Qualificação do transporte de amostras para o monitoramento da qualidade de água tratada para uso em diálise / Qualification of the sample transport for monitoring the quality of water for dialysis purpose

As condições de coleta e o transporte das amostras de água tratada para uso em diálise são etapas críticas para garantir a qualidade dos resultados analíticos. A temperatura no transporte de amostras deve assegurar a manutenção das características físicas e biológicas desde a coleta até o recebimento pelo laboratório analítico. O objetivo deste estudo foi de qualificar o transporte de amostras de água tratada para diálise desde os Serviços de Diálise do estado de São Paulo até o Instituto Adolfo Lutz, realizado durante a execução do Programa Estadual de Monitoramento. Os resultados obtidos indicaram que o sistema adotado, utilizando-se caixas isotérmicas e gelo reutilizável, é capaz de garantir as condições adequadas de temperatura durante o transporte do ponto de coleta das amostras até o laboratório analítico.

The conditions for collecting and transporting the dialysis water samples are the critical steps to assure the quality of the analytical results. The temperature during the water samples transport should ensure the maintenance of the physical and biological characteristics of samples from their collections to the analytical laboratory. The objective of this study was to qualify the transport of the dialysis water samples from the Dialysis Services of the state of São Paulo to the Adolfo Lutz Institute, during the performance of the State Monitoring Program. By using the isothermal boxes and the reusable ices, the obtained results indicated that the adopted system were able to guarantee the adequate temperature conditions during the transport from the sample collection point to the analytical laboratory.

Manual de normas y procedimientos para la toma de muestras y su envío al Laboratorio Nacional de Salud / Manual of standards and procedures for taking samples and sending them to the National Health Laboratory

"Este manual tiene el objetivo de dar a conocer el procedimiento para la toma, almacenamiento y transporte de muestras al LNS así como los conceptos básicos de Bioseguridad. Es de utilidad para personal de laboratorio, enfermería, epidemiología, clínicos y otros que intervienen en este proceso." Incluye un correo electrónico y número telefónico para cualquier consulta en relación al tema. Contiene además, las definiciones de los conceptos relacionados al tema principal, además de la infraestructura que deberá tener el transporte de muestras, incluidos el equipo y el manejo de las mismas. Especifica procedimiento para la toma de muestras de varias enfermedades, entre ellas: Rotavirus, Enfermedad diarreica aguda de etiología bacteriana, Cólera, Fiebre Tifoidea, Hepatitis A, B o C, Dengue, Chikungunya, entre muchas más. En los anexos, incluye los códigos geográficos departamentales y municipales (como herramienta para la identificación de personas con VHI) También contiene en la sección de anexos, una lista de "Laboratorios que realizan cultivos de microbacterias" en el país. Además incluye "Fichas epidemiológicas" de distintas enfermedades

Avaliação d qualidade do DNA obtido de amostras preservadas em parafina / Quality evaluation of DNA from samples preserved in parafin

A obtenção de um material genético íntegro e com concentrações satisfatórias para a amplificação de de uma determinada sequência são os principais desafios para o processamento de amostras de tecido preservados em parafina. O presente estudo teve como objetivo comparar três diferentes protocolos de extração de DNA que têm em comum entre si o princípio de extração por silica-gel. Vinte e sete amostras de tecidos tireoidianos preservados em parafina foram processadas por meio de cortes em triplicata de 20um. O método A utilizou tr~es horas na etapa de digestão do tecido, os métodos B e C utilizaram 16 horas para a digestão, sendo que o último utilizou diferentes solventes para reidratar o tecido e solução de fenol-clorofórmio-álcool isoamílico para purificação. Todos os métodos utilizaram em comum o conjunto de reagentes QIAamp DNA mini kit. Na comparação entre as concentrações obtidas de DNA, o método B spresentou maior média (3,7 ng/iL) já o método A obteve valor médio que 1,2 ng/uL e o método C, de 0,7 ng/uL. Todos os protocolos obtiveram valores da relação 260/280 e 260/230 fora dos valores de refer~encia esperado, evidenciando uma perda na qualidade do DNA extraído. O resultado da integridade do DNA, por meio de eletroforese em gel agarose também demonstrou o alto grau de degradação de todos os métodos analisados. Entretanto, foi possível realizar a genotipagem do polimorfismo 174G>C do gene da interleucina 6 em 100% das amostras testadas para o método C, e 66% par a o método A e B. O método C foi o mais reprodutivo para genotipagem , apesar do maior custo e tempo de processamento, sendo este método mais indicado para a implementação na rotina laboratorial de biologia molecular para amostras preservadas em parafina.

