Actividad antiviral in vitro de un extracto acuoso del alga roja Tricleocarpa fragilis frente a virus influenza A / In vitro antiviral activity of aqueous extract from red seaweed Tricleocarpa fragilis to Influenza A virus

INTRODUCCIÓN: los virus influenza constituyen importantes patógenos de humanos que anualmente causan alrededor de 500 000 muertes a nivel mundial. La emergencia de variantes virales resistentes a los fármacos antiinfluenza disponibles, motiva la búsqueda de nuevos antivirales. Los extractos obtenidos a partir de algas pueden ser empleados con esta finalidad, teniendo en cuenta la diversidad de metabolitos secundarios descritos en estos organismos. OBJETIVO: evaluar la actividad antiviral in vitro de un extracto acuoso del alga roja Tricleocarpa fragilis frente a virus influenza A(H1N1) y A(H3N2) MÉTODOS: se determinó el valor de concentración citotóxica media (CC50) empleando el ensayo de reducción de MTT en células MDCK . El cálculo de la concentración inhibitoria media (CI50) se realizó mediante un ensayo de hemaglutinación y de inhibición del efecto citopático (ECP) en células MDCK. El índice selectivo (IS) se calculó a partir de la relación IS= CC 50/CI50. RESULTADOS: el extracto acuoso de T. fragilis no resultó tóxico en las células MDCK, en el rango de concentraciones evaluadas. El alga inhibió la replicación in vitro de virus influenza A(H1N1), A(H3N2) con valores de IS> 11,4 y 106, respectivamente. CONCLUSIONES: el extracto acuoso de T. fragilis posee actividad antiviral frente a virus influenza A y puede ser empleado en el desarrollo de fármacos antiinfluenza novedosos. Este trabajo constituye el primer informe sobre la actividad antiviral de esta especie de alga(AU)

INTRODUCTION: influenza viruses are major human pathogens that cause over 500 000 deaths every year. The emergence of viral variants resistant to approved antiviral drugs has prompted the search for new anti-influenza compounds. Alga could be used as a source for the development of new anti-influenza drugs, taking into account the diversity of secondary metabolites previously described in these organisms. OBJECTIVE: to evaluate the in vitro antiviral activity of aqueous extract of the red seaweed Tricleocarpa fragilisagainst influenza A virus. METHODS: the mean citotoxicity (CC50) concentration of the extract was determined by using the MTT reduction assay in MDCK cells. The mean inhibitory concentration (CI50) was estimated by means of viral protein (hemagglutinin) test and a cytopathic effect inhibition test in MDCK cells. The Selective index was calculated from (SI)= CC50/IC50. RESULTS: T. fragilis was not toxic at the concentrations evaluated in MDCK cells. The aqueous extract inhibited in vitro influenza A(H1N1) and A(H3N2) virus replication with SI values > 11.4 and 106; respectively. CONCLUSIONS: aqueous extract of T. fragilis showed in vitro anti-influenza activity and can be employed as a source for new antiviral drugs. This paper was the first report for the antiviral activity of T. fragilis(AU)

Virological surveillance and antiviral resistance of human influenza virus in Argentina, 2005–2008 / Vigilancia virológica y resistencia a los antivíricos del virus de la gripe humana en la Argentina, 2005–2008

Objective. To describe the virological characteristics of the influenza strains circulating in Argentina in 2005–2008 and to assess the prevalence of antiviral resistance. Methods. On the basis of their geographical spread and prevalence, influenza A and B isolates grown in Madin–Darby canine kidney cells were selected after antigenic and genomic characterization to be analyzed for antiviral resistance by enzymatic assay and pyrosequencing. Amantadine susceptibility was evaluated by pyrosequencing for known resistance markers on 45 strains of influenza A. Susceptibility to oseltamivir and zanamivir was evaluated by enzymatic assay of 67 influenza A and 46 influenza B strains, some of which were further analyzed by sequencing the neuraminidase gene. Results. Resistance to amantadine was observed only on A(H3N2) strains (29/33); all of them carried the mutation S31N in their M2 sequence. Oseltamivir resistance was observed in 12 (34.3%) of the 35 A(H1N1) strains from 2008; all of them carried the mutation H275Y in their neuraminidase sequence. All these viruses remained sensitive to zanamivir. Conclusions. This study describes a high incidence of amantadine-resistant influenza A(H3N2) viruses since 2006 and an unprecedented increase in oseltamivir resistance detected only in influenza A(H1N1) viruses isolated in 2008. Influenza A and B viruses were more sensitive to oseltamivir than to zanamivir, and influenza A viruses were more sensitive to both neuraminidase inhibitors than the influenza B viruses. The national data generated and analyzed in this study may help increase knowledge about influenza antiviral drug resistance, which is a problem of global concern.

