Frog hepatic health and metal pollution: An assemblage-level approach in a hotspot in southeastern Brazil.

Chemical pollutants include the harmful effects of various substances on soils, water bodies, and biodiversity. Amphibians are one of the most endangered groups of vertebrates and are impacted by chemical pollutants in various ways due to their complex life cycles. Since trace pollutant concentrations vary across environments, different frog ecomorphs (classified by their microhabitat use) may have different exposures. We aimed to determine the association between frog ecomorphs and the occurrence of histopathological hepatic lesions (HHLs) as an indicator of contaminant exposure. We focused on small forest streams near a large urban region in Brazil, heavily polluted in the 1980s. We examined 104 frog specimens from various families. All specimens exhibited HHLs, with melanomacrophages being the most common (n = 99). Arboreal frogs exhibited more vascular congestion, while terrestrial frogs showed structural hepatic damage. Higher cobalt levels were linked to increased liver necrosis in arboreal frogs and structural issues in both arboreal and terrestrial frogs. Cadmium was associated with hepatitis in terrestrial frogs. Although metal levels had no significant effects on rheophilic frogs, the prevalence of hepatitis and necrosis indicated complex exposure pathways. Iron and aluminum were linked to fewer lesions in rheophilic frogs, suggesting resilience. The high prevalence of HHLs signals an ongoing issue, with variations among ecomorphs suggesting differential exposure to pollutants and posing a complex challenge for community conservation.

Histopathological changes in Lithobates catesbeianustadpoles used as biomarkers of pesticide poisoning / Alterações histopatológicas utilizadas em girinos de Lithobates catesbeianuscomo biomarcadores de intoxicações causadas por pesticidas

The use of biological indicators has increased in recent years with the aim of investigating environ-mental pollution in aquatic environments that are vulnerable to the constant use of pesticides. Some biomarkers can help assess the health status, indicating physical, metabolic, and behavioral changes under acute and sublethal poisoning. The mixture of the active ingredients cyproconazole and pico-xystrobin is a widely used fungicide for the control of pests in cotton, rice, coffee, sugarcane, corn, soybean, and wheat. The objective of this study was to verify the occurrence of possible histopatholo-gical lesions in the liver and kidneys of bullfrog tadpoles (Lithobates catesbeianus) caused by a fungi-cide commercial formula composed of picoxystrobin and cyproconazole. The animals were subjected to different concentrations of the fungicide to determine the median lethal concentration (LC50-96h = 0.05 mg L-1), that is, the lethal dose for 50% of the animals in 96 h. After determining the value of LC50-96h, the animals were subjected to three sublethal concentrations (LC50-96h/2, LC50-96h/10, and LC-50-96h/100). Through histological biomarkers, it was verified that this fungicide changed the morphology of the animals' kidney and liver tissues in a chronic way, impairing the functioning of organs that are essential for their survival and metamorphosis, which can result in an imbalance in the biodiversity of aquatic ecosystems.(AU)

O uso de indicadores biológicos tem aumentado nos últimos anos, com o intuito de investigar a po-luição ambiental em ambientes aquáticos que são vulneráveis ao constante uso de pesticidas. Alguns biomarcadores podem ajudar a avaliar o estado de saúde, indicando alterações físicas, metabólicas e comportamentais de intoxicações agudas e subletais. A mistura dos ingredientes ativos picoxistrobina e ciproconazol é amplamente usada como fungicida para o controle de pragas da cultura de algodão, arroz, café, cana-de-açúcar, milho, soja e trigo. O objetivo deste trabalho foi verificar a ocorrência de possíveis lesões histopatológicas em fígado e rins de girinos de rã-touro (Lithobates catesbeianus) causadas pela mistura dos fungicidas picoxistrobina e ciproconazol. Os animais foram submetidos a diferentes concentrações do fungicida para determinação da concentração letal mediana (CL50-96h = 0,05 mg L-1), ou seja, a dose letal para 50% dos animais em 96 horas. Após a determinação do valor da CL50-96h, os animais foram submetidos a três concentrações subletais (CL50-96h/2, CL50-96h/10 e CL50-96h/100). Através dos biomarcadores histológicos, a pesquisa verificou que esse fungicida alterou a morfolo-gia dos tecidos renais e hepáticos dos animais de maneira crônica, prejudicando o funcionamento de órgãos que são fundamentais para sua sobrevivência e metamorfose, o que pode resultar em um desequilíbrio para a biodiversidade dos ecossistemas aquáticos.(AU)

