Spinal Cord Injury Markedly Altered Protein Expression Patterns in the Affected Rat Urinary Bladder during Healing Stages

The influence of spinal cord injury (SCI) on protein expression in the rat urinary bladder was assessed by proteomic analysis at different time intervals post-injury. After contusion SCI between T9 and T10, bladder tissues were processed by 2-DE and MALDI-TOF/MS at 6 hr to 28 days after SCI to identify proteins involved in the healing process of SCI-induced neurogenic bladder. Approximately 1,000 spots from the bladder of SCI and sham groups were visualized and identified. At one day after SCI, the expression levels of three protein were increased, and seven spots were down-regulated, including heat shock protein 27 (Hsp27) and heat shock protein 20 (Hsp20). Fifteen spots such as S100-A11 were differentially expressed seven days post-injury, and seven proteins including transgelin had altered expression patterns 28 days after injury. Of the proteins with altered expression levels, transgelin, S100-A11, Hsp27 and Hsp20 were continuously and variably expressed throughout the entire post-SCI recovery of the bladder. The identified proteins at each time point belong to eight functional categories. The altered expression patterns identified by 2-DE of transgelin and S100-A11 were verified by Western blot. Transgelin and protein S100-A11 may be candidates for protein biomarkers in the bladder healing process after SCI.

Patrón de proteínas expresadas en promastigotes de Leishmania amazonensis (LTB0016) obtenido con el uso de la electroforesis en dos dimensiones / Patern of expressed protein in promastigotes of amazonensis Leishmania (LTB0016) obteined with the use of the two-dimensional electrophoresis

Se realizaron varios ensayos con la finalidad de obtener un método de preparación del homogenato de promastigotes de Leishmania amazonensis, que proporcionará la resolución y reproducibilidad adecuada en los patrones de manchas proteicas. La resuspensión del sedimento de promastigotes con solución de lisis fresca, su posterior incubación por dos horas, la incorporación del DTT y anfolitos a la muestra justo antes de hidratar la tira proporcionaron las condiciones necesarias para lograr la resolución de las manchas proteicas en los geles en los cuales se corrieron los extractos del parásito. Un grupo de geles obtenidos utilizando tiras de 11 cm de longitud y rango de pH de 3-6 fueron analizados además usando el programa de análisis de imágenes PD Quest, con el cual se obtuvo un mapa de referencia de 400 manchas proteicas. Otro grupo de geles fue utilizado para experimentos de inmunodetección, las proteínas separadas por electroforesis en dos dimensiones fueron transferidas a una membrana de nitrocelulosa y enfrentada a suero de pacientes con leishmaniasis, estos sueros reconocieron un grupo de manchas proteicas con pesos moleculares que oscilan entre 14,5 y 66 kDa, estas manchas proteicas se obtuvieron con gran separación y resolución lo que facilitaría su posterior escissión para ulteriores estudios. Estos resultados son pioneros en el área del proteoma y son de gran valor para la identificación y estudio de las proteínas de Leishmania amazonensis (LTB0016). Los mismos permitirán en un futuro, entre otras cosas, comparar el mapa proteico de promastigotes en cultivo, con los de otros estadios de la misma u otra especie de Leishmania.