Evaluación de la supervivencia de las células mononucleadas de la médula ósea trasplantadas en un modelo de ratas con lesión estriatal por ácido quinolínico / Evaluation of the survival of bone marrow mononucleate cells transplanted in a rat model of striatal lesion with quinolinic acid

Introducción. El trasplante es una de las alternativas para el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas, y está encaminado hacia el reemplazo de las células perdidas durante el desarrollo de la enfermedad. Una fuente celular prometedora para el desarrollo de los trasplantes podrían ser las células mononucleadas de la médula ósea. Objetivo. Estudiar la capacidad de las células mononucleadas de la médula ósea de sobrevivir al trasplante y buscar un método que permita el seguimiento de estas células in vivo una vez implantadas. Materiales y métodos. Las células mononucleadas fueron extraídas del fémur de ratas mediante un gradiente de Ficoll-Hypaque. Las células objeto de estudio fueron modificadas genéticamente con un adenovirus que expresa la PFV o marcadas con el reactivo de Hoechst. Las células marcadas se implantaron en el estriado de ratas lesionadas con ácido quinolínico. Resultados. La viabilidad de las células modificadas genéticamente fue baja, mientras que la de las células marcadas con el reactivo de Hoechst fue superior al 90%. Las células implantadas sobrevivieron al trasplante al menos un mes y se dispersaron desde el sitio de entrada hacia el cuerpo calloso y la corteza. Conclusiones. Consideramos más ventajoso el uso del reactivo de Hoechst para el seguimiento de estas células in vivo. Las células mononucleadas tienen características que les permiten formar parte de las fuentes celulares candidatas para el tratamiento de las enfermedades neurodegenerativas

Introduction. Transplant is one of the alternatives available for the treatment of neurodegenerative diseases aimed at replacing the cells lost during the course of the disease. One promising source of cells for the development of transplants could be the mononucleate cells from bone marrow. Aims. The purpose of this study was to study the capacity of bone marrow mononucleate cells to survive the transplant process, and to search for a method that enables tracking of these cells in vivo once they have been implanted. Materials and methods. Bone marrow mononucleate cells were extracted from the femur of rats by means of a Ficoll-Hypaque gradient. The cells under study were modified genetically with an adenovirus that expresses the PFV or which are marked with Hoechst dye. The marked cells were implanted in the striatum of rats with lesions caused by quinolinic acid. Results. The viability of the genetically modified cells was low, whereas that of the cells marked with Hoechst dye was above 90%. The implanted cells survived the transplant at least a month and dispersed away from the site of entry towards the corpus callosum and cortex. Conclusions. We consider that the use of Hoechst dye offers more advantages for tracking these cells in vivo. Mononucleate cells have a number of characteristics that allow them to be included as candidate sources of cells for the treatment of neurodegenerative diseases

Evaluación de la supervivencia de las células mononucleadas de la médula ósea trasplantadas en un modelo de ratas de lesión estriatal con ácido quinolínico / Evaluation of the survival of bone marrow mononucleate cells transplanted in a rat model of striatal lesion with quinolinic acid

Introducción. El trasplante es una de las alternativas para el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas, y está encaminado hacia el reemplazo de las células perdidas durante el desarrollo de la enfermedad. Una fuente celular prometedora para el desarrollo de los trasplantes podrían ser las células mononucleadas de la médula ósea. Objetivo. Estudiar la capacidad de las células mononucleadas de la médula ósea de sobrevivir al trasplante y buscar un método que permita el seguimiento de estas células in vivo una vez implantadas. Materiales y métodos. Las células mononucleadas fueron extraídas del fémur de ratas mediante un gradiente de Ficoll-Hypaque. Las células objeto de estudio fueron modificadas genéticamente con un adenovirus que expresa la PFV o marcadas con el reactivo de Hoechst. Las células marcadas se implantaron en el estriado de ratas lesionadas con ácido quinolínico. Resultados. La viabilidad de las células modificadas genéticamente fue baja, mientras que la de las células marcadas con el reactivo de Hoechst fue superior al 90 por ciento. Las células implantadas sobrevivieron al trasplante al menos un mes y se dispersaron desde el sitio de entrada hacia el cuerpo calloso y la corteza. Conclusiones. Consideramos más ventajoso el uso del reactivo de Hoechst para el seguimiento de estas células in vivo. Las células mononucleadas tienen características que les permiten formar parte de las fuentes celulares candidatas para el tratamiento de las enfermedades neurodegenerativas(AU)

