Análise das vias metabólicas do ceratocisto odontogênico pré e pós marsupialização e comparação à mucosa oral / Metabolic profiling of odontogenic keratocysts prior and after marsupialization and matched oral mucosa

O ceratocisto odontogênico (CO) é um dos cistos odontogênicos mais prevalentes da cavidade bucal e o seu tratamento está relacionado a altas taxas de recidiva. Trata-se de uma lesão que apresenta comportamento clínico e características histopatológicas específicas, diferentes dos demais cistos odontogênicos. Embora não exista consenso sobre a melhor forma de tratamento da lesão, a marsupialização é um procedimento amplamente utilizado. Estudos microscópicos, imunohistoquímicos e moleculares mostram que o epitélio do ceratocisto, após a marsupialização, sofre modificações após o contato com a mucosa oral, revelando semelhanças importantes com o revestimento da mucosa. Por outro lado, não sabemos os efeitos desse procedimento sobre as vias metabólicas do cisto. Dessa forma, o presente estudo visa comparar, qualitativa e quantitativamente, as vias metabólicas do epitélio do ceratocisto odontogênico antes da marsupialização com aquelas presentes após esse procedimento e com a mucosa oral dos mesmos indivíduos. A amostra foi constituída por casos de ceratocistos odontogênicos tratados nos serviços de Cirurgia e Traumatologia Buco-Maxilo-Facial do Hospital das Clínicas da Universidade Federal de Minas Gerais e do Hospital municipal Odilon Behrens. O revestimento cístico foi analisado em dois momentos: antes e após a marsupialização da lesão. Os metabólitos foram extraídos de blocos de parafina correspondentes aos fragmentos dos tecidos e submetidos à análise metabolômica do tipo untargeted. Os resultados de tal análise foram então comparados aos constituintes da mucosa oral dos mesmos indivíduos. A variação de abundância dos metabólitos e suas funções nos processos de regulação de vias biológicas foram identificadas através de ferramentas de bioinformática e análises estatísticas. A comparação entre a mucosa e CO pré marsupialização revelou dez vias metabólicas significativamente alteradas: metabolismo de oxilipina, ácido linoléico, vitamina E, ácido siálico, ômega-3 e galactose, glicólise e gliconeogênese, transporte de carnitina, biossíntese de ácidos graxos e degradação de α-tocoferol. A comparação entre mucosa e CO pós marsupialização mostrou cinco vias metabólicas alteradas: biossíntese de ubiquinona, glicosfingolipídios e metabolismo de nicotinato / nicotinamida, beta-oxidação de ácidos graxos di-insaturados e ferroptose. Quando comparados os fragmentos de CO antes e após a marsupialização, foram encontrados o metabolismo do nicotinato / nicotinamida, a degradação do α-tocoferol e a biossíntese de ácidos graxos poli-insaturados como vias metabólicas significativamente alteradas. Nossos achados mostram que o epitélio do cisto deixado em contato com a mucosa oral durante a marsupialização apresenta expressão metabólica mais similar à mucosa oral comparado com a lesão antes do procedimento.

Odontogenic keratocyst (OKC) is one of the most prevalent odontogenic cysts found in the oral cavity and maxillofacial region and its treatment is associated with high recurrence rates. This lesion presents unique clinical behavior and histopathological characteristics as compared to the other odontogenic cysts. Although there is no consensus on the best treatment modality, marsupialization is a widely used procedure. Studies based on microscopic, immunohistochemical and molecular evaluations have been showing that the OKC epithelium undergoes several modifications after its approximation to the adjacent oral mucosa promoted by marsupialization, showing numerous similarities with the mucosal lining of the oral cavity. On the other hand, the effects of this procedure on the metabolic profile of OKC remain largely unknown. Thus, the present study aims to qualitatively and quantitatively compare the metabolic profile of samples of OKC epithelium before and after marsupialization with matched adjacent oral mucosa biopsies. OKC tissue samples were obtained from patients treated at the Oral and Maxillofacial Surgery facilities of the Faculty of Odontology of UFMG and Odilon Behrens Metropolitan Hospital. Metabolites were extracted from formalin fixed paraffin-embedded tissue samples and an untargeted metabolomic analysis was performed using a HPLC-qTOF. Differential abundance of metabolites and regulation of biological pathways among OKCs before and after marsupialization and matched adjacent oral mucosa were identified by bioinformatics and statistical analyses. Our findings revealed that the metabolic profile of the OKC epithelium that maintained contact with the oral mucosa during marsupialization is more similar to the adjacent oral mucosa than to non-treated lesions.

