Immune response of calves inoculated with proteins ofAnaplasma marginale bound to an immunostimulant complex

Despite our current knowledge of the immunology, pathology, and genetics of Anaplasma marginale, prevention in cattle is currently based on old standbys, including live attenuated vaccines, antibiotic treatment, and maintaining enzootic stability in cattle herds. In the present study, we evaluated the use of an immunostimulant complex (ISCOMATRIX) adjuvant, associated with a pool of recombinant major surface proteins (rMSP1a, rMSP1b, rMSP4 and rMSP5) to improve the humoral immune response triggered in calves mainly by IgG2. Ten calves were divided in three groups: 4 calves were inoculated with the ISCOMATRIX/rMSPs (G1); 2 calves were inoculated with ISCOMATRIX adjuvant (G2); and 4 calves received saline (G3). Three inoculations were administered at 21-day intervals. In G1, the calves showed significant increases in total IgG, IgG1 and IgG2 levels 21 days after the second inoculation, compared to the control group (p 0.05), and G1 calves remained above the cut-off value 28 days after the third inoculation (p 0.05). The post-immunized sera from calves in G1 reacted specifically for each of the rMSPs used. In conclusion, the ISCOMATRIX/rMSPs induced antigen-specific seroconversion in calves. Therefore, additional testing to explore the protection induced by rMSPs, both alone and in conjunction with proteins previously identified as subdominant epitopes, is warranted.

Apesar dos avanços da imunologia, patologia e genética deAnaplasma marginale, a prevenção em bovinos ainda é baseada nas vacinas vivas atenuadas, na terapia com antibiótico e estabilidade enzoótica dos rebanhos bovinos. No presente estudo, avaliou-se o uso de um complexo imunoestimulante (ISCOMATRIX), associado ás proteínas recombinantes de superfície (rMSP1a, rMSP1b, rMSP4 e rMSP5) para melhorar a resposta imune humoral desencadeada em bezerros, principalmente por IgG2. Dez animais foram divididos em três grupos: 4 bezerros foram inoculados com o ISCOMATRIX/rMSPs (G1), 2 bezerros foram inoculados com ISCOMATRIX adjuvante (G2) e 4 bezerros receberam salina (G3). Três doses vacinais foram administradas em intervalos de 21 dias. No G1, os bezerros apresentaram aumentos significativos nos níveis de IgG total, IgG1 e IgG2 21 dias após a segunda inoculação, em comparação com o grupo de controle (p 0,05). Nos bezerros do G1 esses níveis de anticoprpos permaneceram acima do ponto de corte 28 dias após a terceira inoculação (p 0,05). Os soros pós-imunização de bezerros do G1 reagiram especificamente com cada uma das rMSPs utilizadas. Em conclusão, o ISCOMATRIX/rMSPs induziu soroconversão antígeno-específica em bezerros. Portanto, se justifica a realização de ensaios adicionais para explorar a proteção induzida pela rMSPs, tanto sozinhas como em conjunto com novas proteínas identificadas com epitopos subdominantes.

Resposta imune de bezerros imunizados com um coquetel de vacina de DNA que codificam proteínas de membrana externa de Anaplasma marginale / Immune response of calves immunized with cocktail of DNA vaccine encoding complexed outer membrane proteins from Anaplasma marginale

No presente estudo, avaliou-se a resposta imune humoral e celular de um coquetel de plasmídeos recombinantes que codificam as principais proteínas de superfície (rMSP1a, rMSP1b, rMSP4, rMSP5, VirB9 e virB10) em bezerros. Dez animais foram divididos em três grupos: quatro bezerros foram inoculados com os plasmídeos / rMSPs (G1); 2 bezerros foram inoculados com vetor vazio (G2), e quatro bezerros receberam salina (G3). Três inoculações foram efetuadas em intervalos de 21 dias. No G1, os bezerros apresentaram aumentos significativos nos níveis de IgG total 21 dias após a segunda inoculação, em comparação com o grupo controle (p 0,05 %) e os bezerros do G1 permaneceram com DO acima do ponto de corte 28 dias após a terceira inoculação (p 0,05 %). Os soros pós-imunes dos bezerros do G1 reagiram especificamente para cada uma das rMSPs usadas. Adicionalmente, IgG específicas para VirB9 e Vir B10 foram detectadas por ELISA. Em conclusão, a associação de plasmídeos recombinantes induziu soroconversão específica nos bezerros testados. Portanto, sugerese a realização de testes adicionais para avaliar a proteção induzida pelos plasmídeos recombinantes, isoladamente ou em conjunto com as proteínas já identificadas com epítopos subdominantes. 