Objetivo. Describir las características virológicas de las cepas de virus de la gripe que circulaban en la Argentina entre el 2005 y el 2008, y evaluar la prevalencia de la resistencia a los antivíricos. Métodos. Según su diseminación geográfica y su prevalencia, se seleccionaron aislados de gripe A y B cultivados en células renales caninas de Madin-Darby después de su caracterización antigénica y genómica, y se analizó su resistencia a los antivíricos mediante análisis enzimático y pirosecuenciación. La sensibilidad a la amantadina se evaluó por pirosecuenciación para los marcadores conocidos de resistencia en 45 cepas de gripe A. La sensibilidad al oseltamivir y al zanamivir se evaluó mediante análisis enzimático de 67 cepas de gripe A y 46 cepas de gripe B, algunas de las cuales se analizaron en mayor profundidad mediante la secuenciación del gen de la neuraminidasa. Resultados. Se observó resistencia a la amantadina solo en las cepas de gripe A (H3N2) (29/33); todas ellas tenían la mutación S31N en su secuencia de M2. Se observó resistencia al oseltamivir en 12 (34,3%) de las 35 cepas de gripe A (H1N1) aisladas en el 2008; todas ellas tenían la mutación H275Y en su secuencia de neuraminidasa. Todos estos virus conservaron su sensibilidad al zanamivir. Conclusiones. En este estudio se describe una incidencia elevada del virus de la gripe A (H3N2) resistente a la amantadina desde el 2006 y un aumento sin precedentes de la resistencia al oseltamivir detectada solo en los virus de la gripe A (H1N1) aislados en el 2008. Los virus de la gripe A y B fueron más sensibles al oseltamivir que al zanamivir y los virus de la gripe A fueron más sensibles a ambos inhibidores de la neuraminidasa que los virus de la gripe B. Los datos nacionales generados y analizados en este estudio pueden ayudar a aumentar los conocimientos acerca de la resistencia a los fármacos antivíricos dirigidos contra el virus de la gripe, lo que es un motivo de preocupación mundial.

Surveillance of adamantane resistance among influenza A H3 viruses isolated in Argentina between 2001 and 2007 / Vigilancia de la resistencia a los adamantanos entre los virus influenza A H3 aislados en Argentina entre 2001 y 2007

A dramatic rise in the frequency of resistance to adamantane drugs by influenza A H3 viruses, associated with a single amino acid replacement in the viral matrix M2 protein, has occurred in multiple countries worldwide in recent years. We investigated the frequency of adamantane-resistant influenza A H3 viruses in Argentina during the period 2001- 2007. We used reverse transcription followed by polymerase chain reaction. The obtained products were sequenced for the detection of mutations of the M2 gene relevant to the resistance phenotypes. The HA1 sequences of the sensitive and resistant strains were also analyzed to clarify whether they had any relevance to the resistant mutations. Twenty out of 55 (36%) strains were identified with the resistance-conferring substitution at amino acid 31 (Serine 31 Asparagine). No resistant viruses were detected between 2001 and 2005. All strains isolated in 2006 and four out of five isolates from 2007 were resistant. None of the patients had received previous treatment with amantadine and/or rimantadine. The HA1 analysis showed that there were only two changes (Serine193 Phenylalanine and Aspartic acid 225 Asparagine) present in the strains with the M2 substitution at position 31. Our data indicate that since 2006 there has been a significant increase of adamantane-resistant influenza A H3 viruses, which raises concern over the spread of these viruses in Argentina.

En los últimos años, se ha detectado un aumento de virus influenza A H3 resistentes a los adamantanos en distintos países, asociados mayoritariamente con el reemplazo de un único aminoácido de la proteína matriz M2. Se investigó la frecuencia de virus influenza A H3 resistentes a los adamantanos en Argentina entre 2001 y 2007. Se utilizó la transcripción reversa seguida de la reacción en cadena de la polimerasa y de la técnica de secuencia directa para la detección de mutaciones en el gen que codifica para la proteína M2, relevantes para los fenotipos de resistencia. También se analizó la secuencia de la porción HA1 de cepas resistentes y sensibles, para intentar establecer alguna relación con las mutaciones de M2. De un total de 55 cepas, 20 (36%) fueron resistentes debido a un cambio aminoacídico en la posición 31 (serina 31 asparagina). No se detectaron cepas resistentes entre 2001 y 2005. Las cepas aisladas en el 2006 y 4 de 5 cepas obtenidas en el 2007 fueron resistentes. Ninguno de los pacientes de los que se habían aislado esas cepas había recibido tratamiento antiviral con anterioridad. En la porción secuenciada de HA1 se encontraron dos cambios (serina 193 fenilalanina y ácido aspártico 225 asparagina), presentes sólo en las cepas que tuvieron la mutación en la posición 31 de M2. Desde el año 2006 se ha registrado en Argentina un aumento significativo de la circulación de virus influenza A H3 con genotipo resistente, lo que genera expectativa con respecto a su diseminación en nuestro país.

Application of various antioxidants in the treatment of influenza

We determined the effect of the antioxidants superoxide dismutase, desferrioxamine and allopurinol on the survival of male CBA mice infected intranasally with 2-5 LD50 lung influenza virus A/Aichi/2/68. Survival for at least 20 days was observed for 45 percent of the mice that received 1000 U/day superoxide dismutase prepared from red blood cells on days 5,6,7 and 8 after infection, and 75 percent survival was observed for mice that received the same dose on days 4,5,6,7 and 8. Desferrioxamine, 25 mg/kg per day and 100 mg/kg per day injected subcutaneously, resulted in survival rates of 5 and 0 percent, respectively, compared to 10 percent survival observed for saline-injected controls. Allopurinol at doses of 5 to 50 mg/kg per day had no effect on mouse survival. These data demonstrate the efficacy of superoxide dismutase for the protection of mice against hemorrhagic lung edema. The ineffectiveness of allopurinol suggest that the xanthine oxidase system does not play a major role in hemorrhage or lung edema and that caution is necessary when desferrioxamine is administered during an acute inflammatory process accompanied by erythrocyte lysis.