Recobrado de Shigella spp. conservada por la técnica de secado en perlas de vidrio / Recovery of Shigella spp. preserved on glass beads by dehydration technique

Introducción: la técnica de secado en perlas de vidrio se reporta como método de conservación microbiana desde hace varios años, pero la información existente es limitada. Con este antecedente, se decidió evaluar su utilidad para conservar bacterias, de origen clínico, en la colección de cultivos microbianos del Instituto Nacional de Higiene, Epidemiología y Microbiología. Métodos: se estudiaron dos cultivos de Shigella spp., mantenidas en refrigeración. Los datos de viabilidad obtenidos durante cuatro años de conservación fueron procesados con el paquete estadístico SPSS versión 15.0. El análisis estadístico incluyó el de la varianza para la comparación de las medias del recobrado de células viables para las variables tiempo de conservación, dilución y mezcla preservante, y el test de Scheffé de comparaciones múltiples post hoc para la discriminación de las medias. Fueron controladas las características fisiológicas y la respuesta a la tinción de Gram de las cepas. Resultados: no se encontraron diferencias significativas entre las mezclas preservantes utilizadas en este ensayo, y pudieron recobrarse ambas cepas durante los cuatro años de estudio. A partir de los seis meses se apreció una disminución del efecto protector en todas las mezclas. Se obtuvo variabilidad en algunos caracteres fisiológicos (indol, dulcitol y manitol), pero no para la respuesta a la tinción de Gram en ambas cepas, la que se mantuvo estable. Conclusiones:: el método resultó apropiado para mantener Shigella spp. por tiempo limitado, pero pudiera utilizarse como alternativa de conservación en laboratorios con limitados recursos a corto plazo, por su sencillez, bajo costo y efectividad, y debe garantizarse la disponibilidad de réplicas por otras técnicas

Introduction: glass bead dehydration technique has been reported as a microbial preservation method for some years, but the available information is limited. Based on this antecedent, it was decided to evaluate its usefulness to preserve bacteria of clinical origin in the collection of microbial cultures at the National Institute of Hygiene, Epidemiology and Microbiology. Methods: a study was conducted of two Shigella spp. cultures kept under refrigeration. The viability datas obtained during four years of preservation were processed with the statistical package SPSS, version 15.0. Statistical processing included analysis of variance for comparison of the mean recovery values of viable cells for the variables preservation time, dilution and preserving mix, and Scheffe's test of post hoc multiple comparisons for means discrimination. Physiological characteristics were controlled, as well as the response of strains to Gram stain. Results: no significant differences were found between the preserving mixes used in the trial, and both strains could be recovered during the four years of the study. The protective effect of all mixes was found to decrease after six months. Variability was obtained for some physiological characters (indol, dulcitol and mannitol), but response to Gram stain remained stable in both strains. Conclusions:: the method was found to be suitable to preserve Shigella spp. for a limited time, but it could be used as a short-term preservation alternative in laboratories with few resources, due to its simplicity, low cost and effectiveness. Availability should be ensured of replicas obtained by other techniques

Estudio de dos sistemas de transporte para mantener la viabilidad de bacterias de interés clínico / Study of the ability of two swab transport systems to maintain viability of clinically important bacteria / Estudo de dois sistemas de transporte para manter a viabilidade de bactérias de interesse clínico

Se compararon dos dispositivos de conservación de muestras tomadas por hisopado con cepas de referencia de Streptococcus pyogenes, Haemophilus influenzae, Neisseria gonorrhoeae y Streptococcus pneumoniae (ambos con medio de Stuart). El dispositivo Copan Venturi Transystem® (Copan Italia Spa, Brescia, Italia) resultó ser significativamente más efectivo que el Eurotubo (Deltalab, Rubí, Barcelona, España) probablemente porque la estrangulación que presenta al comienzo de la columna semisólida (sistema tipo Venturi) permitiría una mejor conservación de los microorganismos.