In the present study, we evaluated a cocktail of recombinant plasmids encoding the major surface proteins (rMSP1a, rMSP1b, rMSP4, rMSP5, VirB9 and VirB10) to improve the humoral and cellular immune response triggered in calves. Ten calves were divided in three groups: Four calves were inoculated with the plasmids/rMSPs (G1); 2 calves were inoculated with empty vector (G2); and 4 calves received saline (G3). Three inoculations were administered at 21-day intervals. In G1, the calves showed significant increases in total IgG level 21 days after the second inoculation, compared to the control group (p 0,05%), and G1 calves remained above the cut-off value 28 days after the third inoculation (p 0,05%). The post-immunized sera from calves in G1 reacted specifically for each of the rMSPs used. Additionally, ELISA detected specific IgG for VirB9 and VirB10. In conclusion, the cocktail of recombinant plasmids induced antigen-specific seroconversion in calves. Therefore, additional testing to explore the protection induced by recombinant plasmids, alone or in conjunction with proteins previously identified as subdominant epitopes, is warranted.

Resposta imune de bezerros imunizados com um coquetel de vacina de DNA que codificam proteínas de membrana externa de Anaplasma marginale / Immune response of calves immunized with cocktail of DNA vaccine encoding complexed outer membrane proteins from Anaplasma marginale

No presente estudo, avaliou-se a resposta imune humoral e celular de um coquetel de plasmídeos recombinantes que codificam as principais proteínas de superfície (rMSP1a, rMSP1b, rMSP4, rMSP5, VirB9 e virB10) em bezerros. Dez animais foram divididos em três grupos: quatro bezerros foram inoculados com os plasmídeos / rMSPs (G1); 2 bezerros foram inoculados com vetor vazio (G2), e quatro bezerros receberam salina (G3). Três inoculações foram efetuadas em intervalos de 21 dias. No G1, os bezerros apresentaram aumentos significativos nos níveis de IgG total 21 dias após a segunda inoculação, em comparação com o grupo controle (p 0,05 %) e os bezerros do G1 permaneceram com DO acima do ponto de corte 28 dias após a terceira inoculação (p 0,05 %). Os soros pós-imunes dos bezerros do G1 reagiram especificamente para cada uma das rMSPs usadas. Adicionalmente, IgG específicas para VirB9 e Vir B10 foram detectadas por ELISA. Em conclusão, a associação de plasmídeos recombinantes induziu soroconversão específica nos bezerros testados. Portanto, sugerese a realização de testes adicionais para avaliar a proteção induzida pelos plasmídeos recombinantes, isoladamente ou em conjunto com as proteínas já identificadas com epítopos subdominantes.

In the present study, we evaluated a cocktail of recombinant plasmids encoding the major surface proteins (rMSP1a, rMSP1b, rMSP4, rMSP5, VirB9 and VirB10) to improve the humoral and cellular immune response triggered in calves. Ten calves were divided in three groups: Four calves were inoculated with the plasmids/rMSPs (G1); 2 calves were inoculated with empty vector (G2); and 4 calves received saline (G3). Three inoculations were administered at 21-day intervals. In G1, the calves showed significant increases in total IgG level 21 days after the second inoculation, compared to the control group (p 0,05%), and G1 calves remained above the cut-off value 28 days after the third inoculation (p 0,05%). The post-immunized sera from calves in G1 reacted specifically for each of the rMSPs used. Additionally, ELISA detected specific IgG for VirB9 and VirB10. In conclusion, the cocktail of recombinant plasmids induced antigen-specific seroconversion in calves. Therefore, additional testing to explore the protection induced by recombinant plasmids, alone or in conjunction with proteins previously identified as subdominant epitopes, is warranted.

Occurrence of Ehrlichia canis and Anaplasma platys in household dogs from northern Parana

Canine monocytic ehrlichiosis caused primarily by Ehrlichia canis and canine thrombocytic anaplasmosis induced by Anaplasma platys are important emerging zoonotic tick-borne diseases of dogs. There is evidence that these pathogens can also affect humans. This study evaluated the presence of E. canis and A. platys in blood samples collected from 256 domiciled dogs in the municipality of Jataizinho, located in north region of the State of Parana, Brazil, by PCR assay. The occurrence of E. canis and A. platys was 16.4% (42/256) and 19.4% (49/256), respectively; while 5.47% (14/256) of the dogs evaluated were co-infected by these two organisms. The presence of E. canis and A. platys was not significantly associated with the variables evaluated (sex, age, outdoor access, and presence of ticks during blood collection). Infection of dogs by E. canis was associated with anemia and thrombocytopenia, while infection induced by A. platys was related only to thrombocytopenia. Canine monocytic ehrlichiosis and canine thrombocytic anaplasmosis should be included in the differential diagnoses when these hematological alterations are observed during routine laboratory evaluation of dogs.

