Ultraestructura del inmunofenotipo CD44+/CD24- de una línea de células de cáncer de mama triple negativo / Ultrastructure of the CD44 + / CD24- immunophenotype of a line of triple negative breast cancer cells

RESUMEN: El cáncer de mama es la principal causa de muerte debido al cáncer en mujeres. La microscopía electrónica permite establecer características constitutivas de las células entre diferentes poblaciones celulares. Las células madre del cáncer mamario con inmunofenotipo CD44alta/CD24baja son una población de células intratumorales asociada a la quimioresistencia y metástasis, cuya ultraestructura aún no ha sido bien estudiada. El objetivo de este trabajo fue conocer características ultraestructurales de células con fenotipo de células madre del cáncer de la línea celular MDA-MB-436 de tumor mamario triple negativo comparándolas con células madre adiposas. Se utilizó microscopía electrónica de barrido y de transmisión. Previamente, mediante separación inmunomagnética positiva empleando anticuerpos anti CD44 y anti CD24 unidos a perlas magnéticas, se obtuvo una población de células con fenotipo CD44alta/CD24baja a partir de 10x106 células de la línea MDA-MB-436, la cual igual que las células madre adiposas fue cultivada en cubreobjetos para microscopía electrónica de barrido; en tanto que para microscopía electrónica de transmisión se obtuvo un pellet de células, luego se fijó con glutaraldehído al 2,5 % y post fijó con OsO4 1 %. Para microscopía óptica de alta resolución se usó azul de toluidina como tinción. Luego de obtener el fenotipo de células madre del cáncer se corroboró su pluripotencia detectando la expresión de los genes Oct4 y nanog mediante RT-PCR. Nuestros resultados muestran que las células de este fenotipo son pequeñas, redondeadas, recubiertas por microvellosidades abundantes pero cortas; el citoplasma tiene organelas de secreción celular y abundantes mitocondrias alargadas; el núcleo es excéntrico ocupando la mitad del volumen celular, el nucléolo es voluminoso y la heterocromatina está adosada a la membrana nuclear interna. Se concluye que el inmunofenotipo celular estudiado es una sub población celular dentro de la línea estudiada que difiere en tamaño y ultraestructura de las células madre adiposas.

SUMMARY: Breast cancer is the leading cause of cancer deaths in women. Electron microscopy allows establishing constitutive characteristics of cells between different cell populations. CD44 high / CD24 low mammary cancer stem cells are a population of intratumoral cells associated with chemoresistance and metastasis, whose ultrastructure has not yet been well studied. The objective of this work was to know the ultrastructural characteristics of cells with cancer stem cell phenotype, of the triple negative mammary tumor cell line MDAMB-436 436 using scanning and transmission electron microscopy, and to contrast them with adipose-derived mesenchymal stem cells. Previously, by immunomagnetic purification using anti CD44 and anti CD24 antibodies bound to magnetic beads, cells populations was obtained from 10x106 cells of the MDA-MB-436 line, which, adipose-derived mesenchymal stem whereas cultivated on coverslips for scanning electron microscopy; while for transmission electron microscopy a cell pellet was obtained, then fixed with 2.5 % glutaraldehyde and post fixed with OsO4 1 %. For high resolution optical microscopy, toluidine blue was used as staining. After obtaining the phenotype of cancer stem cells, their pluripotency was corroborated by detecting the expression of the Oct4 and nanog genes by RT-PCR. Our results show that the cells of this phenotype are small, rounded, covered by abundant but short microvilli; the cytoplasm has organelles of cellular secretion and abundant elongated mitochondria; the nucleus is eccentric occupying half of the cellular volume, the nucleolus is bulky and the heterochromatin is attached to the inner nuclear membrane. It is concluded that the cellular immunophenotype studied is a sub-cellular population within the line studied that differs in size and ultrastructure of the adipose stem cells.

Human hepatoma cell line (Hep G2) cellular response to hypothermic stress with recovery: Induction of Hsp70, Hsp60 and Hsf1 expression / Respuesta celular de línea de hepatoma humano (HepG2) al estrés hipotérmico con recuperación: Inducción de la expresión de Hsp60, Hsp70, y Hsf1

The cell response of human HepG2 cells exposed to hypothermia with rewarming was analyzed. Ultrastructural findings in hypothermic stressed cells showed swollen mitochondria, dispersed chromatin, vacuoles and ring-shape nucleolar reorganization. These changes were coupled with significative differences in the induction of Hsp60, inducible Hsp70 and monomeric Hsf1 in all treated samples, but not in Hsc 70 expression. Cellular response to hypothermia could be associated with the synergistic induction of Hsp expression.

En este trabajo se analizó la respuesta celular de células HepG2 expuestas a hipotermia con posterior recuperación. Los hallazgos ultraestructurales en células sometidas a estrés hipotérmico incluyeron mitocondrias edematizadas, núcleos picnóticos, vacuolas y reorganización nucleolar en forma de anillo. Tales cambios están relacionados con diferencias significativas en la inducción de la expresión de Hsp60, Hsp70 inducible y Hsf 1 monomérico en todas las muestras tratadas, pero no de Hsc70. La respuesta celular a la hipotermia puede ser relacionada con la inducción sinergística de las Hsp.

In vitro effects of 2-methoxyestradiol-bis-sulphamate on cell growth, morphology and cell cycle dynamics in the MCF-7 breast adenocarcinoma cell line

In the search for new and improved anticancer therapies, researchers have identified several potentially useful compounds. One of these agents is 2-methoxyestradiol-bis-sulphamate (2ME-BM), a sulphamoylated derivative of 2-methoxyestradiol. The objective of this study was to evaluate 2ME-BM's in vitro efficacy as antiproliferative agent in the MCF-7 breast adenocarcinoma cell line. Light- and fluorescent microscopy showed decreased cell density, increased apoptotic characteristics and significant ultrastructural aberrations indicative of autophagic cell death after 24 hours of exposure at a concentration of 0.4 microM. In addition, mitotic indices revealed that 2ME-BM induces a G2M block. The latter was confirmed by flow cytometric analyses where increased sub-G1 and G2/M fractions, as well as an increase in cycli n B1 levels were observed. Further in vitro research into the mechanism of this potentially useful anticancer compound is thus warranted.