Congelação do sêmen de pequenos ruminantes sem uso de gema de ovo utilizando bases vegetais em substituição à gema de ovo / Small ruminants sperm freezing without egg yolk using vegetable bases instead of egg yolk

Na conservação seminal é necessária a utilização de diluentes que forneçam nutrientes e protejam as células espermáticas contra o choque térmico. Os aditivos de origem animal, como a gema de ovo e o leite, amplamente empregados na preservação do sêmen, representam um risco potencial de contaminação. Com o intuito de reduzir esses impactos quanto ao uso de substâncias de origem animal, esta revisão teve como objetivo abordar os principais pontos acerca da utilização de diluentes para congelação do sêmen de pequenos ruminantes livres de gema de ovo, um diluente constituído 100% por produtos de origem vegetal.(AU)

For semen conservation, it is necessary to use extenders that provide nutrients and protect the spermatozoa against thermal shock. Animal source additives, such as egg yolk and milk, widely used in semen preservation, represent a potential contamination risk. To reduce impacts related to the use of animal origin substances, this review aimed to address the main points about the use of extenders for small ruminant sperm freezing free of egg yolk, an extender composed by 100% vegetable origin products.(AU)

Congelação do sêmen de pequenos ruminantes sem uso de gema de ovo utilizando bases vegetais em substituição à gema de ovo / Small ruminant’s sperm freezing without egg yolk using vegetable bases instead of egg yolk

Na conservação seminal é necessária a utilização de diluentes que forneçam nutrientes e protejam as células espermáticas contra o choque térmico. Os aditivos de origem animal, como a gema de ovo e o leite, amplamente empregados na preservação do sêmen, representam um risco potencial de contaminação. Com o intuito de reduzir esses impactos quanto ao uso de substâncias de origem animal, esta revisão teve como objetivo abordar os principais pontos acerca da utilização de diluentes para congelação do sêmen de pequenos ruminantes livres de gema de ovo, um diluente constituído 100% por produtos de origem vegetal.

For semen conservation, it is necessary to use extenders that provide nutrients and protect the spermatozoa against thermal shock. Animal source additives, such as egg yolk and milk, widely used in semen preservation, represent a potential contamination risk. To reduce impacts related to the use of animal origin substances, this review aimed to address the main points about the use of extenders for small ruminant sperm freezing free of egg yolk, an extender composed by 100% vegetable origin products.

Comparative evaluation between the extenders TES-TRIS and ACP-112® and the association of Sálva Marajó oil (Lippia origanoides) in the quality of cryopreserved buffalo sperm / Avaliação comparativa entre os diluidores TES-TRIS e ACP-112® e a associação com o óleo da Sálva do Marajó (Lippia origanoides) na qualidade do sêmen bubalino criopreservado

For artificial insemination, it is essential to use frozen semen, however the freezing process causes deleterious changes to the structure and integrity of sperm membranes that compromise the function of sperm. To avoid this cellular damage, extenders and suitable substrates must be used to recover the highest possible number of viable cells post-thaw. To this end, in the first experiment, we evaluated three different extenders: TES-TRIS, which is widely used for buffaloes; and an extender composed of powdered coconut water-based (ACP-112®) with or without milk (ACP-112®-milk) for buffalo semen freezing. In the second experiment, we evaluated the effect of Lippia origanoides oil extract on protecting buffalo sperm against cryoinjury arising from freezing semen. Semen was collected from ten buffalo bulls (10 ejaculates/bull) and diluted in TES-TRIS (control), ACP-112® or ACP-112®-Milk in the first experiment. In the second experiment, the samples were diluted in the diluent with the best results for sperm quality obtained in experiment I, and 2.5 μg mL-1, 5 μg mL-1 or 10 μg mL-1 of the plant extract was added to treatments; and a control group containing only the diluent was also included. The fresh semen was analyzed for conventional features such as motility, concentration, morphology and viability. After thawing, the samples were evaluated again for motility, vigor and supra-vital staining, and then, were performed the of thermal-resistance test, hypoosmotic test and evaluated sperm membrane integrity with the fluorescent probes PI, FITC-PSA and JC-1 using flow cytometry. The data were submitted to ANOVA, and the results were compared by Tukeys test at a significance of 5%.(AU)

Para a implantação da inseminação artificial é indispensável à utilização de sêmen congelado, que pode provocar mudanças deletérias na estrutura e na integridade das membranas espermáticas, comprometendo sua função. Para evitar estes danos celulares, há a necessidade de se utilizar meios diluidores e substratos adequados que recuperem o maior número possível de células viáveis pós-descongelação. Para isso, foram avaliados, no experimento I, três diferentes diluidores, o diluidor TES-TRIS, bastante utilizado para bubalinos, e um diluidor a base de água de coco em pó (ACP-112), associado ou não ao leite (ACP-112-Leite), na congelação do sêmen de bubalinos; e no experimento II, foi avaliado o efeito do óleo extraído da Lippia origanoides na proteção dos espermatozóides contra as crioinjúrias decorrentes da congelação do sêmen bubalino. Foram utilizados 10 touros bubalinos para as colheitas de sêmen (10 ejaculados/touro), sendo os ejaculados diluídos em TES-TRIS (controle), ACP-112 e ACP-112-Leite no experimento I; e no experimento II, os ejaculados foram diluídos no melhor diluidor obtido no experimento I, acrescido de 2.5 μg mL-1, 5 μg mL-1 e 10 μg mL-1 da planta e o grupo controle, constituído somente do diluidor. O sêmen recém colhido foi analisado quanto as características convencionais, tais como, motilidade, concentração, morfologia e viabilidade. Após a descongelação das amostras foram avaliados novamente, motilidade e viabilidade espermática, e posteriormente, foram realizados os testes de termo-resistência, hiposmótico e de avaliação das membranas dos espermatozóides, através das sondas fluorescentes PI, FITC-PSA e JC-1, utilizando a citometria de fluxo. Os dados obtidos foram submetidos à ANOVA e ao Teste de Tukey a 5%.(AU)