Two extendedly-used swab transport devices with Stuart medium using Streptococcus pyogenes, Haemophilus influenzae, Neisseria gonorrhoeae and Streptococcus pneumoniae reference strains, were compared. Copan Venturi Transystem® (Copan Italia Spa, Brescia, Italy) was significantly more effective than Eurotubo (Deltalab, Rubí, Barcelona, Spain), probably because the narrowing of the tube, just at the beginning of the semisolid column (Venturi system), would yield a better conservation of diffrerent organisms.

Foram comparados dois dispositivos de conservação de amostras tomadas por swab com cepas de referência de Streptococcus pyogenes, Haemophilus influenzae, Neisseria gonorrhoeae e Streptococcus pneumoniae (ambos com meio de Stuart). O dispositivo Copan Venturi Transystem® (Copan Italia Spa, Brescia, Itália) resultou ser significativamente mais efetivo que o Eurotubo (Deltalab, Rubí, Barcelona, Espanha) provavelmente porque o estrangulamento que apresenta no início da coluna semi-sólida (sistema tipo Venturi) permitiria uma melhor conservação dos microorganismos.

Estudios de nuevas tecnicas para conservación de piezas anatómicas / Study of new techniques for the preservation of anatomical pieces: plastination

Introducción: la conservación de las piezas cadavéricasen formol con fines docentes ha sido y lo es en la actualidaduna preocupación compartida por los docentes de la Facultadde Ciencias Médicas.Objetivos: eliminar los riesgos sanitarios; mejorar lacalidad del material; obtener piezas anatómicas que conservensu flexibilidad; favorecer el contacto directo de los estudiantescon las estructuras a estudiar; mejorar la calidad de las piezasanatómicas del Museo Anatómico Pedro Ara.Material y métodos: se trabajó en material cadavéricoanimal, con estructuras pequeñas que facilitan la aplicaciónde la técnica de impregnación en silicona de especímenesenteros o cortes, obteniendo apariencia natural de preparadoselásticos y flexibles.Resultados: se obtuvo piezas con elasticidad, flexibilidady conservación de la coloración. Permitió realizar preparadossin uso de formalina.Conclusión: afirmamos que la plastinación permiteconservar y manipular estructuras anatómicas con seguridad,sin necesidad de utilizar formol u otro elemento tóxico

Introduction: Formaldehyde preservation of body parts for study purposes has alwaysbeen a concern shared by teachers at the School of Medicine.Objectives: To eliminate health risks; improve the quality of samples; obtain anatomicalpieces which keep flexibility; help students’ direct contact with the structures to be studied;and to improve the quality of anatomical pieces at the Anatomical Museum Pedro Ara.Material and methods: We worked on cadaverous animal material with small structuresthat facilitate the application of the technique of silicon impregnation of complete orsectioned specimens obtaining elastic and flexible preparations with natural appearance.Results: We obtained elastic flexible pieces with color conservation. It was possible toprepare samples without formalin.Conclusion: We assert that plastination allows the safe preservation and manipulationof anatomical structures, with no need to use formaldehyde or other toxic element

Estrategias y procedimientos para la conservación de bacterias de importancia en cavidad bucal / Strategies and procedures for the preservation of important bacteria in the oral cavity

