Associação de alterações anatomopatológicas com o Helicobacter spp. por meio de análise imuno-histoquímica em estômagos de leitões / Association of anatomopathological changes with the Helicobacter spp. through immunohistochemical analysis in piglets stomachs

O objetivo deste trabalho foi relacionar os achados anatomopatológicos das lesões gástricas subclínicas de ocorrência natural em leitões com a presença, ou não, de Helicobacter spp. por meio da imuno-histoquímica. Foram utilizados 48 leitões de linhagem genética comercial. Os animais foram adquiridos em uma granja comercial, com peso médio de 34 Kg e idade média de 79 dias; após o abate, seus estômagos foram coletados e avaliados. Avaliações histopatológicas e imuno-histoquímicas foram realizadas em amostras das regiões anatômicas aglandular e glandular. Macroscopicamente, 34 (70,83%) leitões apresentaram lesões na região aglandular, enquanto que em 14 animais (29,17%) não foram encontradas alterações nesta região. Dos estômagos com lesão, 14 foram classificados como grau 1, seis como grau 2 e 14 como grau 3. Microscopicamente, 44 amostras (91,66%) apresentaram paraqueratose. Deste total, 22 apresentaram a forma discreta, 20 a moderada e dois a acentuada. Na avaliação macroscópica da porção glandular, 41 (85,4%) animais apresentaram alteração em pelo menos uma das três regiões, e em somente sete (14,6%) não foram encontradas lesões em nenhuma delas. Em 14 deles, houve aumento da atividade mucípara, em dois, houve erosão e, em cinco, hiperemia. As lesões na região glandular do estômago foram mais extensas no antro e no cárdia, seguidas do fundo. Em relação à análise imuno-histoquímica, 21 (43,8%) amostras tiveram resultados negativos em todas as regiões, e 24 (50%) foram positivas em pelo menos uma delas, sendo que nenhuma foi positiva em todas. Os achados anatomopatológicos demonstraram relação estatística com a bactéria e, sua imunomarcação não associada à lesão em certas regiões gástricas, demonstra seu caráter saprofítico e oportunista.

The aim of this study was to relate the anatomopathological findings of naturally occurring subclinical gastric lesions in piglets, with or without Helicobacter spp. through immunohistochemistry. Forty-eight piglets of commercial genetic lineage were used. The animals were acquired in a commercial farm, with an average weight of 34 kg and an average age of 79 days, and after slaughter, their stomachs were collected and evaluated. Samples from the glandular and aglandular anatomical regions were evaluated. Macroscopically, 34 (70.83%) samples had lesions on aglandular region, while 14 (29.17%) nothing had. Of the injured stomachs, 14 were classified as grade 1, six as grade 2 and 14 as grade 3. Microscopically, 44 samples (91.66%) showed parakeratosis. Of these, 22 showed a discreet manner, 20 moderate and two severe. In the glandular region, in 41 (85.4%) samples there was a change in at least one of the three regions, and only seven animals (14.6%) showed no change in any of the three. Fourteen samples showed increased muciparous activity, two showed erosion and five hyperemia. The lesions were higher in antral regions and cardic, followed the fundus. In relation to immunohistochemistry, 21(43.8%) samples were negative in all areas, 24 (50%) were positive in at least one, and none were positive in all. The anatomopathological findings showed a statistical relationship with the bacteria, and its immunostaining, not associated with gastric lesions in certain regions, demonstrates its saprophytic and opportunistic character.

Detecção de Helicobacter spp. em amostras de mucosa gástrica de cães assintomáticos e alterações histológicas associadas / Identification of Helicobacter spp. in gastric mucosa samples asymptomatic dogs and associate histological alterations