Comparative evaluation between the extenders TES-TRIS and ACP-112® and the association of Sálva Marajó oil (Lippia origanoides) in the quality of cryopreserved buffalo sperm / Avaliação comparativa entre os diluidores TES-TRIS e ACP-112® e a associação com o óleo da Sálva do Marajó (Lippia origanoides) na qualidade do sêmen bubalino criopreservado

For artificial insemination, it is essential to use frozen semen, however the freezing process causes deleterious changes to the structure and integrity of sperm membranes that compromise the function of sperm. To avoid this cellular damage, extenders and suitable substrates must be used to recover the highest possible number of viable cells post-thaw. To this end, in the first experiment, we evaluated three different extenders: TES-TRIS, which is widely used for buffaloes; and an extender composed of powdered coconut water-based (ACP-112®) with or without milk (ACP-112®-milk) for buffalo semen freezing. In the second experiment, we evaluated the effect of Lippia origanoides oil extract on protecting buffalo sperm against cryoinjury arising from freezing semen. Semen was collected from ten buffalo bulls (10 ejaculates/bull) and diluted in TES-TRIS (control), ACP-112® or ACP-112®-Milk in the first experiment. In the second experiment, the samples were diluted in the diluent with the best results for sperm quality obtained in experiment I, and 2.5 μg mL-1, 5 μg mL-1 or 10 μg mL-1 of the plant extract was added to treatments; and a control group containing only the diluent was also included. The fresh semen was analyzed for conventional features such as motility, concentration, morphology and viability. After thawing, the samples were evaluated again for motility, vigor and supra-vital staining, and then, were performed the of thermal-resistance test, hypoosmotic test and evaluated sperm membrane integrity with the fluorescent probes PI, FITC-PSA and JC-1 using flow cytometry. The data were submitted to ANOVA, and the results were compared by Tukey’s test at a significance of 5%.

Para a implantação da inseminação artificial é indispensável à utilização de sêmen congelado, que pode provocar mudanças deletérias na estrutura e na integridade das membranas espermáticas, comprometendo sua função. Para evitar estes danos celulares, há a necessidade de se utilizar meios diluidores e substratos adequados que recuperem o maior número possível de células viáveis pós-descongelação. Para isso, foram avaliados, no experimento I, três diferentes diluidores, o diluidor TES-TRIS, bastante utilizado para bubalinos, e um diluidor a base de água de coco em pó (ACP-112), associado ou não ao leite (ACP-112-Leite), na congelação do sêmen de bubalinos; e no experimento II, foi avaliado o efeito do óleo extraído da Lippia origanoides na proteção dos espermatozóides contra as crioinjúrias decorrentes da congelação do sêmen bubalino. Foram utilizados 10 touros bubalinos para as colheitas de sêmen (10 ejaculados/touro), sendo os ejaculados diluídos em TES-TRIS (controle), ACP-112 e ACP-112-Leite no experimento I; e no experimento II, os ejaculados foram diluídos no melhor diluidor obtido no experimento I, acrescido de 2.5 μg mL-1, 5 μg mL-1 e 10 μg mL-1 da planta e o grupo controle, constituído somente do diluidor. O sêmen recém colhido foi analisado quanto as características convencionais, tais como, motilidade, concentração, morfologia e viabilidade. Após a descongelação das amostras foram avaliados novamente, motilidade e viabilidade espermática, e posteriormente, foram realizados os testes de termo-resistência, hiposmótico e de avaliação das membranas dos espermatozóides, através das sondas fluorescentes PI, FITC-PSA e JC-1, utilizando a citometria de fluxo. Os dados obtidos foram submetidos à ANOVA e ao Teste de Tukey a 5%.

Curvas de resfriamento do sêmen do varrão diluído em ACP®103 adicionado de gema de ovo em concentração fixa / Cooling curves of the boar semen diluted in ACP®103 extender added of powdered egg yolk in fixed concentration

The conservation of boar semen at lower temperatures might contribute to the further expansion of artificial insemination in this species. Egg yolk cryoprotectant properties have already been extensively tested on sperm cryopreservation of several species. This study aimed to test different temperature curves for the conservation of boar semen diluted with coconut milk powdered (ACP®-103) add 7% egg yolk and to verify which one better maintains sperm viability. For this, 36 ejaculates were diluted and stored at 17, 10 and 5 C. Daily analysis of vigor and motility were performed, and on days D0, D2, and D4 semen was evaluated regarding vitality, morphology, and osmotic resistance. For the statistical analysis we performed the tests of Kruska-Wallis with Dunns post-test (nonparametric data) and ANOVA and Tukey test (parametric data). The storage temperature of 10 C was the best one   to maintain spermatic motility at appropriate levels to be used in an artificial insemination program. Analyses of viability, morphology, and hypoosmotic test did not show statistical difference among the treatments. In conclusion, the best temperature curve was 10 C with diluted semen previously kept at 17 C to maintain the viability of sperm cells in pigs for a longer period.

A conservação do sêmen suíno em temperaturas mais baixas pode permitir uma maior expansão    da inseminação artificial nessa espécie. A gema de ovo apresenta propriedades crioprotetoras já amplamente testadas na conservação seminal de diversas espécies. Este trabalho teve por objetivo testar diferentes curvas de temperatura na conservação do sêmen suíno diluído em água de coco    em pó (ACP®-103) acrescido de 7% de gema de ovo e verificar qual delas mantém por mais tempo  a viabilidade espermática. Para tanto, o sêmen de 36 ejaculados foi diluído e conservado a 17,        10 e 5 C. Diariamente foram realizadas análises de vigor e motilidade e nos dias D0, D2 e D4 o sêmen foi avaliado quanto à sua viabilidade, morfologia acrossomal e resistência osmótica. Para a análise estatística foram utilizados os testes de Kruska-Wallis, com pós-teste de Dunns (dados não paramétricos) e Anova com teste de Tukey (dados paramétricos). A conservação à temperatura de 10 C foi a que melhor manteve o vigor espermático e a motilidade em níveis adequados para ser utilizado em um programa de inseminação artificial. As análises de vitalidade, morfologia e teste hiposmótico não apresentaram diferença estatística entre os tratamentos avaliados. Em conclusão, a melhor curva de temperatura foi a de 10 C com sêmen diluído por manter por um período maior a viabilidade da célula espermática suína.

