Avaliação dos efeitos da terapia com prednisona em cães com dermatopatia / Evaluation of the effects of prednisone therapy in dogs with dermatopathy

O objetivo do trabalho foi verificar a presença de efeitos colaterais avaliados pelo método de avaliação clínica e laboratorial em cães com dermatopatias tratados com prednisona em dose anti-inflamatória. Para isso, foram utilizados 11 cães que apresentassem alguma dermatopatia alérgica. Todos esses foram submetidos à terapia com prednisona durante 20 dias, nas doses de 0,25 mg/kg/BID/5 dias, 0,25 mg/kg/Sid/5 dias e 0,25 mg/kg/EDA/10 dias. Exames laboratoriais (hemograma, bioquímicos da função renal, função e lesão hepática, glicemia, colesterol, triglicérides, urinálise, UPC e pressão arterial sistêmica) foram realizados em dois momentos (antes e após o tratamento). Após análise dos resultados não foram observadas alterações estatísticas relacionadas à utilização do corticoide entre os dois momentos estudados. Por tanto, conclui-se que a ausência de alterações pode sugerir que a dose e o tempo de tratamento foram seguros, porém estudos com a utilização de prednisona em doses mais altas e com períodos maiores devem ser realizados afim de demonstrar a relação da corticoidoterapia com efeitos colaterais.

The skin affections are of great importance in the small animal clinic, corresponding to a large percentage of the cases attended in the clinical routine. The most frequent dermatopathies are allergic dermatitis to ectoparasite bite,cutaneous neoplasm, bacterial pyoderma, seborrhea, allergic dermatitis, parasitic dermatitis and immune mediated dermatoses. However, allergic dermatitis is the most commonly treated with corticosteroids. The objective of the study was to verify the presence of side effects evaluated by the clinical and laboratory evaluation method in dogs with dermatopathies treated with prednisone in an anti-inflammatory dose. For this, 11 dogs were used that had some allergic dermatopathy. All of these patients underwent prednisone therapy for 20 days at doses of 0,25 mg/kg/BID/5 dias, 0,25mg/kg/Sid/5 dias e 0,25 mg/kg/EDA/10 dias. Laboratory tests (hemogram, biochemicals of renal function, liverfunction and lesion, glucose, cholesterol, triglycerides, urinalysis, UPC and systemic arterial pressure) were done at two moments (before and after treatment). After analyzing the results, no statistical changes related to the use of corticosteroids were observed between the two moments studied. Therefore, it is concluded that the absence of alterations may suggest that the dose and the time of treatment were safe, but studies with the use of prednisone at higher doses, with longer periods and with a greater number of animals, should be performed in order to demonstrate the relationship of corticoid therapy with side effects.

Avaliação dos efeitos da terapia com prednisona em cães com dermatopatia / Evaluation of the effects of prednisone therapy in dogs with dermatopathy

O objetivo do trabalho foi verificar a presença de efeitos colaterais avaliados pelo método de avaliação clínica e laboratorial em cães com dermatopatias tratados com prednisona em dose anti-inflamatória. Para isso, foram utilizados 11 cães que apresentassem alguma dermatopatia alérgica. Todos esses foram submetidos à terapia com prednisona durante 20 dias, nas doses de 0,25 mg/kg/BID/5 dias, 0,25 mg/kg/Sid/5 dias e 0,25 mg/kg/EDA/10 dias. Exames laboratoriais (hemograma, bioquímicos da função renal, função e lesão hepática, glicemia, colesterol, triglicérides, urinálise, UPC e pressão arterial sistêmica) foram realizados em dois momentos (antes e após o tratamento). Após análise dos resultados não foram observadas alterações estatísticas relacionadas à utilização do corticoide entre os dois momentos estudados. Por tanto, conclui-se que a ausência de alterações pode sugerir que a dose e o tempo de tratamento foram seguros, porém estudos com a utilização de prednisona em doses mais altas e com períodos maiores devem ser realizados afim de demonstrar a relação da corticoidoterapia com efeitos colaterais.(AU)

The skin affections are of great importance in the small animal clinic, corresponding to a large percentage of the cases attended in the clinical routine. The most frequent dermatopathies are allergic dermatitis to ectoparasite bite,cutaneous neoplasm, bacterial pyoderma, seborrhea, allergic dermatitis, parasitic dermatitis and immune mediated dermatoses. However, allergic dermatitis is the most commonly treated with corticosteroids. The objective of the study was to verify the presence of side effects evaluated by the clinical and laboratory evaluation method in dogs with dermatopathies treated with prednisone in an anti-inflammatory dose. For this, 11 dogs were used that had some allergic dermatopathy. All of these patients underwent prednisone therapy for 20 days at doses of 0,25 mg/kg/BID/5 dias, 0,25mg/kg/Sid/5 dias e 0,25 mg/kg/EDA/10 dias. Laboratory tests (hemogram, biochemicals of renal function, liverfunction and lesion, glucose, cholesterol, triglycerides, urinalysis, UPC and systemic arterial pressure) were done at two moments (before and after treatment). After analyzing the results, no statistical changes related to the use of corticosteroids were observed between the two moments studied. Therefore, it is concluded that the absence of alterations may suggest that the dose and the time of treatment were safe, but studies with the use of prednisone at higher doses, with longer periods and with a greater number of animals, should be performed in order to demonstrate the relationship of corticoid therapy with side effects.(AU)

