Thalidomide modulates Mycobacterium leprae-induced NF-κB pathway and lower cytokine response.

It is widely accepted that tumor necrosis factor alpha (TNF-α) plays a critical role in the development of tissue and nerve damage in leprosy and during the reactional episodes of acute inflammation. Thalidomide (N-α-phthalimidoglutarimide), a drug used to treat leprosy reaction, modulates immune response, inhibits inflammation and NF-κB activity. Here we investigated whether thalidomide inhibits NF-κB activation induced by Mycobacterium leprae, p38 and ERK1/2 MAPK activation. EMSA and supershift assays were performed to investigate NF-κB activation in response to M. leprae and its modulation following in vitro treatment with thalidomide. Luciferase assay was assayed in transfected THP-1 cells to determine NF-κB transcriptional activity. Flow cytometry and immunofluorescence were used to investigate p65 accumulation in the nucleus. Immunoblotting was used to investigate p38 and ERK1/2 phosphorylation. Following activation of PBMC and monocytes with M. leprae, the formation and nuclear localization of NF-κB complexes composed mainly of p65/p50 and p50/p50 dimers was observed. Induction of NF-κB activation and DNA binding activity was inhibited by thalidomide. The drug also reduced M. leprae-induced TNF-α production and inhibited p38 and ERK1/2 activation. Definition of the activation mechanisms in cells stimulated with M. leprae can lead to the development of new therapy applications to modulate NF-κB activation and to control the inflammatory manifestations due to enhanced TNF-α response as observed in leprosy and in leprosy reactions.

Papel do NF-kB e da fagocitose de células apoptóticas na patogênese da hanseníase / Role of NF-kB and phagocytosis of apoptotic cells in the pathogenesis of leprosy

Estudos anteriores de nosso grupo demonstraram que o Mycobacterium leprae induz apoptose de monócitos humanos por uma via dependente de proteasoma. No presente trabalho nós demonstramos que o M. leprae induz a produção de TNFalfa e induz apoptose de monócitos por uma via dependente de NF-kB. A talidomida, utilizada no tratamento do Eritema Nodoso Hansênico, possui atividade anti-TNF por um mecanismo ainda não completamente elucidado. Nós demonstramos que a Talidomida suprime a produção de TNF por uma via dependente de p38 MAPK e NF-kB. O papel da remoção de células apoptóticas também foi avaliado. Apesar de macrófagos ativados pela via alternativa ou Mf2 possuírem maior capacidade de associação com o M. leprae quando comparados a macrófagos ativados pela via clássica ou Mf1, o estímulo com células apoptóticas levou ao aumento na associação do M. leprae em macrófagos Mf1, mas não Mf2. Esse aumento na associação do M. leprae com macrófagos Mf1 estimulados com células apoptóticas está associado ao aumento da expressão gênica de COX-2 e elevados níveis de PGE2, IL-10 e TGF-beta, com redução dos níveis de IL-6 e IL-15. Em conjunto, tais dados sugerem que na presença de células apoptóticas, macrófagos pró-inflamatórios estimulados com o M. leprae, desviam para um fenótipo antiinflamatório o que pode explicar o estabelecimento da infecção em pacientes com a forma tuberculóide da doença.

O papel da via ubiquitina-proteossoma na indução de apoptose e secreção de citocinas e estudo da modulação de genes humanos em resposta a Mycobacterium leprae / The role of the ubiquitin-proteasome induced apoptosis and cytokine secretion and study of the modulation of human genes in reply the Mycobacterium leprae

A hanseníase é uma doença infecciosa crônica caracterizada por um espectro de formas clínicas,de acordo com a resposta imune do hospedeiro contra a bactéria.No presente estudo,nós avaliamos a interação entre Mycobacterium leprae e culturas de células mononucleares do sangue periférico(PBMC)na tentativa de contribuir para elucidar novos mecanismos celulares modulados durante o processo infeccioso.Este trabalho consistiu de 2 etapas.Na 1ªetapa,foi estudado o papel da via ubiquitina-proteossoma na apoptose e na secreção de citocinas induzidas por M.leprae.Na 2ªetapa,foi pesquisada a resposta transcricional global de células hospedeiras ao patógeno.Estudos...A dosagem da concentração de citocinas no sobrenadante destas culturas,por ELISA, mostrou que a inibição do proteossoma reduziu significativamente a secreção de TNF-α e IL-10 induzidas por M.leprae:304,4±77,0 e 110,4±37,5pg/mL de TNF-α e 121,9±10,9pg/mL e 0pg/mL de IL-10,em células não tratadas e tratadas com este composto,respectivamente.Da mesma forma,foi observada uma redução significativa dos níveis de TNF-α em resposta a LPS quando as culturas foram tratadas com MG132.Finalmente,ensaios de Western blot demonstraram que...Os experimentos de RT-PCR em tempo real mostraram que M.leprae induz um aumento na expressão de κBras-1 após 4 e 12 horas de estímulo(0,001834±0,00067 e 0,002572 ±0,0008485,respectivamente)quando comparadas a culturas controle não estimuladas(0,001205±0,0001 e 0,00144± 0,0004,respectivamente).Em adição,observou-se um aumento significativo na expressão de VNN-1 após 12 horas de exposição a M.leprae(0,002674±0,0007299 em células não estimuladas e 0,007946±0,001912 em células estimuladas com a bactéria).Em contraste,foi observada a regulação negativa da expressão de CCR5 em culturas estimuladas com M.leprae por 4 horas(0,3221±0,11950 em células não estimuladas e 0,06505±0,01053 em células estimuladas com a bactéria)e 12 horas(0,3087±0,04916 em células não estimuladas...