Generation and characterization of new HER2 monoclonal antibodies.

Antibodies are among the most commonly used research and diagnostic tools. Antibody type and clonality are important in any assay as they can influence epitope detection. HER2 oncoprotein is overexpressed or undergoes gene amplification in approximately 30% of invasive breast carcinomas and 20% of gastric adenocarcinomas. Overexpression of HER2 is primarily detected by immunohistochemistry (IHC) on neoplastic tissue sections. We produced five murine hybridoma clones secreting monoclonal antibodies (MAbs) against HER2 protein. For hybridoma production, spleen cells from BALB/c mice immunized with a recombinant fragment of the extracellular portion of HER2 (rHER2) were fused to SP2/O-Ag14 cells, selected in HAT medium and screened by indirect ELISA. MAbs secreted were characterized according to isotypes, functional affinity constants, reaction with the native protein in MCF-7 cells by indirect immunofluorescence and in tissue sections from HER2 positive breast cancer specimens by IHC. Two MAbs were IgG2b and three were IgG1, and their affinity constants ranged from 6×10(7) to 1×10(9)M(-1). All MAbs reacted with the native protein and two stained strongly the membrane of neoplastic cells overexpressing HER2. These two MAbs could be useful in assaying HER2 overexpression in human tissues for research and possibly diagnostic purposes after a proper large-scale validation study.

Diagnosis of canine leptospirosis using an immunomagnetic separation-PCR method

Diagnosis of leptospirosis by PCR is hampered due to the presence of substances on biological fluids. Here, we report an immunomagnetic separation step prior to PCR which improved the detection of Leptospira spp. in blood and urine samples from dogs. It resulted in a significant improvement on sensitivity for diagnosis of canine leptospirosis.

Controle de qualidade em unidades de alimentação e nutrição de Caxias do Sul, RS / Quality control in Food and Nutrition Units of Caxias do Sul, RS

O objetivo deste estudo foi avaliar a adoção de Boas Práticas (BP), Procedimentos Operacionais Padronizados (POP) e sistema de Análise de Perigos e Pontos Críticos de Controle (APPCC) em Unidades de Alimentação e Nutrição de Caxias do Sul, RS. Foi realizado um estudo exploratório e descritivo que avaliou, por meio de questionário, 20 Unidades de Alimentação e Nutrição de Caxias do Sul, RS, em relação à utilização de ferramentas de controle de qualidade. Foi constatado que 25% e 95% das unidades não possuíam a BP e APPCC implantados, respectivamente. Em relação aos POP, 50% das unidades não possuíam esta ferramenta de auxílio no controle de qualidade dos alimentos. Os resultados obtidos indicaram que existem falhas na implantação e execução das ferramentas de controle de qualidade (BP, POP e APPCC) nas etapas e preparação, conservação e distribuição dos alimentos.

Diagnosis of canine leptospirosis using an immunomagnetic separation-PCR method.

Diagnosis of leptospirosis by PCR is hampered due to the presence of substances on biological fluids. Here, we report an immunomagnetic separation step prior to PCR which improved the detection of Leptospira spp. in blood and urine samples from dogs. It resulted in a significant improvement on sensitivity for diagnosis of canine leptospirosis.

Highly virulent Leptospira borgpetersenii strain characterized in the hamster model.

Abstract. A recent study by our group reported the isolation and partial serological and molecular characterization of four Leptospira borgpetersenii serogroup Ballum strains. Here, we reproduced experimental leptospirosis in golden Syrian hamsters (Mesocricetus auratus) and carried out standardization of lethal dose 50% (LD50) of one of these strains (4E). Clinical disease features and histopathologic analyses of tissue lesions were also observed. As results, strain 4E induced lethality in the hamster model with inocula lower than 10 leptospires, and histopathological examination of animals showed typical lesions found in severe leptospirosis. Gross pathological findings were peculiar; animals that died early had more chance of presenting severe jaundice and less chance of presenting pulmonary hemorrhages (P < 0.01). L. borgpetersenii serogroup Ballum has had a considerable growth in human leptospirosis cases in recent years. This strain has now been thoroughly characterized and can be used in more studies, especially evaluations of vaccine candidates.

An immunomagnetic separation-PCR method for detection of pathogenic Leptospira in biological fluids.