Resveratrol atenua o estresse oxidativo e a lesão muscular de ratos sedentários submetidos ao exercício físico / Resveratrol attenuates oxidative stress and muscle damage in sedentary rats subjected to physical exercise

O sedentarismo é um problema de saúde pública e um dos maiores males da sociedade moderna. Já está bem estabelecido que esforço físico em excesso ou em indivíduos não condicionados acarreta estresse oxidativo e lesões musculares. No presente estudo, foi testada a hipótese de que um único esforço físico é capaz de causar estresse oxidativo e lesão muscular em indivíduos sedentários. Aditivamente foi avaliado efeito antioxidante do polifenol resveratrol (RV) quanto a sua capacidade de atenuar o estresse oxidativo e a lesão muscular causados pelo esforço físico. Para tal, 40 ratos (Rattus norvegicus albinus, Wistar), machos, adultos e sedentários foram aleatoriamente submetidos ou não a 90 minutos de natação, com e sem tratamento com RV (100mg/kg/PV/14dias): N-RV- (n=10) grupo mantido em repouso e não tratado com RV; N-RV+ (n=10) grupo mantido em repouso e tratado com RV; N+RV- (n=10) grupo submetido ao esforço físico de natação e não tratado com RV e N+RV+ (n=10) grupo submetido ao esforço físico de natação e tratado com RV. Em ratos sedentários, o esforço físico da natação promoveu estresse oxidativo (aumento da peroxidação lipídica e diminuição da capacidade antioxidante total do plasma) e aumento significativo da atividade plasmática de creatina quinase (CK) e lactato desidrogenase (LDH). O tratamento com RV diminuiu a peroxidação lipídica e a concentração dos marcadores de lesão muscular (CK e LDH) de ratos sedentários submetidos à natação. Essa é uma das primeiras evidências de que um único esforço físico pode causar estresse oxidativo em indivíduos sedentários e que o RV pode ser uma alternativa para atenuar a lesão muscular causada por esse estresse.(AU)

Physical inactivity is a public health problem when a sedentary population practices physical activity sporadically. Exercise in unconditioned individuals causes oxidative stress and muscle damage. This study tested the hypothesis that a single physical exertion can cause muscle damage and oxidative stress in sedentary individuals, and resveratrol can attenuate it. For this, 40 sedentary adult male rats were equally and randomized into four groups subjected to 90min swimming or rest and administered aqueous resveratrol (100mg/kg/day) or saline for 14 days: N-RV-, rats maintained at rest and administered saline; N-RV+, rats maintained at rest and treated with resveratrol; N+RV-, rats subjected to physical exercise and administered saline; and N+RV+, rats subjected to physical exercise and treated with resveratrol. In sedentary rats, the physical exertion of swimming promoted oxidative stress, i.e. increased lipid peroxidation and decreased plasma total antioxidant capacity, and significant increases in CK and LDH plasma activities. Resveratrol diminished lipid peroxidation and the concentrations of muscle damage markers (CK and LDH) in sedentary rats subjected to swimming. The results provide evidence that a single sudden physical exertion can cause oxidative stress in sedentary rats. Resveratrol showed good results as a treatment for minimizing muscle damage caused by this stress.(AU)

Resveratrol atenua o estresse oxidativo e a lesão muscular de ratos sedentários submetidos ao exercício físico / Resveratrol attenuates oxidative stress and muscle damage in sedentary rats subjected to physical exercise

O sedentarismo é um problema de saúde pública e um dos maiores males da sociedade moderna. Já está bem estabelecido que esforço físico em excesso ou em indivíduos não condicionados acarreta estresse oxidativo e lesões musculares. No presente estudo, foi testada a hipótese de que um único esforço físico é capaz de causar estresse oxidativo e lesão muscular em indivíduos sedentários. Aditivamente foi avaliado efeito antioxidante do polifenol resveratrol (RV) quanto a sua capacidade de atenuar o estresse oxidativo e a lesão muscular causados pelo esforço físico. Para tal, 40 ratos (Rattus norvegicus albinus, Wistar), machos, adultos e sedentários foram aleatoriamente submetidos ou não a 90 minutos de natação, com e sem tratamento com RV (100mg/kg/PV/14dias): N-RV- (n=10) grupo mantido em repouso e não tratado com RV; N-RV+ (n=10) grupo mantido em repouso e tratado com RV; N+RV- (n=10) grupo submetido ao esforço físico de natação e não tratado com RV e N+RV+ (n=10) grupo submetido ao esforço físico de natação e tratado com RV. Em ratos sedentários, o esforço físico da natação promoveu estresse oxidativo (aumento da peroxidação lipídica e diminuição da capacidade antioxidante total do plasma) e aumento significativo da atividade plasmática de creatina quinase (CK) e lactato desidrogenase (LDH). O tratamento com RV diminuiu a peroxidação lipídica e a concentração dos marcadores de lesão muscular (CK e LDH) de ratos sedentários submetidos à natação. Essa é uma das primeiras evidências de que um único esforço físico pode causar estresse oxidativo em indivíduos sedentários e que o RV pode ser uma alternativa para atenuar a lesão muscular causada por esse estresse.(AU)