Introduction: Transplant is one of the alternatives available for the treatment of neurodegenerative diseases aimed at replacing the cells lost during the course of the disease. One promising source of cells for the development of transplants could be the mononucleate cells from bone marrow. AIMS. The purpose of this study was to study the capacity of bone marrow mononucleate cells to survive the transplant process, and to search for a method that enables tracking of these cells in vivo once they have been implanted. MATERIALS AND METHODS: Bone marrow mononucleate cells were extracted from the femur of rats by means of a Ficoll-Hypaque gradient. The cells under study were modified genetically with an adenovirus that expresses the PFV or which are marked with Hoechst dye. The marked cells were implanted in the striatum of rats with lesions caused by quinolinic acid. RESULTS: The viability of the genetically modified cells was low, whereas that of the cells marked with Hoechst dye was above 90percent. The implanted cells survived the transplant at least a month and dispersed away from the site of entry towards the corpus callosum and cortex. CONCLUSIONS: We consider that the use of Hoechst dye offers more advantages for tracking these cells in vivo. Mononucleate cells have a number of characteristics that allow them to be included as candidate sources of cells for the treatment of neurodegenerative diseases

Supervivencia in vitro de neuronas dopaminérgicas hibernadas durante siete días / Survival of dopaminergic neurons that were hibernated in vitro for seven days

Introducción. El uso de tejido fetal fresco en el neurotrasplante presenta considerables dificultades logísticas que limitan su aplicabilidad clínica. Este aspecto podría solucionarse con el desarrollo de procedimientos óptimos de almacenamiento del tejido que no afecten a la viabilidad y la supervivencia dopaminérgica in vivo. Objetivo. Determinar si la hibernación durante siete días influye sobre la supervivencia del tejido mesencefálico in vitro, y comparar el tejido hibernado con el fresco. Material y métodos. El mesencéfalo de rata se hibernó 1, 3, 5 y 7 días a 4 °C. Se preparó la suspensión celular para cultivar durante siete días. Se determinó el número de células TH+ presentes en los cultivos frescos e hibernados. Resultados. La morfología de las neuronas dopaminérgicas hibernadas y cultivadas fue muy similar a la de las células frescas. La comparación de la viabilidad de las células hibernadas con la de las frescas mostró diferencias no significativas. No hay diferencias significativas entre el número de neuronas TH+ observadas en todos los tiempos de hibernación. La supervivencia de células TH+ más baja se alcanzó a los siete días de hibernación. Existen diferencias significativas (p < 0,05) entre el número de neuronas TH+ del tejido fresco y el hibernado. Conclusiones. La hibernación a 4 °C hasta cinco días garantiza la supervivencia in vitro de las células TH+; tiempos mayores, la afecta. Este procedimiento podría considerarse útil para la conservación del tejido humano aplicable en el trasplante clínico. Estos resultados se refieren a condiciones in vitro; por tanto, se requiere estudiar la sobrevivencia y funcionalidad de las neuronas hibernadas y trasplantadas en modelos animales para evaluar su aplicación en la terapia neurorrestaurativa

Introduction. The use of fresh foetal tissue in neurotransplants entails considerable problems of logistics that limit its clinical applicability, something that can be resolved by the development of optimal tissue storage procedures that do not affect in vivo viability and survival of dopamine. Aims. To determine whether 7 days’ hibernation affects the survival of mesencephalic tissue in vitro, and to compare it to fresh tissue. Materials and methods. The midbrains of rats were hibernated for 1, 3, 5 and 7 days at 4 °C. A cellular suspension was prepared for culture throughout a 7-day period. The number of TH+ cells present in the fresh and hibernated cultures was determined. Results. The morphology of the hibernated and cultured dopaminergic neurons was very similar to that of the fresh cells. Comparing the viability of the hibernated and fresh cells did not reveal any significant differences. No significant differences between the numbers of TH+ neurons were observed at any of the hibernation times. The lowest rate of TH+ cell survival was reached at seven days’ hibernation. Significant differences (p < 0.05) were found between the number of TH+ neurons for fresh and hibernated tissue. Conclusions. Hibernation at 4 °C for up to five days guarantees the survival of TH+ cells in vitro, but it is affected by longer times. This procedure could be considered useful for preserving human tissue in clinical transplant applications. These results refer to in vitro conditions; therefore, studies must be conducted to investigate the survival and functionality of hibernated and transplanted neurons in animal models to enable us to evaluate its applicability in neurorestorative therapy