Estudo da correlação das proteínas INGs com a P53 em lesões odontogênicas epiteliais benignas / Study of the correlation of INGs proteins with P53 in benign epithelial odontogenic lesions

As proteínas INGs (inhibitor of growth gene) desempenham papel de supressoras tumorais e podem agir por vias dependentes, ou independentes, da p53 na sinalização do ciclo celular e da apoptose. Este trabalho investigou, por meio de imuno-histoquímica, a correlação entre a expressão das proteínas INGs e a expressão da proteína p53 em ceratocistos odontogênicos (20), TOAs (20) e ameloblastomas sólidos (20). Os espécimes foram submetidos à marcação utilizando os anticorpos anti-Ing3, anti-Ing4, anti-Ing5 e anti-p53. Foi realizada análise quantitativa levando-se em consideração a localização citoplasmática e/ou nuclear para as proteínas INGs e a localização nuclear para a proteína p53. A análise da imunoexpressão das proteínas ING1 e ING2 foi realizada em um estudo prévio e os resultados foram considerados apenas para a análise de correlação com as proteínas estudadas neste estudo. Os dados foram analisados pelo Statistical Package for Social Sciences para Windows (SPSS versão 22.0; IBM, USA). Para a comparação da imunoexpressão entre os grupos de lesões foi utilizado o teste de Kruskal Wallis, e para a investigação das correlações foi utilizado o teste de Spearman. Foram considerados significativos os valores de p ≤ 0.05. O presente estudo evidenciou redução da expressão nuclear e citoplasmática das proteínas ING3, ING4 e ING5 em ceratocistos odontogênicos (COs) e ameloblastomas (AMBs). Além disso, em alguns casos, a perda da expressão nuclear das INGs esteve negativamente correlacionada à expressão da proteína p53. As análises de correlação entre as proteínas INGs indicam a existência de mecanismos compensatórios entre as proteínas INGs em folículos dentários (FDs) e tumores odontogênicos adenomatoides (TOAs), estes mecanismos parecem ser menos evidentes em COs e AMBs. Observou-se redução na expressão da proteína ING3 em AMBs (p=0,003); redução na expressão da proteína ING4, tanto em AMBs (p=0,02) quanto em COs (p=0,001); e uma redução da expressão nuclear da proteína ING5 nos COs (p=0,09) e nos AMBs (p=0,012). Foram evidenciadas correlações positivas entre a expressão nuclear da p53 com a expressão citoplasma/núcleo da proteína ING1 (r=0,603; p=0,05) em COs, e com a expressão citoplasma/ núcleo das proteínas ING3 (r=0,475; p=0,034) e ING4 (r=0,448; p=0,047) em AMBs. Por fim, os resultados deste estudo sugerem que a redução na expressão nuclear das proteínas INGs pode ser um evento envolvido na etiopatogênese de lesões odontogênicas mais agressivas, e que a redução da expressão nuclear/citoplasmática das proteínas INGs não está relacionada ao aumento expressão da p53 em COs e AMBs, o que sugere que a expressão destas proteínas deve resultar em alterações funcionais de maneira independente da p53 em lesões odontogênicas (AU).