Physical inactivity is a public health problem when a sedentary population practices physical activity sporadically. Exercise in unconditioned individuals causes oxidative stress and muscle damage. This study tested the hypothesis that a single physical exertion can cause muscle damage and oxidative stress in sedentary individuals, and resveratrol can attenuate it. For this, 40 sedentary adult male rats were equally and randomized into four groups subjected to 90min swimming or rest and administered aqueous resveratrol (100mg/kg/day) or saline for 14 days: N-RV-, rats maintained at rest and administered saline; N-RV+, rats maintained at rest and treated with resveratrol; N+RV-, rats subjected to physical exercise and administered saline; and N+RV+, rats subjected to physical exercise and treated with resveratrol. In sedentary rats, the physical exertion of swimming promoted oxidative stress, i.e. increased lipid peroxidation and decreased plasma total antioxidant capacity, and significant increases in CK and LDH plasma activities. Resveratrol diminished lipid peroxidation and the concentrations of muscle damage markers (CK and LDH) in sedentary rats subjected to swimming. The results provide evidence that a single sudden physical exertion can cause oxidative stress in sedentary rats. Resveratrol showed good results as a treatment for minimizing muscle damage caused by this stress.(AU)

Induction of haem oxygenase-1 increases infection of dog macrophages by L. infantum.

We aimed to induce and inhibit HO-1, ascertaining its effect on infection rate, parasite load and the levels of superoxide, reactive oxygen species (ROS), nitric oxide (NO), TNF-alpha and IL-10 in cultured macrophages from healthy dogs infected by Leishmania infantum. Macrophages obtained from 15 healthy dogs were cultured alone or infected with L. infantum, with or without association of HO-1 inducer and inhibitor. The infection rate and the parasite load were determined by the number of infected macrophages and number of promastigotes per macrophage, respectively. HO-1 levels and gene expression, as well as IL-10 and TNF-alpha levels were also measured in these cultures. Superoxide, ROS and NO levels in macrophages were measured through flow cytometry. Induction of HO-1 increased the infection rate and parasite load, while its inhibition decreased the infection rate and IL-10 production. There was a positive correlation between HO-1 and infection rate or parasite load. Increased infection rate was associated with decreased superoxide, ROS and NO levels. Induction of HO-1 metabolism in dogs infected by L. infantum is possibly one of the mechanisms responsible for increasing the infection of macrophages, mainly through reduction in the oxidative and nitrosative metabolisms of these cells.

M1 polarization and the effect of PGE2 on TNF-α production by lymph node cells from dogs with visceral leishmaniasis.

Canine visceral leishmaniasis (CVL) is caused by the intracellular parasite Leishmania infantum. Increased levels of arginase, nitric oxide (NO2 ) and prostaglandin E2 (PGE2 ) can play a regulatory role regarding the immune response in CVL cases. This study aimed to evaluate the arginase activity in adherent macrophages cultured from the lymph nodes of healthy and naturally infected dogs and to examine the NO2 and PGE2 levels in the supernatant of these cultures. In addition, the regulatory effect of PGE2 on the production of tumour necrosis factor (TNF-α) and interleukin-10 (IL-10) in supernatants from the total lymph node was observed in leucocyte cultures. The arginase activity was lower in the adherent macrophages cultured from the lymph nodes of naturally infected dogs and there were higher concentrations of NO2 and PGE2 in the supernatants of these cultures. Higher TNF-α and IL-10 concentrations were observed in supernatants from total lymph node leucocytes cultures, from infected dogs, and the presence of indomethacin only decreased TNF-α in the supernatant of these cultures. We conclude that the low arginase activity in macrophages suggested that M1 polarization and PGE2 were participating in the immune response and were increasing TNF-α in CVL.

Effects of P-MAPA immunomodulator on Toll-like receptor 2, ROS, nitric oxide, MAPKp38 and IKK in PBMC and macrophages from dogs with visceral leishmaniasis.

Leishmania (L.) chagasi is the etiologic agent of visceral leishmaniasis (VL) that can be transmitted to humans and dogs. VL in Brazil represents a serious public health problem; therefore, it is important to study new alternatives to treat infected dogs. In dogs, the therapeutic arsenal against canine VL is limited. The immunomodulator protein aggregate magnesium-ammonium phospholinoleate-palmitoleate anhydride (P-MAPA) improves immunocompetence when the immune system is impaired, but its dependence on Toll-like receptors (TLRs) and the mechanisms involved in immune response remain unclear. The in vitro action of P-MAPA on the expression of TLR2 and TLR4, reactive oxygen species (ROS), nitric oxide (NO) and p38 mitogen-activated protein kinase (p38 MAPK) and IKK phosphorylation was studied in mononuclear cells from peripheral blood and macrophages from healthy and Leishmania-infected dogs. The PBMC or macrophages were isolated and cultured with different concentrations of P-MAPA (20,100 and 200 µg/ml) in a humid environment at 37°C with 5% CO(2). Observation revealed that Leishmania-infected dogs showed a decrease in TLR2 in macrophages compared with healthy dogs and in induction with P-MAPA. ROS were increased in PBMCs from Leishmania spp.-infected dogs compared with healthy dogs and P-MAPA improved ROS production. NO production was increased in culture supernatant from macrophages stimulated by P-MAPA in both healthy and Leishmania spp. infected dogs. Treatment of macrophages from healthy dogs with immunomodulatory P-MAPA induced p38 MAPK and IKK phosphorylation, suggesting signal transduction by this pathway. These findings suggest that P-MAPA has potential as a therapeutic drug in the treatment of canine visceral leishmaniasis.