Use of polyclonal antibodies, electron microscopy and histopathology to detect iridovirus-like particles in bullfrogs / Uso de anticorpos policlonais, microscopia eletrônica e histologia para detecção de partículas semelhantes ao iridovírus em rãs-touro

Iridoviruses of the Ranavirus genus have been implicated in the decline in amphibians worldwide, capable of affecting animals both in the wild and in captivity. This study aimed to detect iridovirus-like particles from three frog farms in southeastern Brazil using primary polyclonal antibodies, transmission electron microscopy (TEM) and histologic findings. The target organs were liver and kidneys. Sixty adults and sixty tadpoles of bullfrogs (Lithobates catesbeianus) were used in the study. TEM revealed the presence of iridovirus-like particles in hepatic tissue using the negative staining technique. Positive results were also observed by immunoelectron microscopy and immunocytochemistry (ICC). The histological analysis of the samples showed liver hemorrhage and corpuscles inclusion in hepatocytes as well as glomerulotubular degeneration and necrosis in the kidneys. The methods used in this study were highly efficient to detect the presence of iridovirus-like particles and possible infection of ranavirus.(AU)

Os iridovirus do gênero Ranavirus têm sido implicados no declínio dos anfíbios em todo o mundo afetando animais de vida livre e aqueles em cativeiro. O objetivo deste estudo foi detectar a presença de partículas semelhantes ao iridovírus em três ranários na região sudeste do Brasil, utilizando anticorpos policlonais primários, microscopia eletrônica de transmissão (MET) e achados histológicos. Os órgãos alvo foram o fígado e os rins. Sessenta rãs-touro adultas (Lithobates catesbeianus) e sessenta girinos da mesma espécie foram usados para o estudo. A MET revelou a presença de partículas semelhantes ao iridovírus em tecido hepático utilizando a técnica de contrastação negativa. Os resultados positivos foram também observados por imunomicroscopia eletrônica e imunocitoquímica. As análises histológicas nas mesmas amostras evidenciaram hemorragia no fígado e corpúsculos de inclusão em hepatócitos, e degeneração glomerulotubular e necrose nos rins. Os métodos usados neste estudo foram altamente eficientes na detecção de partículas semelhantes ao iridovírus e possivel infecção por ranavirus.(AU)

Use of polyclonal antibodies, electron microscopy and histopathology to detect iridovirus-like particles in bullfrogs / Uso de anticorpos policlonais, microscopia eletrônica e histologia para detecção de partículas semelhantes ao iridovírus em rãs-touro

Iridoviruses of the Ranavirus genus have been implicated in the decline in amphibians worldwide, capable of affecting animals both in the wild and in captivity. This study aimed to detect iridovirus-like particles from three frog farms in southeastern Brazil using primary polyclonal antibodies, transmission electron microscopy (TEM) and histologic findings. The target organs were liver and kidneys. Sixty adults and sixty tadpoles of bullfrogs (Lithobates catesbeianus) were used in the study. TEM revealed the presence of iridovirus-like particles in hepatic tissue using the negative staining technique. Positive results were also observed by immunoelectron microscopy and immunocytochemistry (ICC). The histological analysis of the samples showed liver hemorrhage and corpuscles inclusion in hepatocytes as well as glomerulotubular degeneration and necrosis in the kidneys. The methods used in this study were highly efficient to detect the presence of iridovirus-like particles and possible infection of ranavirus.

Os iridovirus do gênero Ranavirus têm sido implicados no declínio dos anfíbios em todo o mundo afetando animais de vida livre e aqueles em cativeiro. O objetivo deste estudo foi detectar a presença de partículas semelhantes ao iridovírus em três ranários na região sudeste do Brasil, utilizando anticorpos policlonais primários, microscopia eletrônica de transmissão (MET) e achados histológicos. Os órgãos alvo foram o fígado e os rins. Sessenta rãs-touro adultas (Lithobates catesbeianus) e sessenta girinos da mesma espécie foram usados para o estudo. A MET revelou a presença de partículas semelhantes ao iridovírus em tecido hepático utilizando a técnica de contrastação negativa. Os resultados positivos foram também observados por imunomicroscopia eletrônica e imunocitoquímica. As análises histológicas nas mesmas amostras evidenciaram hemorragia no fígado e corpúsculos de inclusão em hepatócitos, e degeneração glomerulotubular e necrose nos rins. Os métodos usados neste estudo foram altamente eficientes na detecção de partículas semelhantes ao iridovírus e possivel infecção por ranavirus.