Erliquiose monocítica canina, causada principalmente por Ehrlichia canis, e anaplasmose trombocítica canina, devida a infecção com Anaplasma platys, são importantes doenças transmitidas por carrapatos que acometem os cães, com evidências que podem também acometer o homem. O presente estudo avaliou a ocorrência desses agentes em amostras de sangue de 256 cães domiciliados na cidade de Jataizinho, na região Norte do Paraná, Brasil, utilizando a técnica da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). A ocorrência de E. canis e A. platys foi de 16,4% (42/256) e 19,4% (49/256), respectivamente, com 5,47% (14/256) dos animais apresentando coinfecção. Não foi observada associação significativa com as variáveis sexo, idade, acesso à rua e presença de carrapatos no momento da coleta de sangue. A infecção por E. canis teve relação com anemia e com trombocitopenia, enquanto a infecção por A. platys apresentou relação apenas com trombocitopenia. Com base nos resultados obtidos, reforçou-se a necessidade de que erliquiose e anaplasmose canina devem estar entre os diagnósticos diferenciais, quando da detecção de anemia e trombocitopenia em exames laboratoriais.

Occurrence of Ehrlichia canis and Anaplasma platys in household dogs from northern Parana

Canine monocytic ehrlichiosis caused primarily by Ehrlichia canis and canine thrombocytic anaplasmosis induced by Anaplasma platys are important emerging zoonotic tick-borne diseases of dogs. There is evidence that these pathogens can also affect humans. This study evaluated the presence of E. canis and A. platys in blood samples collected from 256 domiciled dogs in the municipality of Jataizinho, located in north region of the State of Parana, Brazil, by PCR assay. The occurrence of E. canis and A. platys was 16.4% (42/256) and 19.4% (49/256), respectively; while 5.47% (14/256) of the dogs evaluated were co-infected by these two organisms. The presence of E. canis and A. platys was not significantly associated with the variables evaluated (sex, age, outdoor access, and presence of ticks during blood collection). Infection of dogs by E. canis was associated with anemia and thrombocytopenia, while infection induced by A. platys was related only to thrombocytopenia. Canine monocytic ehrlichiosis and canine thrombocytic anaplasmosis should be included in the differential diagnoses when these hematological alterations are observed during routine laboratory evaluation of dogs.

Erliquiose monocítica canina, causada principalmente por Ehrlichia canis, e anaplasmose trombocítica canina, devida a infecção com Anaplasma platys, são importantes doenças transmitidas por carrapatos que acometem os cães, com evidências que podem também acometer o homem. O presente estudo avaliou a ocorrência desses agentes em amostras de sangue de 256 cães domiciliados na cidade de Jataizinho, na região Norte do Paraná, Brasil, utilizando a técnica da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). A ocorrência de E. canis e A. platys foi de 16,4% (42/256) e 19,4% (49/256), respectivamente, com 5,47% (14/256) dos animais apresentando coinfecção. Não foi observada associação significativa com as variáveis sexo, idade, acesso à rua e presença de carrapatos no momento da coleta de sangue. A infecção por E. canis teve relação com anemia e com trombocitopenia, enquanto a infecção por A. platys apresentou relação apenas com trombocitopenia. Com base nos resultados obtidos, reforçou-se a necessidade de que erliquiose e anaplasmose canina devem estar entre os diagnósticos diferenciais, quando da detecção de anemia e trombocitopenia em exames laboratoriais.

Toxoplasma gondii: humoral and cellular immune response of BALB/c mice immunized via intranasal route with rTgROP2

TgROP2 is an intracellular protein associated with rhoptries of Toxoplama gondii and an antigen component of a candidate vaccine for toxoplasmosis. The purpose of the present study was to evaluate the efficacy of rTgROP2 to stimulate humoral and cellular immune responses in BALB/c mice via intranasal injection. TgROP2 partial coding sequence was (196-561) amplified by PCR from genomic T. gondii RH strain DNA and cloned into the pTrcHis expression vector. Escherichia coli Rosetta 2 cells transformed with pTrcHis-TgROP2 showed high levels (~1 mg.mL-1) of recombinant protein after 4 hours of IPTG induction. Recombinant TgROP2 exhibited an apparent Mr equal to 54 kDa. In order to test immunogenicity of the recombinant protein, 10 BALB/c mice received 10 µg of rROP2 protein + 10 µg of Quil-A via intranasal injection. Doses were administered at days 0, 21, and 42. Three animals were euthanized and used to evaluate cell-ular immune response on day 62. Five (50%) and two (20%) out of ten animals produced IgG (DO mean = 0.307; cut-off = 0.240) and IgA (DO mean = 0.133, cut-off = 0.101), respectively, by ELISA on day 62. The proliferation of splenocytes revealed high stimulation index (SI) when co-cultured with 5, 10 and 15 µg.mL-1 of rTgROP2. These results indicate that intranasal immunization with recombinant protein ROP2 plus Quil-A can elicit both cellular and humoral immune responses in BALB/c mice.