Variation of red cell distribution width and mean corpuscular volume in anemic dogs / Variação da distribuição do diâmetro eritrocitário e do volume corpuscular médio em cães anêmicos

The anisocytosis is a hematologic finding that is routinely evaluated from the mean corpuscular volume (MCV) and erythrocyte morphology in assessment of blood smears. The present study tested the hypothesis that the coefficient of variation of the red cell distribution width (RDW-CV - Red Cell Distribution Width) is a more sensitive parameter in the evaluation of hematologic anisocytosis, considering different levels of anemia in dogs and reticulocytosis. Blood counts of 102 anemic dogs and 353 control dogs made by automated hematology counter. The anemic animals were grouped according to the degree of anemia (mild, moderate and severe) and also as medullary response by manual reticulocyte count (none, weak, moderate and strong). The RDW-CV was different to the animal groups with moderate and severe anemia, which were higher, compared to the control group and mild anemia. The highest average value of RDW-CV (14.45%) occurred in patients with severe anemia. In the control group had higher MCV value that anemic animals, this may be due to a mixed population of erythrocytes in that group of animals. However, there wasnt difference in MCV between different degrees of anemia and reticulocytosis. Therefore, the RDW is a more sensitive indicator anisocytosis than VCM and its value is directly proportional to the degree of anemia and reticulocytosis; when combined, the sensitivity for detection of anisocytosis in anemic dogs is greater. The use of reference values established by the clinical laboratory itself is mighty important.

A anisocitose é um achado hematológico que rotineiramente é avaliado a partir do volume corpuscular médio (VCM) e da avaliação da morfologia eritrocitária em esfregaços sanguíneos. No presente estudo foi testada a hipótese de que o coeficiente de variação da distribuição do diâmetro eritrocitário (RDW-CV - Red Cell Distribution Width) é um parâmetro hematológico mais sensível na avaliação da anisocitose, considerando-se diferentes graus de anemia e reticulocitose em cães. Foram analisados hemogramas de 102 cães anêmicos e 353 cães controle, realizados em contador hematológico automatizado ABC Vet (Horiba ABX, Paris, França). Os animais anêmicos foram subdivididos conforme o grau de anemia (discreta, moderada e grave) e também de acordo com a resposta medular (resposta nula, discreta, moderada e intensa), por meio da contagem de reticulócitos manual. O RDW-CV apresentou diferença para os subgrupos de animais com anemia moderada e grave, que apresentaram valores maiores, com relação ao grupo controle e subgrupo com anemia discreta. O maior valor médio de RDW-CV (14,45%) ocorreu no subgrupo com anemia grave. No grupo controle o VCM teve valor maior que nos animais anêmicos, isto pode ter ocorrido devido a uma população mista de eritrócitos naquele grupo de animais. Entretanto, não houve diferença do VCM entre os diferentes graus de anemia e reticulocitose. Por isso, o RDW é um indicador de anisocitose mais sensível que o VCM e seu valor é diretamente proporcional ao grau de anemia e reticulocitose; quando associados, a sensibilidade para detecção deanisocitose em cães anêmicos é maior. O uso de valores de referência estabelecidos pelo próprio laboratório clínico é de extrema importância.

Variation of red cell distribution width and mean corpuscular volume in anemic dogs / Variação da distribuição do diâmetro eritrocitário e do volume corpuscular médio em cães anêmicos

The anisocytosis is a hematologic finding that is routinely evaluated from the mean corpuscular volume (MCV) and erythrocyte morphology in assessment of blood smears. The present study tested the hypothesis that the coefficient of variation of the red cell distribution width (RDW-CV - Red Cell Distribution Width) is a more sensitive parameter in the evaluation of hematologic anisocytosis, considering different levels of anemia in dogs and reticulocytosis. Blood counts of 102 anemic dogs and 353 control dogs made by automated hematology counter. The anemic animals were grouped according to the degree of anemia (mild, moderate and severe) and also as medullary response by manual reticulocyte count (none, weak, moderate and strong). The RDW-CV was different to the animal groups with moderate and severe anemia, which were higher, compared to the control group and mild anemia. The highest average value of RDW-CV (14.45%) occurred in patients with severe anemia. In the control group had higher MCV value that anemic animals, this may be due to a mixed population of erythrocytes in that group of animals. However, there wasnt difference in MCV between different degrees of anemia and reticulocytosis. Therefore, the RDW is a more sensitive indicator anisocytosis than VCM and its value is directly proportional to the degree of anemia and reticulocytosis; when combined, the sensitivity for detection of anisocytosis in anemic dogs is greater. The use of reference values established by the clinical laboratory itself is mighty important.(AU)