Recovery of sperm after epididymal refrigeration from domestic cats using ACP-117c and Tris extenders / Recuperação de espermatozoides após refrigeração do epidídimo de gatos domésticos utilizando os diluidores ACP-117c e Tris

We aimed to compare fresh sperm and sperm cooled to 4ºC that had been recovered from the epididymides of cats using powdered coconut water (ACP-117c) and Tris extenders. Sixty epididymides were divided into 6 groups: 10 fresh epididymides were recovered using Tris (T0h); 10 were kept at 4°C/2h and recovered using Tris (T2h); 10 were kept at 4°C/4h and recovered using Tris (T4h); 10 fresh were recovered using ACP-117c (A0h); 10 were kept at 4°C/2h and recovered using ACP-117c (A2h), and 10 were kept at 4°C/4h and recovered using ACP-117c (A4h). The testis-epididymis complexes (TEC) control were not cooled. The others were cooled at 4°C for 2 or 4h. The epididymis was separated and the sperm was recovered by the modified flotation method. Sperm kinetic parameters were evaluated by a computer-system analysis, and vigor, viability, concentration, membrane function and morphology of the sperm were assessed under a light microscope. The progressive motility with ACP-117c declined after 2h of cooling, but did not differ between fresh and 4h. The vigor and membrane function were higher in A4h than A0h. The vigor at T2h and T4h were decreased compared to T0h. T0h was higher than A0h for vigor and sperm membrane function. However, after 4h of cooling, ACP-117c maintained a higher percentage of living cells. Feline epididymal sperm quality can be maintained to the degree necessary for artificial breeding programs following cooling and ACP-117c may be successfully used to recover cat sperm that have been cooled for up to 4h.(AU)

Objetivou-se comparar a qualidade de espermatozoides recuperados a fresco e após refrigeração a 4ºC do epidídimo de gatos domésticos utilizando-se os diluidores ACP-117c e Tris. Sessenta epidídimos foram distribuídos em seis grupos: 10 epidídimos a fresco com o Tris (T0h), 10 a 4°C/2h e recuperados com Tris (T2h), 10 a 4°C/4h e recuperados com Tris (T4h), 10 epidídimos a fresco com o ACP-117c (A0h), 10 a 4 °C/2h e recuperados com ACP-117c (A2h), 10 a 4°C/4h e recuperados com ACP-117c (A4h). Os complexos testículo-epidídimo (CTE) do controle não foram refrigerados. Os outros foram refrigerados a 4°C durante duas e quatro horas. Os epidídimos foram separados das demais estruturas, e os espermatozoides recuperados pela técnica de flutuação modificada. Os parâmetros cinéticos foram avaliados em um sistema computadorizado, e o vigor, a viabilidade, a concentração, a funcionalidade de membrana e a morfologia celular foram avaliados em microscopia de luz. A motilidade progressiva com ACP-117c declinou após duas horas de refrigeração, mas não diferiu entre a recuperação a fresco e após refrigeração por quatro horas. Vigor e integridade funcional da membrana celular foram significativamente superiores no grupo A4h em comparação ao A0h. O vigor espermático em T2h e T4h reduziu significativamente em comparação com T0h. T0h foi significativamente superior ao A0h quanto aos parâmetros de vigor e integridade funcional da membrana espermática, entretanto, após quatro horas de refrigeração, o ACP-117c apresentou um maior percentual de células vivas. Os espermatozoides epididimários de felinos domésticos conseguem manter a qualidade necessária para serem utilizados em programas de reprodução artificial após serem refrigerados e recuperados por meio da técnica de flutuação modificada, e o diluidor ACP-117c pode ser utilizado com sucesso para recuperação de células espermáticas refrigeradas de gatos por até quatro horas.(AU)

Recovery of sperm after epididymal refrigeration from domestic cats using ACP-117c and Tris extenders / Recuperação de espermatozoides após refrigeração do epidídimo de gatos domésticos utilizando os diluidores ACP-117c e Tris

We aimed to compare fresh sperm and sperm cooled to 4ºC that had been recovered from the epididymides of cats using powdered coconut water (ACP-117c) and Tris extenders. Sixty epididymides were divided into 6 groups: 10 fresh epididymides were recovered using Tris (T0h); 10 were kept at 4°C/2h and recovered using Tris (T2h); 10 were kept at 4°C/4h and recovered using Tris (T4h); 10 fresh were recovered using ACP-117c (A0h); 10 were kept at 4°C/2h and recovered using ACP-117c (A2h), and 10 were kept at 4°C/4h and recovered using ACP-117c (A4h). The testis-epididymis complexes (TEC) control were not cooled. The others were cooled at 4°C for 2 or 4h. The epididymis was separated and the sperm was recovered by the modified flotation method. Sperm kinetic parameters were evaluated by a computer-system analysis, and vigor, viability, concentration, membrane function and morphology of the sperm were assessed under a light microscope. The progressive motility with ACP-117c declined after 2h of cooling, but did not differ between fresh and 4h. The vigor and membrane function were higher in A4h than A0h. The vigor at T2h and T4h were decreased compared to T0h. T0h was higher than A0h for vigor and sperm membrane function. However, after 4h of cooling, ACP-117c maintained a higher percentage of living cells. Feline epididymal sperm quality can be maintained to the degree necessary for artificial breeding programs following cooling and ACP-117c may be successfully used to recover cat sperm that have been cooled for up to 4h.(AU)

