SUPLEMENTAÇÃO DO MEIO DE REFRIGERAÇÃO ESPERMÁTICA COM VITAMINA C E CATALASE EM SÊMEN OBTIDO DE CÃES JOVENS E IDOSOS

O uso de sêmen refrigerado é uma boa opção na rotina clínica de inseminação, sendo um método prático e barato que permite melhor preservação da fertilidade quando comparado ao sêmen congelado. Contudo, o período de sobrevivência dos espermatozoides é curto. A adição de moléculas antioxidantes ao meio de diluição pode reduzir o estresse oxidativo durante o armazenamento e assim melhorar sua qualidade. O objetivo desse trabalho foi avaliar o efeito da adição da catalase e vitamina C ao diluente sobre a qualidade do sêmen canino refrigerado. Para isso foram utilizados cinco cães com idade variando de 2 a 5 anos, e cinco com mais de sete anos. O sêmen foi colhido e dividido em três amostras para a refrigeração nos meios controle (sem adição de antioxidante), com adição de vitamina C e com adição de catalase. Antes e após a refrigeração as amostras foram analisadas através do sistema computadorizado CASA, da análise da morfologia espermática e da integridade das membranas plasmática e acrossomal. No presente trabalho a única variável que se beneficiou da ação dos antioxidantes foi à integridade do acrossomo nas amostras de sêmen resfriado obtidas de animais idosos. Além disso, neste mesmo grupo a concentração de catalase utilizada parece ter tido um efeito deletério sobre parâmetros da motilidade espermática. Estes resultados reforçam a evidencia de variações individuais na resposta

Suplementação do meio de refrigeração espermática com vitamina c e catalase em sêmen obtido de cães jovens e idosos

O uso de sêmen refrigerado é uma boa opção na rotina clínica de inseminação, sendo um método prático e barato que permite melhor preservação da fertilidade quando comparado ao sêmen congelado. Contudo, o período de sobrevivência dos espermatozoides é curto. A adição de moléculas antioxidantes ao meio de diluição pode reduzir o estresse oxidativo durante o armazenamento e assim melhorar sua qualidade. O objetivo desse trabalho foi avaliar o efeito da adição da catalase e vitamina C ao diluente sobre a qualidade do sêmen canino refrigerado. Para isso foram utilizados cinco cães com idade variando de 2 a 5 anos, e cinco com mais de sete anos. O sêmen foi colhido e dividido em três amostras para a refrigeração nos meios controle (sem adição de antioxidante), com adição de vitamina C e com adição de catalase. Antes e após a refrigeração as amostras foram analisadas através do sistema computadorizado CASA, da análise da morfologia espermática e da integridade das membranas plasmática e acrossomal. No presente trabalho a única variável que se beneficiou da ação dos antioxidantes foi à integridade do acrossomo nas amostras de sêmen resfriado obtidas de animais idosos. Além disso, neste mesmo grupo a concentração de catalase utilizada parece ter tido um efeito deletério sobre parâmetros da motilidade espermática. Estes resultados reforçam a evidencia de variações individuais na resposta

Description of ultrastructural damages in frozen-thawed canine spermatozoa / Descrição de danos ultraestruturais em espermatozoides caninos congelados-descongelados

In spite of the advances in transmission electronic microscopy (TEM), there are few studies presenting a systematic description of the canine spermatozoa and they are only focused on sperm cell heads. The goal of the present study was to describe ultrastructural appearance of canine fresh and frozen-thawed spermatozoa, focusing on damages induced by freezing-thawing in different sperm regions. Ten ejaculates from five proven stud dogs (two ejaculates/dog) were collected, evaluated, extended in Tris-egg yolk-glycerol, frozen and stored in liquid nitrogen, and thawed six weeks later.  Samples were evaluated for progressive motility, morphology, and for ultrastructural analysis by TEM. Concerning to TEM, the most striking differences between fresh and frozen-thawed samples were observed over the mid-piece since the fresh spermatozoa showed a well preserved mid-piece. However, the frozen-thawed spermatozoa mid-piece showed signs of damage such as mitochondrial vacuolization. In conclusion, freezing-thawing processes using a Tris-egg yolk extender induce ultrastructural damages in head and mid-piece of canine sperm, affecting the mitochondrial ultrastructure besides.KEY WORDS: Cryopreservation, dog, semen, ultrastructure.