TgROP2 é uma proteína localizada nas roptrias do Toxoplasma gondii, sendo um antígeno candidato a componente de uma vacina contra a toxoplasmose. O objetivo do presente estudo foi avaliar a eficácia da TgROP2 recombinante em estimular a resposta imune celular e humoral de camundongos BALB/c após estímulo intranasal. A sequência da TgROP2 foi amplificada pela PCR a partir da cepa RH e clonada em vetor de expressão pTrc-His. Após a transformação em Escherichia coli- Rosetta 2, a pTrcHis-TgROP2 exibiu alto nível de expressão após 4 horas de indução com IPTG. A proteína recombinante apresentou uma massa molecular aparente de aproximadamente 54 kDa. Para avaliar a imunogenicidade dessa proteína recombinante, 10 camundongos receberam, pela via intranasal, 10 µg da rROP2 associado a 10 µg de Quil-A. Três doses foram realizadas nos dias 0, 21 e 42. No dia 62 do experimento, três animais foram eutanasiados para avaliar as respostas imune celular e humoral. Cinco (50%) e dois (20%) dos 10 animais apresentaram níveis de IgG (DO média = 0,307; ponto de corte = 0,240) e IgA (DO média = 0,133; ponto de corte = 0,101) acima do ponto de corte no ELISA no dia 62. A proliferação de esplenócitos revelou altos Índices de Estimulação (SI), quando as células foram cultivadas com 5, 10 e 15 µg.mL-1 de rTgROP2. Os resultados obtidos indicam que a via nasal pode estimular tanto a resposta imune celular como a humoral.

Clonagem, expressão e diversidade na seqüência do gene iss de Escherichia coli patogênica para aves (APEC), isolada no Brasil / Cloning, expression and sequence diversity of iss gene from avian pathogenic Escherichia coli (APEC) isolated in Brazil

A proteína Iss (increased serum survival) é uma importante característica de resistência ao sistema complemento da Escherichia coli patogênica para aves (APEC). Os objetivos deste trabalho foram clonar e verificar a diversidade da seqüência do gene iss de APEC e caracterizar a proteína Iss recombinante. O gene iss de 309 bp foi amplificado por PCR, clonado e expresso na E. coli BL21 (DE3) utilizando o vetor pET SUMO. O gene iss da APEC9 foi classificado como iss tipo 1 pela diferenciação entre 3 tipos de iss alelos. A proteína Iss foi expressa pela indução com IPTG, purificada em coluna com resina ligada ao íon níquel e utilizada na imunização de galinhas poedeiras. Anticorpos da classe IgY anti rIss reagiram com a proteina rIss, a qual apresentou massa molecular de 22 kDa, correspondendo 11kDa da Iss e 11 kDa da proteína SUMO.

The Iss (Increased serum survival) protein is an important characteristic of resistance to complement system of avian pathogenic Escherichia coli (APEC). The objectives of this work were to cloning and verify the sequence diversity of iss gene from APEC and characterize the recombinant Iss protein. The iss gene of 309 bp was amplified by PCR, cloned and expressed in E. coli BL21 (DE3) using the pET SUMO vector. The iss gene from APEC9 strain was classified as iss type 1 by differentiation of the three iss gene allele types. The protein was expressed by induction of IPTG and purified in resin charged with the nickel ion. Antibodies IgY anti rIss reacted with rIss showing a molecular mass of 22 kDa, corresponding 11KDa of Iss protein and 11 KDa SUMO protein.

Soroprevalência de Anaplasma marginale em bovinos da região Centro-Sul do estado do Paraná, Brasil, por um teste imunoenzimático competitivo utilizando proteína recombinante MSP5-PR1

Anaplasma marginale prevalence was determined in 223 sera samples in 2-year old or older cattle, from the Center- Southern Region of the Paraná State, including Ponta Grossa, Guarapuava and Laranjeiras do Sul municipalities. A survey of antibodies IgG class against Anaplasma marginale was performed through a competitive immune absorbent assay (cELISA-PR1). From the 223 sera examined, 130 (58.74%) reacted to cELISA-PR1 test, suggesting an region of enzootic instability, with a significant percentage of animals susceptible to infection by A. marginale and potentially in risk to develop anaplasmosis. The kind of exploration in the property, the breeding and handling system, the presence of other animals (ovine/caprine, horses, wild animals), and means of commercialization of animals were analyzed. The statistical analysis showed that there were no significant differences among the analyzed variables.

Foi determinada a prevalência de Anaplasma marginale em 223 soros de bovinos com idade maior ou igual a dois anos, das regiões de Ponta Grossa, Guarapuava e Laranjeiras do Sul, região Centro-Sul do estado do Paraná. O teste imunoenzimático de competição PR1 (cELISA-PR1) foi utilizado para determinar a presença ou ausência de anticorpos anti-A. marginale. Dos 223 soros analisados, 130 (58,74%) foram positivos pelo cELISA-PR1, sugerindo ser essa região de instabilidade de enzoótica, com uma porcentagem significativa de animais susceptíveis à infecção por A. marginale, com risco potencial para desenvolver a anaplasmose. As características de tipo de exploração da propriedade, sistema de criação, manejo e forma de comercialização dos animais foram avaliadas. A análise estatística não demonstrou haver diferença significativa entre as variáveis estudadas e a positividade dos animais.

