Cambios morfológicos en gametos del barbo tigre Puntius tetrazona (Cypriniformes: Cyprinidae) e implementación de la fertilización in vitro / Morphological changes in gametes of tiger barb Puntius tetrazona (Cypriniformes: Cyprinidae) and the implementation of in vitro fertilization

The production of ornamental fishes represents an economic activity of a growing number of Mexican families. Nevertheless, the reproduction of fish in captivity is one of the complications faced by farmers. This study was set up to: (i) evaluate the morphological and functional changes induced by hydration in the gametes of fish tiger barb (Puntius tetrazona; 240 samples) at tree times after hydration (10, 20 and 30s) with classic spermograms (volume, sperm concentration, viability, motility, and normal morphology); and (ii) evaluate the implementation of in vitro fertilization based on the ovulation rate, the percentage of fertilization and hatching, and the larval numbers obtained after 72 hours. The average volume of milt was 3.0±0.7μL, and the minimum, maximum and average concentration of sperm was 44.4x10(6) spz/mL, 52.3x10(6)spz/mL, and 48.1±5.9x10(6)spz/mL, respectively. The viability and motility of the sperm was 84.6±3.2% and 81.5±2.2%, respectively. The diameter of the sperm with/without water contact was 2.1±0.6μm and 3.8±1.0μm (p<0.05); the largest diameter was recorded 30 seconds after the contact with water. For oocytes, the smaller and larger diameters were recorded at 10 and 30s, respectively (both with/without water contact); the oocytes diameters after 10 and 30 seconds of contact with water were 1.11 and 1.55mm, respectively. A higher ovulation rate was recorded using the in vitro fertilization: 250±50 oocytes versus 28±09 oocytes (during natural fertilization; p<0.05). Nevertheless, fertilization and hatching rates were higher for the natural fertilization (80 and 60%, respectively). Considering the number of larvae obtained after 72 hours, our results showed a higher value for the in vitro fertilization (75±18 compared to 13.4±12 of the natural fertilization; p<0.05). We propose this fish as a model for other ornamental fishes of commercial interest. Our results demonstrate that the in vitro fertilization is a very high viable option to optimize and maximize resources; besides, the reproduction management optimization under controlled conditions may enhance wild fish stocks preservation. Rev. Biol. Trop. 62 (4): 1353-1363. Epub 2014 December 01.

El objetivo del presente estudio fue conocer las características de los gametos de Puntius tetrazona (n=240), los cambios morfológicos a partir de su activación mediante espermogramas cásicos y por otro lado, se evaluó la implementación de la fertilización in vitro a partir de la tasa ovulatoria, el % de fertilización y eclosión y el número de larvas vivas a las 72h. El volumen promedio de semen fue de 3.0±0.7µL. La concentración espermática mínima, máxima y promedio fue 44.48x10(6)spz/mL, 52.3x10(6)spz/mL y 48.1±5.9x10(6)spz/mL, respectivamente. La viabilidad promedio fue de 84.68±3.27%. La motilidad promedio fue 81.53±2.28%. El diámetro de los espermatozoides fluctuó entre 2.16±0.2 y 2.79±0.3µm; 3.84±0.3 y 4.86±0.31µm sin y con contacto con el agua respectivamente, con diferencias significativas. El diámetro mayor fue a los 30s en contacto con el agua. Los ovocitos de menor y mayor diámetro se registraron a los diez y 30s sin y con contacto con el agua respectivamente. Los diámetros de los ovocitos en diez y 30s en contacto con el agua fluctuaron entre 1.11 y 1.55mm respectivamente. La mayor tasa ovulatoria fue en la fertilización in vitro con 250±50 ovocitos frente a 28±09 de la natural, con diferencias significativas. Los porcentajes de fertilización y eclosión fueron más elevados en la fertilización natural con 80% y 60% respectivamente. Se registraron 75±18 larvas a las 72 horas en el grupo in vitro comparado con 13.4±12 larvas de la fertilización natural. Con lo anterior, la técnica que permitió mayor cantidad de larvas fue la de fertilización in vitro.