Abstract Leptospirosis is a zoonotic disease that occurs worldwide and is caused by pathogenic bacteria of the genus Leptospira. Clinical manifestations of leptospirosis are similar to other febrile illnesses and this fact frequently retards the beginning of antibiotic therapy. Thus, early and accurate diagnosis is a prerequisite for proper treatment of leptospirosis. Antigen and DNA-based detection tests offer potential advantage over tests based on antibody detection for early diagnosis of leptospirosis since antibodies only reach detectable levels several days after the onset of the infection. This work describes a method for detection of pathogenic Leptospira that associates an immunoseparation step with a PCR assay and uses an internal amplification control (IAC) to ensure accuracy of the test. The immunoseparation was performed with protein A-magnetic beads in house coated with an MAb specific for LipL32, the major outer membrane protein of pathogenic Leptospira; PCR was performed using lipL32 specific primers. The IMS-PCR method enhanced detection of Leptospira in experimentally contaminated human sera and urine when compared to PCR performed alone. IMS-PCR was able to detect 10(2) Leptospira cells per mL of human sera and urine, corresponding to 25 genomic copies per PCR reaction.

Detection of salmonella sp in chicken cuts using immunomagnetic separation

The immunomagnetic separation (IMS) is a technique that has been used to increase sensitivity and specificity and to decrease the time required for detection of Salmonella in foods through different methodologies. In this work we report on the development of a method for detection of Salmonella in chicken cuts using in house antibody-sensitized microspheres associated to conventional plating in selective agar (IMS-plating). First, protein A-coated microspheres were sensitized with polyclonal antibodies against lipopolysacharide and flagella from salmonellae and used to standardize a procedure for capturing Salmonella Enteritidis from pure cultures and detection in selective agar. Subsequently, samples of chicken meat experimentally contaminated with S. Enteritidis were analyzed immediately after contamination and after 24h of refrigeration using three enrichment protocols. The detection limit of the IMS-plating procedure after standardization with pure culture was about 2x10 CFU/mL. The protocol using non-selective enrichment for 6-8h, selective enrichment for 16-18h and a post-enrichment for 4h gave the best results of S. Enteritidis detection by IMS-plating in experimentally contaminated meat. IMS-plating using this protocol was compared to the standard culture method for salmonellae detection in naturally contaminated chicken cuts and yielded 100 percent sensitivity and 94 percent specificity. The method developed using in house prepared magnetic microespheres for IMS and plating in selective agar was able to diminish by at least one day the time required for detection of Salmonella in chicken products by the conventional culture method.

A separação imunomagnética (IMS) é uma técnica que tem sido associada a diferentes métodos de detecção de Salmonella em alimentos para aumentar a sensibilidade e a especificidade e diminuir o tempo de análise. Neste trabalho é comunicada a obtenção de microesferas magnéticas sensibilizadas com anticorpos anti-Salmonella e seu uso em associação com a metodologia de cultivo convencional para desenvolver um método de detecção de salmonelas em cortes de frango (IMS-plaqueamento). Inicialmente, microesferas cobertas com proteína A foram sensibilizadas com anticorpos policlonais contra lipopolissacarídeo e flagelo de salmonelas e usadas na padronização de um procedimento que captura Salmonella Enteritidis em cultivo puro e faz posterior detecção em ágar seletivo. A seguir, amostras de carne de frango experimentalmente contaminadas com S. Enteritidis foram analisadas imediatamente após a contaminação e após 24h de refrigeração utilizando três protocolos de enriquecimento. O limite de detecção foi cerca de 2x10 UFC/mL. O protocolo que incluiu enriquecimento não-seletivo por 6-8h, enriquecimento seletivo por 16-18h e pós-enriquecimento por 4h foi o que proporcionou melhor resultado na detecção de S. Enteritidis em carne de frango experimentalmente contaminada. Este protocolo foi comparado à metodologia convencional em estudo de detecção de salmonelas em cortes de frango naturalmente contaminados e obteve 100 por cento de sensibilidade e 94 por cento de especificidade. O método desenvolvido foi capaz de diminuir em pelo menos um dia o tempo de detecção de salmonelas em cortes de frango pela metodologia convencional.

