunogenic egg components is necessary to determine whether the immune responses to certain antigens can serve as indicators or predictors of the form and severity of clinical disease, and to ascertain whether such responses can be manipulated for the purpose of reducing pathology

Diagnosis of early prepatent schistosomiasis by cystatin capture enzyme-linked immunosorbent assay

To test the efficacy of detecting anti-Schistosoma mansoni cysteine proteinase antibodies [CP Abs] by cystatin capture [CC] ELISA in the diagnosis of prepatent schistosomiasis [before egg passing], 253 schistosome negative individuals were selected and divided into two groups. The first comprised 118 children whose first water contact occurred in March and April 1999 [primarily infected] and the second included 135 individuals previously treated for schistosomiasis [re- infected]. All the individuals were followed up tri weekly by stool for detecting schistosome eggs and by serological tests for detecting antibodies against CP and anti-soluble egg antigens [SEA] by ELISA technique. CP seropositivity was detected in 92 from all the examined individuals, 38 out of them were primarily infected [PI] children and the rest [54] were re-infected patients. Anti-SEA IgM Abs were sought in 92 CP seropositive sera and seropositivity rate was lower in 38 PI children than 54 re-infected individuals. The anti-SEA seropositivity rate in PI children was 5% in pre-patent and 94.4% in post-patent. None of the 161 CP seronegative individuals passed eggs up to 12 weeks

Pathology of the spleen in hepatosplenic schistosomiasis. Morphometric evaluation and extracellular matrix changes

Histological, ultrastructural, morphometric and immunohistochemical data obtained from the study of spleens removed by splenectomy from 34 patients with advanced hepatosplenic schistosomiasis revealed that the main alterations were congestive dilatation of the venous sinuses and diffuse thickening of the splenic cords. Splenic cord thickening was due to an increase of its matrix components, especially type IV collagen and laminin, with the conspicuous absence of interstitial collagens, either of type I or type III. Deposition of interstitial collagens (types I and III) occurred in scattered, small focal areas of the red pulp, but in the outside of the walls of the venous sinuses, in lymph follicles, marginal zone, in the vicinity of fibrous trabeculae and in sidero-sclerotic nodules. However, fibrosis was not a prominent change in schistosomal splenomegaly and thus the designation "fibro-congestive splenomegaly" seems inadequate. Lymph follicles exhibited variable degrees of atrophy, hyperplasia and fibrous replacement, sometimes all of them seen in different follicles of the same spleen and even in the same examined section. Changes in white pulp did not seem to greatly contribute to increasing spleen size and weight, when compared to the much more significant red pulp enlargement

Antigenic stimulation is more efficient than LPS in inducing nitric oxide production by human mononuclear cells on the in vitro granuloma reaction in schistosomiasis

Nitric oxide (NO) is an extremely important and versatile messenger in biological systems. It has been identified as a cytotoxic factor in the immune system, presenting anti- or pro-inflammatory properties under different circumstances. In murine monocytes and macrophages, stimuli by cytokines or lipopolysaccharide (LPS) are necessary for inducing the immunologic isoform of the enzyme responsible for the high-output production of NO, nitric oxide synthase (iNOS). With respect to human cells, however, LPS seems not to stimulate NO production in the same way. Addressing this issue, we demonstrate here that peripheral blood mononuclear cells (PBMC) obtained from schistosomiasis-infected patients and cultivated with parasite antigens in the in vitro granuloma (IVG) reaction produced more nitrite in the absence of LPS. Thus, LPS-induced nitrite levels are easily detectable, although lower than those detected only with antigenic stimulation. Concomitant addition of LPS and L-N-arginine methyl ester (L-NAME) restored the ability to produce detectable levels of nitrite, which had been lost with L-NAME treatment. In addition, LPS caused a mild decrease of the IVG reaction and its association with L-NAME was responsible for reversal of the L-NAME-exacerbating effect on the IVG reaction. These results show that LPS alone is not as good an NO inducer in human cells as it is in rodent cells or cell lines. Moreover, they provide evidence for interactions between LPS and NO inhibitors that require further investigation.

Oral immunization of mice against schistosoma mansoni using drinking water from trays contraining biomphalaria Alexandria infected with schistosoma mansoni

Water collected from trays containing Biomphalaria alexandrina infected with Schistosoma mansoni at the time of cercariae shedding [SmISW] and trays containing clean, non-infected, B. Alexandrina [NISW] and underground water [UW], were filtered used as a drinking water for 3 groups of albino mice males. After 2 months, blood samples were collected from the 3 groups and serum was tested for anti-cercarial IgG, then mice were infected with 150 S. Mansoni cercariae. 8 weeks after infection, mice were perfused and adult S. mansoni worms were counted. Anti-cercarial IgG was positive in 23 out of the 28 samples collected from mice drinking SmISW and only in 2 out of the 21 samples collected from mice drinking NISW, while all samples collected from mice drinking UW were negative for anti-cercarial IgG [X2 = 45.897, P <0.001]