INGs (inhibitor of growth gene) proteins play a role of tumor suppressors and can act via p53-dependent or independent pathways in signaling cell cycle and apoptosis. The aim of this study is to evaluate correlation between expression of proteins of ING proteins and expression of protein p53 in dental follicles (DF), odontogenic keratocysts (OK), adenomatoid odontogenic tumors (AOT) and solid ameloblastomas (AMBs). The sample was intentional and non-probabilistic, consisting of 20 cases of solid AMBs, 20 cases of AOT, 20 cases of OKs and 10 samples of DFs. The specimens were subjected to immunohistochemical method, using antibodies anti-Ing3, anti-Ing4, anti-Ing5 and antip53. Quantitative analysis was performed taking into account cytoplasmic and / or nuclear location for ING proteins and nuclear location for the p53 protein. The analysis of ING1 and ING2 immunoexpressions was performed in a previous study and the results were considered only for the correlation analysis. Data were analyzed by Statistical Package for Social Sciences for Windows (SPSS version 22.0; IBM, USA). Kruskal Wallis test was used to compare the immunoexpression between the groups of lesions, and Spearman test was used to investigate correlations. Values of p ≤ 0.05 were considered significant. This study showed a reduction in nuclear and cytoplasmic expression of ING3, ING4 and ING5 in odontogenic keratocysts (OKs) and ameloblastomas (AMBs). In addition, in some cases, loss of INGs nuclear expression was negatively correlated with p53 expression. Correlation analyzes may indicate existence of compensatory mechanisms between all the ING proteins in dental follicles (FDs) and adenomatoid odontogenic tumors (TOAs). These mechanisms seem to be less evident in COs and AMBs. The results of this study showed a reduction in ING3 expression in AMBs (p = 0.003); a reduction in ING4 expression, in OKs (p = 0.02) and in AMBs (p = 0.001); and a reduction in ING5 nuclear expression, also in OK (p = 0.09) and in AMBs (p = 0.012). Positive correlations were found between p53 nuclear expression with ING1 cytoplasm / nucleus expression (r = 0.603; p = 0.05) in OKs, and with ING3 cytoplasm / nucleus expression (r = 0.475; p = 0.034) and also ING4 cytoplasm / nucleus expression (r = 0.448; p = 0.047) in AMBs. Finally, this study suggests that reduction in the expression of INGs proteins seems to be an event that occurred in etiopathogenesis of more aggressive odontogenic lesions. Futhermore, nuclear / cytoplasmic expression of INGs proteins is not related to increase in p53 expression in OKs and AMBs, which indicates that loss of expression of these proteins may results in functional changes independently of p53 (AU).

The relationship between ras protein and odontogenic lesions / Relação entre a proteína ras e as lesões odontogênicas

Odontogenic lesions comprise a diverse group of lesions which usually affect the oral cavity and are derived from embryonic dental tissues. Their mechanisms of development and progression are still not fully known, but there are some studies investigating the participation of specific proteins in these events. Objective: The objective of this study was to investigate the expression of KRAS protein in these pathologies and also to associate the protein expression with the behaviour of the lesions studied. Material and Methods: Immunohistochemical analysis of 20 cases was performed for each one of the following lesions: dentigerous cyst (DC), odontogenic keratocyst (OKC) and ameloblastoma (AB), totalising 60 cases to be analysed. Results: By considering the KRAS immunoexpression, there were 11 cases (55%) presenting overexpression (score 3) in the basal layer of DC and 13 cases (65%) in the suprabasal layer. A similar finding was observed in the analysis of OKC, with eight cases (40%) in the suprabasal layer (score 3) and only five cases (25%) in the basal layer. As for AB, the overexpression was observed in six cases (30%). Conclusion: Therefore, it one suggests that the KRAS expression in odontogenic lesions is inversely proportional to their aggressive behaviour. (AU)

As lesões odontogênicas compreendem um grupo diversificado de lesões que comumente acometem a cavidade oral e são derivadas dos tecidos que originam o dente. Seus mecanismos de desenvolvimento e progressão ainda não são completamente conhecidos, porém alguns estudos investigam a participação de algumas proteínas específicas nesses eventos. Objetivo: O objetivo desse estudo foi investigar a expressão da proteína KRAS nestas patologias e associar a expressão proteica com o comportamento das lesões estudadas. Material e Métodos: A análise imuno-histoquímica foi realizada em 20 casos cada uma das lesões: cisto dentígero (CD), ceratocisto odontogênico (CO) e ameloblastoma (Am), totalizando 60 casos analisados. Resultados: Considerando-se a imunoexpressão de KRAS na camada basal do CD, 11 (55%) casos apresentaram hiperexpressão (score 3), já na camada suprabasal em 13 (65%) casos. Resultado semelhante foi observado na análise do CO, onde a camada suprabasal obteve 8 (40%) casos com score 3, enquanto a camada basal atingiu esse nível em apenas 5 (25%) casos. Em relação ao Am a hiperexpressão foi observada em 6 (30%) dos casos. Conclusão: Portanto, sugere-se que a expressão de KRAS nas lesões odontogênicas seja inversamente proporcional ao comportamento agressivo dessas lesões. (AU)