Resposta hepática à suplementação alimentar em rãs-touro sob condição de estresse / Liver response to dietary supplementation in bullfrog under stress condition

Evaluate the hepatoprotective effect of dietary supplementation with the probiotic (Bacillus subtilis) and with beta-glucan on bullfrog in stress of high stocking density. Animals were assigned in treatments: T1: 100 animals m-2 (control); T2: 236 animals m-2; T3: 236 animals m-2 supplemented with probiotic; T4: 236 animals m-2 supplemented with beta-glucan. Evaluated survival, weight gain (WG) and the condition of liver biochemistry and histopathology. There was no statistical difference in survival between treatments (P>0.05), but were observed significant differences for WG at 30 days, between not supplemented treatments and supplemented treatments (P 0.001). Biochemical analysis showed conditions very near among animals of control treatment and animals supplemented with beta-glucan. Histopathological analysis revealed lesions and cytoplasmic rarefaction in 100% of the samples, suggesting protein deficiency. The beta-glucan reduced the effects of stress in bullfrog and has shown hepatoprotective effect, but the probiotic Bacillus subtilis was not demonstrating the same effect.(AU)

Avaliou-se o efeito hepatoprotetor da suplementação alimentar com probiótico (Bacillus subtillis) e com betaglucana em rãs-touro submetidas à condição de estresse por adensamento. Os animais foram distribuídos nos tratamentos: T1: 100 animais m-2 (controle); T2: 236 animais m-2; T3: 236 animais m-2, suplementados com probiótico; e, T4: 236 animais m-2, suplementados com betaglucana. Avaliou-se sobrevivência, ganho em peso (GP) e a condição bioquímica e histopatológica dos fígados. Não foi observada diferença estatística para a sobrevivência (P>0,05), porém foram observadas diferenças significativas para o GP aos 30 dias, entre os tratamentos não suplementados e os suplementados (P 0,001). As avaliações bioquímicas mostraram condições muito próximas entre os animais do tratamento controle e aqueles suplementados com betaglucana. A análise histopatológica mostrou lesões e rarefação citoplasmática em 100% das amostras, sugerindo deficiência proteica. A betaglucana mostrou efeito hepatoprotetor, reduzindo os efeitos do estresse sobre o fígado de rã-touro, porém o probiótico Bacillus subtillis não apresentou o mesmo potencial.(AU)

Resposta hepática à suplementação alimentar em rãs-touro sob condição de estresse / Liver response to dietary supplementation in bullfrog under stress condition

Evaluate the hepatoprotective effect of dietary supplementation with the probiotic (Bacillus subtilis) and with beta-glucan on bullfrog in stress of high stocking density. Animals were assigned in treatments: T1: 100 animals m-2 (control); T2: 236 animals m-2; T3: 236 animals m-2 supplemented with probiotic; T4: 236 animals m-2 supplemented with beta-glucan. Evaluated survival, weight gain (WG) and the condition of liver biochemistry and histopathology. There was no statistical difference in survival between treatments (P>0.05), but were observed significant differences for WG at 30 days, between not supplemented treatments and supplemented treatments (P 0.001). Biochemical analysis showed conditions very near among animals of control treatment and animals supplemented with beta-glucan. Histopathological analysis revealed lesions and cytoplasmic rarefaction in 100% of the samples, suggesting protein deficiency. The beta-glucan reduced the effects of stress in bullfrog and has shown hepatoprotective effect, but the probiotic Bacillus subtilis was not demonstrating the same effect.

Avaliou-se o efeito hepatoprotetor da suplementação alimentar com probiótico (Bacillus subtillis) e com betaglucana em rãs-touro submetidas à condição de estresse por adensamento. Os animais foram distribuídos nos tratamentos: T1: 100 animais m-2 (controle); T2: 236 animais m-2; T3: 236 animais m-2, suplementados com probiótico; e, T4: 236 animais m-2, suplementados com betaglucana. Avaliou-se sobrevivência, ganho em peso (GP) e a condição bioquímica e histopatológica dos fígados. Não foi observada diferença estatística para a sobrevivência (P>0,05), porém foram observadas diferenças significativas para o GP aos 30 dias, entre os tratamentos não suplementados e os suplementados (P 0,001). As avaliações bioquímicas mostraram condições muito próximas entre os animais do tratamento controle e aqueles suplementados com betaglucana. A análise histopatológica mostrou lesões e rarefação citoplasmática em 100% das amostras, sugerindo deficiência proteica. A betaglucana mostrou efeito hepatoprotetor, reduzindo os efeitos do estresse sobre o fígado de rã-touro, porém o probiótico Bacillus subtillis não apresentou o mesmo potencial.