Detection of Salmonella sp in chicken cuts using immunomagnetic separation.

The immunomagnetic separation (IMS) is a technique that has been used to increase sensitivity and specificity and to decrease the time required for detection of Salmonella in foods through different methodologies. In this work we report on the development of a method for detection of Salmonella in chicken cuts using in house antibody-sensitized microspheres associated to conventional plating in selective agar (IMS-plating). First, protein A-coated microspheres were sensitized with polyclonal antibodies against lipopolysacharide and flagella from salmonellae and used to standardize a procedure for capturing Salmonella Enteritidis from pure cultures and detection in selective agar. Subsequently, samples of chicken meat experimentally contaminated with S. Enteritidis were analyzed immediately after contamination and after 24h of refrigeration using three enrichment protocols. The detection limit of the IMS-plating procedure after standardization with pure culture was about 2x10 CFU/mL. The protocol using non-selective enrichment for 6-8h, selective enrichment for 16-18h and a post-enrichment for 4h gave the best results of S. Enteritidis detection by IMS-plating in experimentally contaminated meat. IMS-plating using this protocol was compared to the standard culture method for salmonellae detection in naturally contaminated chicken cuts and yielded 100% sensitivity and 94% specificity. The method developed using in house prepared magnetic microespheres for IMS and plating in selective agar was able to diminish by at least one day the time required for detection of Salmonella in chicken products by the conventional culture method.

Evaluation of different ways of presenting LipL32 to the immune system with the aim of developing a recombinant vaccine against leptospirosis.

Leptospirosis, caused by bacteria of the genus Leptospira, is a direct zoonosis with wide geographical distribution. The implications in terms of public health and the economical losses caused by leptospirosis justify the use of a vaccine against Leptospira in human or animal populations at risk. In this study, we used the external membrane protein LipL32 as a model antigen, as it is highly immunogenic. The LipL32 coding sequence was cloned into several expression vectors: (i) pTarget, to create a DNA vaccine; (ii) pUS973, pUS974, and pUS977 for expression in BCG (rBCG); and (iii) pAE, to express the recombinant protein in Escherichia coli, for a subunit vaccine. Mice were immunized with the various constructs, and the immune response was evaluated. The highest humoral immune response was elicited by the subunit vaccine (rLipL32). However, with rBCG, the titer was still rising at the end of the experiment. The serum of vaccinated animals was able to recognize LipL32 on the membrane of the Leptospira, detected by indirect immunofluorescence. A monoclonal antibody anti-LipL32 was shown to inhibit the growth of Leptospira in vitro, indicating potential protection induced by the LipL32 antigen.

Qualidade microbiana e aspecto visual de mandioca minimamente processada / Microbial quality and visual aspect of minimally processed cassava

Foi avaliada a qualidade microbiológica de mandioca minimamente processada, embalada a vácuo e refrigerada (4-7ºC), com quatro a oito dias de armazenamento. Três amostras representativas foram obtidas no comércio da região de Pelotas, a partir de três lotes do produto. As amostras foram coletadas em supermercado para realizar as seguintes avaliações: contagens de bactérias mesófilas, psicrotróficas, láticas, clostrídios sulfito redutores, coliformes totais e fecais, mofos e leveduras, e presença de Salmonella. Os resultados das contagens (UFC g-1) variaram de 4,7 x 106 a 6,3 x 108, para bactérias mesófilas; 1,8 x 107 a 6,0 x 108, para psicrotróficas; 2,8 x 107 a 3,8 x 108, para láticas; 1,5 x 103 a > 1,1x106, para coliformes totais; < 30 a 4,6 x 104 para coliformes fecais; 2,4 x 102 a 2,5 x 104, para mofos e leveduras; e < 10 para clostrídios sulfito redutores. Salmonella não foi detectada. As altas contagens de bactérias sugerem falhas na higiene de produção, processamento ou armazenamento do produto.