Supervivencia in vitro de neuronas dopaminèrgicas hibernadas durante siete dias / s. t

El uso de tejido fetal fresco en el neurotrasplante presenta considerables dificultades logìsticas que limitan su aplicabilidad clìnica . Este aspecto podrìa solucionarse con el desarrollo de procedimientos optimos de almacenamiento del tejido que no afecten a la viabilidad y la supervivencia dopaminèrgica in vivo. Es objetivo del trabajao determinar si la hibernaciòn durante siete dìas influye sobre la supervivencia del tejido mesencefàlico in vitro y comparar el tejido hibernado con el fresco...(AU)

Cultivo de las células estromales de la médula ósea en un medio suplementado con los nutrientes N2: implicaciones sobre la generación de células neurales / Marrow stromal cells cultured in n2-supplemented medium: implications on the generation of neural cells

Introducción. La mayoría de los sistemas de cultivo para el mantenimiento in vitro y la diferenciación neural de las células estromales de la médula ósea (CEM) utilizan medios sintéticos suplementados con suero fetal bovino (SFB) al 10 o al 20%. Sin embargo, el suero se compone de cantidades desconocidas de sustancias no definidas que podrían interferir el efecto de las sustancias exógenas sobre la diferenciación neural de estas células. Objetivo. En este trabajo describimos la supervivencia de las CEM en condiciones de cultivo donde se redujo la concentración del SFB al 0,5 y al 1% y se utilizó la fórmula N2 de Bottenstein y Sato (1979) y un sustrato tratado con poli-L-lisina (PLL). Materiales y métodos. Se cultivaron células estromales aisladas de los fémures de rata en el medio de Eagle modificado por Dulbecco, con concentraciones de SFB del 10, el 1 y el 0,5% o en medio libre de suero, que contenían la fórmula N2. En los cultivos crecidos en medios libres de suero o con baja concentración de éste, la superficie de cultivo se trató con PLL. La supervivencia celular se midió por el método del MTT o por recuento de las células vivas. Resultados. La supervivencia de las CEM cultivadas en la fórmula N2 disminuyó hasta aproximadamente el 40% de la observada en el medio con SFB al 10%, y se afectó la morfología celular. Un aumento significativo de la supervivencia con respecto al cultivo en N2 se produjo cuando, además de este nutriente, se añadió SFB al 0,5 y al 1%. En los cultivos sembrados sobre superficies tratadas con PLL la supervivencia celular aumentó en comparación con los sembrados sobre superficies no tratadas. Conclusiones. Este sistema de cultivo que combina la fórmula N2 con SFB al 1% y emplea un sustrato tratado con PLL, es adecuado para el mantenimiento de las CEM. Estas condiciones son ventajosas para estudiar la diferenciación neural de estas células, ya que reducen la interferencia del suero. Se discute la posible implicación de este sistema de cultivo para los estudios de diferenciación neural en estas células

Introduction. Most of the culture system for in vitro maintenance and neural differentiation of marrow stromal cells (MSCs) use synthetic media supplemented with 10 or 20% fetal bovine serum (FBS). Serum, however, is comprised of unknown quantities of undefined substances which could interfere the effect of exogenous substances on neural differentiation of MSCs. Aim. Here we describe survival of MSCs cultured in culture conditions where serum was reduced at 0.5 and 1% using Bottenstein and Sato’s N2 formula (1979) and poly-L-lysine (PLL)-coated substrate. Materials and methods. Stromal cells isolated from rat femurs were cultivated in Dulbecco’s modified Eagle medium at 10, 1, 0.5% FBS or in serum free medium containing N2 formula. In serum free medium or at low serum concentration culture surface was coated with PLL. Cell survival was determined by MTT method or by counting viable cells. Results. Survival of MSCs cultured in N2 supplement was reduced at about 40% of that observed in 10% FBS containing medium. Under these conditions cell morphology was also affected. When N2 containing medium was supplemented with FBS at 0.5 or 1% a significant increase of survival with respect to that observed in N2-supplemented cultures was observed. Cells seeded on PLL-coated surface increased their survival by contrast with their homologous cultures seeded on uncoated surface. Conclusions. The culture system which combines N2 formula with FBS 1% and PLL-coated surface is useful for the maintenance of MSCs. These conditions offer advantages for the study of differentiation of these cells because they reduce the confounding influence of serum. The possible implication of this culture system for the study of neural differentiation by these cells is discussed

