RESUMO
Human mesenchymal stem cells (MSCs) have emerged as attractive cellular vehicles to deliver therapeutic genes for ex-vivo therapy of diverse diseases; this is, in part, because they have the capability to migrate into tumor or lesion sites. Previously, we showed that MSCs could be utilized to deliver a bacterial cytosine deaminase (CD) suicide gene to brain tumors. Here we assessed whether transduction with a retroviral vector encoding CD gene altered the stem cell property of MSCs. MSCs were transduced at passage 1 and cultivated up to passage 11. We found that proliferation and differentiation potentials, chromosomal stability and surface antigenicity of MSCs were not altered by retroviral transduction. The results indicate that retroviral vectors can be safely utilized for delivery of suicide genes to MSCs for ex-vivo therapy. We also found that a single retroviral transduction was sufficient for sustainable expression up to passage 10. The persistent expression of the transduced gene indicates that transduced MSCs provide a tractable and manageable approach for potential use in allogeneic transplantation.
Assuntos
Adolescente , Animais , Criança , Humanos , Camundongos , Morte Celular/efeitos dos fármacos , Linhagem Celular Tumoral , Proliferação de Células/efeitos dos fármacos , Transformação Celular Neoplásica/efeitos dos fármacos , Citosina Desaminase/genética , Fluoruracila/farmacologia , Terapia Genética , Instabilidade Genômica/efeitos dos fármacos , Cariótipo , Células-Tronco Mesenquimais/citologia , Células-Tronco Multipotentes/citologia , Neoplasias/terapia , Retroviridae/metabolismo , Fatores de Tempo , Transdução GenéticaRESUMO
As terapias antirretrovirais (TARV) trouxeram um grande benefício para os pacientes infectados pelo HIV, porém não conseguem impedir totalmente o surgimento de formas virais resistentes, causadas principalmente pela elevada taxa mutacional do vírus. O desenvolvimento de resistência do HIV aos antirretrovirais é um fator limitante para o sucesso da TARV. Os portadores de vírus resistentes, além de não responderem adequadamente ao tratamento, podem também transmitir estes vírus mutantes, representando grave problema de saúde pública. O acúmulo de mutações de resistência aos antirretrovirais representa um desafio importante na melhoria do tratamento de pacientes com vírus multirresistentes. Atualmente, dois tipos de métodos estão estabelecidos para avaliação da resistência ou sensibilidade do HIV aos antirretrovirais: os testes fenotípicos e genotípicos de resistência. As análises de resistência do HIV aos antirretrovirais, avançaram muito nos últimos anos com o desenvolvimento dos algoritmos para avaliação de resistência. Atualmente, uma série de sistemas de interpretação de resistência fenotípica e genotípica do HIV aos antirretrovirais estão disponíveis na Internet. Estes sistemas identificam respectivamente os níveis de sensibilidade in vitro aos antirretrovirais e mutações associadas à resistência em sequêcias virais, e retomam o perfil de resistência do HIV, funcionando portanto, como importantes ferramentas para utilização em análises de resistência. No presente trabalho, foi desenvolvida uma ferramenta de bioinformática para análise de resistência do HIV-1 aos antirretrovirais, chamada de LASP-HIV1-ResTool. A ferramenta LASP-HIV1-ResTool é capaz de otimizar a análise de dados genômicos do HIV-1, é de fácil manuseio e está disponível no site da unidade de bioinformática do LASP/CPqGM/FIOCRUZ, Bioafrica e 10C/FIOCRUZ para domínio público...
The antiretroviral therapy (HAART) has brought a great benefit to HIV-infectedpatients, but can not completely prevent the emergence of resistant viral forms, mainly caused by the high mutation rate of the virus. The development of HIV resistance to antiretroviral drugs is a limiting factor for the success of HAART. The patients with resistant virus, that do not respond adequately to treatment, may also transmit this virus mutants, representing a serious public health problem. The accumulation of resistancemutations to antiretroviral drugs represents a major challenge in improving the treatment of multiresistant virus. Currently, two types of methods are established to assess resistance or susceptibility of HIV to antiretroviral drugs: the phenotypic and genotypicresistance. However, the analysis of HIV resistance to antiretrovirals, have advanced greatly in recent years with the development of algorithms for evaluation of resistance. Currently, a number of systems for interpretation of HIV resistance to antiretrovirals, using algorithms, are available on the Internet. These systems identify the mutations associated with resistance, in amino acids sequences and return the viral resistance profile of HIV, acting therefore as, important tools for use in resistanceanalysis. In this study, we developed a bioinformatics tool for analysis of HIV-1 resistance to antiretrovirals. This tool is easy to use, will be available at the bioinformatics unit of LASP / CPqGM / FIOCRUZ, Bioafrica and IOC / FIOCRUZ in public domain and is able to optimize the analysis of genomic data of HIV-1...