Estudo da expressão imunohistoquímica de SO2, FGF-10 e WNT-1 em lesões odontogênicas epiteliais benignas / Study of the immunohistochemical expression of SO2, FGF-10 and WNT-1 in benign epithelial odontogenic lesions

Os dentes desenvolvem-se a partir de interações sequenciais entre o epitélio e o mesênquima derivado da crista neural em diferentes estágios de histodiferenciação e morfodiferenciação. Ao final da odontogênese, espera-se que as estruturas que participaram da formação destes tecidos desapareçam ou permaneçam quiescentes. Não é incomum que os remanescentes epiteliais da odontogênese originem lesões, como cistos e tumores odontogênicos. No desenvolvimento dentário precoce, a manutenção das células-tronco é regulada por uma série de fatores de transcrição específicos, que inclui OCT-4, SOX-2, Nanog, Stat-3 e c-Myc e diversos outros genes Homeobox e vias de transcrição (SHH, Wnt/ß-catenina, FGF, BMP) contribuem para o destino e diferenciação celular. No entanto, há a participação destes genes e vias na patogênese de vários tipos de tumores. O objetivo do presente estudo foi avaliar a imunoexpressão de SOX2, FGF-10 e Wnt-1 em uma série de casos de lesões odontogênicas e alguns espécimes de germes dentários. A amostra consistiu de 20 Ceratocistos Odontogênicos (CO), 20 Ameloblastomas sólidos (AM), 20 Tumores odontogênicos adenomatoides (TOA), 10 Tumores odontogênico epitelial calcificante (TOEC) e 05 casos de germes dentários usados comparativamente. A imunoexpressão foi avaliada de acordo com o percentual de células epiteliais imunomarcadas e intensidade de células positivas resultando na pontuação de imunomarcação total (PIT) que variou de 0 a 7. A análise da imunoexpressão da SOX2 revelou positividade na maioria dos casos das lesões estudadas. A pontuação de imunomarcação para SOX2 revelou haver diferença estatisticamente significativa entre os grupos de lesões estudadas, com maior frequência em CO e TOEC (p <0,001). Após o pareamento, observou-se diferença significativa entre AM e CO, AM e TOEC, CO e TOA, CO e TOEC e, TOA e TOEC (p <0,05). A análise da imunoexpressão da FGF-10 e Wnt-1 revelou positividade em todos os casos das lesões estudadas, mas sem diferença estatisticamente significativa entre os grupos de lesões estudadas (p = 0,628). Houve diferença significativa em relação aos escores de positividade para Wnt-1 (p <0,001) com maior frequência em CO e TOA. Após o pareamento, observou-se existir diferença estatisticamente significativa entre AM e CO, AM e TOEC, CO e TOEC e, TOA e TOEC (p <0,05). O padrão de expressão de SOX2, FGF-10 e Wnt-1, em germes dentários e nas lesões odontogênicas aqui avaliadas, confirma a participação destas vias na odontogênese e também no desenvolvimento das lesões odontogênicas (AU).