O presente estudo teve por objetivo correlacionar o número de bactérias espiraladas e as alterações histológicas da mucosa gástrica em cães de vida livre. Foram analisadas biopsias gástricas endoscópicas de 28 cães assintomáticos. Para análise histológica, foi realizada avaliação qualitativa, onde foram atribuídos escores de 0 a 3, considerando a densidade de bactérias espiraladas por campo (400x), a presença de células inflamatórias, o número de agregados linfoides e a existência de alteração degenerativa glandular. A prevalência de Helicobacter spp, identificado pela histologia (Carbol-Fucscina) e positividade no teste da urease, foi de 100%. Dos 28 cães, 18 (64,3%) receberam escore 3 e 10 (35,7%) o escore 2 para a densidade de bactérias. O infiltrado inflamatório predominantemente linfoplasmocitário foi de grau leve (escore 1) em 17 (60,7%) cães e moderado em 6 (21,4%) cães. Dos 28 cães, 14 (50%) receberam escore 1 para degeneração glandular e 9 (32,1%), o escore 0. As regiões do corpo e antro apresentaram maior número de resultados positivos à histopatologia. Apesar do número elevado de bactérias encontrado nas amostras analisadas, as alterações histológicas foram classificadas como de grau leve na maioria dos animais. A presença do Helicobacter spp. não parece estar relacionado com sintomatologia de gastrite.

The objective of the present study was to establish a relationship between the number of spiral bacteria and gastric mucosa histological alterations in mongrel dogs. Endoscopic biopsies of 28 asymptomatic dogs were analyzed. Qualitative evaluation was performed for histological analysis, in which scores from 0 to 3 were attributed, considering the density of spiral bacteria per field (400x), presence of inflammatory cells, number of lymphoid aggregates and existence of gland degenerative alteration. The prevalence of Helicobacter spp., identified by hystological technique (Carbol – fuchsine) and positive urease test, was100%. Eighteen (64.3%) of the 28 dogs presented score 3, and 10 (35.7%0), score 2 for the density of bacteria. The inflammatory infiltrate, predominantly lymphocytic, was slight (score 1) in 17dogs (60.7%) and moderate in 6 (21.4%). From the 28 dogs, 14 (50%) scored 1 for glandular degeneration and 9 (32.1%) scored 0. The body and antrum regions presented the highest positive result to histopathology. Despite the high number of bacteria found in the analyzed samples, the histological alterations have been classified as slight in most of the animals. The presence of Helicobacter spp. apparently does not produces gastritis symptoms.

Relación entre el grado de contacto perro-propietario y la carga de helicobacterias en mucosa gástrica canina / Relationship between grade of contact dog-owner and the helicobacterias on gastric mucosa

Las helicobacterias son bacterias Gram negativas de forma curva o helicoidal ampliamente distribuidas en estómago de humanos y de diversos animales, ya sea como microbiota normal o causante de patologías gastrointestinales. El objetivo del trabajo consistió en determinar la relación entre la presencia y carga de helicobacterias en caninos, con el grado de contacto con sus propietarios positivos a estas bacterias utilizando el test rápido de ureasa. Se utilizó una muestra de 31 perros sanos de la ciudad de Chillán, Chile, de los cuales por vía endoscópica se obtuvo biopsias de mucosa de fundus gástrico, los cuales se sometieron al test rápido de ureasa. Los propietarios de estos caninos eran todos positivos a helicobacterias, lo que fue determinado a través del mismo test. El noventa y siete porciento de las biopsias caninas fueron positivas a helicobacterias. El treinta y nueve por ciento de las biopsias que reaccionó positivamente al test de ureasa en menor tiempo, pertenecían a caninos cuyo grado de contacto con sus propietarios era muy cercano. Los resultados sugieren que las altas cargas de helicobacterias encontradas en los caninos podrían deberse al mayor grado de contacto que tienen estos animales con sus propietarios. Por ello, sería importante determinar, en futuros estudios, si estas mascotas pueden ser reservorio o fuente de transmisión para las personas o viceversa y las especies bacterianas involucradas.

Helicobacter, Gram negative bacterias are curved or helicoidal microorganisms, widely spread in the stomach of humans and several animals, found as normal microbiota or causing of gastrointestinal pathologies. The objective of the work consisted of determining the relation between the presence and loads of helicobacterias in canine, with the degree of contact with its positive owners proprietors to these bacteria using rapid urease test. A sample of 31 healthy dogs of the city of Chillán, Chile were used, from which gastric fungus biopsies were obtained by endoscopy. These biopsies were put under the Rapid Urease Test. The owner of these canines were all positive for helicobacteria, determined by means of the same test. Ninety sevent percent of the canine biopsies were positive for helicobacteria. Thirty nine percent of the biopsies with the fastest positive reaction to the urease test belonged to canines with a high contact grade to their owners. The results suggest that the high charges of helicobacteria found in canines could be because of the higher contact grade of these animals with their owner. It would be important then to determine in future studies, whether if these pets could be a reserve or a transmission source for people, or viceverse, and the bacterial species involved.