Liver histopathological changes in breeding bullfrogs - doi: 10.4025/actascibiolsci.v35i4.15981

In order to complement the histopathological study of juveniles and tadpoles of the bullfrog, Lithobathes catesbeianus, fed commercial diet used by frog farms in Rio de Janeiro, containing 40% crude protein, we performed necropsy and histopathology of the liver to establish a relationship between the quality of crude protein in the diet and animal health. For this, it was used twenty breeding male bullfrogs, with average weight 591.30 g (± 91.90 g) and length 165.02 mm (± 14.22 mm), and ten females with average weight and length of 629.80 g (± 134.47 g) and 169.32 mm (± 21.82 mm). The liver histopathology showed hyperemia, high number of melanomacrophages and cytoplasmic rarefaction, probably due to protein deficiency and fatty liver degeneration and presence of inflammatory processes. These lesions indicate a degenerative nutritional process. These findings suggest that the animals were fed with proteins of low biological value, indicating poor quality of feed, undermining the sanity. The impairment of liver function by these injuries will lead to reduced availability of precursors of sex hormones, since the liver is important in the metabolism of the same, and reproductive performance of these animals may be impaired.

Liver histopathological changes in breeding bullfrogs / Alterações histopatológicas do fígado de reprodutores de rã-touro

In order to complement the histopathological study of juveniles and tadpoles of the bullfrog, Lithobathes catesbeianus, fed commercial diet used by frog farms in Rio de Janeiro, containing 40% crude protein, we performed necropsy and histopathology of the liver to establish a relationship between the quality of crude protein in the diet and animal health. For this, it was used twenty breeding male bullfrogs, with average weight 591.30 g (± 91.90 g) and length 165.02 mm (± 14.22 mm), and ten females with average weight and length of 629.80 g (± 134.47 g) and 169.32 mm (± 21.82 mm). The liver histopathology showed hyperemia, high number of elanomacrophages and cytoplasmic rarefaction, probably due to protein deficiency and fatty liver degeneration and presence of inflammatory processes. These lesions indicate a degenerative nutritional process. These findings suggest that the animals were fed with proteins of low biological value, indicating poor quality of feed, undermining the sanity. The impairment of liver function by these injuries will lead to reduced availability of precursors of sex hormones, since the liver is important in the metabolism of the same, and reproductive performance of these animals may be impaired.

Em complementação ao estudo histopatológico de girinos e imagos da rã-touro, Lithobates catesbeianus, alimentados com ração comercial utilizada pelos ranários do Rio de Janeiro, contendo 40% de proteína bruta, realizou-se necropsia e histopatologia do fígado de reprodutores, procurando uma relação entre a qualidade de proteína bruta na ração e a sanidade do animal. Foram utilizados 20 reprodutores de rã-touro, dez machos com peso de 591,30 g (± 91,90 g) e comprimento médios de 165,02 mm (± 14,22 mm), e dez fêmeas com peso e comprimento médios de 629,80 g (± 134,47 g) e 169,32 mm (± 21,82 mm). Os resultados da histopatologia mostraram que o fígado dos reprodutores, tanto machos quanto fêmeas apresentavam hiperemia, grande número de melanomacrófagos e rarefação citoplasmática provavelmente por deficiência proteica e quadro de degeneração hepática gordurosa. Tais lesões indicam quadro degenerativo nutricional. Também presente processos inflamatórios focais. Estes achados sugerem uma alimentação com proteínas de baixo valor biológico, indicando má qualidade da ração, comprometendo sua sanidade. Pode-se inferir que o comprometimento das funções hepáticas, irá diminuir a disponibilidade de precursores dos hormônios sexuais, pois o fígado é importante na metabolização dos mesmos, e a performance reprodutiva destes animais poderá ser prejudicada.

Liver histopathological changes in breeding bullfrogs - doi: 10.4025/actascibiolsci.v35i4.15981

In order to complement the histopathological study of juveniles and tadpoles of the bullfrog, Lithobathes catesbeianus, fed commercial diet used by frog farms in Rio de Janeiro, containing 40% crude protein, we performed necropsy and histopathology of the liver to establish a relationship between the quality of crude protein in the diet and animal health. For this, it was used twenty breeding male bullfrogs, with average weight 591.30 g (± 91.90 g) and length 165.02 mm (± 14.22 mm), and ten females with average weight and length of 629.80 g (± 134.47 g) and 169.32 mm (± 21.82 mm). The liver histopathology showed hyperemia, high number of melanomacrophages and cytoplasmic rarefaction, probably due to protein deficiency and fatty liver degeneration and presence of inflammatory processes. These lesions indicate a degenerative nutritional process. These findings suggest that the animals were fed with proteins of low biological value, indicating poor quality of feed, undermining the sanity. The impairment of liver function by these injuries will lead to reduced availability of precursors of sex hormones, since the liver is important in the metabolism of the same, and reproductive performance of these animals may be impaired.  

