ABSTRACT
A criopreservação do sêmen de fêmeas masculinizadas de truta arco-íris tem como objetivo a racionalização do processo de produção de estoques 100% femininos. Para tal, foi coletado sêmen de machos normais (M) e de dois tipos de fêmeas genotípicas (R e G), masculinizadas pela administração oral de 17a-metiltestosterona. R foi obtido pela fertilização de ovócitos normais com sêmen de fêmeas masculinizadas enquanto G foi através de reprodução ginogenética. O sêmen foi diluído em uma solução crioprotetora (glicose 5,4 g, gema de ovo de galinha 10 ml, dimetil sulfóxido 10 ml, água destilada 80 ml) na razão de 1:3 (sêmen/diluidor), envasado em palhetas de 0,5 ml e congelado em um "container" tipo "seco" Cryopac CP-65, à temperatura de -180ºC. A descongelação foi feita em água a 70ºC por 3 segundos. As taxas de fertilização obtidas, não revelaram diferença estatística significativa (P<0.05) entre os três grupos de sêmen descongelados (M = 73,1±11,5%; R = 67,2±23,6%; G = 64±5,8%), indicando que a metodologia de congelação utilizada foi eficaz, tanto na criopreservação do sêmen das trutas normais como para o das masculinizadas.
ABSTRACT
Silver nitrate staining of rainbow trouts (Oncorhynchus mykiss) chromosomes, for the identification of the nucleolar organizing regions (NORs), revealed that in individuals from Núcleo Experimental de Salmonicultura de Campos do Jordão (Brazil) NORs were located in the long arms of submetacentric pair while in specimens from Mount Shasta (USA) NORs were located in the short arms of a submetacentric pair. Cytogenetic analysis of the offspring, obtained through artificial crosses including individuals from both stocks, allowed the identification of NORs in two submetacentric chromosomes, one in the short arms and the other in the long arms, confirming the effectiveness of the hybridization process. Complementary results obtained using the FISH technique with 18S and 5S rDNA probes showed that NOR-bearing chromosomes exhibited a cluster of 5S genes located in tandem with the 18S gene cluster in both stocks. The results allow us to suggest that the difference in NOR-bearing chromosomes found between the two stocks is likely to be due to pericentric inversion involving the chromosome segment where 18S and 5S rDNA genes are located. The presence of ribosomal genes in the long arms of a submetacentric chromosome is apparently a particular characteristic of the rainbow trout stock of Campos do Jordão and might be used as a chromosome marker in studies of controlled crosses in this species.
Subject(s)
Crosses, Genetic , Nucleolus Organizer Region , Oncorhynchus mykiss/genetics , Animals , In Situ Hybridization, FluorescenceABSTRACT
Growth and survival were compared between all-female and mixed-sex groups of diploid and triploid rainbow trout, Oncorhynchus mykiss, reared separately from first feeding up to completing the first reproductive cycIe. All-female groups were generated using sperm from genotipic females masculinized with 17-methyltestosterone. Triploidy was induced by a 28°C heat shocking in inseminated eggs, for 20 minutes, starting 10 minutes after egg activation. At the end of the first rearing period (12 months) the heat-shocked groups showed higher mortality than their respective diploid controls. In the second rearing period (from 12th through 26th month) the mortality was more severe in the diploid groups, especially among the males. Diploids, especially from the mixed-sex groups, grew faster than triploids until the first spawning season. After that, triploids, especially from all-female groups, reached higher weights than the diploids one. Externally, triploid males showed the typical secondary sex characteristics of ripe males, whereas triploid females kept the appearance of juvenile fishes. These results preclude the use of mixed-sex groups in the triploids production and support the usefulness of sterile all-female groups generated by the association of sex reversal and triploidization in trout farming oriented to production of large-sized fish.