Apesar dos avanços na microscopia eletrônica de transmissão (MET), existem poucos estudos apresentando uma descrição sistemática do espermatozoide canino, os quais estão focados apenas na cabeça espermática. Objetivou-se, com o presente estudo, descrever a aparência ultraestrutural do espermatozoide canino fresco e congelado-descongelado, enfocando os danos induzidos pela congelação e descongelação em diferentes regiões espermáticas. Dez ejaculados obtidos de cinco cães (dois ejaculados por cão) foram coletados, avaliados e diluídos em Tris-gema-glicerol, congelados e armazenados em nitrogênio líquido, e descongelados seis semanas após. Avaliaram-se as amostras quanto à motilidade progressiva, morfologia espermática e análise ultraestrutural por MET. Em relação à MET, as principais diferenças entre o espermatozoide fresco e descongelado foram observadas na peça intermediária, visto que o espermatozoide fresco apresentava uma peça intermediária bem preservada. Entretanto, a peça intermediária dos espermatozoides descongelados mostrava sinais de danos como a vacuolização das mitocôndrias.  Em conclusão, os processos de congelação e descongelação utilizando o diluente Tris-gema induzem danos ultraestruturais na cabeça e peça intermediária de células espermáticas caninas, afetando, inclusive, a ultraestrutura das mitocôndrias. PALAVRAS-CHAVES: Cão, criopreservação, sêmen, ultraestr

DESCRIPTION OF ULTRASTRUCTURAL DAMAGES IN FROZEN-THAWED CANINE SPERMATOZOA / DESCRIÇÃO DE DANOS ULTRAESTRUTURAIS EM ESPERMATOZOIDES CANINOS CONGELADOS-DESCONGELADOS

In spite of the advances in transmission electronic microscopy (TEM), there are few studies presenting a systematic description of the canine spermatozoa and they are only focused on sperm cell heads. The goal of the present study was to describe ultrastructural appearance of canine fresh and frozen-thawed spermatozoa, focusing on damages induced by freezing-thawing in different sperm regions. Ten ejaculates from five proven stud dogs (two ejaculates/dog) were collected, evaluated, extended in Tris-egg yolk-glycerol, frozen and stored in liquid nitrogen, and thawed six weeks later.  Samples were evaluated for progressive motility, morphology, and for ultrastructural analysis by TEM. Concerning to TEM, the most striking differences between fresh and frozen-thawed samples were observed over the mid-piece since the fresh spermatozoa showed a well preserved mid-piece. However, the frozen-thawed spermatozoa mid-piece showed signs of damage such as mitochondrial vacuolization. In conclusion, freezing-thawing processes using a Tris-egg yolk extender induce ultrastructural damages in head and mid-piece of canine sperm, affecting the mitochondrial ultrastructure besides.KEY WORDS: Cryopreservation, dog, semen, ultrastructure.

Apesar dos avanços na microscopia eletrônica de transmissão (MET), existem poucos estudos apresentando uma descrição sistemática do espermatozoide canino, os quais estão focados apenas na cabeça espermática. Objetivou-se, com o presente estudo, descrever a aparência ultraestrutural do espermatozoide canino fresco e congelado-descongelado, enfocando os danos induzidos pela congelação e descongelação em diferentes regiões espermáticas. Dez ejaculados obtidos de cinco cães (dois ejaculados por cão) foram coletados, avaliados e diluídos em Tris-gema-glicerol, congelados e armazenados em nitrogênio líquido, e descongelados seis semanas após. Avaliaram-se as amostras quanto à motilidade progressiva, morfologia espermática e análise ultraestrutural por MET. Em relação à MET, as principais diferenças entre o espermatozoide fresco e descongelado foram observadas na peça intermediária, visto que o espermatozoide fresco apresentava uma peça intermediária bem preservada. Entretanto, a peça intermediária dos espermatozoides descongelados mostrava sinais de danos como a vacuolização das mitocôndrias.  Em conclusão, os processos de congelação e descongelação utilizando o diluente Tris-gema induzem danos ultraestruturais na cabeça e peça intermediária de células espermáticas caninas, afetando, inclusive, a ultraestrutura das mitocôndrias. PALAVRAS-CHAVES: Cão, criopreservação, sêmen, ultraestr

Morphofunctional characteristics of canine cooled and frozen semen using two different extenders / Características morfofuncionais do sêmen canino refrigerado e congelado, usando dois diferentes meios diluentes

The objective of this study was to verify the efficiency of two different extenders: TRIS/Fructose/Citric Acid/Glycerol (8 %) - (TRIS 8 %) (Morton, 1988 modified) and commercial extender - MP50) (PAPA et al., 2002) for freezing dog semen. Ten ejaculates from different adult dogs were collected by digital manipulation. The samples semen were evaluated for sperm motility and vigor, hypo-osmotic swelling test, sperm membrane integrity, sperm morphology, ultra structural analysis in three different moments, fresh (T1), cooled (T2) and thawed (T3). The samples were packaged in 0.5 mL French straws with 40 x 106 spermatozoa/ straw, and kept at 5 0C for 60 minutes (T2); then frozen in static vapor of nitrogen for the following 20 minutes and immersed in liquid nitrogen until being thawed in 70 0C water for 8 seconds (T3). By analysis of variance, it would be possible to verify the animal effect on almost all variables observed in this study, except for sperm motility and membrane integrity. For cooled semen (T2), MP50 were significantly better for hypo-osmotic swelling test, sperm membrane integrity (p