Gamete interactions in teleost fish: the egg envelope. Basic studies and perspectives as environmental biomonitor

The current knowledge about teleost fish egg envelope is summarized. The paper analyzes the organization and deposition process of the protein composition and genes involved in the synthesis of teleost fish egg envelopes and their role in gamete interaction during fertilization. Pelagic and demersal species that our research group is working with are especially considered. The vertebrate ZP family of proteins, the evolution and relationship among the different genes and their expression are taken into account. We consider fish envelope as a possible biomonitor for ecological contaminants. The biotechnological applications for aquaculture and genomic and post-genomic approaches are auspicious.

In vitro fertilization of the rock shrimp, Rhynchocinetes typus (Decapoda, Caridea): a review

This review compiles all the research done on gametes and fertilization in the rock shrimp, R. typus, and describes the sequence of events from the first gamete interaction to zygote formation and the first cleavage of the embryo, with light, fluorescence confocal and electron microscopes. Early studies showed that sperm from the vas deferens have a tack-shape with a "needle-like process" or rigid spike (RS) that extends from a semi-spherical body that contains the arms with chromatin and spines. Upon contact with seawater and by action of Na +, the arms and spines extend, producing an inverted umbrella form of the spermatozoa. The first sperm-oocyte interaction occurs between protein receptors type lectins of the sperm RS and oocyte chorion sperm ligands. These ligands contain residues of a-Glu, Man (a 1-3) Man, a and p-GlcNAc and a-GalNA terminal residues. It was found that a-Man and GlcNAc residues are the ligands that are directly related to the adhesion process and further penetration of sperm. After this first interaction, the RS enters the oocyte envelope by the action of a trypsin-like enzyme, rhynchocinecine, present in the acicular process. Later, arms and spines penetrate the oocyte cytoplasm, where the chromatin of the arms begin to migrate to the central area of the sperm, condensing in a cup-shaped structure near the connecting piece, which forms the male pronucleus.

Cysteine-Rich Secretory Proteins (CRISP) and their role in mammalian fertilization

Epididymal protein CRISPI is a member of the CRISP (Cysteine-RIch Secretory proteins) family and is involved in sperm-egg fusion through its interaction with complementary sites on the egg surface. Results from our laboratory have shown that this binding ability resides in a 12-amino-acid region corresponding to a highly conserved motif of the CRISP family, named Signature 2 (S2). In addition to this, our results revealed that CRISP1 could also be involved in the previous step of sperm binding to the zona pellucida, identifying a novel role for this protein in fertilization. As another approach to elucidate the participation of CRISP1 in fertilization, a mouse line containing a targeted disruption of CRISP1 was generated. Although CRISP1-deficient mice exhibited normal fertility, CRISP1-defficient sperm presented a decreased level of protein tyrosine phosphorylation during capacitation, and an impaired ability to fertilize both zona-intact and zona-free eggs in vitro, confirming the proposed roles for the protein in fertilization. Evidence obtained in our laboratory indicated that testicular CRISP2 would also be involved in sperm-egg fusion. Competition assays between CRISP1 and CRISP2, as well as the comparison of their corresponding S2 regions, suggest that both proteins bind to common complementary sites in the egg. Together, these results suggest a functional cooperation between CRISP1 and CRISP2 to ensure the success of fertilization.

Porcine oviduct sperm binding glycoprotein and its deleterious effect on sperm: a mechanism for negative selection of sperm?

In their journey through the oviduct some subpopulations of sperm are preserved in a reservoir, while others are negatively selected. Sperm binding glycoprotein (SBG) is a pig oviductal epithelial cell glycoprotein that produces, under capacitating conditions, acrosome alteration, p97 tyrosine-phosphorylation and reduction of the motility of sperm. In this paper, we show that SBG is accessible at the extracellular surface of the oviductal epithelial cells, supporting a sperm interaction biological role in situ. We analyze the possible dependence of the tyrosine-phosphorylation of p97 on the PKA mechanism, finding that apparently it is not PKA dependent. Also, after SBG treatment the phosphorylated proteins locate mainly at the detached periacrosomal region and at the tail of sperm; the latter may be related to SBG's motility reduction effect. The study of the time course effect of SBG on sperm as detected by chlortetracycline (CTC) staining and of its binding to sperm by immunodetection in conjunction with CTC, shows results in agreement with the hypothesis that this glycoprotein is involved in the alteration of acrosomes in a specific sperm subpopulation. The results suggest that SBG may be part of a mechanism for negative selection of sperm.