Actualizaciones en el patógeno emergente Helicobacter pullorum asociado a industria avícola / Updatings in emerging pathogen Helicobacter pullorum associated with the poultry industry

Numerosas especies de Helicobacter se han aislado en el estómago, tracto intestinal e hígado en varios mamíferos y algunas especies aviares. Además el DNA del Helicobacter se ha detectado en muestras de líquido biliar e hígado procedentes de humanos. En los primeros estudios se pensó que la Helicobacter spp. fenotípicamente estaba asociada al género Campylobacter. La primera especie de Helicobacter que fue aislada y rigurosamente estudiada en humanos fue el Helicobacter pilory; posteriormente se identificaron otras especies, entre la que destaca el aislamiento del Helicobacter pullorum en aves. Originalmente el Helicobacter pullorum fue descubierto y aislado por Stanley y col (Stanley et al. 1994), en las heces fecales e hígados congestionados (hepatitis viral) de pollos de carne y gallinas ponedoras, respectivamente. Esta especie de Helicobacter es una bacteria gram negativa, ligeramente curvo no esporulado, con flagelo monopolar no encapsulado. Estudios realizados han sugerido que el Helicobacter pullorum representa un potencial zoonótico en la patogénesis de cuadros entéricos asociados a diarrea y a enfermedades crónicas hepáticas como el carcinoma hepatocelular (HCC) en humanos. El consumo de carne y otros productos de origen avícola constituye un medio de infección de Helicobacter pullorum en humanos, a través de la contaminación de la carcasa, como previamente se reportó para especies de Campylobacter y Aracobacter. En conclusión, el Helicobacter pullorum en pollos se ha aislado en pocas ocasiones, utilizando técnicas moleculares tales como PCR (reacción de cadena de polimerasa) y otras. Por lo tanto, no existe un método válido de estudio recomendado epidemiológicamente.

Numerous Helicobacter species have been isolated in the stomach, intestinal tract and liver of several mammals and some avian species. Furthermore Helicobacter DNA has been detected in samples of bile liquid and liver from humans. In the first studies it was believed that Helicobacter spp. was phenotipically associated with genus Campylobacter. The first Helicobacter species to be isolated and rigorously studied in humans was the Helicobacter pylori, other species were subsequently identified, among which we may highlight the isolation of the Helicobacter pullorum in chickens. Originally the Helicobacter pullorum, was discovered and isolated by Stanley (Stanley et al. 1994), in feces and congested livers ( viral hepatitis) of broilers and layer hens respectively. This species of Helicobacter is a gram-negative bacteria, slightly curved non-spurolated, with monopolar non-sheathed flagella. Studies performed have suggested that Helicobacter pullorum represents a zoonotic potential in the pathogenesis of enteric symptoms associated with diarrhea and chronic disease of the liver, such as the hepatocellular carcinoma (HCC) in humans. Consumption of meat and other poultry origin products constitute infection media of Helicobacter pullorum in humans, through contamination of the carcass as previously reported for Campylobacter and Aracobacter species. In conclusion, the Helicobacter pullorum in chickens has been isolated in few occasions, using molecular techniques such as the PCR (Polymerase Chain Reaction) and others. Therefore, there does not exist a valid epidemiologically recommended method of study.

Prevalência de helicobactérias e alterações na mucosa gástrica de cães saudáveis / Prevalence of helicobacters and alterations in gastric mucosa of healthy dogs

Prevalence, distribution and density of gastric helicobacter colonization were determined in 50 healthy dogs, characterizing the macroscopic and microcospic aspects of their mucosa. Helicobacter prevalence was 96 percent, with greater distribution in the gastric fundus and body. Although the presence of macroscopic alterations was high (58 percent), it was characterized as mild due to the predominance of less severe ones (65.5 percent). High prevalence of mostly monoclear cell infriltate (64.7 percent) was noted. Association between the presence of helicobacter and macro and microscopic alterations was not observed