Detection of Mycobacterium in clinical samples by multiprimer polymerase chain reaction

We investigated the use of multiprimer-PCR for detection of mycobacteria species in clinical samples. Three different mycobacterial genomic fragments were investigated: the IS6110 insertion sequence, present in M. tuberculosis complex; the genus specific fragment (32kDa); and from M. tuberculosis species-specific mtp40 gene. The sensitivity and specificity using 135 clinical isolates were 94.5% and 95.9%, respectively, compared with culture in Löwenstein-Jensen medium; the detection limit was 0.05ng of DNA. In conclusion, this assay is reliable and rapid for detection of Mycobacterium species in clinical samples, and differentiates M. tuberculosis from M. bovis strains in a single-step assay.

PCR utilizando vários oligonucleotídeos para detecção de espécies de micobactérias em espécimes clínicas foi padronizado. Três diferentes fragmentos genômicos: da seqüência de inserção IS6110, presente no complexo M. tuberculosis, do gene responsável por proteína específica (32kDa) do gênero e do gene mtp40 espécie-específico do M. tuberculosis foram estudados. A sensibilidade e especificidade do método em 135 amostras clínicas foram de 94.5% e 95.9%, respectivamente, comparados com os resultados da cultura em meio Löwenstein-Jensen, e o limite de detecção foi de 0.05 ng of DNA. O ensaio mostrou-se confiável e rápido para detecção de espécies de Mycobacterium em amostras clínicas, diferenciando M. tuberculosis de M. bovis em uma única reação.

Fatores de virulência presentes em amostras de Escherichia coli uropatogênicas - UPEC para suínos

Urinary tract infections occur frequently in pig herds urinary infection is the most significant cause of culling and mortality of adult animals. Despite the multifactorial nature of this condition, Escherichia coli is frequently isolated from diseased animals. Several virulence factors were described on uropathogenic strains and they can be used to distinguish isolates. The objective of the present review is to present some topics related to virulence factors present in swine uropathogenic E. coli strains.

As infecções urinárias são freqüentes nos rebanhos suínos, sendo a principal causa de descarte e mortalidade de animais adultos. Apesar das características multifatoriais da doença o microrganismo freqüentemente isolado é a Escherichia coli. Vários fatores de virulência de Escherichia coli foram descritos em amostras uropatogênicas e permitem diferenciar cepas patogênicas de não patogênicas. Esta revisão tem por objetivo apresentar alguns tópicos relativos aos fatores de virulência presentes em amostras de E. coli uropatogênicas para suínos.

Fatores de virulência presentes em amostras de Escherichia coli uropatogênicas - UPEC para suínos

Urinary tract infections occur frequently in pig herds urinary infection is the most significant cause of culling and mortality of adult animals. Despite the multifactorial nature of this condition, Escherichia coli is frequently isolated from diseased animals. Several virulence factors were described on uropathogenic strains and they can be used to distinguish isolates. The objective of the present review is to present some topics related to virulence factors present in swine uropathogenic E. coli strains.

As infecções urinárias são freqüentes nos rebanhos suínos, sendo a principal causa de descarte e mortalidade de animais adultos. Apesar das características multifatoriais da doença o microrganismo freqüentemente isolado é a Escherichia coli. Vários fatores de virulência de Escherichia coli foram descritos em amostras uropatogênicas e permitem diferenciar cepas patogênicas de não patogênicas. Esta revisão tem por objetivo apresentar alguns tópicos relativos aos fatores de virulência presentes em amostras de E. coli uropatogênicas para suínos.

Detection of Mycobacterium in clinical samples by multiprimer polymerase chain reaction

We investigated the use of multiprimer-PCR for detection of mycobacteria species in clinical samples. Three different mycobacterial genomic fragments were investigated: the IS6110 insertion sequence, present in M. tuberculosis complex; the genus specific fragment (32kDa); and from M. tuberculosis species-specific mtp40 gene. The sensitivity and specificity using 135 clinical isolates were 94.5% and 95.9%, respectively, compared with culture in Löwenstein-Jensen medium; the detection limit was 0.05ng of DNA. In conclusion, this assay is reliable and rapid for detection of Mycobacterium species in clinical samples, and differentiates M. tuberculosis from M. bovis strains in a single-step assay.