Determinação da razão ótima de espermatozóides por ovócitos de piabanha Brycon insignis (pisces - characidae) / Determination of the optimum ratio of spermatozoa per oocyte of the piabanha Brycon insignis

Determinou-se a razão ótima de espermatozóides por ovócitos da piabanha Brycon insignis, utilizando-se dois machos e duas fêmeas da espécie, submetidos ao procedimento de desova induzida. Os gametas foram extrusados manualmente 200 horas-grau após a aplicação do extrato bruto de hipófise. Os ovócitos foram misturados e deste pool retiraram-se amostras com 2g de ovócitos (701 ovócitos/g). O sêmen do pool foi diluído em solução de NaCL 1,2 por cento de tal forma que, após a adição de 1ml do sêmen diluído aos ovócitos, fossem obtidas as seguintes razões espermatozóides por ovócitos em cada tratamento: T1=86.662, T2=173.324, T3=259.986, T4=346.648 e T5=433.310. A taxa de fertilização do sêmen não diluído usado como controle foi de 65,3 por cento. Após ativação espermática com NaHCO3 1 por cento e fecundação, os ovos foram transferidos para as incubadoras e nelas foram observadas as seguintes percentagens de fertilização em relação à do grupo-controle: T1=35,7 por cento, T2=53,1 por cento, T3=79,1 por cento, T4=93,4 por cento e T5=87,8 por cento. A percentagem de fertilização (em relação ao controle) aumentou de forma linear, segundo a equação de regressão: Y=15,55+0,0002297X (P<0,01; R²=0,98), até a proporção de 314.481 espermatozóides por ovócitos, após o que a taxa de fertilização se estabilizou no limite de 88 por cento

The optimum spermatozoa:oocyte ratio of piabanha Brycon insignis was studied. Two males and two females were induced to spawn, and the gametes were stripped after 200 hourgrades starting from the application of carp pituitary gland. Oocytes from two females were mixed, and samples of 2g (701 oocytes/g) were collected from the obtained pool and placed into plastic cups. The semen from the two males, after mixed to compose a pool, was diluted in NaCl solution (1.2 percent) so that, after the addition of 1ml of diluted sperm into the oocytes, the following spermatozoa:oocyte ratios (tri-replicated) were obtained: T1=86,662, T2=173,324, T3=259,986, T4=346,648 and T5=433,310. After the activation using 1 percent NaHCO3 and fertilization, the eggs were transferred to incubators, and observed the percentages of fertilization relative to the control. T1=35.7 percent, T2=53.1 percent, T3=79.1 percent, T4=93.4 percent and T5=87.8 percent. Undiluted semen was used as "control", which showed 65 percent of fertilization. The percentage of fertilization (relative to the control) increased linearly according to the regression Y= 15.55 + 0.0002297X (P<0.01; R²=0.98), until the proportion of 314,481 spermatozoa per oocyte, and, from this point, the fertilization rate maintained at 88 percent

A carbohydrate-based mechanism of species recognition in sea urchin fertilization