Objetivou-se comparar a qualidade de espermatozoides recuperados a fresco e após refrigeração a 4ºC do epidídimo de gatos domésticos utilizando-se os diluidores ACP-117c e Tris. Sessenta epidídimos foram distribuídos em seis grupos: 10 epidídimos a fresco com o Tris (T0h), 10 a 4°C/2h e recuperados com Tris (T2h), 10 a 4°C/4h e recuperados com Tris (T4h), 10 epidídimos a fresco com o ACP-117c (A0h), 10 a 4 °C/2h e recuperados com ACP-117c (A2h), 10 a 4°C/4h e recuperados com ACP-117c (A4h). Os complexos testículo-epidídimo (CTE) do controle não foram refrigerados. Os outros foram refrigerados a 4°C durante duas e quatro horas. Os epidídimos foram separados das demais estruturas, e os espermatozoides recuperados pela técnica de flutuação modificada. Os parâmetros cinéticos foram avaliados em um sistema computadorizado, e o vigor, a viabilidade, a concentração, a funcionalidade de membrana e a morfologia celular foram avaliados em microscopia de luz. A motilidade progressiva com ACP-117c declinou após duas horas de refrigeração, mas não diferiu entre a recuperação a fresco e após refrigeração por quatro horas. Vigor e integridade funcional da membrana celular foram significativamente superiores no grupo A4h em comparação ao A0h. O vigor espermático em T2h e T4h reduziu significativamente em comparação com T0h. T0h foi significativamente superior ao A0h quanto aos parâmetros de vigor e integridade funcional da membrana espermática, entretanto, após quatro horas de refrigeração, o ACP-117c apresentou um maior percentual de células vivas. Os espermatozoides epididimários de felinos domésticos conseguem manter a qualidade necessária para serem utilizados em programas de reprodução artificial após serem refrigerados e recuperados por meio da técnica de flutuação modificada, e o diluidor ACP-117c pode ser utilizado com sucesso para recuperação de células espermáticas refrigeradas de gatos por até quatro horas.(AU)

Diferentes concentrações de gema de ovo em pó adicionada ao diluente ACP-103® na conservação do sêmen suíno / Different concentrations of powdered egg yolk added to the aCP-103® extender in swine semen conservation

Muitas tentativas são feitas para se melhorar a conservação do sêmen suíno, sendo a gema de ovo conhecida por suas propriedades crioprotetoras. Este trabalho teve por objetivo testar diferentes concentrações de gema de ovo em pó (GOP), adicionada ao diluente água de coco em pó (ACP-103®), e verificar qual mantém melhor a viabilidade espermática. Foram diluídos 36 ejaculados em ACP-103®, acrescidos de diferentes concentrações de GOP (0%, 1%, 3%, 5% e 7%) e conservados a 17 °C. Diariamente, foram realizadas análises de vigor e motilidade e nos dias 1 (D0), 3 (D2) e 5 (D4) de conservação foram feitas as de vitalidade, morfologia e resistência osmótica. Utilizou-se o teste estatístico de Kruskal-Wallis e de Dunn's para dados não paramétricos e ANOVA e Tukey para os paramétricos. Queda de vigor e motilidade foi observada em todos os tratamentos. Os GOP-3%, GOP-5% e GOP-7% foram os que melhor mantiveram o vigor espermático em D0 (2,4±0,8; 2,5±1,1 e 2,8±0,9, respectivamente), sem diferenças significativas entre si. O mesmo ocorreu para a motilidade (77±15%, 74±23% e 81±16% em D0). Os resultados das análises de vitalidade, morfologia e resistência osmótica não diferiram. Em conclusão, as concentrações entre 5 e 7% de GOP adicionado ao ACP-103® permitem sua utilização como diluente eficiente para manter a qualidade espermática(AU)

Many attempts have been made to improve the conservation of boar semen. Egg yolk is known to have cryoprotectant properties. This study aimed to test different concentrations of egg yolk added to the coconut milk powder extender (ACP-103®), and verify which one is better to maintain sperm viability. The ejaculated (36) were diluted in ACP-103® supplemented with different concentrations of egg yolk (0%, 1%, 3%, 5% and 7%). The conservation occurred at 17 °C, and vigor and motility analysis were carried out daily. On days 1 (D0), 3 (D2) and 5 (D4) the semen was evaluated for vitality, morphology and osmotic resistance. For statistical nonparametric analysis Kruskal-Wallis and Dunn's tests were performed, and for parametric data ANOVA and Tukey test were used. A decrease in vigor and motility was observed in all treatments. Treatments T2, T3 and T4 better maintained spermatic on D0 (2.4±0.8, 2.5±1.1, and 2.8±0.9, respectively), with no significant differences among them. The same was observed for motility (77±15%, 74±23%, and 81±16% on D0). Analyses of vitality, morphology and osmotic resistance did not show statistical difference among treatments. In conclusion, the concentration of egg yolk (7%) added to the ACP-103® can be effectively used as extender to maintain sperm viability(AU)

Diferentes concentrações de gema de ovo em pó adicionada ao diluente ACP-103® na conservação do sêmen suíno / Different concentrations of powdered egg yolk added to the aCP-103® extender in swine semen conservation

Muitas tentativas são feitas para se melhorar a conservação do sêmen suíno, sendo a gema de ovo conhecida por suas propriedades crioprotetoras. Este trabalho teve por objetivo testar diferentes concentrações de gema de ovo em pó (GOP), adicionada ao diluente água de coco em pó (ACP-103®), e verificar qual mantém melhor a viabilidade espermática. Foram diluídos 36 ejaculados em ACP-103®, acrescidos de diferentes concentrações de GOP (0%, 1%, 3%, 5% e 7%) e conservados a 17 °C. Diariamente, foram realizadas análises de vigor e motilidade e nos dias 1 (D0), 3 (D2) e 5 (D4) de conservação foram feitas as de vitalidade, morfologia e resistência osmótica. Utilizou-se o teste estatístico de Kruskal-Wallis e de Dunn's para dados não paramétricos e ANOVA e Tukey para os paramétricos. Queda de vigor e motilidade foi observada em todos os tratamentos. Os GOP-3%, GOP-5% e GOP-7% foram os que melhor mantiveram o vigor espermático em D0 (2,4±0,8; 2,5±1,1 e 2,8±0,9, respectivamente), sem diferenças significativas entre si. O mesmo ocorreu para a motilidade (77±15%, 74±23% e 81±16% em D0). Os resultados das análises de vitalidade, morfologia e resistência osmótica não diferiram. Em conclusão, as concentrações entre 5 e 7% de GOP adicionado ao ACP-103® permitem sua utilização como diluente eficiente para manter a qualidade espermática