Este trabalho compara o crescimento e a sobrevivência entre lotes monossexo femininos e de sexos mistos de truta arco-íris, Oncorhynchus mykiss, diploides e triploides, cultivados separadamente desde o início da alimentação até completarem o primeiro ciclo reprodutivo. Os lotes monossexo femininos foram obtidos usando-se sêmen de fêmeas genotípicas masculinizadas com 17-metiltestosterona. A triploidia foi induzida por choque térmico a 28°C, aplicado durante 20 minutos, com início 10 minutos após a ativação dos ovos. Ao final da fase I do cultivo (12 meses), os grupos tratados com choque térmico apresentaram maior mortalidade do que os seus respectivos controles. Na fase II do cultivo (do 12º ao 26º mês), a mortalidade foi mais intensa nos grupos diploides, principalmente nos machos. Os diploides, sobretudo os lotes de sexos mistos, cresceram mais rápido do que os triploides até a primeira estação de desova e, depois disso, os triploides, sobretudo os lotes monossexo femininos, foram mais pesados do que os diploides. Externamente, os machos triploides exibiram as características sexuais secundárias típicas dos machos sexualmente maduros, enquanto que as fêmeas triploides mantiveram o aspecto de peixe juvenil. Esses resultados desaconselham o emprego de lotes de sexos mistos na produção de triploides e indicam a obtenção de lotes monossexo femininos estéreis, pela associação das
ABSTRACT
Growth and survival were compared between all-female and mixed-sex groups of diploid and triploid rainbow trout, Oncorhynchus mykiss, reared separately from first feeding up to completing the first reproductive cycIe. All-female groups were generated using sperm from genotipic females masculinized with 17-methyltestosterone. Triploidy was induced by a 28°C heat shocking in inseminated eggs, for 20 minutes, starting 10 minutes after egg activation. At the end of the first rearing period (12 months) the heat-shocked groups showed higher mortality than their respective diploid controls. In the second rearing period (from 12th through 26th month) the mortality was more severe in the diploid groups, especially among the males. Diploids, especially from the mixed-sex groups, grew faster than triploids until the first spawning season. After that, triploids, especially from all-female groups, reached higher weights than the diploids one. Externally, triploid males showed the typical secondary sex characteristics of ripe males, whereas triploid females kept the appearance of juvenile fishes. These results preclude the use of mixed-sex groups in the triploids production and support the usefulness of sterile all-female groups generated by the association of sex reversal and triploidization in trout farming oriented to production of large-sized fish.
Este trabalho compara o crescimento e a sobrevivência entre lotes monossexo femininos e de sexos mistos de truta arco-íris, Oncorhynchus mykiss, diploides e triploides, cultivados separadamente desde o início da alimentação até completarem o primeiro ciclo reprodutivo. Os lotes monossexo femininos foram obtidos usando-se sêmen de fêmeas genotípicas masculinizadas com 17-metiltestosterona. A triploidia foi induzida por choque térmico a 28°C, aplicado durante 20 minutos, com início 10 minutos após a ativação dos ovos. Ao final da fase I do cultivo (12 meses), os grupos tratados com choque térmico apresentaram maior mortalidade do que os seus respectivos controles. Na fase II do cultivo (do 12º ao 26º mês), a mortalidade foi mais intensa nos grupos diploides, principalmente nos machos. Os diploides, sobretudo os lotes de sexos mistos, cresceram mais rápido do que os triploides até a primeira estação de desova e, depois disso, os triploides, sobretudo os lotes monossexo femininos, foram mais pesados do que os diploides. Externamente, os machos triploides exibiram as características sexuais secundárias típicas dos machos sexualmente maduros, enquanto que as fêmeas triploides mantiveram o aspecto de peixe juvenil. Esses resultados desaconselham o emprego de lotes de sexos mistos na produção de triploides e indicam a obtenção de lotes monossexo femininos estéreis, pela associação das
ABSTRACT
The survival rate among all-female and mixed-sex groups of diploid and triploid rainbow trout, Oncorhynchus mykiss, during the embryonic development period was compared. AII-female groups were obtained using sperm from masculinized genotypic female with 17-methyltestosterone. Triploidy was induced by heat shocking the eggs at 28°C for 20 minutes, starting 10 minutes post-activation. Triploidization rate was estimated from erythrocyte major axis measurement as 94 and 100%, respectively to all-female and mixed-sex groups. Compared with the diploid control, heat-shocked eggs showed higher mortality primarily after hatching period; groups fertilized with semen from masculinized female showed higher mortality rates than groups fertilized with semen from normal males.
Durante o período de desenvolvimento embrionário, foram comparadas as taxas de sobrevivência de lotes monossexos femininos e de lotes de sexos mistos de truta arco-íris, Oncorhynchus mykiss, diploides e triploides. Os lotes monossexos femininos foram obtidos usando-se sêmen de fêmeas genotípicas masculinizadas com 17 -metiltestosterona e a triploidia foi induzida por choque térmico a 28°C aplicado durante 20 minutos, com início 10 minutos após a ativação dos ovos. As taxas de triploidização, estimadas pela medida do eixo maior dos eritrócitos, foram de 94 e 100%, respectivamente, para os grupos monossexos femininos e de sexos mistos. Os grupos de indivíduos triplóides, resultantes de tratamento com choque térmico, apresentaram maior mortalidade do que os seus respectivos controles diploides, sobretudo na fase eleuteroembrionária e as parcelas que foram fertilizadas com sêmen de fêmeas masculinizadas apresentaram mortalidade superior à daquelas que foram fertilizadas com sêmen de machos normais.