A anisocitose é um achado hematológico que rotineiramente é avaliado a partir do volume corpuscular médio (VCM) e da avaliação da morfologia eritrocitária em esfregaços sanguíneos. No presente estudo foi testada a hipótese de que o coeficiente de variação da distribuição do diâmetro eritrocitário (RDW-CV - Red Cell Distribution Width) é um parâmetro hematológico mais sensível na avaliação da anisocitose, considerando-se diferentes graus de anemia e reticulocitose em cães. Foram analisados hemogramas de 102 cães anêmicos e 353 cães controle, realizados em contador hematológico automatizado ABC Vet (Horiba ABX, Paris, França). Os animais anêmicos foram subdivididos conforme o grau de anemia (discreta, moderada e grave) e também de acordo com a resposta medular (resposta nula, discreta, moderada e intensa), por meio da contagem de reticulócitos manual. O RDW-CV apresentou diferença para os subgrupos de animais com anemia moderada e grave, que apresentaram valores maiores, com relação ao grupo controle e subgrupo com anemia discreta. O maior valor médio de RDW-CV (14,45%) ocorreu no subgrupo com anemia grave. No grupo controle o VCM teve valor maior que nos animais anêmicos, isto pode ter ocorrido devido a uma população mista de eritrócitos naquele grupo de animais. Entretanto, não houve diferença do VCM entre os diferentes graus de anemia e reticulocitose. Por isso, o RDW é um indicador de anisocitose mais sensível que o VCM e seu valor é diretamente proporcional ao grau de anemia e reticulocitose; quando associados, a sensibilidade para detecção deanisocitose em cães anêmicos é maior. O uso de valores de referência estabelecidos pelo próprio laboratório clínico é de extrema importância.(AU)

Neutrophil dysfunction varies with the stage of canine visceral leishmaniosis.

Canine visceral leishmaniosis (CVL) causes a dependent-stage alteration in neutrophil oxidative metabolism. When production of reactive oxygen species (ROS) exceeds the antioxidant capacity of neutrophils, apoptosis is triggered, impairing the viability and function of these cells, which can predispose dogs to infection. However, the uremic condition observed in late-stage CVL can also alter the viability and function of human neutrophils. To more clearly understand this relationship, the apoptosis rate and oxidative metabolism of neutrophils from control dogs (n=20) were compared to dogs in moderate (n=15) and very severe (n=15) stage CVL, classified according to LeishVet Consensus. To assess neutrophil oxidative metabolism, superoxide production was measured using the nitroblue tetrazolium reduction test (NBT) in isolated neutrophils. The apoptosis rate of neutrophils was estimated using the morphological method. Moderate-stage dogs presented increased superoxide production, while dogs with very severe stage CVL presented decreased superoxide production and an increase neutrophil apoptosis rate. Leishmaniosis causes differential neutrophil dysfunction according to disease stage. In moderate stage CVL, increased superoxide production is observed with no change in neutrophil viability. However, in very severe stage CVL, decreased superoxide production and increased apoptosis occur associated with uremia.

Estresse oxidativo e aumento da apoptose em neutrófilos de cães com azotemia pré-renal / Oxidative stress and increase in apoptosis index of neutrophils from dogs with prerenal azotemia

O presente trabalho tem como objetivo testar a hipótese de que, à semelhança do que ocorre na uremia, cães com azotemia pré-renal sofrem estresse oxidativo, o qual está relacionado com alterações do metabolismo oxidativo e apoptose dos neutrófilos. Para tal, foi determinada a peroxidação lipídica pela quantificação do malondialdeído (MDA) e o status antioxidante total do plasma de 15 cães normais e 10 com azotemia pré-renal, correlacionando-os com a produção de superóxido e o índice apoptótico dos neutrófilos. As determinações do MDA e do status antioxidante total foram estabelecidas empregando-se um conjunto de reagentes comerciais. Por meio de citometria de fluxo capilar, a produção de superóxido e a apoptose de neutrófilos isolados de sangue periférico foram determinadas utilizando-se a sonda hidroetidina e o sistema anexina V-PE, respectivamente. Cães azotêmicos (26,29±5,32g/L) apresentaram menor concentração (p=0,0264) do antioxidante albumina em relação ao grupo-controle (30,36±3,29g/L) e também uma menor (p=0,0027) capacidade antioxidante total (2,36±0,32 versus 2,73±0,24mmol/L), enquanto não houve alteração da peroxidação lipídica plasmática e da produção de superóxido neutrofílica. Concluiu-se que, à semelhança do que ocorre na uremia, condições azotêmicas pré-renais no cão causam estresse oxidativo e aceleração da apoptose dos neutrófilos.