Many attempts have been made to improve the conservation of boar semen. Egg yolk is known to have cryoprotectant properties. This study aimed to test different concentrations of egg yolk added to the coconut milk powder extender (ACP-103®), and verify which one is better to maintain sperm viability. The ejaculated (36) were diluted in ACP-103® supplemented with different concentrations of egg yolk (0%, 1%, 3%, 5% and 7%). The conservation occurred at 17 °C, and vigor and motility analysis were carried out daily. On days 1 (D0), 3 (D2) and 5 (D4) the semen was evaluated for vitality, morphology and osmotic resistance. For statistical nonparametric analysis Kruskal-Wallis and Dunn's tests were performed, and for parametric data ANOVA and Tukey test were used. A decrease in vigor and motility was observed in all treatments. Treatments T2, T3 and T4 better maintained spermatic on D0 (2.4±0.8, 2.5±1.1, and 2.8±0.9, respectively), with no significant differences among them. The same was observed for motility (77±15%, 74±23%, and 81±16% on D0). Analyses of vitality, morphology and osmotic resistance did not show statistical difference among treatments. In conclusion, the concentration of egg yolk (7%) added to the ACP-103® can be effectively used as extender to maintain sperm viability

Curvas de resfriamento do sêmen do varrão diluído em ACP®103 adicionado de gema de ovo em concentração fixa / Cooling curves of the boar semen diluted in ACP®103 extender added of powdered egg yolk in fixed concentration

The conservation of boar semen at lower temperatures might contribute to the further expansion of artificial insemination in this species. Egg yolk cryoprotectant properties have already been extensively tested on sperm cryopreservation of several species. This study aimed to test different temperature curves for the conservation of boar semen diluted with coconut milk powdered (ACP®-103) add 7% egg yolk and to verify which one better maintains sperm viability. For this, 36 ejaculates were diluted and stored at 17, 10 and 5 C. Daily analysis of vigor and motility were performed, and on days D0, D2, and D4 semen was evaluated regarding vitality, morphology, and osmotic resistance. For the statistical analysis we performed the tests of Kruska-Wallis with Dunns post-test (nonparametric data) and ANOVA and Tukey test (parametric data). The storage temperature of 10 C was the best one   to maintain spermatic motility at appropriate levels to be used in an artificial insemination program. Analyses of viability, morphology, and hypoosmotic test did not show statistical difference among the treatments. In conclusion, the best temperature curve was 10 C with diluted semen previously kept at 17 C to maintain the viability of sperm cells in pigs for a longer period. (AU)

A conservação do sêmen suíno em temperaturas mais baixas pode permitir uma maior expansão    da inseminação artificial nessa espécie. A gema de ovo apresenta propriedades crioprotetoras já amplamente testadas na conservação seminal de diversas espécies. Este trabalho teve por objetivo testar diferentes curvas de temperatura na conservação do sêmen suíno diluído em água de coco    em pó (ACP®-103) acrescido de 7% de gema de ovo e verificar qual delas mantém por mais tempo  a viabilidade espermática. Para tanto, o sêmen de 36 ejaculados foi diluído e conservado a 17,        10 e 5 C. Diariamente foram realizadas análises de vigor e motilidade e nos dias D0, D2 e D4 o sêmen foi avaliado quanto à sua viabilidade, morfologia acrossomal e resistência osmótica. Para a análise estatística foram utilizados os testes de Kruska-Wallis, com pós-teste de Dunns (dados não paramétricos) e Anova com teste de Tukey (dados paramétricos). A conservação à temperatura de 10 C foi a que melhor manteve o vigor espermático e a motilidade em níveis adequados para ser utilizado em um programa de inseminação artificial. As análises de vitalidade, morfologia e teste hiposmótico não apresentaram diferença estatística entre os tratamentos avaliados. Em conclusão, a melhor curva de temperatura foi a de 10 C com sêmen diluído por manter por um período maior a viabilidade da célula espermática suína. (AU)

CURVAS DE RESFRIAMENTO DO SÊMEN DO VARRÃO DILUÍDO EM ACP®103 ADICIONADO DE GEMA DE OVO EM CONCENTRAÇÃO FIXA

Abstract The conservation of boar semen at lower temperatures might contribute to the further expansion of artificial insemination in this species. Egg yolk cryoprotectant properties have already been extensively tested on sperm cryopreservation of several species. This study aimed to test different temperature curves for the conservation of boar semen diluted with coconut milk powdered (ACP®-103) add 7% egg yolk and to verify which one better maintains sperm viability. For this, 36 ejaculates were diluted and stored at 17, 10 and 5 °C. Daily analysis of vigor and motility were performed, and on days D0, D2, and D4 semen was evaluated regarding vitality, morphology, and osmotic resistance. For the statistical analysis we performed the tests of Kruska-Wallis with Dunns post-test (nonparametric data) and ANOVA and Tukey test (parametric data). The storage temperature of 10 °C was the best one to maintain spermatic motility at appropriate levels to be used in an artificial insemination program. Analyses of viability, morphology, and hypoosmotic test did not show statistical difference among the treatments. In conclusion, the best temperature curve was 10 °C with diluted semen previously kept at 17 °C to maintain the viability of sperm cells in pigs for a longer period.

Resumo A conservação do sêmen suíno em temperaturas mais baixas pode permitir uma maior expansão da inseminação artificial nessa espécie. A gema de ovo apresenta propriedades crioprotetoras já amplamente testadas na conservação seminal de diversas espécies. Este trabalho teve por objetivo testar diferentes curvas de temperatura na conservação do sêmen suíno diluído em água de coco em pó (ACP®-103) acrescido de 7% de gema de ovo e verificar qual delas mantém por mais tempo a viabilidade espermática. Para tanto, o sêmen de 36 ejaculados foi diluído e conservado a 17, 10 e 5 °C. Diariamente foram realizadas análises de vigor e motilidade e nos dias D0, D2 e D4 o sêmen foi avaliado quanto à sua viabilidade, morfologia acrossomal e resistência osmótica. Para a análise estatística foram utilizados os testes de Kruska-Wallis, com pós-teste de Dunns (dados não paramétricos) e Anova com teste de Tukey (dados paramétricos). A conservação à temperatura de 10 °C foi a que melhor manteve o vigor espermático e a motilidade em níveis adequados para ser utilizado em um programa de inseminação artificial. As análises de vitalidade, morfologia e teste hiposmótico não apresentaram diferença estatística entre os tratamentos avaliados. Em conclusão, a melhor curva de temperatura foi a de 10 °C com sêmen diluído por manter por um período maior a viabilidade da célula espermática suína.