Novel, panzootic and hybrid genotypes of amphibian chytridiomycosis associated with the bullfrog trade.

Global amphibian declines are linked with the presence of specific, highly virulent genotypes of the emerging fungal disease chytridiomycosis caused by Batrachochytrium dendrobatidis (Bd) known as the global panzootic lineage (Bd-GPL). The global trade in amphibians for human consumption is suspected to have facilitated emergence of the disease, but evidence to support this is largely lacking. Here, we investigated the role the Lithobates catesbeianus (North American bullfrog) trade in spreading Bd genotypes by comparing strains associated with L. catesbeianus to a global panel using 36 sequenced loci from multiple chromosomal regions. Most bullfrogs were infected with Bd-GPL genotypes, but we also detected novel, highly divergent Bd genotypes (Bd-Brazil) from a live bullfrog in a US market and from native Brazilian anurans in the Atlantic Forest where bullfrogs are widely farmed. Sexual reproduction was also detected for the first time in Bd in the form of a hybrid genotype between the Bd-GPL and Bd-Brazil lineages in the Atlantic Forest. Despite the demonstration that ribosomal RNA types in Bd fail to undergo concerted evolution (over 20 sequence types may be found in a single strain), the Bd-GPL and Bd-Brazil lineages form largely separate clusters of related internal transcribed spacer (ITS) RNA sequences. Using ITS sequences, we then demonstrate the presence of Bd-Brazil in Japan, primarily on invasive L. catesbeianus. The finding that Bd is capable of sexual reproduction between panzootic and endemic genotypes emphasizes the risk of international wildlife trade as a source of additional Bd epizootics owing to hybridization.

OCCURRENCE OF Cryptosporidium spp. OOCySTS IN BULLFROG (Lithobates catesbeianus SHAW, 1802) / OCORRÊNCIA DE OOCISTOS DE Cryptosporidium spp. EM RÃs-TOURO (Lithobates catesbeianus SHAW, 1802), NO MUNICÍPIO DE UBERLÂNDIA, MG, BRASIL

The objective of the present study was to detect the occurrence of  Cryptosporidium spp. oocysts in intestinal mucosa scraping and feces samples from bullfrogs (Lithobates catesbeianus Shaw, 1802) confined at the school farm of Federal University of Uberlândia, MG, Brazil. The modified Ziehl Neelsen staining technique was used. Out of 28 fecal samples, 14.28% (4/28) were positive for Cryptosporidium spp., with 7.14% positive samples in feces of frogs under 3 months of age and 7.14% in feces of frogs over 3 months of age. Form the 16 intestinal scraping samples, 75% (10/16) were positive, 50% in tadpoles and 25% in adult frogs. This research allows the situation identification and the recommendation of measures to control this parasite, aiming at preventing or delaying the appearance of this parasitism in other animals, since it an important zoonosis to public health.KEYWORDS: Cryptosporidium spp, protozoan, bullfrog, Lithobates catesbeianus

O presente trabalho teve como objetivo detectar a ocorrência de oocistos de Cryptosporidium spp. em raspagens da mucosa intestinal e amostras de fezes de rãs-touro (Lithobates catesbeianus, Shaw, 1802) em confinamento, na fazenda escola da Universidade Federal de Uberlândia, MG, utilizando a técnica de coloração de Ziehl Neelsen modificada. Em 28 amostras fecais, 14,28% (4/28) foram positivas para Cryptosporidium spp., sendo 7,14% positivas em fezes de rãs com menos de três meses e 7,14% positivas em fezes de rãs com mais de três meses. Em dezesseis amostras de raspagem intestinal, 75% (10/16) foram positivas, sendo 50% em girinos e 25% em rãs adultas. Esta pesquisa permite identificar a situação e recomendar medidas de controle, visando a prevenir ou a retardar o aparecimento dessa parasitose nos demais animais, visto que trata-se de uma zoonose importante em saúde pública.PALAVRAS-CHAVES: Cryptosporidium spp, protozoário, rã-touro, Lithobates catesbeianus.?