This study aims to test the hypothesis that, similarly to what occurs in uremia, dogs with prerenal azotemia suffer oxidative stress associated with changes in oxidative metabolism and apoptosis in neutrophils. For this purpose, fifteen normal dogs and ten with prerenal azotemia had lipid peroxidation determined by quantifying the malondialdehyde (MDA) and had plasma total antioxidant status evaluated, correlating them with the superoxide production and apoptotic index of neutrophils. MDA and plasma total antioxidant status were determined using commercial reagents. Using capillary flow cytometry, superoxide production and apoptosis were determined from isolated neutrophils of peripheral blood using the hydrithidine and Annexin V-PE probe system, respectively. Azotemic dogs (26.29±5.32g/L) had a lower concentration (p=0.0264) of the plasma antioxidant albumin than the control group (30.36±3.29g/L) and also had lower (p=0.0027) total antioxidant status (2.36±0.32 versus 2.73±0.24mmol/L), while no alterations were observed in plasma lipid peroxidation and superoxide production. It was concluded that, similarly to what occurs in uremia, prerenal azotemia causes oxidative stress and acceleration of neutrophil apoptosis in dogs.

Estresse oxidativo e aumento da apoptose em neutrófilos de cães com azotemia pré-renal / Oxidative stress and increase in apoptosis index of neutrophils from dogs with prerenal azotemia

O presente trabalho tem como objetivo testar a hipótese de que, à semelhança do que ocorre na uremia, cães com azotemia pré-renal sofrem estresse oxidativo, o qual está relacionado com alterações do metabolismo oxidativo e apoptose dos neutrófilos. Para tal, foi determinada a peroxidação lipídica pela quantificação do malondialdeído (MDA) e o status antioxidante total do plasma de 15 cães normais e 10 com azotemia pré-renal, correlacionando-os com a produção de superóxido e o índice apoptótico dos neutrófilos. As determinações do MDA e do status antioxidante total foram estabelecidas empregando-se um conjunto de reagentes comerciais. Por meio de citometria de fluxo capilar, a produção de superóxido e a apoptose de neutrófilos isolados de sangue periférico foram determinadas utilizando-se a sonda hidroetidina e o sistema anexina V-PE, respectivamente. Cães azotêmicos (26,29±5,32g/L) apresentaram menor concentração (p=0,0264) do antioxidante albumina em relação ao grupo-controle (30,36±3,29g/L) e também uma menor (p=0,0027) capacidade antioxidante total (2,36±0,32 versus 2,73±0,24mmol/L), enquanto não houve alteração da peroxidação lipídica plasmática e da produção de superóxido neutrofílica. Concluiu-se que, à semelhança do que ocorre na uremia, condições azotêmicas pré-renais no cão causam estresse oxidativo e aceleração da apoptose dos neutrófilos.(AU)

This study aims to test the hypothesis that, similarly to what occurs in uremia, dogs with prerenal azotemia suffer oxidative stress associated with changes in oxidative metabolism and apoptosis in neutrophils. For this purpose, fifteen normal dogs and ten with prerenal azotemia had lipid peroxidation determined by quantifying the malondialdehyde (MDA) and had plasma total antioxidant status evaluated, correlating them with the superoxide production and apoptotic index of neutrophils. MDA and plasma total antioxidant status were determined using commercial reagents. Using capillary flow cytometry, superoxide production and apoptosis were determined from isolated neutrophils of peripheral blood using the hydrithidine and Annexin V-PE probe system, respectively. Azotemic dogs (26.29±5.32g/L) had a lower concentration (p=0.0264) of the plasma antioxidant albumin than the control group (30.36±3.29g/L) and also had lower (p=0.0027) total antioxidant status (2.36±0.32 versus 2.73±0.24mmol/L), while no alterations were observed in plasma lipid peroxidation and superoxide production. It was concluded that, similarly to what occurs in uremia, prerenal azotemia causes oxidative stress and acceleration of neutrophil apoptosis in dogs.(AU)

Valor do teste de redução do tetrazólio nitroazul (nbt) no diagnóstico de processos inflamatórios caninos / Clinical value of nitroblue tetrazolium test (nbt) in the diagnosis of canine inflammatory processes

Objetivou-se estimar o valor clínico do teste de redução do tetrazólio nitroazul (NBT) no diagnóstico dos processos inflamatórios de cães, comparando-o com o leucograma e a concentração plasmática de fibrinogênio. Para tal, determinou-se a porcentagem de neutrófilos redutores de NBT, a concentração plasmática de fibrinogênio e o leucograma de 242 cães, incluindo animais sadios e com quadro inflamatório, portadores ou não de hepatopatias, azotemia ou hipogamaglobulinemias. O uso do teste de redução do NBT permitiu confirmar 30,43% dos processos inflamatórios em cães. O uso associado do teste de redução do NBT com a determinação do fibrinogênio plasmático e leucograma possibilitou uma maior eficiência diagnóstica, identificando-se 84,35% dos processos inflamatórios. Não foi verificado um efeito significativo da hipogamaglobulinemia e da hepatopatia sobre a capacidade do neutrófilo reduzir o NBT em cães com doenças inflamatórias, porém os resultados obtidos sugerem que a azotemia possa afetar a capacidade do neutrófilo em reduzir o NBT. Conclui-se que o teste de redução de NBT é pouco sensível para o diagnóstico dos processos inflamatórios em cães, porém útil nos casos em que o fibrinogênio e o leucograma não são capazes de detectar a inflamação.(AU)