PCR utilizando vários oligonucleotídeos para detecção de espécies de micobactérias em espécimes clínicas foi padronizado. Três diferentes fragmentos genômicos: da seqüência de inserção IS6110, presente no complexo M. tuberculosis, do gene responsável por proteína específica (32kDa) do gênero e do gene mtp40 espécie-específico do M. tuberculosis foram estudados. A sensibilidade e especificidade do método em 135 amostras clínicas foram de 94.5% e 95.9%, respectivamente, comparados com os resultados da cultura em meio Löwenstein-Jensen, e o limite de detecção foi de 0.05 ng of DNA. O ensaio mostrou-se confiável e rápido para detecção de espécies de Mycobacterium em amostras clínicas, diferenciando M. tuberculosis de M. bovis em uma única reação.

Seroprevalence fo Anaplasma marginale in dairy cattle and, studies on the dynamics of natural infection of Holstein calves in Southern Brazil / Soroprevalência de Anaplasma marginale em bovinos leiteiros e estudos sobre a dinâmica da infecção natural em bezerros holandeses no Sul do Brasil

Sera of 708 animals (cows, heifers and calves) from 13 dairy herds in the Londrina region of Paraná, Brazil, were tested for antibodies to Anaplasma marginale by a competitive ELISA assay (cELISA). Ten 2 to 20 days old Holstein calves, from one of the 13 herds studied, were monitored during one year. Blood samples from each calf were collected monthly and tick burden counting was performed every fortnight. Percentage of infected erythrocytes was established by Giemsa-stained smears, and sera samples were examined by cELISA to detect antibodies against A. marginale. In the 13 herds, 92.94% of the animals were seropositive to A. marginale, which indicates that Londrina is an area of enzootic stability. Among the three animal categories (cows, heifers and calves), the rates were 98.29%, 96.64% and 81.25%, respectively. Passive transfer of maternal antibodies to calves was demonstrated by cELISA. From ten calves, nine (90%) were seropositive at the first sampling, revealing colostral antibodies anti-A . marginale. These antibodies remained in calves for 2 to 3 months. After this period the calves were infected with ticks, and then all of them were seropositive to Anaplasma. Five 4 to 7 months old calves showed rickettsemia ranging from 0.1% to 3.8%. Two of them were treated with tetracycline. The rickettsemia and clinical signs of anaplasmosis of these calves were coincident with t

Soros de 708 animais (vacas, novilhas e bezerros) oriundos de 13 propriedades leiteiras da região de Londrina, Estado do Paraná, Brasil, foram testados para a presença de anticorpos contra Anaplasma marginale pelo teste ELISA competitivo (cELISA). Dez bezerros recém nascidos, pertencentes a um dos 13 rebanhos utilizados no levantamento sorológico, foram monitorados durante um ano. De cada bezerro foram colhidas amostras de sangue mensalmente e a cada quinze dias foi realizada a contagem de carrapatos. A porcentagem de eritrócitos parasitados foi determinada pela coloração de Giemsa em esfregaços sanguíneos e as amostras de soros foram submetidas ao cELISA para a detecção de anticorpos contra A. marginale. Dos animais dos rebanhos, 92,94% foram soropositivos para A. marginale indicando que a região de Londrina é uma área de estabilidade enzoótica. Nas três categorias de animais estudadas (vacas, novilhas e bezerros) as taxas de soropositivos foram de 98,29%, 96,64% e 81,25%, respectivamente. Nove dos 10 bezerros (90%) foram positivos pelo cELISA logo após o nascimento, o que demonstra a transferência de anticorpos colostrais. Os níveis de anticorpos colostrais foram detectados até o segundo e o terceiro mês de idade com um decréscimo neste período. Os níveis de anticorpos contra A. marginale voltaram a crescer nos meses seguintes, após os animais se infestarem com o Boophilus mi

Celulitis in Japanese Quails (coturnix coturnix japonica) for Eschorichia coli: virulence factors, sensibility and profile antimicrobial resistance / Celulite em codornas (coturnix coturnix japonica) causada por Escherichia coli: fatores de virulência, sensibilidade e perfil de resistência antimicrobiana

Ten E. coli strains isolated from celulitis lesion s of Japanese quails were to evaluated antimicrobia l resistance to twent y six drugs , to pathogenicity of strains in SPF chickens embryonated eggs and virulence factors. The antimicrobials of higher efficiency wer e ampicillin, florfenicol and the lesser efficiency were erythromycin, oxacilin, lincomicin, novobiocin, penicillin, sulfonamidas, trimethoprim+sulfomethoxazo/e and tetracyicline. The majority of E. coli strains were serum resistance, the others virulence factors, hemolisin and congo red affinity, were lesser frequent on the studied strains. Pathogenicity of E. coli strains, evaluated to DL50 in embryonated eggs, had varied of 8x10 2 the 3,2x10  

Dez cepas de E. coli isoladas de lesões de celulite em codornas foram avaliadas quanto a resistência antimicrobiana frente a vinte e seis drogas, a patogenicidade das amostras em ovos embrionários de galinha SPF e quanto aos fatores de virulência: hemolisinas, resistência sérica e afinidade ao vermelho congo Os antimicrobianos de maior eficiência foram ampicilinar florfenicol e os menos eficientes foram eritromicina, oxacilina. lincomicina, novobiocina. penicsilna, sulfonamida, sulfomethoxazole+ trimetoprim e tetraciclina. A maioria das amostras de E. coli foram resistentes ao soro, os outros fatores do virulência, hemolisina e afinidade ao vermelho-congo, foram menos freqüentes nas amostras estudadas. A patogenicidade das amostras de E. coli estimada através da DL50 em ovos embrionados, variaram de 8x10* a 3.2x10a.  