In the present review, we describe a systematic study of the sulfated polysaccharides from marine invertebrates, which led to the discovery of a carbohydrate-based mechanism of sperm-egg recognition during sea urchin fertilization. We have described unique polymers present in these organisms, especially sulfated fucose-rich compounds found in the egg jelly coat of sea urchins. The polysaccharides have simple, linear structures consisting of repeating units of oligosaccharides. They differ among the various species of sea urchins in specific patterns of sulfation and/or position of the glycosidic linkage within their repeating units. These polysaccharides show species specificity in inducing the acrosome reaction in sea urchin sperm, providing a clear-cut example of a signal transduction event regulated by sulfated polysaccharides. This distinct carbohydrate-mediated mechanism of sperm-egg recognition coexists with the bindin-protein system. Possibly, the genes involved in the biosynthesis of these sulfated fucans did not evolve in concordance with evolutionary distance but underwent a dramatic change near the tip of the Strongylocentrotid tree. Overall, we established a direct causal link between the molecular structure of a sulfated polysaccharide and a cellular physiological event - the induction of the sperm acrosome reaction in sea urchins. Small structural changes modulate an entire system of sperm-egg recognition and species-specific fertilization in sea urchins. We demonstrated that sulfated polysaccharides - in addition to their known function in cell proliferation, development, coagulation, and viral infection - mediate fertilization, and respond to evolutionary mechanisms that lead to species diversity.

Identificación de proteínas espermáticas humanas involucradas en la interacción espermatozoide-zona pellucida / aaa

La interacción inicial entre las gametas es mediada por proteínas de superficie de la cabeza del espermatozoide y de la matriz extracelular del ovocito, la zona pellucida (ZP). El presente trabajo tuvo como objetivo la identificación de antígenos de superficie de espermatozoides humanos potencialmente involucrados en el reconocimiento de la ZP. Para ello se obtuvo un extracto de proteínas periféricas de espermatozoides humanos por tratamiento de las células con solución de alta fuerza iónica (HSE - High Salt Extract) (Buffer Pipes 100mM, pH 7,4; NaCl1M, sacarosa 0,25 M). Se desarrollaron anticuerpos policlonales (anti-HSE) que reconocieron numerosas proteínas en HSE (9-200 KDa). Las proteínas fueron separadas por electroforesis en geles de poliacrilamida, transferidas a membranas de nitrocelulosa y utilizadas para adsorber inmunoglobulinas de anti-HSE. Con éste método se obtuvieron anticuerpos contra dos polipéptidos mayoritarios de 49 (p49) y 66 (p66) kDa. Ambos anticuerpos (anti-p49 y anti-p66) reconocieron epitopes localizados en la cabeza y el flagelo de espermatozoides eyaculados y capacitados...

Integrins and disintegrins: the candidate molecular players in sperm-egg interaction.

Fertilization includes sperm-egg recognition, adhesion, binding, fusion and egg activation. Integrin (ITG) receptors which are adhesion molecules are expressed on mouse, hamster and human gametes and their potential ligands also have been identified. Role of ITGs during fertilization is supported by inhibition of sperm-egg adhesion and/or fusion by means of anti-ITG mAbs, Arg-Gly-Asp (RGD) or disintegrin-like peptides. This review includes the current understanding of the molecular mechanism that regulates sperm-egg interaction and implications of this knowledge for assessing the fertility potential of men and immunocontraceptive method.

Efecto modulador de las secreciones del tracto reproductivo femenino sobre la función del espermatozoide humano / Modulating effect of the secretions of the feminine reproductive tract on the function of the human spermatozoa