Dental development occurs from sequential interactions between the epithelium and the mesenchyme derived from the neural crest at different stages of histodifferentiation and morphodifferentiation. At the end of tooth development, the structures that participated in the formation of these tissues are expected to disappear or remain quiescent. It is not uncommon that the epithelial remnants of the tooth development originate lesions such as odontogenic cysts and tumors. In early tooth development, stem cell maintenance is regulated by specific transcription factors, which includes OCT-4, SOX-2, Nanog, Stat-3 and c-Myc and several other Homeobox genes and transcription pathways (SHH, Wnt/ß-catenin, FGF, BMP) contribute to cell fate and differentiation. However, there is involvement of these genes and pathways in the pathogenesis of several types of tumors. The aim of the present study was to evaluate the immunoexpression of SOX2, FGF-10 and Wnt-1 in a case series of odontogenic lesions and some specimens of dental germs. The sample consisted of 20 Odontogenic Keratocysts (OK), 20 solid ameloblastomas (AM), 20 adenomatoid odontogenic tumors (AOT), 10 calcifying epithelial odontogenic tumors (CEOT) and 5 dental gerns for comparison. Immunoexpression was evaluated according to the percentage of immunostained epithelial cells and intensity of the positive cells resulting in total immunostaining score (PIT) ranging from 0 to 7. The analysis of SOX2 immunoexpression revealed positivity in most cases of the lesions studied. The immunostaining score for SOX2 revealed a statistically significant difference between the groups of lesions studied, with a higher frequency in OK and CEOT (p < 0.001). After pairing, we observed a significant difference between AM and OK, AM and CEOT, OK and AOT, OK and CEOT, and AOT and CEOT (p <0.05). Analysis of the FGF-10 and Wnt-1 immunoexpression revealed positivity in all cases of the lesions studied, with no statistically significant difference between the groups of lesions studied (p = 0.628). There was a significant difference in relation to the positivity scores for Wnt-1 (p <0.001) with higher frequency in OK and AOT. After pairing, there was a statistically significant difference between AM and OK, AM and CEOT, OK and CEOT and, AOT and CEOT (p <0.05). The expression pattern of SOX2, FGF-10 and Wnt-1 in dental germs and odontogenic lesions evaluated here confirms the participation of these pathways in the tooth development as well as in the development of odontogenic lesions (AU).

Análise retrospectiva das lesões do complexo oral e maxilofacial do Serviço de Cirurgia oral do Hospital Universitário Clementino Fraga Filho: um estudo retrospectivo de 24 anos / Retrospective analysis of injuries of the oral complex and maxilofacial in Oral Surgery Service of the Hospital Universitário Clementino Fraga Filho: a study retrospective of 24 years

Os estudos epidemiológicos podem auxiliar na identificação da prevalência das lesões em uma determinada população, assim como na coleta de dados relativos a localização, idade, gênero e saúde geral do paciente, bem como hábitos nocivos existentes, e possíveis fatores etiológicos associados. Na literatura, os estudos epidemiológicos das doenças de boca exibem, em sua maioria, uma alta prevalência de lesões benignas de mucosa, principalmente do tipo hiperplásicas, assim como mucoceles, e alterações inflamatórias periapicais. No entanto, a real prevalência das lesões pode variar de acordo com a idade dos pacientes e da origem dos casos. O objetivo deste trabalho foi identificar a prevalência e as características sócio- demográficas de lesões orais dos pacientes encaminhados para tratamento cirúrgico no serviço de Cirurgia Oral do Hospital Universitário Clementino Fraga Filho (HUCFF), da Universidade Federal do Rio de Janeiro. O período de estudo compreendeu de 1989 a 2013, perfazendo 24 anos As lesões diagnosticadas foram classificadas de acordo com a sua natureza. Os dados coletados foram analisados levando-se em conta os valores absolutos e percentuais. Dos 328 casos da amostra, 159 (48,5%) eram pacientes do sexo feminino e 169 (51,5%) pacientes do sexo masculino, e a média de idade geral foi de 34,26 anos. Os cistos e tumores odontogênicos de desenvolvimento ocorreram mais comumente com 154 casos, representando 47,0%. As doenças da polpa e do periápice e as lesões intra-ósseas não odontogênicas foram responsáveis por 18,9% e 10,7% das lesões, respectivamente. Dezenove casos (5,7%) eram lesões hiperplásicas; 16 (4,9%) eram lesões de glândulas salivares; 13 (4%) eram lesões malignas; e 13 (4,0%) eram cistos não- odontogênicos. Dez casos (3,0%) eram de lesões com diagnóstico inconclusivo, e as neoplasias benignas foram as menos comumente diagnosticadas, com apenas 6 casos (1,8%). Levando-se em consideração as lesões de maior prevalência, o cisto radicular foi a patologia mais comumente encontrada representando 16,8% da amostra, seguido do cisto dentígero (15,3%), do ameloblastoma (10,7%), do tumor odontogênico ceratocístico (9,5%) e dos odontomas (5,5%). (AU)