DIFERENTES CONCENTRAÇÕES DE GEMA DE OVO EM PÓ ADICIONADA AO DILUENTE ACP-103® NA CONSERVAÇÃO DO SÊMEN SUÍNO

Abstract Many attempts have been made to improve the conservation of boar semen. Egg yolk is known to have cryoprotectant properties. This study aimed to test different concentrations of egg yolk added to the coconut milk powder extender (ACP-103®), and verify which one is better to maintain sperm viability. The ejaculated (36) were diluted in ACP-103® supplemented with different concentrations of egg yolk (0%, 1%, 3%, 5% and 7%). The conservation occurred at 17 °C, and vigor and motility analysis were carried out daily. On days 1 (D0), 3 (D2) and 5 (D4) the semen was evaluated for vitality, morphology and osmotic resistance. For statistical nonparametric analysis Kruskal-Wallis and Dunn's tests were performed, and for parametric data ANOVA and Tukey test were used. A decrease in vigor and motility was observed in all treatments. Treatments T2, T3 and T4 better maintained spermatic on D0 (2.4±0.8, 2.5±1.1, and 2.8±0.9, respectively), with no significant differences among them. The same was observed for motility (77±15%, 74±23%, and 81±16% on D0). Analyses of vitality, morphology and osmotic resistance did not show statistical difference among treatments. In conclusion, the concentration of egg yolk (7%) added to the ACP-103® can be effectively used as extender to maintain sperm viability.

Resumo Muitas tentativas são feitas para se melhorar a conservação do sêmen suíno, sendo a gema de ovo conhecida por suas propriedades crioprotetoras. Este trabalho teve por objetivo testar diferentes concentrações de gema de ovo em pó (GOP), adicionada ao diluente água de coco em pó (ACP-103®), e verificar qual mantém melhor a viabilidade espermática. Foram diluídos 36 ejaculados em ACP-103®, acrescidos de diferentes concentrações de GOP (0%, 1%, 3%, 5% e 7%) e conservados a 17 °C. Diariamente, foram realizadas análises de vigor e motilidade e nos dias 1 (D0), 3 (D2) e 5 (D4) de conservação foram feitas as de vitalidade, morfologia e resistência osmótica. Utilizou-se o teste estatístico de Kruskal-Wallis e de Dunn's para dados não paramétricos e ANOVA e Tukey para os paramétricos. Queda de vigor e motilidade foi observada em todos os tratamentos. Os GOP-3%, GOP-5% e GOP-7% foram os que melhor mantiveram o vigor espermático em D0 (2,4±0,8; 2,5±1,1 e 2,8±0,9, respectivamente), sem diferenças significativas entre si. O mesmo ocorreu para a motilidade (77±15%, 74±23% e 81±16% em D0). Os resultados das análises de vitalidade, morfologia e resistência osmótica não diferiram. Em conclusão, as concentrações entre 5 e 7% de GOP adicionado ao ACP-103® permitem sua utilização como diluente eficiente para manter a qualidade espermática.

Aloe vera na criopreservação do sêmen de tambaqui (Colossoma macropomum) / Aloe vera in the cryopreservation of tambaqui (Colossoma macropomum) sperm

This study aimed to evaluate the extract of Aloe vera (AV) associated or not with 10% Dimethylsulfoxide (DMSO) in cryopreservation of tambaqui semen. For the formation of the pools (n= 14), 30 males were hormonally induced twice. Each pool had the objective motility, curvilinear velocity, straight-line velocity, average path velocity and morphology analyzed before and after cryopreservation of semen. The means for cryopreservation were constituted of Powder Coconut Water-104 diluent added DMSO and/or AV (5 or 10%). After cryopreservation, motility, velocities and morphology were reduced significantly when compared to fresh semen. For sperm motility the best treatment was that using only DMSO (20,86±8,31) and DMSO + 5% AV (15.71±9.77). For the velocities, the worse treatment was DMSO+10% AV. Treatment with only the addition of DMSO had a significantly higher effect than others on percentage of morphologically normal sperm. The mean correlation found was between motilityand the rate of morphologically normal sperm (r = 0.687). In conclusion, the addition of AV does not provide greater protection for spermatozoa during cryopreservation.

Aloe vera na criopreservação do sêmen de tambaqui (Colossoma macropomum) / Aloe vera in the cryopreservation of tambaqui (Colossoma macropomum) sperm

This study aimed to evaluate the extract of Aloe vera (AV) associated or not with 10% Dimethylsulfoxide (DMSO) in cryopreservation of tambaqui semen. For the formation of the pools (n= 14), 30 males were hormonally induced twice. Each pool had the objective motility, curvilinear velocity, straight-line velocity, average path velocity and morphology analyzed before and after cryopreservation of semen. The means for cryopreservation were constituted of Powder Coconut Water-104 diluent added DMSO and/or AV (5 or 10%). After cryopreservation, motility, velocities and morphology were reduced significantly when compared to fresh semen. For sperm motility the best treatment was that using only DMSO (20,86±8,31) and DMSO + 5% AV (15.71±9.77). For the velocities, the worse treatment was DMSO+10% AV. Treatment with only the addition of DMSO had a significantly higher effect than others on percentage of morphologically normal sperm. The mean correlation found was between motilityand the rate of morphologically normal sperm (r = 0.687). In conclusion, the addition of AV does not provide greater protection for spermatozoa during cryopreservation(AU)

Resfriamento do sêmen de Colossoma macropomum em água de coco em pó (acp-104) associada à crioprotetores - estudo de toxicidade