Celulitis in Japanese Quails (coturnix coturnix japonica) for Eschorichia coli: virulence factors, sensibility and profile antimicrobial resistance / Celulite em codornas (coturnix coturnix japonica) causada por Escherichia coli: fatores de virulência, sensibilidade e perfil de resistência antimicrobiana

Ten E. coli strains isolated from celulitis lesion s of Japanese quails were to evaluated antimicrobia l resistance to twent y six drugs , to pathogenicity of strains in SPF chickens embryonated eggs and virulence factors. The antimicrobials of higher efficiency wer e ampicillin, florfenicol and the lesser efficiency were erythromycin, oxacilin, lincomicin, novobiocin, penicillin, sulfonamidas, trimethoprim+sulfomethoxazo/e and tetracyicline. The majority of E. coli strains were serum resistance, the others virulence factors, hemolisin and congo red affinity, were lesser frequent on the studied strains. Pathogenicity of E. coli strains, evaluated to DL50 in embryonated eggs, had varied of 8x10 2 the 3,2x10

Dez cepas de E. coli isoladas de lesões de celulite em codornas foram avaliadas quanto a resistência antimicrobiana frente a vinte e seis drogas, a patogenicidade das amostras em ovos embrionários de galinha SPF e quanto aos fatores de virulência: hemolisinas, resistência sérica e afinidade ao vermelho congo Os antimicrobianos de maior eficiência foram ampicilinar florfenicol e os menos eficientes foram eritromicina, oxacilina. lincomicina, novobiocina. penicsilna, sulfonamida, sulfomethoxazole+ trimetoprim e tetraciclina. A maioria das amostras de E. coli foram resistentes ao soro, os outros fatores do virulência, hemolisina e afinidade ao vermelho-congo, foram menos freqüentes nas amostras estudadas. A patogenicidade das amostras de E. coli estimada através da DL50 em ovos embrionados, variaram de 8x10* a 3.2x10a.

Plasmid profile of Staphylococcus hyicus isolated from swine exudative epidermitis in Brazil / Perfil plasmidial de Staphylococcus hyicus isolados de suínos com epidermite exsudativa no Brasil

Staphylococcus hyicus cultures, isolated from piglets with skin lesions, were investigated for their plasmid profile and their resistance to antimicrobial agents. Plasmid of different sizes could be detected in six Staphylococcus hyicus isolates. All that samples showed tetracycline resistance and presented small plasmid of 4.0 Kb. Curing and transformation experiments showed that the 4.0 Kb plasmid harboured the genetic determinant of tetracycline resistance in this strains.

Staphylococcus hyicus isolados de leitões com lesões de pele foram estudados no que se refere aos seus plasmídios e resistência a agentes antimicrobianos. Plasmídios de diferentes pesos moleculares foram detectados nas seis amostras de Staphylococcus hyicus. Todas as amostras mostraram resistência à tetraciclina e um pequeno plasmídio de 4.0 Kb, com uma exceção. Experimentos de cura e transformação demonstraram que este plasmídio abriga o determinante genético para resistência à tetraciclina nas amostras estudadas.

Genetic studies of virulence factors of avian Escherichia coli strains / Estudo genético dos fatores de virulência de Escherichia coli aviária

Ten pathogenic E. coli strains were examined for plasmid types and pathogenicity. Some strains were found to produce colicin and to have drug resistance determinants on a single conjugative plasrnid while others harbored apart Col V and H plasmids. These plasmids were derepressed with a transfer frequency of around 10-6 and 10-1 and did not induce serum resistance or virulence in the recipient ceils of E. coli K12 and of normal flora E. coli strains of chickens, it was the verified that, in the strains studied, the serum resistance and the determinants for virulence are coled by cromossomal genes or have their expression dependant on chromossomal genes.  

Dez amostras de E. coli patogênicas para aves foram analisadas quanto a associação entre os plasmídios R e Col e a patogenicidade. Foram encontradas amostras com determinantes de resistência a drogas e produção de colicina em um único plasmídio conjugativo e amostras que transportavam plasmídios Col V e R. Estes plasmídios (R e/ou Col) eram desreprimidos, apresentando altas freqüências de transferência (10-1 a 10-6) e não determinavam resistência ao soro, nem virulência em amostras receptoras de E. coli K12 e de flora normal de galinha. Assim, foi verificado que nas amostras estudadas, a resistência ao soro não é codificada por plasmídios e que os determinantes para virulência podem estar em genes cromossomais ou dependem de genes cromossomais para sua expressão.     