Microbial quality and visual aspect of minimally processed cassava. The hygienic-sanitary quality of minimally processed vacuum packaged and refrigerated cassava (4-7ºC), with 4-8 days of storage was evaluated. Three representative samples from 3 different lots of cassava were obtained from retail stores in Pelotas, Rio Grande do Sul State, Brazil. The following microbial counts were carried out in each sample: mesophilic, psychrotrophic, lactic and sulfide-reducing bacteria, total e fecal coliforms and yeast and molds. The presence of Salmonella was also investigated. Results of counts ranged from 4.7 x 106 to 6.3 x 108 CFU g-1 for mesophilic bacteria, 1.8 x 107 to 6.0 x 108 CFU g-1 for psychrotrophic bacteria, 2.8 x 107 to 3.8 x 108 CFU g-1 for lactic bacteria, 1.5 x 103 to > 1.1 x 106 for total coliforms, < 30 to 4.6 x 104 for fecal coliforms, 2.4 x 102 to 2.5 x 104 CFU g-1 for yeasts and molds and < 10 CFU g-1 for sulfide-reducing bacteria. Salmonella was not detected. The high counts of bacteria in the product suggest poor processing or storage practices.

Isolamento de Salmonella de produtos de frango e perfil de suscetibilidade dos isolados a antimicrobianos / Salmonella isolation from poultry products and antimicrobial susceptibility

Salmonella Enteritidis tem sido o principal sorotipo causador de salmonelose. O uso de antimicrobianos na prevenção e no tratamento dessa infecção, assim como a utilização destes como promotores de crescimento, tem provocado o aparecimento de cepas resistentes. O trabalho teve por objetivo investigar a presença de Salmonella em produtos de frango e verificar a resistência dos isolados frente a agentes antimicrobianos. Foram analisadas 120 amostras de produtos de frango, segundo metodologia preconizada pela Food and Drug Administration. Salmonella foi isolada de sete (15,83%) amostras e foram identificados quatro sorotipos, Enteritidis, Newport, Derby e Agona. Enteritidis foi o sorotipo de maior prevalência (71,4%). Trinta e seis (94,7%), 34 (89,5%), 32 (84,2%) e 32 (84,2%) isolados foram sensíveis aos antimicrobianos cloranfenicol, norfloxacina, ciprofloxacina e ampicilina, respectivamente. Trinta e três (86,8%) isolados foram resistentes ao ácido nalidíxico. Todos os isolados (100%) foram sensíveis à cefatriaxona. Vinte e cinco isolados (65,8%) foram resistentes à tetraciclina. Foram encontrados cinco(13,2%) isolados multirresistentes. A fiscalização dos produtos de frango deve ser mais rigorosa, quanto a possível presença de Salmonella. O aparecimento de cepas de Salmonella resistentes a agentes antimicrobianos é indicativo da necessidade de maior controle no uso desses fármacos.

Escherichia coli verotoxigênica: isolamento e prevalência em 60 propriedades de bovinos de leite da região de Pelotas, RS, Brasil / Verotoxin-producing Escherichia coli: isolation and prevalence in 60 dairy cattle farms from Pelotas-RS, Brazil

A produção de verotoxinas foi investigada em 1.127 isolamentos de Escherichia coli feitos a partir de 243 bovinos de leite, de água de consumo humano e animal e de amostras de leite de 60 propriedades da bacia leiteira de Pelotas, no período de dezembro de 1999 a dezembro de 2000, com o objetivo de determinar a prevalência de E. coli verotoxigênicas (VTEC) nas propriedades e no rebanho, de detectar a presença de sorotipos ligados a infecções humanas e de identificar, nas propriedades e na região de Pelotas, potenciais fatores de risco de infecção para os animais. A detecção das toxinas em sobrenadante de culturas de E. coli isoladas foi realizada através do ensaio de citotoxicidade em células Vero. VTEC foi isolada em 95 por cento (57/60) das propriedades estudadas, em 49 por cento (119/243) dos animais testados, em 5 por cento (3/60) das amostras de água de consumo humano, em 8,35 por cento (5/60) das amostras de água de consumo animal e em 5 por cento (3/60) das amostras de leite. A prevalência de bovinos infectados em cada propriedade variou de 0 a 100 por cento. Em 2,9 por cento (7/243) dos animais testados, foram isoladas VTEC pertencentes aos sorogrupos O157, O91 e O112, que incluem cepas responsáveis por casos de colite hemorrágica e síndrome urêmica hemolítica em humanos. Fatores de risco de contaminação, como a precipitação pluviométrica, a temperatura, o tamanho da propriedade e a concentração de animais, apresentaram evidências de influenciarem a prevalência de VTEC nos animais. Estes resultados sugerem que o grupo VTEC está amplamente distribuído na bacia leiteira de Pelotas e inclui organismos pertencentes a sorogrupos patogênicos para humanos.