La conservación o preservación de microorganismos es extremadamente importante, y debe garantizar el mantenimiento del organismo en estado inactivo, puro, sin variaciones ni mutaciones, es decir, en una condición muy cercana a la original. La preservación de microorganismos también es una urgente necesidad en los procesos de enseñanza, en taxonomía y en los laboratorios de investigación para múltiples propósitos en estudios metabólicos, genéticos, epidemiológicos, inmunológicos, fisiológicos y patológicos. El costo de la conservación y mantenimiento, así como el tiempo durante el cual los microorganismos permanecen viables, determinan la selección de la técnica de preservación. Hoy en día, la mayoría de los métodos empleados en la preservación de microorganismos requieren sistemas de almacenamiento altamente especializados, un gran soporte de equipos tecnológicos, conocimiento y, con frecuencia, ambientes controlados a temperaturas muy bajas. A menudo, la disponibilidad de equipo, el espacio para almacenar y la experiencia propia determinan el método por emplear. Es necesario tener el conocimiento y la experiencia en el manejo de estas metodologías con el fin de hacer el mejor aprovechamiento de los microorganismos confiados a un cepario o institución coleccionadora de microorganismos. En esta revisión se describen las principales características de los métodos de preservación a corto y largo plazo, y la experiencia con éstos en bacterias representativas de cavidad bucal.

Exame do líquido cefalorraquidiano: influência da temperatura, tempo e preparo da amostra na estabilidade analítica / Cerebrospinal fluid exam: influence of sample preparation, temperature and time on analytical stability

O líquido cefalorraquidiano (LCR) é um fluido biológico que está em íntima relação com o sistema nervoso central (SNC). Por isso, o exame do LCR constitui um método de grande valia para o diagnóstico e o acompanhamento de diversas afecções neurológicas. Entretanto, existem poucos estudos sobre a estabilidade de seus analitos durante a etapa pré-analítica. OBJETIVO: Identificar dados existentes sobre a influência da temperatura e do tempo de estocagem, dos ciclos de congelamento/descongelamento e pré-tratamentos (centrifugação, desnaturação, adição de soro) na estabilidade dos analitos do LCR. MÉTODO: Foi realizada uma revisão sistemática de artigos da literatura, usando palavras-chave da língua inglesa como storage, cerebrospinal fluid, CSF, stability, temperature e period, com base nos serviços de dados de PubMed, Highwire Press, Lilacs e Amazonas Library, os quais permitem a pesquisa bibliográfica de citações e artigos científicos. RESULTADO: A busca encontrou nove artigos, resultado da escassez de trabalhos sobre o assunto. Os analitos do LCR estudados incluíram células (número e morfologia), proteínas totais, glicose, lactato, aminoácidos, creatina, creatinina, biomarcadores e enzimas. As metodologias se basearam em microscopia óptica, ensaio imunossorvente ligado à enzima (ELISA), Imunoblot/SDS-PAGE e fotometria. CONCLUSÃO: A revisão da literatura confirma que a estabilidade da amostra de LCR sofre influência da temperatura, do tempo de estocagem e das condições de preparo pré-analítico. Os achados desta revisão sistemática podem contribuir para a ampliação dos conhecimentos no exame do LCR, assim como o melhor entendimento sobre a estabilidade da amostra.

The cerebrospinal fluid (CSF) is a biological fluid that is in close relation with the central nervous system (CNS). Therefore, the CSF examination constitutes an invaluable method in the diagnosis and monitoring of countless neurological diseases. However, there are a few studies about the stability of its analytes during the pre-analytical stage. OBJECTIVE: To identify existing data about the influence of temperature and storage time, freezing/thawing cycles and pre-treatments (centrifugation, denaturation, serum addition) on the stability of CSF analytes. METHOD: A systematic review of articles in the literature was conducted by use of Key words: in English such as "storage", "cerebrospinal fluid", "CSF", "stability", "temperature" and "period", based on data from PubMed, Highwire Press, Lilacs and Amazonas Library, free digital archives of biomedical research articles. RESULTt: The search found nine articles, what results from the lack of studies about this subject. Different CSF constituents were analyzed: number of cells and their morphology, total protein, glucose, lactate, amino acids, creatine, creatinine, biomarkers and enzymes. The methodologies employed were: optical microscopy, enzyme linked immunosorbent assay (ELISA), Imunoblot/SDS-PAGE and spectrometry. CONCLUSION: The literature review confirms that the stability of CSF samples is influenced by temperature, storage time and conditions of pre-analytical preparation. The findings of this systematic review may contribute to improving the knowledge about CSF examination, as well as to better understanding the sample stability.