Genetic studies of virulence factors of avian Escherichia coli strains / Estudo genético dos fatores de virulência de Escherichia coli aviária

Ten pathogenic E. coli strains were examined for plasmid types and pathogenicity. Some strains were found to produce colicin and to have drug resistance determinants on a single conjugative plasrnid while others harbored apart Col V and H plasmids. These plasmids were derepressed with a transfer frequency of around 10-6 and 10-1 and did not induce serum resistance or virulence in the recipient ceils of E. coli K12 and of normal flora E. coli strains of chickens, it was the verified that, in the strains studied, the serum resistance and the determinants for virulence are coled by cromossomal genes or have their expression dependant on chromossomal genes.

Dez amostras de E. coli patogênicas para aves foram analisadas quanto a associação entre os plasmídios R e Col e a patogenicidade. Foram encontradas amostras com determinantes de resistência a drogas e produção de colicina em um único plasmídio conjugativo e amostras que transportavam plasmídios Col V e R. Estes plasmídios (R e/ou Col) eram desreprimidos, apresentando altas freqüências de transferência (10-1 a 10-6) e não determinavam resistência ao soro, nem virulência em amostras receptoras de E. coli K12 e de flora normal de galinha. Assim, foi verificado que nas amostras estudadas, a resistência ao soro não é codificada por plasmídios e que os determinantes para virulência podem estar em genes cromossomais ou dependem de genes cromossomais para sua expressão.

Resistência a drogas em amostras de Escherichia Coli isoladas de aves em Londrina PR. / Resistência a drogas em amostras de Escherichia Coli isoladas de aves em Londrina PR.

Twenty nine strains of Escherichia coli isolated from chicken in Londrina, were tested for drugs resistance and distribution ofR plasmids. It was determinated the resistence level of strains and 93,1% were resistant, 79,3% were multiple antibiotic resistance. Most was resistance to tetracycline and sulphadiazine (79,3% and 68,1% respectively). The resistance to chloranphenicol, ampicilin an kanamycin was lower. In genetic studies of transferance of resistant determinant by conjugation, it was revealed 33,3% of conjugative R plasmids. These results would present a serious public health hazard whereas the antibiotic resistant E. coli, carrying R plasmids, reach man by animals feed.

Vinte e nove amostras de E. coli isoladas de aves em Londrina, foram testadas para resitência a drogas antimicrobianas e distribuição dos plasmídios R. Foi determinado o nível de resistência das amostras e 93,1% mostraram-se resistentes, sendo que, 79,3% apresentaram resistência múltipla. A maioria foi resistente para tetraciclina e sulfadiazina (79,3% e 68,1% respectivamente). A resistência ao cloranfenicol, ampicitina e canamicina, foi mais baixa. Em estudos genéticos envolvendo transferência dos marcadores de resistência por conjugação, verificou-se que a. resistência múltipla é por plasmídios R conjugativos, e foram encontrados em 33,3% das amostras. Uma vez que as bactérias resistentes, transportando plasmídios R, chegam até ao homem através dos produtos animais, estes resultados indicam riscos para a saúde pública.  

Resistência a drogas em amostras de Escherichia Coli isoladas de aves em Londrina PR / Resistência a drogas em amostras de Escherichia Coli isoladas de aves em Londrina PR

Twenty nine strains of Escherichia coli isolated from chicken in Londrina, were tested for drugs resistance and distribution ofR plasmids. It was determinated the resistence level of strains and 93,1% were resistant, 79,3% were multiple antibiotic resistance. Most was resistance to tetracycline and sulphadiazine (79,3% and 68,1% respectively). The resistance to chloranphenicol, ampicilin an kanamycin was lower. In genetic studies of transferance of resistant determinant by conjugation, it was revealed 33,3% of conjugative R plasmids. These results would present a serious public health hazard whereas the antibiotic resistant E. coli, carrying R plasmids, reach man by animals feed.

Vinte e nove amostras de E. coli isoladas de aves em Londrina, foram testadas para resitência a drogas antimicrobianas e distribuição dos plasmídios R. Foi determinado o nível de resistência das amostras e 93,1% mostraram-se resistentes, sendo que, 79,3% apresentaram resistência múltipla. A maioria foi resistente para tetraciclina e sulfadiazina (79,3% e 68,1% respectivamente). A resistência ao cloranfenicol, ampicitina e canamicina, foi mais baixa. Em estudos genéticos envolvendo transferência dos marcadores de resistência por conjugação, verificou-se que a. resistência múltipla é por plasmídios R conjugativos, e foram encontrados em 33,3% das amostras. Uma vez que as bactérias resistentes, transportando plasmídios R, chegam até ao homem através dos produtos animais, estes resultados indicam riscos para a saúde pública.