The purpose of the present study is to determine the clinical value of nitroblue tetrazolium reduction test (NBT) to diagnose inflammatory processes in dogs, and compare to white blood cell count (WBC) and concentration of plasma fibrinogen. To this end, we determined the percentage of NBT reducing neutrophils, concentration of plasma fibrinogen and WBC of 242 dogs, including both healthy dogs and animals with inflammation processes, with or without liver disease, azotemia or hypogammaglobulinemias. The NBT reduction test confirmed 30.43% of inflammatory diseases in dogs. The combined use of NBT reduction test, plasma fibrinogen and WBC was more efficient and identified 84.35% of inflammatory processes. Hypogammaglobulinemia and liver disease did not alter the ability of neutrophils to reduce NBT in dogs with inflammatory diseases, but results suggest that azotemia may affect the ability of neutrophils to reduce NBT. It can be concluded that NBT reduction test has low sensitivity for the diagnosis of inflammatory diseases in dogs, but it is useful in cases where the fibrinogen and WBC are not able to detect inflammation.(AU)

CLINICAL VALUE OF NITROBLUE TETRAZOLIUM TEST (NBT) IN THE DIAGNOSIS OF CANINE INFLAMMATORY PROCESSES / Valor do teste de redução do Tetrazólio Nitroazul (NBT) no diagnóstico de processos inflamatórios caninos.

Objetivou-se estimar o valor clínico do teste de redução do tetrazólio nitroazul (NBT) no diagnóstico dos processos inflamatórios de cães, comparando-o com o leucograma e a concentração plasmática de fibrinogênio. Para tal, determinou-se a porcentagem de neutrófilos redutores de NBT, a concentração plasmática de fibrinogênio e o leucograma de 242 cães, incluindo animais sadios e com quadro inflamatório, portadores ou não de hepatopatias, azotemia ou hipogamaglobulinemias. O uso do teste de redução do NBT permitiu confirmar 30,43% dos processos inflamatórios em cães.  O uso associado do teste de redução do NBT com a determinação do fibrinogênio plasmático e leucograma possibilitou uma maior eficiência diagnóstica, identificando-se 84,35% dos processos inflamatórios. Não foi verificado um efeito significativo da hipogamaglobulinemia e da hepatopatia sobre a capacidade do neutrófilo reduzir o NBT em cães com doenças inflamatórias, porém os resultados obtidos sugerem

Valor do teste de redução do tetrazólio nitroazul (nbt) no diagnóstico de processos inflamatórios caninos / Clinical value of nitroblue tetrazolium test (nbt) in the diagnosis of canine inflammatory processes

Objetivou-se estimar o valor clínico do teste de redução do tetrazólio nitroazul (NBT) no diagnóstico dos processos inflamatórios de cães, comparando-o com o leucograma e a concentração plasmática de fibrinogênio. Para tal, determinou-se a porcentagem de neutrófilos redutores de NBT, a concentração plasmática de fibrinogênio e o leucograma de 242 cães, incluindo animais sadios e com quadro inflamatório, portadores ou não de hepatopatias, azotemia ou hipogamaglobulinemias. O uso do teste de redução do NBT permitiu confirmar 30,43% dos processos inflamatórios em cães. O uso associado do teste de redução do NBT com a determinação do fibrinogênio plasmático e leucograma possibilitou uma maior eficiência diagnóstica, identificando-se 84,35% dos processos inflamatórios. Não foi verificado um efeito significativo da hipogamaglobulinemia e da hepatopatia sobre a capacidade do neutrófilo reduzir o NBT em cães com doenças inflamatórias, porém os resultados obtidos sugerem que a azotemia possa afetar a capacidade do neutrófilo em reduzir o NBT. Conclui-se que o teste de redução de NBT é pouco sensível para o diagnóstico dos processos inflamatórios em cães, porém útil nos casos em que o fibrinogênio e o leucograma não são capazes de detectar a inflamação.

The purpose of the present study is to determine the clinical value of nitroblue tetrazolium reduction test (NBT) to diagnose inflammatory processes in dogs, and compare to white blood cell count (WBC) and concentration of plasma fibrinogen. To this end, we determined the percentage of NBT reducing neutrophils, concentration of plasma fibrinogen and WBC of 242 dogs, including both healthy dogs and animals with inflammation processes, with or without liver disease, azotemia or hypogammaglobulinemias. The NBT reduction test confirmed 30.43% of inflammatory diseases in dogs. The combined use of NBT reduction test, plasma fibrinogen and WBC was more efficient and identified 84.35% of inflammatory processes. Hypogammaglobulinemia and liver disease did not alter the ability of neutrophils to reduce NBT in dogs with inflammatory diseases, but results suggest that azotemia may affect the ability of neutrophils to reduce NBT. It can be concluded that NBT reduction test has low sensitivity for the diagnosis of inflammatory diseases in dogs, but it is useful in cases where the fibrinogen and WBC are not able to detect inflammation.