The production of verotoxin was investigated in 1127 Escherichia coli isolated from 243 dairy cattle, water for human and animal consumption, and milk samples from 60 dairy farms from Pelotas-Brazil, from December of 1999 to December of 2000, to determine the prevalence of verotoxigenic E. coli (VTEC) in farms, to detect the presence of serotypes involved in human infections and to identify potential risk factors for animal infection. Vero cell assay was used to detect toxins in culture supernatants from E. coli isolated. VTEC was isolated in 95 percent (57/60) from farms and in 49 percent (119/243) from cattle, 5 percent (3/60) from water of human consumption, in 8.35 percent (5/60) from water animal consumption and 5 percent (3/60) from milk samples. The prevalence of cattle infected for each farm ranged from 0 to 100 percent. VTEC belonging to serogroups O157, O91 and O112, which include strains responsible for cases of hemorrhagic colitis and hemolytic uremic syndrome in humans, were isolated from 7 (2.9 percent) out of 243 cattle. Risk factors for contamination, such as amount of rain, farm size and cattle number, influenced cattle prevalence rate. These results suggest that VTEC is widely distributed among dairy cattle in the region surveyed and includes organisms from serogroups pathogenic for humans.

Evaluation of an indirect ELISA for the detection of Salmonella in chicken meat

In this work, an indirect ELISA based on a monoclonal antibody (MAb) specific for an outer membrane protein of Salmonellaenterica serovar Enteritidis was used for detection of Salmonella in 154 samples of chicken meat. Its efficiency was determined through comparison with the results obtained from the conventional method. The prevalence of samples contaminated with Salmonella was 23 percent with the conventional culture method, and 26 percent with the ELISA. From thirty-five samples positive for Salmonella by the conventional method, 33 were also positive by ELISA. Seven other samples were only positive in the ELISA. Comparison of the results obtained in the two methods showed an ELISA sensitivity and specificity of 94 percent, and positive and negative predictive values of 82 percent and 98 percent respectively. The serotyping of the isolates revealed 31 Salmonella enterica serovar Enteritidis, 2 Salmonella enterica serovar Heidelberg, 1 Salmonella enterica serovar Choleraesuis and 1 Salmonella enterica sorovar 6,7:-:-.

Neste trabalho, um ELISA indireto baseado em um anticorpo monoclonal (MAb) especifico para proteína de membrane externa de Salmonellaenterica serovar Enteritidis foi usado para detecção de Salmonella em 154 amostras de carne de frango. Sua eficiência foi determinada através de comparação com os resultados obtidos pela metodologia convencional. A prevalência de amostras contaminadas com Salmonella foi de 23 por cento pelo método de cultivo convencional, e 26 por cento pelo ELISA. De 35 amostras positivas para Salmonella pela metodologia convencional, 32 também foram positivas no ELISA. Outras sete amostras foram positivas somente no ELISA. Comparando os resultados obtidos nos dois métodos, o ELISA demonstrou sensibilidade e especificidade de 94 por cento, e valor preditivo positivo e negativo de 82 por cento e 98 por cento respectivamente. A sorotipagem dos isolados revelou 31 Salmonella enterica serovar Enteritidis, 2 Salmonella enterica serovar Heidelberg, 1 Salmonella enterica serovar Choleraesuis e 1 Salmonella enterica sorovar 6,7:-:-.