El objetivo de éste trabajo fue determinar mediante un modelo in vitro, el efecto que ejerce el fluido peritoneal sobre la función del espermatozoide humano, tomando como control al fluido folicular. Para ello se obtuvieron fluidos peritoneales provenientes de pacientes que realizaron laparascopia diagnóstica en fecha periovulatoria y que no presentaron enfermedad tubo-peritoneal (n=9). El fluido folicular se obtuvo de pacientes que realizaron recuperación ovocitaria en un programa de fertilización in vitro (n=4). Ambos fluidos fueron centrifugados, filtrados y congelados a -20§C. Los sémenes de pacientes normozoospérmicos (n=21) fueron procesados mediante un gradiente discontínuo de Percoll y capacitados en medio sintético Human Tubal Fluid suplementado con albúmina, a una concentración de 2-10 por 10 esp./ml durante 3 a 4 horas. En experimentos apareados, los espermatozoides capacitados fueron expuestos en relación 1:1 v/v al medio control, al fluido folicular o al peritoneal durante 1 hora, luego de lo cual se procedió a estudiar la función espermática mediante los siguientes tests: a) viabilidad b) motilidad progresiva c) la reacción acrosomal inducida por ionóforo de calcio y d) la expresión del receptor espermático para D-manosa. Nuestros resultados muestran que ni la viabilidad ni la motilidad resultaron afectadas por el pre-tratamiento. Si bien la ocurrencia de la reacción acrosomal espontánea no fue diferente entre los distintos grupos (6.3 a 7.5 por ciento, NS), la inducida por ionóforo disminuyó significativamente luego de la exposición al fluido peritoneal y al folicular (18.9ñ5.1 por ciento y 29.0ñ6.1 por ciento vs control 45.6ñ5.0 por ciento, p <0.001 y 0.01 respectivamente). Si bien la detección del receptor para D-manosa aumentó durante la capacitación, resultó significativamente menor a los controles luego del tratamiento previo (FP: 15.4ñ2.9 por ciento y FF: 15.5ñ3.1 por ciento vs control 23.7ñ3.1 por ciento, p<0.05. Nuestros resultados sugieren que al menos in vitro, tanto el fluido peritoneal como el folicular modularían la función del espermatozoide humano manteniéndolo vivo y móvil, pero en un estado no reaccionado

Alteración de mecanismos moleculares y activación abortiva en oocitos humanos durante las fallas de fecundación: aspectos biológicos / Alteration of molecular mechanisms and abortive activation in human oocytes during the failures of fertilization

Introducción: Los primeros estudios relacionados con falla de fecundación en humanos se concentraron en la citogenética del oocito. Más recientemente, los avances en imágenes digitales y microscopía de fluorescencia han permitidos investigar eventos menos conocidos como la movilidad citoplásmica de los pronúcleos masculino y femenino y los mecanismos físicos que dirigen su unión. Objetivo: Analizar cualitativa y cuantitativamente oocitos no fecundados luego de FIV e ICSI, haciendo hincapié en la organización del citoesqueleto, estado de la cromatina, organización del áster y presencia de activaciones abortivas. Materiales y Métodos: Se estudiaron 248 oocitos clasificados como "no fecundados" luego de fertilización in vitro (FIV) e inyección intracitoplásmica de espermatozoides (ICSI) 20-40 hs post inseminación o inyección. El material se procesó para inmunofluorescencia mediante la utilización de anticuerpos monoclonales para la detección de Ó y ß tubulinas y Ó tubulinas acetiladas. El material genético se estudió por tinción con Hoechst 33258 y se analizó por microscopía óptica (UV). El análisis citogenético se realizó en 69 oocitos activados luego de ICSI de acuerdo a la técnica de Tarkowski (1966). Los resultados se analizaron estadísticamente mediante el test de Chi cuadrado. Resultados y Discusión: Inmunofluorescencia: 1) FIV: La principal causa de falla de fecundación luego de FIV fue la ausencia de penetración espermática (54,9 por ciento). De los restantes oocitos estudiados, el 11,4 por ciento mostraron una falla de activación oocitaria y el 23,9 por ciento presentaron fallas en los procesos de nucleación o migración de pronúcleos. 2) ICSI: La principal causa de falla de fecundación luego de ICSI resultó ser la falla de activación oocitaria (36,5 por ciento). Un 14,6 por ciento de los oocitos remanentes detuvieron su desarrollo en la primera placa metafásica. En general, las fallas detectadas luego de FIV ó ICSI resultaron cuantitativamente diferentes. Análisis cromosómico en oocitos activados post ICSI: El estudio cromosómico permitió identificar la presencia de activaciones abortivas, incluyendo metafases III (MIII), núcleos reticulares (NR) y núcleos telofásicos (NT)

Reduçäo no tempo de exposiçäo dos oócitos aos espermatozóides durante a fertilizaçäo in vitro: resultados preliminares / Reducing the time of sperm-oocyte exposure during in vitro fertilization: preliminar results