Determinación de la presencia de Helicobacter spp. en perros, mediante biopsia gástrica obtenida por endoscopía / Determination of Helicobacter spp. by gastric biopsy obtained by endoscopy in dogs

Con el objeto de determinar la frecuencia de presentación de Helicobacter spp. se realizó un estudio en caninos de Valdivia, Chile, a través de biopsia gástrica de las zonas fúndica y pilórica obtenida por endoscopía y analizadas mediante las pruebas de ureasa e histología. Los resultados indican que la bacteria Helicobacter spp. fue detectada en todos los perros. La prueba de ureasa dio resultados positivos a Helicobacter en el 86,2 por ciento de las muestras de la zona fúndica y en el 75,9 por ciento del antro pilórico. El examen histológico reveló la bacteria en todas las muestras fúndicas y en el 92 por ciento de las muestras del antro pilórico. En la zona fúndica las frecuencias obtenidas entre la prueba de ureasa e histología resultaron estadísticamente significativas, a diferencia de lo que se obtuvo en la zona del antro pilórico. La bacteria fue encontrada en perros de todas las edades de ambos sexos. Las muestras que resultaron positivas a la prueba de ureasa, reaccionaron principalmente entre las 3 y 24 horas de incubación. En el examen histológico se determinó el grado de infección por el Helicobacter spp., siendo las muestras clasificadas mayormente en los grados moderado a marcado, ubicándose sobre la superfiscie de la mucosa, en las fosas gástricas, glándulas gástricas y en las células parietales.

A study was carried out in order to determinate Helicobacter spp. in dogs of Valdivia city, Chile. Gastric mucosal biopsy from fundus and pyloric antrum were obtained by endoscopy and analized by urease test and histology.Stomach endoscopic appearance, frecuency presentation of Helicobacter spp. according to sex and age, time reaction to urease test, degree of infection and distribution Helicobacter spp. were analized. Results indicated that Helicobacter spp. was detected in all dogs. The urease test was positive in 86.2% of the fundus samples and in 75.9% of the pyloric antrum samples. Histological examination revealed the bacterium in all of the fundus samples and in 92% of the antrum samples. In fundus samples the frecuency obtained by urease test and histology resulted statistically significant, different to the results obtained in the antrum region. Helicobacter spp. was found in young and old animals of both sexes. Samples that gave positive results in the urease test reacted mainly between 3 to 24 hours post incubated. Histological examination to determinate degree of infection to Helicobacter spp., were classified moderate to marked degree and detected on the mucosal surface, gastric pits, gastric glands and parietal cells.

Helicobacter pylori y los linfomas MALT del estomago / Helicobacter pylori and linfomas MALT of the stomach

Los linfomas MALT del estómago son tumores derivados del MALT que como resultado de la infección por Helicobacter pylori se desarrolla en la mucosa gástrica. El desarrollo de los linfomas del MALT del estómago es un proceso secuencial, en donde la infección por Helicobacter pylori inicia una reacción linfoide en la mucosa gástrica que da como resultado la formación de un MALT. Los linfomas MALT se pueden presentar por dos vías: partiendo de la ½malignización¼ del MALT, con el desarrollo de un linfoma de bajo grado, dependiente de un estimulo antigénico y con cambios cromosómicos en el tiempo que lo hacen evolucionar a formas de alto grado, independientes del estímulo antigénico o de novo como resultado de una alteración cromosómica inducida, en el caso de los linfomas MALT del estómago, por Helicobacter pylori. El tratamiento de los linfomas MALT depende de la localización, de la clasificación, del grado de diferenciación (bajo grado versus alto grado) y de las alteraciones cromosómicas asociadas. En las etapas iniciales del linfoma, en los linfomas de bajo grado, cuando aún es dependiente inmunológicamente de Helicobacter pylori la curación se alcanza tras la erradicación de la infección; en los estados avanzados, cuando ya el linfoma no depende inmunológicamente de la bacteria el tratamiento se hace con cirugía, quimioterapia y radioterapia solas o asociadas dependiendo de las condiciones del paciente y del entorno médico-asistencial en donde se desenvuelve. El futuro de los linfomas gástricos depende de que se detecten cuando aún son sensibles a la erradicación de la infección por Helicobacter pylori o que disminuya la infección en la población como resultado del mejoramiento de las condiciones socioeconómicas de la población, incluida la potabilización del agua y el control de excretas y en un futuro mediante la inmunoprevención a través de la vacunación de toda la población.