CLINICAL VALUE OF NITROBLUE TETRAZOLIUM TEST (NBT) IN THE DIAGNOSIS OF CANINE INFLAMMATORY PROCESSES / Valor do teste de redução do Tetrazólio Nitroazul (NBT) no diagnóstico de processos inflamatórios caninos

Objetivou-se estimar o valor clínico do teste de redução do tetrazólio nitroazul (NBT) no diagnóstico dos processos inflamatórios de cães, comparando-o com o leucograma e a concentração plasmática de fibrinogênio. Para tal, determinou-se a porcentagem de neutrófilos redutores de NBT, a concentração plasmática de fibrinogênio e o leucograma de 242 cães, incluindo animais sadios e com quadro inflamatório, portadores ou não de hepatopatias, azotemia ou hipogamaglobulinemias. O uso do teste de redução do NBT permitiu confirmar 30,43% dos processos inflamatórios em cães.  O uso associado do teste de redução do NBT com a determinação do fibrinogênio plasmático e leucograma possibilitou uma maior eficiência diagnóstica, identificando-se 84,35% dos processos inflamatórios. Não foi verificado um efeito significativo da hipogamaglobulinemia e da hepatopatia sobre a capacidade do neutrófilo reduzir o NBT em cães com doenças inflamatórias, porém os resultados obtidos sugerem

EFEITO DO EDTA SOBRE O TESTE DE REDUÇÃO DO TETRAZÓLIO NITROAZUL (NBT) PARA AVALIAÇÃO DO METABOLISMO OXIDATIVO DOS NEUTRÓFILOS DE EQUINOS / Efeito do edta sobre o teste de redução do tetrazólio nitroazul (nbt) para avaliação do metabolismo oxidativo dos ne

O teste de redução do tetrazólio nitroazul (NBT) é um dos métodos mais utilizados para se avaliar o metabolismo oxidativo dos neutrófilos em sangue total heparinizado. O etileno-diaminotetracético (EDTA) é o anticoagulante mais utilizado na rotina hematológica e apresenta a vantagem de melhor preservar as características morfológicas dos neutrófilos do que a heparina. Estudos prévios em humanos indicam que o EDTA pode quelar o cálcio necessário para a ativação do metabolismo oxidativo enquanto que a heparina pode gerar valores de redução de NBT falsamente elevados. Objetivou-se comparar a capacidade dos neutrófilos reduzirem o NBT em amostras sangüíneas colhidas com heparina e EDTA. Para tal, sangue total de 30 eqüinos SRD sadios, adultos e de ambos os sexo foram divididas em dois tubos, um contendo heparina sódica (10U/mL) e o outro EDTA potássico (1,8mg/mL). Imediatamente após a colheita realizaram-se os testes de redução espontânea e estimulada do NBT. Em ambas as provas de redução do NBT, amostras colhidas com heparina apresentaram maior destruição celular, formação de precipitado e de agregados celulares do que as tratadas com EDTA. A média de redução espontânea do NBT em amostras com EDTA (5,93%) não diferiu das obtidas com heparina (4,2%). Na prova estimulada, a média de neutrófilos redutores de NBT em amostras com EDTA (10,43%) foi menor ( p < 0,05) do que as obtidas

Efeito do EDTA sobre o teste de redução do Tetrazólio Nitroazul (NBT) para avaliação do metabolismo oxidativo dos neutrófilos de equinos / EDTA effects on the Tetrazolium Nitroblue test (NBT) to the equine neutrophil oxidative metabolism evaluation

Objetivou-se comparar a capacidade dos neutrófilos reduzirem NBT em amostras sangüíneas colhidas com heparina e EDTA. Para tal, sangue total de 30 eqüinos SRD sadios, adultos e de ambos os sexo foram divididas em dois tubos, um contendo heparina sódica (10U/mL) e o outro EDTA potássico (1,8mg/mL). Imediatamente após a colheita realizaram-se os testes de redução espontânea e estimulada do NBT. Em ambas as provas de redução do NBT, amostras colhidas com heparina apresentaram maior destruição celular, formação de precipitado e de agregados celulares do que as tratadas com EDTA. A média de redução espontânea do NBT em amostras com EDTA (5,93%) não diferiu das obtidas com heparina (4,2%). Na prova estimulada, a média de neutrófilos redutores de NBT em amostras com EDTA (10,43%) foi menor (p<0,05) do que as obtidas com heparina (36,1%). Conclui-se que o EDTA pode ser utilizado com vantagens em relação à heparina na prova de redução espontânea do NBT, entretanto, efeito quelante deste anticoagulante compromete a produção de superóxido em neutrófilos estimulados com extrato bacteriano.

The aim of the present study was to compare the neutrophils ability to reduce NBT in blood samples collected with heparin and EDTA. For this purpose, blood samples from 30 horses were collected of non-defined mix breed, healthy, adults and from both sexes animals, the samples were divided into two tubes, one containing sodium heparin (10U/mL) and other potassium EDTA (1.8 mg/mL). Immediately after the blood collection, the tests of spontaneous and stimulated reduction of NBT were conducted. In both reducing NBT tests, heparinized samples had higher cell destruction, precipitate and cellular aggregates in comparison with those treated with EDTA. The average of spontaneous NBT reduction in samples with EDTA (5.93%) did not differ from those obtained with heparin (4.2%). In stimulated test, the NBT reduction average of neutrophils in samples with EDTA (10.43%) was lower (p <0.05) than those obtained with heparin (36.1%). It is concluded that EDTA can be used with advantages over heparin in the spontaneous NBT reduction test, however, the anticoagulant chelating effect compromises neutrophils superoxide production when stimulated with bacterial extract.