Influence of incorporation of vitamin c to the diet in the productive performance of bullfrog Lithobates catesbeianus post-metamorphosed / Influência da incorporação de vitamina c à dieta no desempenho produtivo de rãs-touro Lithobates catesbeianus pós-metamorfoseadas

The experiment was developed in Marta Farm, Tremembé city, located in the State of São Paulo - Brazil, using a frogculture commercial project. The aim of this study was evaluate the performance (growth, survival and feed conversion) of bullfrogs Lithobates catesbeianus, post-metamorphosed fed with diets containing different amounts of vitamin C and their performance with the temperature. The animals were kept in 24 boxes of (2.0 x 1.0 m) with an initial density of 50 animals per square meter. The following levels of supplementation in the diet were tested: 0, 250, 500, 750, 1,000 and 2,000 mg vitamin C kg-1 of diet. The experimental design was completely randomized, with six treatments and four replicates. The parameters evaluated were: feed intake, weight gain, feed conversion and survival tax. The animals were weighed at the beginning of the experiment and every 30 days and recorded daily to room temperature. The percentage of food intake decreased with the growth of the frogs, from 3.85 to 1.2% of the live weight, and the mean of temperature decreased from 28 to 20.1°C. It was concluded that there was no influence of vitamin C on the performance (growth, survival and feed conversion) of bullfrogs in the growing stage.

O experimento foi desenvolvido no projeto de ranicultura da Fazenda Marta, localizada no município de Tremembé, no Estado de São Paulo Brasil. O objetivo foi verificar o desempenho produtivo (crescimento, sobrevivência, conversão alimentar) de rãs-touro, Lithobates catesbeianus, pós-metamorfoseadas alimentadas com dieta contendo diferentes quantidades de vitamina C e sua performance em função da temperatura. Os animais foram mantidos em 24 tanques de 2,0 x 1,0 m, em uma densidade inicial de 50 animais por metro quadrado. Foram testados os seguintes níveis de suplementação na dieta: 0, 250, 500, 750, 1.000 e 2.000 mg de vitamina C kg-1 de ração. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado, com seis tratamentos e quatro réplicas. Os parâmetros avaliados foram: consumo de ração, ganho de peso, conversão alimentar e taxa de sobrevivência. Os animais foram pesados no início do experimento e a cada 30 dias e diariamente registrou-se a temperatura ambiente. O percentual de consumo de ração reduziu, à medida que as rãs cresceram, de 3,85 para 1,20% do peso vivo e a temperatura ambiente diminuiu de 28,0 para 20,1°C. Pode-se concluir que não houve influência da vitamina C sobre o desempenho produtivo (crescimento, sobrevivência e conversão alimentar) de rãs-touro na fase de engorda.

OCCURRENCE OF Cryptosporidium spp. OOCySTS IN BULLFROG (Lithobates catesbeianus SHAW, 1802) / OCORRÊNCIA DE OOCISTOS DE Cryptosporidium spp. EM RÃs-TOURO (Lithobates catesbeianus SHAW, 1802), NO MUNICÍPIO DE UBERLÂNDIA, MG, BRASIL

The objective of the present study was to detect the occurrence of  Cryptosporidium spp. oocysts in intestinal mucosa scraping and feces samples from bullfrogs (Lithobates catesbeianus Shaw, 1802) confined at the school farm of Federal University of Uberlândia, MG, Brazil. The modified Ziehl Neelsen staining technique was used. Out of 28 fecal samples, 14.28% (4/28) were positive for Cryptosporidium spp., with 7.14% positive samples in feces of frogs under 3 months of age and 7.14% in feces of frogs over 3 months of age. Form the 16 intestinal scraping samples, 75% (10/16) were positive, 50% in tadpoles and 25% in adult frogs. This research allows the situation identification and the recommendation of measures to control this parasite, aiming at preventing or delaying the appearance of this parasitism in other animals, since it an important zoonosis to public health.KEYWORDS: Cryptosporidium spp, protozoan, bullfrog, Lithobates catesbeianus

O presente trabalho teve como objetivo detectar a ocorrência de oocistos de Cryptosporidium spp. em raspagens da mucosa intestinal e amostras de fezes de rãs-touro (Lithobates catesbeianus, Shaw, 1802) em confinamento, na fazenda escola da Universidade Federal de Uberlândia, MG, utilizando a técnica de coloração de Ziehl Neelsen modificada. Em 28 amostras fecais, 14,28% (4/28) foram positivas para Cryptosporidium spp., sendo 7,14% positivas em fezes de rãs com menos de três meses e 7,14% positivas em fezes de rãs com mais de três meses. Em dezesseis amostras de raspagem intestinal, 75% (10/16) foram positivas, sendo 50% em girinos e 25% em rãs adultas. Esta pesquisa permite identificar a situação e recomendar medidas de controle, visando a prevenir ou a retardar o aparecimento dessa parasitose nos demais animais, visto que trata-se de uma zoonose importante em saúde pública.PALAVRAS-CHAVES: Cryptosporidium spp, protozoário, rã-touro, Lithobates catesbeianus.?