Cultivo de las celulas estromales de la mèdula òsea en un medio suplementado con los nutrientes N2: implicaciones sobre la generaciòn de cèlulas neurales / s. t

Most of the culture system for in vitro maintenance and neural differentiation of marrow stromal cells (MSCs) use synthetic media supplemented with 10 or 20 percent fetal bovine serum (FBS). Serum, however, is comprised of unknown quantities of undefined substances which could interfere the effect of exogenous substances on neural differentiation of MSCs, AIM. Here we describe survival of MSCs cultured in culture conditions where serum was reduced at 0,5 and 1 percent using Bottenstein and Sato's N2 formula (1979) and poly-L-lysine (PLL)-coated substrate...(AU)

Trasplante de células estromales en el modelo de lesión por 6-OHDA / Stromal cell transplant in the 6-OHDA lesion model

Introducción. En la actualidad, existe un cúmulo de evidencias de que el trasplante de tejido mesencefálico fetal puede producir un beneficio sintomático tanto en los pacientes con enfermedad de Parkinson como en los modelos de la enfermedad. Sin embargo, las dificultades técnicas y éticas en la obtención de tejido cerebral fetal apropiado y en cantidad suficiente ha dificultado su aplicación. Las células estromales derivadas de médula ósea, debido a su potencialidad para generar diferentes tipos de células, podrían ser una fuente ideal para la restauración celular en las enfermedades neurodegenerativas. Objetivo. Evaluar el efecto del trasplante de células estromales derivadas de médula ósea sobre la conducta de ratas con lesión por 6-OHDA, cuando se realiza en el estriado. Materiales y métodos. Se utilizaron ratas con lesión de la sustancia negra inducida por la 6-OHDA, divididas en varios grupos experimentales. La actividad rotatoria inducida por D-anfetamina (5 mg/kg intraperitonialmente) se evaluó antes y en los tres meses posteriores al trasplante en todos los grupos experimentales, excepto en el grupo de controles sanas. Las ratas hemiparkinsonianas recibieron un total de 350.000 células de mesencéfalo ventral fetal y 8 × 104 células estromales/µL, las cuales se implantaron en el estriado. Resultados y conclusiones. Los animales con trasplante de células estromales en el cuerpo estriado redujeron significativamente el número de vueltas inducidas por anfetamina (p < 0,05); sin embargo, esta reducción no fue mayor que la inducida por los trasplantes de células mesencefálicas fetales. Por otro lado, no fue posible demostrar una mejoría significativa de las habilidades motoras de las extremidades anteriores (AU)

Introduction. A good deal of evidence currently exists to show that transplanting foetal mesencephalic tissue can produce symptomatic benefits both in patients and in disease models. Nevertheless, the technical and ethical difficulties involved in obtaining enough suitable foetal cerebral tissue have been a serious obstacle to its application. Stromal cells derived from bone marrow, due to their potential capacity to generate different types of cells, could be an ideal source of material for cell restoration in neurodegenerative diseases. Aims. Our aim was to evaluate the effect of transplanting stromal cells derived from bone marrow on the behaviour of 6-OHDA rats, when they are inserted into the striatum. Materials and methods. In this study we used rats with a lesion in the substantia nigra induced by 6-hydroxydopamine, divided into several experimental groups. Rotary activity induced by D-amphetamine (5 mg/kg, intraperitoneally) was evaluated before and throughout the three months following the transplant in all the experimental groups, except in the group of healthy controls. Hemiparkinsonian rats received a total of 350,000 foetal ventral mesencephalic cells and 8 × 104 stromal cells/µL, which were implanted in the striatum. Results and conclusions. Animals with stromal cells transplanted in the body of the striatum significantly reduced the number of turns induced by amphetamine (p < 0.05); yet this reduction was not greater than that induced by foetal mesencephalic cell transplants. We were also unable to demonstrate any significant improvement in the motor skills of the forelimbs (AU)

Viabilidad in vitro y niveles de glutatión en neuronas mesencefálicas hibernadas durante siete días / In vitro viability and glutathione levels in mesencephalic neurons after seven days' hibernation

