RESUMO
A Distrofia Muscular de Duchenne (DMD) é uma desordem genética de caráter recessivo ligada ao cromossoma X, acometendo 1 a cada 3500 meninos nascidos vivos. A doença é caracterizada por fraqueza muscular presente nos primeiros anos de vida, seguida por progressiva perda da capacidade de deambulação e óbito. A ausência da proteína estrutural distrofina é tida como causa primária da patologia, tendo em vista sua participação no complexo responsável pela estabilização do sarcolema, mediando a ancoragem de proteínas do citoesqueleto à matriz extracelular (MEC). Em decorrência da instabilidade gerada pela ausência da distrofina, ocorre o rompimento da fibra, inflamação tecidual e aumento de elementos de matriz extracelular (MEC). Recentemente nosso grupo observou aumento da expressão de um dos receptores de MEC, a integrina VLA-4 (4 beta 1-CD49d, CD29), em linfócitos T de um dos pacientes distróficos. A expressão dessa integrina vem sendo relacionada à facilitação do recrutamento de células inflamatórias a sítios de lesão através de sua ligação a VCAM1, expresso por células endoteliais, e a fibronectina, importante componente da MEX, cuja expressão encontra-se aumentada no músculo esquelético de pacientes com DMD. Para avaliarmos se o aumento da expressão dessa integrina poderia de fato conferir maior capacidade migratória através de endotélio e induzida por fibronectina da população de linfócitos T, realizamos ensaios de migração in vitro. Vimos que linfócitos T de pacientes DMD tinham uma maior capacidade migratória quando comparamos a indivíduos saudáveis. O bloqueio do VLA4 foi capaz de reverter este aumento. Mais recentemente, realizamos ensaios afim de avaliar a participação dessa mesma integrina na regulação da resposta contra fibra muscular. Nossos resultados vêm mostrando maior adesão de células de pacientes DMD a fibras musculares, sendo esta adesão diminuída após bloqueio do VLA4. 4 é potencial alvo terapêutico para pacientes DMD.
Assuntos
Humanos , Integrinas , Linfócitos , Distrofia Muscular de Duchenne , Receptores de Antígeno muito TardioRESUMO
A micropipette technique was adopted to investigate the effect of blockade of integrin betal on adhesion of hepatocellular carcinoma (HCC) cells onto type IV collagen (Col IV) coated surfaces and pseudopod protrusion of HCC cells in response to Col IV stimulation. Adhesion strength was expressed as an adhesion force, which was defined as the product of the cross sectional area and critical negative pressure needed to detach single cell away from the substrate. Chemotactic pseudopod protrusion of an HCC cell was evaluated using a dual-pipette set-up, in which two pipettes filled with Col IV solution were positional in close contact with the same cell and pseudopod protrusion into each pipette was viewed dynamically and recorded with a tape recorder. The lengths of pseudopods were measured and plotted against time to obtain a pseudopod growth curve. The integrin beta1 subunit on the surfaces of HCC cells was analyzed by flow cytometry. The results showed that the adhesion forces for HCC cells adhering on 5 microg/ml Col IV coated surfaces were 932 +/- 134 (x 10(-10) N, n = 60). Upon treatment of HCC cells with Anti-CD29 in a protein concentration of 5 microg/ml and 10 microg/ml, the value decreased significantly to 449 +/- 119 (x 10(-10) N, n = 60) and 220 +/- 78 (x 10(-10) N, n = 55), respectively. In dual pipette chemotaxis experiment, when the two pipettes were filled with Col IV in an identical concentration of 600 microg/ml, pseudopods extended from the HCC cell into each of the pipettes nearly symmetrically, i.e., with nearly identical maximum pseudopod length and similar pseudopod growth curves. Upon addition of Anti-CD29 to one of the pipettes in a protein concentration of 20 microg/ml, pseudopod protrusion was blocked nearly completely while protrusion into the opposite pipette became more evidently, with larger maximum length. Expression of integrin beta1 was up to 95.78% to cells chosen in the experiment. These results suggested that integrin beta1 subunit was important constituent receptor subunit for mediating HCC cell adhesion and chemotactic pseudopod protrusion to Col IV.
Assuntos
Humanos , Anticorpos Monoclonais , Farmacologia , Carcinoma Hepatocelular , Metabolismo , Patologia , Adesão Celular , Quimiotaxia , Alergia e Imunologia , Colágeno Tipo IV , Metabolismo , Integrina beta1 , Alergia e Imunologia , Neoplasias Hepáticas , Metabolismo , Patologia , Invasividade Neoplásica , Receptores de Antígeno muito Tardio , Alergia e Imunologia , Células Tumorais CultivadasAssuntos
Humanos , Animais , Coelhos , Receptores de Antígeno muito Tardio , Receptores de Fibronectina/efeitos dos fármacos , Modelos Animais de Doenças , Eosinófilos , Inflamação/terapia , Integrinas/efeitos dos fármacos , Mediadores da Inflamação/efeitos adversos , Mediadores da Inflamação/imunologia , OvinosRESUMO
O sistema de moléculas de adesäo AVL-4/VCAM-1 é responsávelpelo recrutamento e acúmulo seletivos de eosinófilos e basófilos nos locais de inflamaçäo alérgica. A expressäo endotelial de VCAM-1 pode ser induzida por IL-1, TNF e IL-4 promovendo a aderência de células VLA-4 positivas (eosinófilos, basófilos, monócitos e linfócitos). O mesmo näo ocorrendo com as células VLA-4 negativas (neutrófilos). A densidade dos receptores de VLA-4 aumenta significativamente nos linfócitos T pulmonares cerca de 48 horas após a broncoprovocaçäo alergênica específica. O mesmo ocorre com a expressäo de HLA-DR. A ativaçäo de VLA-4 (CD 49 d) pode explicar a concentraçäo seletiva de células T nos brônquios dos pacientes asmáticos alérgicos. O acúmulo destes linfócitos T ativados contribuiria para a patogênese da asma e de outras manifestaçöes atópicas. A terapêutica antialérgica futura incluirá a prevençäo da ativaçäo das moléculas de adesäo e da liberaçäo das citocinas humanas.