Os peixes da espécie Colossoma macropomum (tambaqui) tem um alto valor econômico e ecológico. Uma tecnologia que vêm se destacando nos últimos anos é a conservação de sêmen realizada por resfriamento. Dessa forma, o estudo tem como objetivo avaliar a qualidade do sêmen de tambaqui em solução de água de coco em pó específico para peixes (ACP-104) com ou sem crioprotetores durante os seguintes períodos de refrigeração: zero, três, 24, 48 e 72 horas. [...] As amostras de sêmen diluído nos diferentes tratamentos apresentaram maiores velocidades cinéticas (VCL, VSL e VAP), em todos os tempos de conservação avaliados quando comparado ao sêmen não diluído. No início do resfriamento, H0, poucas patologias foram observadas, mas ao passar do período de avaliação, as anormalidades espermáticas foram aumentando em todas as amostras resfriadas. O sêmen fresco, após 72 horas de resfriamento, apresentou baixa taxa de motilidade (6,210,38%), aumento na porcentagem de espermatozoides com anormalidades (48,07%) e muitos espermatozoide aglutinados quando comparado com sémen diluído. Em ACP-104 sem crioprotetor, pois este apresentou 21,291,37% de espermatozoides móveis e 26,75% de anormalidades espermáticas em ACP-104 + DMSO os valores encontrados foram 27,672,56%; 25,79%, e ACP-104 + MG foi de 16,680,57%; 26,42% para porcentagem móveis e patologias espermáticas, respectivamente. Assim, conclui-se que o sêmen tambaqui pode ser resfriado a 4 C, mantendo parâmetros aceitáveis de velocidade e morfologia até 24 horas, mas, quando diluídas em água de coco em pó específico para peixes (ACP-104), este tempo de armazenamento pode ser expandida até a 72 horas.

The fish species Colossoma macropomum (tambaqui) has a high economic and ecological value. A technology that has been highlighted in recent years is the sperm conservation carried out by cooling. The study aims to evaluate the main seminal parameters of diluted semen in a solution of powdered coconut water specific for fish (ACP TM -104) with or without cryoprotectants during the following times of cooling: zero, three, 24, 48, and 72 hours. [...] Semen samples diluted in the different treatments showed higher speeds kinetics (VCL, VSL and VAP) in all storage times evaluated from the undiluted semen. At the beginning of cooling, H0, little pathology has been observed, but over the evaluation period, the abnormal sperm were increased in all samples refrigerated. The fresh semen, after 72 hours of cooling, showed low motility rate (6.21 0.38%) increase in the percentage of sperm with abnormalities (48.07%) and many agglutinated sperm compared with semen diluted in ACPTM -104 without cryoprotectants, because it showed 21.29 1.37% of mobile spermatozoa and 26.75% of abnormal sperm in ACPTM-104 + DMSO the values were 27.67 2.56%, 25.79 %, and ACP TM-104 + MG was 16.68 0.57%, 26.42% for percentage and mobile sperm pathologies, respectively. Thus, it is concluded that semen can be tambaqui cooled to 4 C, maintaining acceptable parameters of speed and morphology to 24 hours, but when diluted with coconut water for specific fish powder (PCW- 104TM), this time storage can be expanded up to 72 hours.

Uso de diluentes alternativos a baixas temperaturas na manutenção da qualidade espermática do sêmen suíno

Inúmeros trabalhos tem sido realizados com o propósito de melhorar a conservação do sêmen suíno, seja com o uso de diluentes ou faixas de temperaturas alternativas, ou ainda adicionando antioxidantes ou aminoácidos ao diluente. O presente estudo teve por objetivo definir um diluente e temperatura alternativa de conservação do sêmen suíno e avaliar os efeitos da inclusão de trolox ou betaína na manutenção da qualidade espermática. O sêmen de oito reprodutores foram coletados semanalmente através da técnica da mão enluvada e no laboratório foram submetidos às análises de vigor e motilidade no dia da coleta e durante o período de conservação (D0 a D4), avaliados quanto a vitalidade, integridade de acrossoma e teste hiposmótico no D0 e D4. Inicialmente os ejaculados foram conservados em três diluentes: Beltsville Thawing Solution (BTS), água de coco em pó (ACP) e leite em pó desnatado (LPD); e submetidos a duas temperaturas de armazenamento 17 e 10 °C, totalizando seis tratamentos. Definido o melhor tratamento, adicionou-se três diferentes concentrações de trolox (1000, 2000 e 3000 ?M/ 100 mL) e de betaína (1, 2 e 3g/ 100 mL). Dos diluentes testados, o LPD a 10 °C proporcionou uma melhor conservação da motilidade e vigor espermáticos, além de maior taxa de vitalidade e maior percentual de células com acrossoma íntegro. Diante desses resultados, o LPD a 10 °C apresentou-se como melhor diluente para a realização das etapas seguintes. As amostras acrescidas de diferentes concentrações de trolox não foram melhores quando comparadas ao tratamento controle em nenhuma das análises realizadas. Concentrações elevadas de trolox (2000 e 3000 ?M) apresentaram efeitos negativos sobre o vigor e a motilidade espermática. Quanto às amostras acrescidas de betaína, também não foram observados efeitos benéficos. A betaína provavelmente devido a seus efeitos osmóticos, reduziu o vigor e motilidade das amostras, esse efeito foi maior quando se elevou a concentração desse aminoácido. O LPD pode ser utilizado como diluente para o sêmen suíno acondicionado a 10 °C para ser utilizado por até 24 horas após a diluição. Não se pode comprovar os efeitos benéficos do trolox na conservação do sêmen suíno em meio à base de LPD. E a betaína apresentou efeitos negativos sobre a qualidade espermática quando adicionada ao diluente à base de LPD, em concentrações acima de 1% em temperatura de conservação a 10 °C.