Epidemiological studies can assist in identifying the prevalence of oral lesions in a given population. Other information that can be collected is data on affected sites, patient´s age and gender and overall health, the presence of hazardous habits and associated etiological factors. In the literature, epidemiological studies of oral diseases nearly always exhibit a high prevalence of mucosal benign hyperplastic lesions, as well as mucoceles and periapical inflammatory lesions. However, the actual prevalence of lesions may depend on patient´s age range and in the origin of the cases. The aim of this study was to determine the prevalence and socio-demographic characteristics of odontogenic and non- odontogenic lesions of patients referred for surgical treatment at the Oral Surgery Service of the Clementino Fraga Filho University Hospital (HUCFF), of the Federal University of Rio de Janeiro. The study period totalized 24 years, from 1989 to 2013. The lesions were classified according to their nature. The collected data was analyzed taking into account the absolute values and percentages. Of the 328 sample cases, 159 (48.5%) were female patients and 169 (51.5%) male patients, and the average age was of 34.26 years. Dvelopment Odontogenic Cysts and Tumors occurred more commonly with 154 cases, representing 47.0% of the study group. Pulpal and periapical diseases and non-odontogenic bone lesions accounted for 18.9% and 10.7% cases, respectively. Nineteen cases (5.7%) were hyperplastic lesions; 16 (4.9%) were salivary glands lesions; 13 (4%) were malignant neoplasms; and 13 (4.0%) were nonOdontogenic cysts. Ten cases (3.0%) were represented by lesions with inconclusive diagnosis. Benign neoplasms were the least commonly diagnosed cases, with only 6 tumors (1.8%). Taking into consideration the lesions of higher prevalence, the periapical cyst was the most commonly found oral disease representing 16.8% of the sample, followed by the dentigerous cyst (15.3%), the ameloblastoma (10.7%), the keratocystic odontogenic tumor (9.5%) and the odontomas (5.5%). (AU)

Análise imunoistoquímica de metaloproteases nos cistos dentígeros, cistos radiculares e tumores odontogênicos ceratocísticos: revisão sistemática / Immunohistochemical analysis of metalloproteases in dentigerous cysts, radicular cysts and keratocystic odontogenic tumors: systematic review

Evidence suggests that metalloprotease expression may affect the biological behavior of odontogenic lesions. This study was conducted to review the literature about the role of metalloproteases in the development of odontogenic lesions. A search was carried out using one database, MEDLINE, via PubMed. Only articles written in English were included. Abstracts of all articles retrieved in the electronic search were evaluated for their relevance. Three articles met inclusion criteria. They analyzed the role of MMP-2, MMP-8 and MMP-13 in radicular cysts, dentigerous cysts and keratocystic odontogenic tumors, and of MMP-1, MMP-7 and MMP-27 in keratocystic odontogenic tumors. The immunostaining technique used for all studies was similar, differing only in type of staining used. Different immunoreactivity results were found in the studies. The pattern of metalloprotease expression in odontogenic lesions was different from the pattern found in other lesions. In the studies analyzed, there was a significant positive immunoreactivity for metalloproteases in odontogenic lesions, particularly in keratocystic odontogenic tumors, a finding that may explain KCOT aggressiveness.

Evidências sugerem que a expressão das metaloproteinases podem afetar o comportamento biológico das lesões odontogênicas. Esse estudo foi conduzido a fim de revisar a literatura sobre o papel das metaloproteinases no desenvolvimento das lesões odontogênicas. A pesquisa foi realizada utilizando a base de dados do MEDLINE, via PUBMED. Somente artigos escritos em língua inglesa foram aceitos. Os resumos de todos os artigos encontrados na busca foram avaliados de acordo com sua relevância. Três artigos preencheram os critérios de inclusão. Eles analisaram o papel da MMP-2, MMP-8 e MMP-13 nos cistos radiculares, cistos dentígeros e nos tumores odontogênicos ceratocísticos (TOC) e MMP-1, MMP-7 e MMP-27 no TOC. A técnica imunoistoquímica utilizada por todos os estudos foi similar, diferindo somente pelo tipo da coloração utilizada. Diferentes imunomarcações foram encontradas nos estudos. O padrão da expressão das metaloproteinases nas lesões odontogênicos variou entre as lesões. Nos estudos analisados, houve uma imunomarcação positiva, significante estatiticamente, das metaloproteinases nas lesões odontogênicas em especial nos TOCs, o que pode explicar a agressividade dessas lesões.