Um protocolo de "nested-PCR" para detecção do vírus da anemia das galinhas / A nested-PCR protocol for detection of the chicken anemia virus

Este trabalho descreve o estabelecimento de um pro!tocolo de "nested-PCR" para a detecção do vírus da anemia das galinhas (CAV, chicken anemia virus), agente causador da anemia infecciosa das galinhas. Para a extração de DNA a partir de amostras clínicas um método baseado no uso de tiocianato de guanidina mostrou-se mais sensível e prático, do que os demais avaliados. Para a PCR inicial foi selecionado um par de primers que amplifica uma região de 664 pares de bases (pb) do gene VP1. Para a "nested-PCR" propriamente dita, foi selecionado um segundo par que amplifica uma região interna de 520 pb. A especificidade dos primers foi avaliada utilizando amostras de lotes controlados para CAV. Outras trinta amostras vírus e bactérias, causadoras de doenças em aves, não geraram produto de amplificação. A sensibilidade do teste foi determinada a partir de diluições seriadas de uma amostra vacinal de CAV. A "nested-PCR" mostrou ser mais sensível do que a PCR e foi capaz de detectar pelo menos 0,16 TCID50 por cento da cepa vacinal. Além disso, detectou DNA viral em tecidos, soro e cama aviária de lotes com e sem sinais clínicos. Conclui-se que, como técnica para a detecção do CAV, o protocolo de "nested-PCR" aqui descrito, é mais sensível, rápido e menos trabalhoso do que o isolamento viral em cultivo celular. (AU)

This paper reports a nested polymerase chain reaction (nested-PCR) protocol for detection of chicken anemia virus (CAV), the causal agent of infectious chicken anemia. For DNA extraction from clinical samples, a method based on guanidine thiocyanate was found more sensitive and practical than other extraction protocols tested. The pair of primers used in the initial PCR targeted a 664 bp fragment on the VP1 gene. The primers for the internal PCR targeted a fragment of 520 bp. The specificity of the primers was evaluated on samples of CAV controlled flocks. Thirty different viruses and bacteria isolated from chickens did not give rise to any amplification product in the assay. The sensitivity of the nested-PCR was determined on serial dilutions of a CAV vaccine. The nested-PCR was more sensitive than a one step PCR and was able to detect at least 0.16 TCID50 of the vaccine strain. In addition, the protocol employed here detected viral DNA from tissues, sera and litter from flocks with or without clinical signs of disease. It is concluded that the nested-PCR protocol described here is more sensitive, faster and less cumbersome than virus isolation in cell culture as a diagnostic technique for detection of CAV.(AU)

Um protocolo de "nested-PCR" para detecção do vírus da anemia das galinhas / A nested-PCR protocol for detection of the chicken anemia virus

Este trabalho descreve o estabelecimento de um pro!tocolo de nested-PCR para a detecção do vírus da anemia das galinhas (CAV, chicken anemia virus), agente causador da anemia infecciosa das galinhas. Para a extração de DNA a partir de amostras clínicas um método baseado no uso de tiocianato de guanidina mostrou-se mais sensível e prático, do que os demais avaliados. Para a PCR inicial foi selecionado um par de primers que amplifica uma região de 664 pares de bases (pb) do gene VP1. Para a nested-PCR propriamente dita, foi selecionado um segundo par que amplifica uma região interna de 520 pb. A especificidade dos primers foi avaliada utilizando amostras de lotes controlados para CAV. Outras trinta amostras vírus e bactérias, causadoras de doenças em aves, não geraram produto de amplificação. A sensibilidade do teste foi determinada a partir de diluições seriadas de uma amostra vacinal de CAV. A nested-PCR mostrou ser mais sensível do que a PCR e foi capaz de detectar pelo menos 0,16 TCID50 por cento da cepa vacinal. Além disso, detectou DNA viral em tecidos, soro e cama aviária de lotes com e sem sinais clínicos. Conclui-se que, como técnica para a detecção do CAV, o protocolo de nested-PCR aqui descrito, é mais sensível, rápido e menos trabalhoso do que o isolamento viral em cultivo celular.

Performance comparison between broilers positive and negative for antibodies against the chicken anemia virus

O vírus da anemia das galinhas (CAV - "chicken anemia virus") está presente em praticamente todos os países investigados, inclusive no Brasil. O objetivo deste trabalho foi determinar qual a diferença de desempenho, comparando frangos positivos (progênie de matrizes vacinadas ou com infecção natural) com frangos negativos para a presença de anticorpos contra o CAV, no sistema atual de criação intensiva. Como resultado, foi observado que os frangos negativos foram significativamente mais pesados que os frangos positivos. Os machos negativos tiveram um peso final 5,43% superior ao dos machos positivos. Não houve diferença significativa entre os tratamentos em relação aos parâmetros de mortalidade e conversão alimentar. Este estudo indicou que a presença de anticorpos contra o CAV em frangos de corte, seja através da vacinação ou infecção natural das matrizes, não gerou uma progênie com melhor desempenho nas condições de criação testadas.

Performance comparison between broilers positive and negative for antibodies against the chicken anemia virus

The chicken anemia virus (CAV) is present in virtually every country investigated, Brazil including. The aim of this study was to determine what the difference in performance is between positive (progeny of breeders vaccinated or with natural infection) and negative broilers to the presence of antibodies against the CAV in currently intensive raising systems. As a result, it was observed that negative broilers were significantly heavier than positive broilers. Negative males had a final weight 5.43% higher than positive males. There was no significant difference among different treatments in relation to parameters as mortality and feeding conversion. These study indicated that the presence of antibodies against CAV in broilers - may it be through vaccination or natural infection of breeders - did not generate progeny with superior performance under the tested raising conditions.

O vírus da anemia das galinhas (CAV - "chicken anemia virus") está presente em praticamente todos os países investigados, inclusive no Brasil. O objetivo deste trabalho foi determinar qual a diferença de desempenho, comparando frangos positivos (progênie de matrizes vacinadas ou com infecção natural) com frangos negativos para a presença de anticorpos contra o CAV, no sistema atual de criação intensiva. Como resultado, foi observado que os frangos negativos foram significativamente mais pesados que os frangos positivos. Os machos negativos tiveram um peso final 5,43% superior ao dos machos positivos. Não houve diferença significativa entre os tratamentos em relação aos parâmetros de mortalidade e conversão alimentar. Este estudo indicou que a presença de anticorpos contra o CAV em frangos de corte, seja através da vacinação ou infecção natural das matrizes, não gerou uma progênie com melhor desempenho nas condições de criação testadas.