Evidência do cão como reservatório da leptospirose humana: isolamento de um sorovar, caracterização molecular e utilização em inquérito sorológico

O artigo, através da realização de vários experimentos, indica o cão, como o segundo principal reservatório de leptospirose

Uso de sanitizantes na redução da carga microbiana de mandioca minimamente processada / Use of sanitizants on the reduce of microbial rate of cassava minimally processed

Foi avaliado o efeito de dois sanitizantes clorados, em diferentes pH, na redução da carga microbiana em mandioca minimamente processada. As raízes foram colhidas na zona rural da região de Pelotas-RS. Após a colheita foram selecionadas, lavadas, descascadas, cortadas em toletes e submetidas aos seguintes tratamentos: 1) sem lavagem; 2) lavagem em água destilada; 3) imersão em solução de dicloro s. triazinatriona sódica dihidratada (Sumaveg®) a 100mg L-1, por 10 minutos; 4) imersão em solução de dicloro s. triazinatriona sódica dihidratada a 200mg L-1, por 10 minutos; 5) imersão em solução de hipoclorito de sódio a 100mg L-1, por 15 minutos; 6) imersão em solução de hipoclorito de sódio a 200mg L-1, por 15minutos; 7) imersão em solução de hipoclorito de sódio a 100mg L-1, pH 6,0, durante 15min e 8) imersão em solução de hipoclorito de sódio a 200mg L-1, pH 6,0, durante 15min. As raízes foram analisadas antes e 15 min após a aplicação dos tratamentos. Determinou-se a contagem total de: mesófilos aeróbios, psicrotróficos, bactérias láticas, coliformes totais, coliformes fecais e mofos e leveduras. Nas soluções sanitizantes sem ajuste de pH, a lavagem apenas em água, reduziu em 1 ciclo logaritmo as contagens de bactérias láticas. Porém, em soluções com pH 6,0, as contagens de mesófilos foram reduzidas em três ciclos logaritmos e em dois ciclos para microrganismos psicrotróficos, bactérias láticas e mofos e leveduras, eliminando coliformes totais e fecais após 15min de contato com o sanitizante. O uso de hipoclorito de sódio, sem ajuste do pH reduziu a carga microbiana de coliformes totais e fecais. Quando se empregou o dicloro s. triazinatriona sódica dihidratada, os resultados foram semelhantes aos obtidos com hipoclorito de sódio sem ajuste de pH. As maiores reduções da carga microbiana, com eliminação dos coliformes totais e fecais, foram obtidas quando se utilizou hipoclorito de sódio, a 100 ou 200mg L-1, com pH ajustado para 6,0 e tempo de exposição de 15 minutos.

[Evidence of dog as a reservoir for human leptospirosis: a serovar isolation, molecular characterization and its use in a serological survey]. / Evidência do cão como reservatório da leptospirose humana: isolamento de um sorovar, caracterização molecular e utilização em inquérito sorológico.

Canine leptospirosis has been known as Stuttgart disease since 1898, and dogs are considered to be the second principal source of infection in man. The isolation of a pathogenic serovar from dog urine that was diagnosed clinically and laboratorial as having leptospirosis and its utilization to test serological samples of human and canine cases of leptospirosis, has demonstrated its importance to the ecosystem of the southern region of Brazil. The results of the serological microscopic agglutination test indicated that 100% of human serum samples from 12 patients from the serum bank of 2001 at the Center for Control of Zoonoses, that had titers between 25 and 3,200 with the canicola serovar, and 72% of 105 canine serum samples from the same serum bank, also reacted with the new isolate. The mean and median titers of the human serum samples tested with the battery of antigens recommended by WHO was 630 and 100 respectively, and when tested with the isolate it was 1,823 and 400. In the dog sera, the values were respectively 347 and 100 with the battery, and 1,088 and 200 with the isolate.

Evidência do cão como reservatório da leptospirose humana: isolamento de um sorovar, caracterização molecular e utilização em inquérito sorológico / Evidence of dog as a reservoir for human leptospirosis: a serovar isolation, molecular characterization and its use in a serological survey

A leptospirose canina é conhecida como enfermidade de Stuttgard desde 1898, sendo os cães, depois dos roedores, considerados como a segunda principal fonte de infecção para o homem. O isolamento de um sorovar patogênico da urina de um cão, laboratorial e clinicamente identificado como tendo leptospirose, e sua utilização para testar amostras de soro de casos de leptospirose humana e canina, evidenciou a sua importância no ecossistema da região sul do Brasil. Os resultados do teste de soroaglutinação microscópica indicaram que 100 por cento das amostras de soro humano de 12 pacientes do banco de soro de 2001 do Centro de Controle de Zoonoses, que haviam reagido com títulos que variaram de 25 a 3.200 para o sorovar canicola, e 72 por cento das amostras de 105 soros caninos do mesmo banco de soro, também reagiram contra o novo isolado. O título médio e mediana dos soros humanos testados com a bateria de antígenos recomendada pela OMS, foi respectivamente 630 e 100, ao passo que os testados com o isolado foi de 1.823 e 400. Nos soros caninos, os títulos foram respectivamente de 347 e 100 para a bateria e de 1.088 e 200 para o isolado.