O objetivo deste estudo foi avaliar, por meio de análise funcional e morfológica, dois meios diluentes TRIS/ frutose/ácido cítrico/glicerol (8 %) (TRIS 8 %) (Morton, 1988 modificado) e um meio comercial (MP50) (PAPA et al., 2002) para criopreservação de sêmen canino. Colheramse dez ejaculados de cães adultos, por manipulação digital do pênis. Avaliaram-se as amostras pela motilidade espermática, velocidade espermática, teste hiposmótico, integridade de membrana espermática, morfologia espermática, e análise ultra-estrutural no sêmen fresco (T1), refrigerado (T2) e descongelado (T3). Envasaram-se as amostras diluídas em palhetas francesas de 0,5 mL, com 40 x 106 espermatozóides/palheta e se as mantiveram por sessenta minutos a 5 ºC (T2); em seguida, transferiram-nas para vapor de nitrogênio líquido durante vinte minutos e posteriormente estocadas. O sêmen foi descongelado a 70 ºC por 8 segundos. A análise de variância mostrou influência do animal nas diferentes variáveis, com exceção da motilidade espermática e integridade de membrana espermática. Na refrigeração (T2), o meio MP50 apresentou melhores resultados no teste hiposmótico e na integridade de membrana (p0,05). A análise ultra-estrutural do sêmen mostrou edema e ondulação da membrana plasmática e acrossomal nas diferentes etapas do processo de criopreservação. Conclui-se que os meios diluentes utilizados mostraram se

MORPHOFUNCTIONAL CHARACTERISTICS OF CANINE COOLED AND FROZEN SEMEN USING TWO DIFFERENT EXTENDERS / CARACTERÍSTICAS MORFOFUNCIONAIS DO SÊMEN CANINO REFRIGERADO E CONGELADO, USANDO DOIS DIFERENTES MEIOS DILUENTES

The objective of this study was to verify the efficiency of two different extenders: TRIS/Fructose/Citric Acid/Glycerol (8 %) - (TRIS 8 %) (Morton, 1988 modified) and commercial extender - MP50) (PAPA et al., 2002) for freezing dog semen. Ten ejaculates from different adult dogs were collected by digital manipulation. The samples semen were evaluated for sperm motility and vigor, hypo-osmotic swelling test, sperm membrane integrity, sperm morphology, ultra structural analysis in three different moments, fresh (T1), cooled (T2) and thawed (T3). The samples were packaged in 0.5 mL French straws with 40 x 106 spermatozoa/ straw, and kept at 5 0C for 60 minutes (T2); then frozen in static vapor of nitrogen for the following 20 minutes and immersed in liquid nitrogen until being thawed in 70 0C water for 8 seconds (T3). By analysis of variance, it would be possible to verify the animal effect on almost all variables observed in this study, except for sperm motility and membrane integrity. For cooled semen (T2), MP50 were significantly better for hypo-osmotic swelling test, sperm membrane integrity (p

O objetivo deste estudo foi avaliar, por meio de análise funcional e morfológica, dois meios diluentes TRIS/ frutose/ácido cítrico/glicerol (8 %) (TRIS 8 %) (Morton, 1988 modificado) e um meio comercial (MP50) (PAPA et al., 2002) para criopreservação de sêmen canino. Colheramse dez ejaculados de cães adultos, por manipulação digital do pênis. Avaliaram-se as amostras pela motilidade espermática, velocidade espermática, teste hiposmótico, integridade de membrana espermática, morfologia espermática, e análise ultra-estrutural no sêmen fresco (T1), refrigerado (T2) e descongelado (T3). Envasaram-se as amostras diluídas em palhetas francesas de 0,5 mL, com 40 x 106 espermatozóides/palheta e se as mantiveram por sessenta minutos a 5 ºC (T2); em seguida, transferiram-nas para vapor de nitrogênio líquido durante vinte minutos e posteriormente estocadas. O sêmen foi descongelado a 70 ºC por 8 segundos. A análise de variância mostrou influência do animal nas diferentes variáveis, com exceção da motilidade espermática e integridade de membrana espermática. Na refrigeração (T2), o meio MP50 apresentou melhores resultados no teste hiposmótico e na integridade de membrana (p0,05). A análise ultra-estrutural do sêmen mostrou edema e ondulação da membrana plasmática e acrossomal nas diferentes etapas do processo de criopreservação. Conclui-se que os meios diluentes utilizados mostraram se