ABSTRACT
The survival rate among all-female and mixed-sex groups of diploid and triploid rainbow trout, Oncorhynchus mykiss, during the embryonic development period was compared. AII-female groups were obtained using sperm from masculinized genotypic female with 17-methyltestosterone. Triploidy was induced by heat shocking the eggs at 28°C for 20 minutes, starting 10 minutes post-activation. Triploidization rate was estimated from erythrocyte major axis measurement as 94 and 100%, respectively to all-female and mixed-sex groups. Compared with the diploid control, heat-shocked eggs showed higher mortality primarily after hatching period; groups fertilized with semen from masculinized female showed higher mortality rates than groups fertilized with semen from normal males.
Durante o período de desenvolvimento embrionário, foram comparadas as taxas de sobrevivência de lotes monossexos femininos e de lotes de sexos mistos de truta arco-íris, Oncorhynchus mykiss, diploides e triploides. Os lotes monossexos femininos foram obtidos usando-se sêmen de fêmeas genotípicas masculinizadas com 17 -metiltestosterona e a triploidia foi induzida por choque térmico a 28°C aplicado durante 20 minutos, com início 10 minutos após a ativação dos ovos. As taxas de triploidização, estimadas pela medida do eixo maior dos eritrócitos, foram de 94 e 100%, respectivamente, para os grupos monossexos femininos e de sexos mistos. Os grupos de indivíduos triplóides, resultantes de tratamento com choque térmico, apresentaram maior mortalidade do que os seus respectivos controles diploides, sobretudo na fase eleuteroembrionária e as parcelas que foram fertilizadas com sêmen de fêmeas masculinizadas apresentaram mortalidade superior à daquelas que foram fertilizadas com sêmen de machos normais.
ABSTRACT
Rainbow trout, Oncorhynchus mykiss, specimens were submitted to 6 different treatments with 17-methyltestosterone (MT), either by dilution in immersion bath and/or added to the diet during the early stages of development in order to induce the reproductive sterility. During the reproductive season (winter) two years old animals were collected, their weight and size measured and their gonadal stage analyzed in order to obtain the rates of occurrence of normal, sterilized and sex reverted specimens. The treatments with MT diluted in immersion baths were more efficacious than those with hormone added in diet only, and the mixed treatments (immersion baths and diet) were more efficient than immersion baths only. The effects of the MT, even though at a lower rate than that found in other papers, were similar in the macroscopical and histological aspects of the gonads. No dose-related mortality during the treatments was observed.
Exemplares de truta arco-íris, Oncorhynchus mykiss, nos estágios iniciais do desenvolvimento, foram submetidos a 6 diferentes tratamentos com 17-metiltestosterona (MT) diluída em banhos de imersão e/ou adicionada na ração, visando à indução da esterilidade reprodutiva. Aos 2 anos de idade, na estação reprodutiva (inverno), todos os animais foram coletados e pesados e as suas gônadas, analisadas para obtenção das porcentagens de indivíduos normais, esterilizados e sexualmente revertidos. Os tratamentos com banhos de imersão contendo MT em solução foram mais eficazes que os constituídos de apenas hormônio adicionado à ração, sendo ainda os tratamentos somados (banho de imersão e ração suplementada) mais eficientes do que os que receberam apenas banho de imersão. Os efeitos da MT, embora em proporções menores que os relatados na literatura, são semelhantes quanto aos aspectos macroscópicos e histológicos das gônadas. Não foi observada relação entre a mortalidade e as doses de hormônio durante o tratamento.
ABSTRACT
Rainbow trouts, Oncorhynchus mykiss, were submitted to 6 different treatments with 17-methyltestosterone, either by dilution in immersion baths and/or added to the diet during the early stages of development. During the reproductive season (winter), two years old animals were collected and their gonadal stage macroscopically analyzed in order to obtain the rates of occurrence of normal, sterilized and sex reverted specimens. ln this occasion, the pituitary gland was fixed for histochemical analysis and somatotropic (StH) and gonadotropic cells (GtH I and GtH II) counting were carried out. The pars distalis proximalis in the pituitaries of the sterile fishes showed chromophobes cells (presumably GtH I producer), while normal and sex reverted fishes, due to their being in final maturational stages, showed basophil cells (presumably GtH II producer) in larger quantities. The acidophil cells (presumably StH producer), also present in the pars distalis proximalis, occurred in greater numbers in the pituitaries of the sterile fishes when compared to their numbers in the other two groups (normal and sterile fishes).