Manutenção de leveduras por congelamento a –20ºC / Yeasts mantainance for freezing at –20ºC

As coleções de culturas são especialmente úteis para estudos retrospectivos e prospectivos, que enfocam a biologia, etiologia e aspectos epidemiológicos. Uma vez que estes estudos, geralmente, demandam um longo período de tempo, é importante que se faça escolha adequada do método de preservação. O total de 328 leveduras representadas pelos gêneros Candida, Cryptococcuss, Trichosporon, Rodothorulla foram semeadas em caldo cérebro-coração contendo glicerol e após 7 dias de refrigeração, congeladas – 20ºC. Foram recuperadas 99,0% das leveduras após 3 anos e 3 anos e 6 meses de congelamento. Após o período de 4 anos, a viabilidadefoi de 90,6% (144 leveduras). A metodologia ofereceu a vantagem de baixo custo, facilidade na realização e no armazenamento além de favorecer a conservação de quase totalidade das leveduras por 42 meses.

The culture collections are especially useful for retrospective and prospective studies, which focus the biology, etiologyand epidemic aspects. Once these studies, generally, demand a long period of time, it is important to do the adequate choice of preservation method. The total of 328 yeasts represented by the genus Candida, Cryptococcus, Trichosporon, Rodothorulla were seededin brain-heart infusion contenting glicerol and after 7 days of efrigeration, frozen at –20ºC. It was recovered 99,0% of yeasts after 3 years and 3 years and 6 months of freezing. After the period of 4 years the viability was 90,6% (144 yeasts). The methodology offered the low cost advantage, easiness in the accomplishment and in the storage, besides offering the conservation of almost the totality ofyeasts for 42 months.

Estabilidad de muestras conservadas en tubo primario: un estudio de 25 analitos de química clínica / Stability of specimens stored in primary tube: a study on 25 analytes of clinical chemistry

Se estudió la estabilidad de veinticinco analitos conservados durante siete días en dos tipos de tubos primarios: tubos de polimetilmetaacrilato (PMMA) con gránulos y tubos con gel separador, ambos con acelerador de la coagulación. El objetivo fue determinar en qué tubo los analitos tenían mayor estabilidad y como consecuencia, cuánto tiempo podían conservarse las muestras en ambos tubos. Las muestras fueron conservadas en el tubo primario a 4-8 ºC y se analizaron por duplicado diariamente durante siete días. La estabilidad de los analitos se determinó comparando los resultados de los siete días con los valores obtenidos el primer día y los límites de aceptabilidad derivaron del coeficiente de variación (CV) de cada determinación, de la variabilidad biológica (VB) intraindividual y de un análisis multivariado de varianza MANOVA. Los promedios de aldolasa, fósforo, glucosa, lactatodehidrogenasa, potasio y sodio cuando la muestra se conservó con gránulos, tuvieron diferencias estadísticamente significativas al compararlos con los promedios de los mismos analitos conservados en gel; resultados similares se obtuvieron cuando se tomó como límite de aceptabilidad el CV y la VB intraindividual. Cada laboratorio debería establecer la estabilidad de sus analitos según el tubo primario utilizado, con el objetivo de responder a no conformidades que requieran el procesamiento de analitos sobre muestras previamente extraídas en el caso de que éstas se conserven en tubo primario.

The stability of 25 analytes during a seven-day storage in two different kinds of tubes was studied. PMMA (polimetilmetaacrilate) tubes contain a clotting activator (glass particles) and the other tubes contain a gel barrier. The aim was to determine the analytes' stability in both kinds of tubes and, as a consequence, to determine the optimal time for storage of the samples in the primary tube. The specimens were maintained at 4-8 ºC and analyzed in duplicate during seven days. The analytes' stability was determined by comparing the results obtained each day with those obtained on the first day. The significant change limits were based on the determination of the variation coefficient, on the biological variation and on statistically significant changes using a MANOVA test. Mean values of aldolasa, phosphate, glucose, lactic dehydrogenase, potassium and sodium stored in tubes with a clotting activator had statistical differences in comparison with the mean values of the same analytes stored with a gel barrier. Each laboratory should investigate the specific analytes' stability according to the collection device used.