OBJETIVO: verificar se a reduçäo do tempo de exposiçäo dos oócitos aos espermatozóides in vitro é capaz de melhorar as taxas de fertilizaçäo e clivagem e o desenvolvimento embrionário. PACIENTES E MÉTODOS: foram selecionados 11 casais inférteis submetidos à fertilizaçäo in vitro (FIV) no período de maio a dezembro de 1997. Em cada paciente, uma parte dos oócitos captados foi submetida à FIV convencional (grupo I), e os oócitos restantes foram lavados uma hora após a inseminaçäo, quando também foi realizada a troca do meio de cultura (grupo II). Foram considerados embriöes de boa qualidade (EBQ) aqueles com 4 ou mais células, blastômeros regulares e 50 por cento de fragmentaçäo. RESULTADOS: a taxa de fertilizaçäo foi de 64,8 por cento no grupo I e 59,4 por cento no grupo II (NS). A taxa de clivagem foi de 95,6 por cento no grupo I e de 92,1 por cento no grupo II (NS). Na análise morfológica dos embriöes, verificou-se uma maior proporçäo de EBQ no grupo II (57,1 por cento) em relaçäo ao grupo I (36,9 por cento), com p=0,05. CONCLUSÃO: a reduçäo do temppo de exposiçäo dos oócitos aos espermatozóides in vitro contribui para um melhor desenvolvimento embrionário.

Gravidez quádrupla e nascimento após injeçäo intracitoplasmática de espermatozóides (ICSI) totalmente imóveis / Quadruplets pregnancy after intracytoplasmic sperm injection (ICSI) of immobile sperm

OBJETIVO: relatar um caso de gravidez quadrigemelar após Injeçäo Intracitoplasmática de Espermatozóide (ICSI) com espermatozóides imóveis, obtidos através de Aspiraçäo direta do testículo (TESA), que resultou no nascimento de quatro crianças saudáveis. DELINEAMENTO: estudo retrospectivo de caso clínico. Local: Clínica e Centro de Pesquisa em Reproduçäo Humana Roger Abdelmassih. MÉTODO: Foi realizada técnica de Fertilizaçäo "in vitro" (FIV), associada a técnica de Injeçäo Intracitoplasmática de Espermatozóide (ICSI) em paciente de 37 anos de idade, utilizando espermatozóides totalmente imóveis recuperados por aspiraçäo direta do testículo. Os óvulos foram obtidos após induçäo da ovulaçäo com protocolo longo usando acetato de leuprolide e FSH altamente purificado associado com hMG (Pergonal, Serono laboratórios). Após a transferência dos embriöes, o suporte da fase lútea foi feito com estradiol transdérmico e progesterona oleosa. RESULTADOS: com a injeçäo de espermatozóides imóveis, 6 dos 7 oócitos injetados apresentaram fertilizaçäo e clivagem normais. No 17§ dia após transferência de 4 embriöes, foi constatada gravidez através de dosagem sérica de b-HCG. Através de ultra-sonografia foi constatada gestaçäo quadrigemelar com todos embriöes viáveis que resultou no nascimento de quatro crianças saudáveis através de TESA, resultando no nascimento de 4 crianças normais, demonstrando a viabilidade do tratamento proposto.

Participación del líquido folicular en el desarrollo del folículo, la maduración del ovocito y la función espermática / Participation of follicular fluid in follicle development, oocyte maturity and spermatic function

El estudio de la composición del líquido folicular (LF) es de gran importancia en reproducción asistida, por la función que éste desempeña en la maduración del ovocito y en la capacitación espermática. La composición bioquímica del LF está influenciada por el estado de maduración del folículo y recíprocamente dicha composición predice el éxito de la subsecuente maduración folicular y el embarazo. En la mayoría de las especies las concentraciones elevadas de estradiol son comunes de los folículos de madurez intermedia la progesterona de los maduros y los andrógenos de los atrésicos. La concentración del estradiol está asociada con la capacidad fertilizante de los ovocitos y la de sus metabolitos con la estimulación de la producción de progesterona. Además, el IF regula la acción de las gonadotropinas, al favorecer la unión de éstas a su receptor. El LF contribuye regulando la meiosis, ya que contiene factores que estimulan la maduración del ovocito o que bloquean la habilidad de los gránulos corticales para modificar los componentes de la zona pelúcida. Asimismo, la exposición de los espermatozoides a este fluido favorece la reacción acrosomal, su movilidad y la capacidad para penetrar al óvulo

Role of hypo-osmotic sperm swelling test in assisted reproduction.