Influence of incorporation of vitamin c to the diet in the productive performance of bullfrog Lithobates catesbeianus post-metamorphosed / Influência da incorporação de vitamina c à dieta no desempenho produtivo de rãs-touro Lithobates catesbeianus pós-metamorfoseadas

The experiment was developed in Marta Farm, Tremembé city, located in the State of São Paulo - Brazil, using a frogculture commercial project. The aim of this study was evaluate the performance (growth, survival and feed conversion) of bullfrogs Lithobates catesbeianus, post-metamorphosed fed with diets containing different amounts of vitamin C and their performance with the temperature. The animals were kept in 24 boxes of (2.0 x 1.0 m) with an initial density of 50 animals per square meter. The following levels of supplementation in the diet were tested: 0, 250, 500, 750, 1,000 and 2,000 mg vitamin C kg-1 of diet. The experimental design was completely randomized, with six treatments and four replicates. The parameters evaluated were: feed intake, weight gain, feed conversion and survival tax. The animals were weighed at the beginning of the experiment and every 30 days and recorded daily to room temperature. The percentage of food intake decreased with the growth of the frogs, from 3.85 to 1.2% of the live weight, and the mean of temperature decreased from 28 to 20.1°C. It was concluded that there was no influence of vitamin C on the performance (growth, survival and feed conversion) of bullfrogs in the growing stage.

O experimento foi desenvolvido no projeto de ranicultura da Fazenda Marta, localizada no município de Tremembé, no Estado de São Paulo Brasil. O objetivo foi verificar o desempenho produtivo (crescimento, sobrevivência, conversão alimentar) de rãs-touro, Lithobates catesbeianus, pós-metamorfoseadas alimentadas com dieta contendo diferentes quantidades de vitamina C e sua performance em função da temperatura. Os animais foram mantidos em 24 tanques de 2,0 x 1,0 m, em uma densidade inicial de 50 animais por metro quadrado. Foram testados os seguintes níveis de suplementação na dieta: 0, 250, 500, 750, 1.000 e 2.000 mg de vitamina C kg-1 de ração. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado, com seis tratamentos e quatro réplicas. Os parâmetros avaliados foram: consumo de ração, ganho de peso, conversão alimentar e taxa de sobrevivência. Os animais foram pesados no início do experimento e a cada 30 dias e diariamente registrou-se a temperatura ambiente. O percentual de consumo de ração reduziu, à medida que as rãs cresceram, de 3,85 para 1,20% do peso vivo e a temperatura ambiente diminuiu de 28,0 para 20,1°C. Pode-se concluir que não houve influência da vitamina C sobre o desempenho produtivo (crescimento, sobrevivência e conversão alimentar) de rãs-touro na fase de engorda.

Estudo da resistência a antimicrobianos das principais bactérias isoladas de mastite bovina, no estado de Säo Paulo, no período de 1980 a 1993, e sua relaçäo com a saúde pública / Study of the resistence to antimicrobials of the principal bacteria isolated from bovine mastitis in the state of Säo Paulo in the period 1980 to 1993 and its relation to public health