Trutas arco-íris, Oncorhynchus mykiss, nas primeiras fases do desenvolvimento foram submetidas a 6 diferentes tratamentos com 17-metiltestosterona em banhos de imersão e/ou adicionada à ração alimentar. Aos dois anos de idade, na estação reprodutiva (inverno), todos os exemplares foram coletados e, através da análise macroscópica das gônadas, classificados em animais normais, esterilizados e sexualmente revertidos. Nessa ocasião, foram fixadas as hipófises para análise histoquímica e contagens das células produtoras de gonadotropinas (GtH I e GtH II), bem como, das produtoras de somatotropina (StH). As hipófises de animais esterilizados apresentaram na pars distalis proximalis grande número de células cromófobas, que se presume sejam produtoras de GtH I, enquanto nos animais normais e revertidos, por estarem em estádios avançados de maturação, as células basófilas, que se presume produtoras de GtH II, foram as mais abundantes. As células acidófilas, que se admite como sendo as produtoras de StH, também presentes na pars distalis proximalis, ocorreram em maior número nas hipófises de peixes esterilizados quando comparadas às dos outros dois grupos (animais normais e revertidos).
ABSTRACT
Rainbow trouts, Oncorhynchus mykiss, were submitted to 6 different treatments with 17-methyltestosterone, either by dilution in immersion baths and/or added to the diet during the early stages of development. During the reproductive season (winter), two years old animals were collected and their gonadal stage macroscopically analyzed in order to obtain the rates of occurrence of normal, sterilized and sex reverted specimens. ln this occasion, the pituitary gland was fixed for histochemical analysis and somatotropic (StH) and gonadotropic cells (GtH I and GtH II) counting were carried out. The pars distalis proximalis in the pituitaries of the sterile fishes showed chromophobes cells (presumably GtH I producer), while normal and sex reverted fishes, due to their being in final maturational stages, showed basophil cells (presumably GtH II producer) in larger quantities. The acidophil cells (presumably StH producer), also present in the pars distalis proximalis, occurred in greater numbers in the pituitaries of the sterile fishes when compared to their numbers in the other two groups (normal and sterile fishes).
Trutas arco-íris, Oncorhynchus mykiss, nas primeiras fases do desenvolvimento foram submetidas a 6 diferentes tratamentos com 17-metiltestosterona em banhos de imersão e/ou adicionada à ração alimentar. Aos dois anos de idade, na estação reprodutiva (inverno), todos os exemplares foram coletados e, através da análise macroscópica das gônadas, classificados em animais normais, esterilizados e sexualmente revertidos. Nessa ocasião, foram fixadas as hipófises para análise histoquímica e contagens das células produtoras de gonadotropinas (GtH I e GtH II), bem como, das produtoras de somatotropina (StH). As hipófises de animais esterilizados apresentaram na pars distalis proximalis grande número de células cromófobas, que se presume sejam produtoras de GtH I, enquanto nos animais normais e revertidos, por estarem em estádios avançados de maturação, as células basófilas, que se presume produtoras de GtH II, foram as mais abundantes. As células acidófilas, que se admite como sendo as produtoras de StH, também presentes na pars distalis proximalis, ocorreram em maior número nas hipófises de peixes esterilizados quando comparadas às dos outros dois grupos (animais normais e revertidos).
ABSTRACT
Rainbow trout, Oncorhynchus mykiss, specimens were submitted to 6 different treatments with 17-methyltestosterone (MT), either by dilution in immersion bath and/or added to the diet during the early stages of development in order to induce the reproductive sterility. During the reproductive season (winter) two years old animals were collected, their weight and size measured and their gonadal stage analyzed in order to obtain the rates of occurrence of normal, sterilized and sex reverted specimens. The treatments with MT diluted in immersion baths were more efficacious than those with hormone added in diet only, and the mixed treatments (immersion baths and diet) were more efficient than immersion baths only. The effects of the MT, even though at a lower rate than that found in other papers, were similar in the macroscopical and histological aspects of the gonads. No dose-related mortality during the treatments was observed.
Exemplares de truta arco-íris, Oncorhynchus mykiss, nos estágios iniciais do desenvolvimento, foram submetidos a 6 diferentes tratamentos com 17-metiltestosterona (MT) diluída em banhos de imersão e/ou adicionada na ração, visando à indução da esterilidade reprodutiva. Aos 2 anos de idade, na estação reprodutiva (inverno), todos os animais foram coletados e pesados e as suas gônadas, analisadas para obtenção das porcentagens de indivíduos normais, esterilizados e sexualmente revertidos. Os tratamentos com banhos de imersão contendo MT em solução foram mais eficazes que os constituídos de apenas hormônio adicionado à ração, sendo ainda os tratamentos somados (banho de imersão e ração suplementada) mais eficientes do que os que receberam apenas banho de imersão. Os efeitos da MT, embora em proporções menores que os relatados na literatura, são semelhantes quanto aos aspectos macroscópicos e histológicos das gônadas. Não foi observada relação entre a mortalidade e as doses de hormônio durante o tratamento.