En el trasplante de mesencéfalo embrionario en pacientes con enfermedad de Parkinson, la sobrevivencia dopaminérgica es baja (510 por ciento); de ahí que se considere el empleo de múltiples donantes. La dificultad en obtener más tejido determina la necesidad de un procedimiento para almacenar tejido nigral humano por un tiempo, sin afectar significativamente el estado fisiológico del mismo. Este estudio se diseñó para determinar si la hibernación del tejido en fragmentos influye sobre la viabilidad, cómo se comporta la viabilidad de las células mesencefálicas después de siete días de hibernación y los niveles de glutatión en el tejido hibernado (TH). La viabilidad del TH en piezas (82,37 ñ 2,12), resultó superior al valor del mesencéfalo completo (70,29 ñ 3,43). La viabilidad del TH durante siete días a 4 °C, a diferentes tiempos posdisociación, no difirió significativamente. Se encontraron diferencias significativas entre TH y tejido fresco a t= 0, a pesar de lo cual este procedimiento no parece afectar el tejido mesencefálico de forma significativa, ya que se conservó una viabilidad del 94 por ciento después de hibernadas. No se evidenció un aumento del contenido de glutatión como respuesta antioxidante ante los daños que pudiera provocar la hibernación. Estos resultados sugieren que la hibernación, al no afectar significativamente el estado de las células, podría considerarse un procedimiento útil para su aplicación en la conservación del tejido para trasplante clínico. Además, se requiere del estudio de la sobrevivencia y funcionalidad de las células hibernadas después de trasplantadas en modelos animales, para evaluar su potencialidad en la terapia celular (AU)

Tejido nervioso fetal, ética y trasplante / Foetal nervous tissue, ethics and transplants

Introducción. El problema ético moral que supone el uso de embriones humanos como fuente de células en el neurotrasplante encierra serias contradicciones en cuanto a qué tejido emplear, de qué fuente, qué método de obtención usar y la búsqueda de fuentes alternativas de tejidos. Desarrollo. En este trabajo se presenta un breve recuento de los puntos éticos y médicos involucrados en la obtención, protección del sujeto donante, preparación, seguridad y eficacia del tejido nervioso fetal humano en el contexto del trasplante neural. La ética del trasplante nervioso fetal humano es muy complejo, ya que representa una encrucijada entre varios puntos de la ética médica, los cuales, en su propio derecho, son muy debatidos, tales como el aborto, el trasplante y la integración en la función cerebral individual. Se analizan desde una perspectiva bioética aspectos como el establecimiento de la fuente óptima de optención de tejido nervioso para trasplante, la seguridad y eficacia del mismo, el consentimiento informado para la donación del tejido, la disponibilidad y el almacenamiento, entre otros. Conclusiones. Todo programa que proponga el uso de tejido fetal con propósito de trasplante debe ajustarse estricta y verdaderamente a las regulaciones éticas nacionales y locales, antes de iniciar los ensayos clínicos(AU)

Obtención de suspensiones de células neurales: aplicación en las investigaciones neurobiológicas / Obtention of suspension of neural cells: application in neurobiological investigations

Introducción. Las técnicas de injerto intracerebral se han convertido en poderosas herramientas usadas para el estudio de los mecanismos de regeneración y plasticidad que tienen lugar en el sistema nervioso central (SNC). Las suspensiones de células neurales fetales se han empleado exitosamente como injertos intracerebrales en sitios profundos del cerebro. Objetivo. El presente trabajo tiene como objetivo la descripción de la metodología utilizada en nuestro grupo para la obstenció y preparación de las suspensiones celulares de varias zonas del cerebro de embrión de rata (mesencéfalo, estriado y septum) empleadas para los trasplantes experimentales en modelos animales. Material y métodos. Se describen con detalle los pasos involucrados en la preparación del tejido en forma de suspensión celular. Estos pasos incluyen la obtención del tejido en el estadío óptimo de desarrollo, disección del tejido donante, tratamiento enzimático y la disociación mecánica hasta la obtención de la suspensión de células. Los recuentos de viabilidad mostraron un alto porcentaje (por encima de 95 por ciento) de células viables en las suspensiones obtenidas por esta vía. La viabilidad celular está afectada por diferentes factores y constituye un prerrequisito para la buena sobrevivencia del injerto. Conclusión. La metodología descrita permite la obtención de suspensiones de células neurales fetales óptimas para estudios tanto in vitro como de traplantes experimentales

Obtención de suspensiones de células neurales: aplicación en las investigaciones neurobiológicas / Obtention of suspension of neural cells: application in neurobiological investigations