Água de coco em pó em biotécnica da reprodução de caprinos / Powdered coconut water in biotechnologies of reproduction in goats

O uso de biotecnologias reprodutivas objetiva a obtenção do melhoramento genético dos animais de interesse econômico. A utilização dessas biotecnologias, como o uso de diluentes seminais associados a processos de preservação por refrigeração ou congelação, seguidos de inseminação artificial, visa aumentar o número de animais disponíveis para seleção, diminuindo o intervalo entre gerações e obtendo-se ganho genético pelo aumento da eficiência reprodutiva de machos e fêmeas caprinas. Dentre os diluentes seminais, estudos vêm sendo realizados com o uso da água de coco in natura desde a década de 80 e, mais recentemente, com a água de coco em pó desde 2002, apresentando resultados satisfatórios quanto à preservação espermática.(AU)

The use of reproductive biotechnologies search breeding of animals of economic interest. The use of these biotechnologies, such as the use of sperm extenders associated with the processes of preservation by cooling or freezing, followed by artificial insemination, aimed to increasing the number of animals available for selection, reducing the generation interval and obtaining genetic gain by increasing reproductive performance of bucks and dams. Among the sperm extenders, studies are being conducted with the use of fresh coconut water since the 80s and, more recently, with the powdered coconut water since 2002, with satisfactory results related to sperm preservation.(AU)

Biotecnologia do sêmen e inseminação artificial em aves / Semen biotechnology and avian artificial insemination

A biotecnologia animal, de aplicação mais importante, inclui a coleta de sêmen, para a avaliação, preservação e para a inseminação artificial (IA). A IA é aplicada em aves e têm sido amplamente revisada. Os pioneiros na biotecnologia de reprodução avícola desenvolveram o método de massagem abdominal, para coletar sêmen de galos. A conservação da variabilidade genética é um desafio para a produção sustentável de recursos alimentares e para a preservação da biodiversidade. A necessidade para preservação de sêmen avícola terá como foco, o progresso em prognósticos satisfatórios para sêmen congelado; criação de métodos padronizados de congelamento de sêmen de outras espécies diferentes de galos; incremento de criobancos de sêmen de aves; preservação de espécies raras; manutenção de aceitável variabilidade genética selecionada de linhas puras; disponibilidade a longo prazo de potencial genético de animais excepcionais e; suporte financeiro para pesquisa.(AU)

The animal biotechnology, the most important application, including the collection of semen for the evaluation, preservation and artificial insemination (AI). The AI is applied in birds and have been widely reviewed. The pioneers in biotechnology poultry breeding have developed the method of abdominal massage, to collect semen from roosters. The conservation of genetic variability is a challenge for the sustainable production of food resources and the preservation of biodiversity. The need for preservation of semen will focus on poultry, progress satisfactory predictions for frozen semen, the creation of standardized methods for freezing sperm of other species of roosters; criobancos increase in semen of birds, and conservation of rare species, maintenance of acceptable genetic variability in selected inbred lines; long-term availability of genetic potential and exceptional animal; financial support for research.(AU)

Qualidade morfofuncional do espermatozoide suíno conservado nos diluentes ACP®- 103 e BTS / Morfo-functional quality of swine spermatozoa in conservation into BTS and coconut water powdered extender

Com a finalidade de se testar a ação do diluente água de coco em pó sobre as características morfológicas do espermatozoide suíno, o sêmen de sete reprodutores foi coletado, sendo separado de cada ejaculado um total de 1,75x109 sptz entre os dois tratamentos, com concentração de 35x106 sptz/mL. Usou-se o BTS como controle sendo testado o diluente água de coco em pó. O dia de coleta foi D0, sendo o sêmen conservado durante 5 dias, com análises em: D0 e D4. A avaliação da qualidade espermática baseou-se nos resultados da produção espermática, morfologia espermática, resistência osmótica e número de células vivas. Para o delineamento experimental, utilizou-se o teste Mann Whitney (SAS 6.03), a um intervalo de confiança de p<0,05. O resultado da resistência osmótica foi excelente, com 71,3% de espermatozoides com cauda enrolada. Não houve diferença estatística entre os dois diluentes testados para a característica células com acrossoma intacto (BRS=67,1%; ACP=71,2%). O sêmen diluído em ACP®-103 é aconselhável para o uso de rotina em laboratórios que trabalhem com conservação de sêmen suíno.(AU)

In order to test the action of coconut water powdered extender on the morphological characteristics of swine spermatozoa, the semen of seven swine males was collected and it was separate from each one a total of 1.75x109sptz, among the treatments, to a concentration of 35x106 sptz/mL. The BTS was used as control, being tested to coconut water powdered extender. The day of collection was considered D0, with a semen conservation for 5 days, with analyses in D0 and D4. The evaluation of spermatic quality was based in the results of the spermatic production, spermatic morphology, osmotic resistance and the alive cells number. The experimental statistic test used was Mann Whitney (SAS 6.03), with a trust interval of p<0.05. The medium results of the osmotic resistance were excellent, with 71.3% of spermatozoa with coiled tail. There were not statistics differences among the two extenders tested for the characteristic cells with intact acrosome (BTS=67.1%; ACP=71.2%). The semen diluted in ACP®-103 extender presented a higher number of alive cells (77.7%) after conservation period, statistically different from the BTS (58.4%). The choice of ACP®-103 extender is advisable for the routine use in laboratories that work with conservation of swine semen.(AU)

Água de coco em pó em biotécnica da reprodução de caprinos / Powdered coconut water in biotechnologies of reproduction in goats

O uso de biotecnologias reprodutivas objetiva a obtenção do melhoramento genético dos animais de interesse econômico. A utilização dessas biotecnologias, como o uso de diluentes seminais associados a processos de preservação por refrigeração ou congelação, seguidos de inseminação artificial, visa aumentar o número de animais disponíveis para seleção, diminuindo o intervalo entre gerações e obtendo-se ganho genético pelo aumento da eficiência reprodutiva de machos e fêmeas caprinas. Dentre os diluentes seminais, estudos vêm sendo realizados com o uso da água de coco in natura desde a década de 80 e, mais recentemente, com a água de coco em pó desde 2002, apresentando resultados satisfatórios quanto à preservação espermática.

The use of reproductive biotechnologies search breeding of animals of economic interest. The use of these biotechnologies, such as the use of sperm extenders associated with the processes of preservation by cooling or freezing, followed by artificial insemination, aimed to increasing the number of animals available for selection, reducing the generation interval and obtaining genetic gain by increasing reproductive performance of bucks and dams. Among the sperm extenders, studies are being conducted with the use of fresh coconut water since the 80’s and, more recently, with the powdered coconut water since 2002, with satisfactory results related to sperm preservation.