Prevalence of helicobacter pylori in Northern Jordan-endoscopy based study

Helicobacter pylori infection is considered the most common infection worldwide and is associated with many other disorders. The aim of this study is to determine the prevalence of this infection among patients undergoing endoscopy in Northern Jordan. Between November 1998 and September 2000, all patients referred from the Gastro-esophageal Clinic to the Endoscopy Unit at Princess Basma Teaching Hospital, Irbid, Northern Jordan were enrolled in this prospective study. For each patient clinical and epidemiological data was collected and endoscopy was performed. At least 3 antral biopsies were obtained from each patient, and these were examined histologically for the presence of gastritis and stained for Helicobacter pylori using modified Giemsa stain. A total of 197 consecutive patients [113 females] with a mean age of 40.2 years [range 15-91 years] were studied. Abdominal pain was the highest presenting symptom. Gastritis 91% and esophagitis 42% were the most frequent endoscopic findings. Gastritis was documented histologically in 183 [93%] of patients. Helicobacter pylori was found in 161 patients [82%], with all of these having histological gastritis. The 11 patients with gastric ulcer, compared to the 51 out of the 59 [86%] patients with duodenal ulcer, showed Helicobacter pylori in their biopsies. The prevalence of Helicobacter pylori infection in patients subjected to an upper gastrointestinal endoscopy in Jordan is high. This study confirms that Helicobacter pylori is significantly associated with gastritis and peptic ulcer. Further studies are needed to determine the types of Helicobacter pylori strains present in Jordan

Estrategias para prevenir la contaminación microbiana: patógenos alimentarios emergentes / Strategies to prevent microbial contamination: emerging food pathogens

La contaminación de alimentos es un problema mundial que ha motivado a la OMC y al Codex Alimentarius a apoyar nuevas estrategias para asegurar la producción de alimentos seguros para todos. Los procedimientos basados en el análisis de riesgos y control de los puntos críticos (HACCP) constituyen la principal herramienta para el logro de este objetivo. El éxito de este sistema se basa en sólidos conocimientos científicos, y considera no sólo a microorganismos patógenos, sino también a las interacciones microbio-alimentos-huésped. La investigación e información científica es por lo tanto, crucial para el mejoramiento en la seguridad de los alimentos, y para reducir el consumo de alimentos contaminados. No menos de 10 Patógenos Microbianos Emergentes asociados a gastroenteritis y contaminación de alimentos. Estos son, Campylobacter jejuni, Escherichia coli enterohemorragica, Listeria monocytogenes. Arcobacter butzleri, Helicobacter pylori, Criptoporidium parvum, Cyclospora cayetanensis, de la Hepatis A virus Calicivirus and Rotavirus. Se han desarrollado un gran número de tests rápidos para detectar apropiadamente estos patógenos en alimentos contaminados. La mayoría de estos ensayos están basados en técnicas moleculares como PCR, inmunoensayos en fase sólida y otros. Esto implica que si el sistema HACCP va a ser implementado, y por lo tanto la industria de alimentos requerirá de inversiones y de entrenamiento, los laboratorios de microbiología de alimentos deberán establecer metodologías moleculares nuevas y entrenar adecuadamente a su personal. Por último, las agencias gubernamentales de control de alimentos deberán progresar desde un sistema basado en el control del producto final, a un dirigido a la estimación de riesgos y a la prevención. Estos importantes desafíos están aún pendientes en nuestro país

Género helicobacter: una entidad taxonómica en expansión, de características zoonóticas / Genus helicobacter: a toxonomic entity in expansion, with zoonotic characteristics

El genero Helicobacter es un taxón que ha experimentado una notable expansión, tanto desde el punto de vista de las especies que lo componen hasta ahora (19), como de los animales reservorios donde han sido encontradas. Algunas de estas especies pueden colonizar la mucosa gástrica y otras la mucosa intestinal. Muchas de ellas han sido consideradas como agentes zoonóticos y es posible que, en el futuro, nuevas especies sean agregadas a este género y muchas de aquellas encontradas exclusivamente en animales pueden ser aisladas del hombre y de otros huéspedes