Production and caracterization of monoclonal antibodies for the detection of Salmonella enterica in chicken meat

Foi obtido um painel de 13 anticorpos monoclonais que reagem com proteínas de membrana externa de Salmonella Enteritidis. Dois MAbs foram classificados como IgM, 6 foram do isotipo IgG2a, três foram do isotipo IgG3 e um do isotipo IgG2b. A reatividade dos anticorpos monoclonais (MAbs) com diferentes sorovares de Salmonella e outras bactérias foi investigada através de um ELISA indireto. Cinco MAbs reagiram apenas com Salmonella Enteritidis. Dois MAbs apresentaram reacão cruzada com antígenos termoextraídos de Klebsiella pneumoniae, Citrobacter freundii e Enterobacter aerogenes. O MAb 424H apresentou amplo espectro de reatividade, detectando antígenos de Salmonella pertencentes aos sorogrupos B, C, D, E, e G. O limite de deteccão de diferentes sorovares de Salmonella em um ELISA indireto com o MAb 424H variou de 1,0 x 104 UFC/mL para Salmonella London a 1,4 x 106 UFC/mL para Salmonella Gallinarum e Salmonella Typhimurium. A avaliacão do desempenho do ELISA indireto com o MAb 424H na deteccão de diferentes sorovares de Salmonella em amostras de carne de frango, mostrou ser possível detectar todos os sorovares após o enriquecimento das amostras, nos três níveis de contaminacão utilizados. A análise de alíquotas de amostras de carne de frango não contaminadas artificialmente, feita em paralelo, foi negativa para Salmonella tanto no método convencional quanto no ELISA.

Intoxicaçäo estafilocócica em restaurante institucional / Staphylococcal intoxication in a institutional restaurant

Foi investigado um surto de intoxicaçäo alimentar ocorrido em um restaurante institucional. Cinqüenta e seis pessoas, de um total de 88, foram acometidas de vômitos, diarréia, dores abdominais, prostraçäo, febre e cefaléia após ingerirem uma refeiçäo composta de sanduíche de galinha, refresco de laranja e pudim de leite. Os sintomas apareceram entre uma hora e meia e 12 horas após a ingestäo da refeiçäo e duraram 24 a 36 horas. As taxas de ataque específico foram de 64 por cento para o sanduíche de galinha, de 61 por cento para o refresco de laranja e de 60 por cento para o pudim. A contagem de Staphylococcus aureus secretores de enterotoxina A no sanduíche de galinha foi de 2 X 10(8)UFC.g-1. Estes resultados, juntamente com os obtidos nos questionários aplicados às pessoas que ficaram doentes, forneceram provas circunstanciais que permitiram concluir que ocorreu uma intoxicaçäo alimentar provocada pelo sanduíche de galinha contaminado com enterotoxina A de Staphylococcus aureus.

Monoclonal antibodies against an outer membrane protein from pathogenic Leptospira

Foram obtidos dois hibridomas secretores de anticorpos monoclonais (MAbs) que reagem com uma lipoproteína (LipL32) da membrana externa de leptospiras patogênicas. Para a produção dos hibridomas, células do baço de camundongos BALB/c, imunizados com LipL32 recombinante (rLipL32), foram fusionadas com células SP2/O-Ag14, selecionadas em meio HAT e testadas em ELISA indireto. Um dos MAbs secretados pelos hibridomas é do isotipo IgG2b e o outro do isotipo IgM. A especificidade dos MAbs foi confirmada em ELISA indireto e immunoblotting usando rLipL32 purificada, Escherichia coli (E. coli) expressando LipL32 e sorovares patogênicos e saprófitas. Os dois MAbs reagiram com a maioria dos sorovares patogênicos e não reagiram com sorovares saprófitas. Os MAbs possuem potencial para uso em testes de diagnóstico de leptospirose.