Introducción. Las técnicas de injerto intracerebral se han convertido en poderosas herramientas usadas para el estudio de los mecanismos de regeneración y plasticidad que tienen lugar en el sistema nervioso central (SNC). Las suspensiones de células neurales fetales se han empleado exitosamente como injertos intracerebrales en sitios profundos del cerebro. Objetivo. El presente trabajo tiene como objetivo la descripción de la metodología utilizada en nuestro grupo para la obtención y preparación de las suspensiones celulares de varias zonas del cerebro de embrión de rata (mesencéfalo, estriado y septum) empleadas para los trasplantes experimentales en modelos animales. Material y métodos. Se describen con detalle los pasos involucrados en la preparación del tejido en forma de suspensión celular. Estos pasos incluyen la obtención del tejido en el estadío óptimo de desarrollo, disección del tejido donante, tratamiento enzimático y la disociación mecánica hasta la obtención de la suspensión de células. Los recuentos de viabilidad mostraron un alto porcentaje (por encima de 95 por ciento) de células viables en las suspensiones obtenidas por esta vía. La viabilidad celular está afectada por diferentes factores y constituye un prerrequisito para la buena sobrevivencia del injerto. Conclusión. La metodología descrita permite la obtención de suspensiones de células neurales fetales óptimas para estudios tanto in vitro como de traplantes experimentales (AU)

Obtención de suspensiones de células neurales: aplicación en las investigaciones neurobiológicas / Obtention of suspension of neural cells: application in neurobiological investigations

Introducción. Las técnicas de injerto intracerebral se han convertido en poderosas herramientas usadas para el estudio de los mecanismos de regeneración y plasticidad que tienen lugar en el sistema nervioso central (SNC). Las suspensiones de células neurales fetales se han empleado exitosamente como injertos intracerebrales en sitios profundos del cerebro. Objetivo. El presente trabajo tiene como objetivo la descripción de la metodología utilizada en nuestro grupo para la obtención y preparación de las suspensiones celulares de varias zonas del cerebro de embrión de rata (mesencéfalo, estriado y septum) empleadas para los trasplantes experimentales en modelos animales. Material y métodos. Se describen con detalle los pasos involucrados en la preparación del tejido en forma de suspensión celular. Estos pasos incluyen la obtención del tejido en el estadío óptimo de desarrollo, disección del tejido donante, tratamiento enzimático y la disociación mecánica hasta la obtención de la suspensión de células. Los recuentos de viabilidad mostraron un alto porcentaje (por encima de 95 por ciento) de células viables en las suspensiones obtenidas por esta vía. La viabilidad celular está afectada por diferentes factores y constituye un prerrequisito para la buena sobrevivencia del injerto. Conclusión. La metodología descrita permite la obtención de suspensiones de células neurales fetales óptimas para estudios tanto in vitro como de traplantes experimentales (AU)

Obtención de suspensiones de células neurales: aplicación en las investigaciones neurobiológicas / Obtention of suspension of neural cells: application in neurobiological investigations

Introducción. Las técnicas de injerto intracerebral se han convertido en poderosas herramientas usadas para el estudio de los mecanismos de regeneración y plasticidad que tienen lugar en el sistema nervioso central (SNC). Las suspensiones de células neurales fetales se han empleado exitosamente como injertos intracerebrales en sitios profundos del cerebro. Objetivo. El presente trabajo tiene como objetivo la descripción de la metodología utilizada en nuestro grupo para la obstenció y preparación de las suspensiones celulares de varias zonas del cerebro de embrión de rata (mesencéfalo, estriado y septum) empleadas para los trasplantes experimentales en modelos animales. Material y métodos. Se describen con detalle los pasos involucrados en la preparación del tejido en forma de suspensión celular. Estos pasos incluyen la obtención del tejido en el estadío óptimo de desarrollo, disección del tejido donante, tratamiento enzimático y la disociación mecánica hasta la obtención de la suspensión de células. Los recuentos de viabilidad mostraron un alto porcentaje (por encima de 95 por ciento) de células viables en las suspensiones obtenidas por esta vía. La viabilidad celular está afectada por diferentes factores y constituye un prerrequisito para la buena sobrevivencia del injerto. Conclusión. La metodología descrita permite la obtención de suspensiones de células neurales fetales óptimas para estudios tanto in vitro como de traplantes experimentales (AU)