Hypo-osmotic sperm swelling (HOS) profile is found to be a better predictor of the fertilisability in those husbands possessing subnormal semen parameters. The group where husband's HOS gradings were less than 60%, no one could conceive his fertile wife even after intra-uterine insemination (IUI) for 8 times. However, in the other group where the HOS values were greater than 60%, conception were registered in 6 oligospermic and 2 asthenospermic husbands after 2 to 8 IUI amongst 22 married couples. No conception occurred in any normal coital cycle. All the pregnancies were delivered by elective caesarean section (4 females and 3 males), their birth weights were 2.705 +/- 0.425 kg. One aborted spontaneously at 10 weeks' gestation. The emerging fact in this study is where the HOS values are below 60% the male fertility is reduced, the chances of conception are trivial but fecundity is relatively fair where HOS reading is greater than 60%. It is also a no risk and high benefit method to pick and choose subfertile husbands who are likely to conceive their fertile wives by assisted reproductive techniques.

Especies reactivas de oxígeno en el espermatozoide / Oxygen reactive species in the spermatozoa

Los radicales libres de oxígeno son especies químicas de este elemento formadas mediante reacciones enzimáticas y no enzimáticas y han sido implicados en muchos procesos patológicos y fisiológicos. Las especies químicas de oxígeno más reactivas son el peróxido de hidrógeno y los radicales libres anión superóxido e hidróxilo, siendo este último el más reactivo. El espermatozoide de mamíferos, incluyendo el del humano producen radicales libres de oxígeno y peróxido de hidrógeno; sin embargo esta última célula normalmente posee mecanismos enzimáticos para protegerse del posible daño que pudiera causarle estos agentes tóxicos. A pesar de ello, el espermatozoide es bastante suceptible al "estrés oxidativo", probablemente debido a su alto contenido de ácidos grasos insaturados. Este hecho puede tener importancia en la patología de ciertos tipos de infertilidad masculina como lo es la oligozoospermia, ya que se ha demostrado que en estos casos, se presenta una producción incontrolada de especies reactivas de oxígeno por parte del espermatozoide

Estudio comparativo de la prueba de resistencia osmótica en semen de pacientes normospérmicos o dispérmicos / Comparative study of the test of osmotic resistence in semen of normospermic or dispermic patients

La alta incidencia de factor masculino en los casos de esterilidad conyugal justifican los intentos de un estudio más completo del semen. La prueba de resistencia osmótica (PRO), ha sido propuesta como un detector precoz de fallas en la integridad funcional de la membrana espermática. En el presente trabajo estudiamos las posibles correlaciones entre PRO y los parámetros convencionales del espermograma (de acuerdo a las técnicas recomendadas por la OMS) y comparamos los resultados de la PRO en especímenes normospérmicos y oligo, terato y/o astenospérmicos. En 75 casos se cuantificó: concentración espermática (en hemocitómetro), motilidad, velocidad de traslación (rápidos, lentos y no progresivos), morfología (coloración de Papanicolaou) y PRO (incubación del semen en solución de citrato de Na y fructosa, 150 mOsm/l, 37§C, 60 min). En todos los casos, la PRO se correlacionó significativamente con el porcentaje de formas móviles, rápidas o de morfología normal (r = 0.39; r = 0.39 y r = 0.35 respectivamente). A su vez, disminuye significativamente al incrementarse el número de alteraciones en las determinaciones del espermograma de rutina. En las muestras asteno, terato y oligospérmicas, los resultados de la PRO son significativamente inferiores a las con motilidad, morfología o concentración normal, respectivamente (p < 0.005 en todos los casos). Consideramos que la PRO representa una técnica accesible y de relativa sencillez que constituye un aporte relevante en el diagnóstico de la esterilidad masculina