Estuda a resistência bacteriana frente a antimicrobianos utilizados no tratamento da mastite bovina no período de 1980 a 1993; a significância das diferenças percentuais e a relaçäo com a Saúde Pública. O teste de sensibilidade (antibiograma) foi de difusäo em ágar com uso de discos, testando os antimicrobianos ampicilina, cloranfenicol, gentamicina, kanamicina, penicilina e tetracicina frente aos agentes etiológicos Staphylococcus sp, Streptococcus sp e Escherichia coli. Os resultados säo apresentados a cada 2 anos, com 7 sub-períodos, e analisados estatisticamente pelo teste de duas proporçöes, com aproximaçäo normal e significância de "t"alfa 0,05. Nas séries históricas, as tendências foram, na sua grande maioria, de queda dos percentuais de resistência. Para o Staphylococcus sp, a gentamicina apresentou os menores porcentuais de resistência e poucas diferenças significativas, seguido pelo cloranfenicol, kanamicina e tetraciclina. A penicilina apresentou altos percentuais de resistência. Para o Streptococcus sp, os menores percentuais de resistência foram frente ao cloranfenicol e penicilina, com o cloranfenicol apresentando os menores números de diferenças significativas. Para a E. coli, os menores percentuais de resistência foram frente à gentamicina e cloranfenicol, sendo a gentamicina, o antimicrobiano com menor número de diferenças significativas. As diferenças significativas tanto ocorreram pela queda como pelo aumento dos percentuais de resistência. Os resultados indicaram uma grande variaçäo dos percentuais de resistência para estes agentes etiológicos, permitindo destacar a importância do conhecimento epidemiológico para o uso de antimicrobianos

Bacterial prevalence in necrosis of freshwater shrimps (Macrobrachium rosembergii, Decapoda, Palaemonidae) / PREVALÊNCIA VACTERIANA EM NECROSE DE CAMARÃO DE ÁGUA DOCE (Macrobrachium rosembergii, DECAPODA, PALAEMONIDAE)

The authors present bacterial agents occurrence in necrosis of cultured freshwater shrimps (Macrobrachium rosenbergii) in São Paulo State, Brazil. The shrimps showed black spot of various size on exoskeleton surface, on the carapace and abdomen, rostrum, uropods and periopods. In the bacterial cultivation it was isolated the genera Aeromonas, Pseudomonas and Vibrio, chitinolitic bacteria inhabitant of water and opportunist. Those bacteria utilize previous lesions of the exoskeleton as alimentary source determining necrosis, mutilation and death depending upon the commitment surface of the body. Besides these agents, it was isolated coagulase negative Staphylococcus sp., Escherichia coli and Proteus sp. Those lesions were determined by failures in alimentary and sanitary management in shrimp farms, as well as in the control of populacional density of pounds.

Estudou-se a microbiota bacteriana de casos de necrose do exoesqueleto de camarões de água doce (Macrobrachium rosenbergii) em criação comercial situada no Litoral Sul do Estado de São Paulo, Brasil. As lesões se apresentavam como manchas escuras,"black spots", de tamanhos variados, na superfície do exoesqueleto e abdome, no rostro, nos urópodes, nos pereiópodes e nas pinças. Na cultura bacteriológica isolaram-se os gêneros Aeromonas, Pseudomonas e Vibrio, bactérias quitinolíticas comumente associadas a esta enfermidade. Estes micro-organismos estão presentes na água e se comportam como oportunistas. Aproveitando lesões prévias do exoesqueleto, passam a utilizá-lo como substrato, causando necrose nas áreas afetadas e mutilações, ou mesmo morte, dependendo da extensão e comprometimento da superfície corporal atingida. Além destes agentes oportunistas, foram também isolados Staphylococcus sp. coagulase negativa, Escherichia coli e Proteus sp. Estas lesões foram decorrentes de falhas no manejo alimentar e sanitário e do descontrole da densidade populacional nos tanques de criação.

Bacterial prevalence in necrosis of freshwater shrimps (Macrobrachium rosembergii, Decapoda, Palaemonidae) / PREVALÊNCIA VACTERIANA EM NECROSE DE CAMARÃO DE ÁGUA DOCE (Macrobrachium rosembergii, DECAPODA, PALAEMONIDAE)

The authors present bacterial agents occurrence in necrosis of cultured freshwater shrimps (Macrobrachium rosenbergii) in São Paulo State, Brazil. The shrimps showed black spot of various size on exoskeleton surface, on the carapace and abdomen, rostrum, uropods and periopods. In the bacterial cultivation it was isolated the genera Aeromonas, Pseudomonas and Vibrio, chitinolitic bacteria inhabitant of water and opportunist. Those bacteria utilize previous lesions of the exoskeleton as alimentary source determining necrosis, mutilation and death depending upon the commitment surface of the body. Besides these agents, it was isolated coagulase negative Staphylococcus sp., Escherichia coli and Proteus sp. Those lesions were determined by failures in alimentary and sanitary management in shrimp farms, as well as in the control of populacional density of pounds.

Estudou-se a microbiota bacteriana de casos de necrose do exoesqueleto de camarões de água doce (Macrobrachium rosenbergii) em criação comercial situada no Litoral Sul do Estado de São Paulo, Brasil. As lesões se apresentavam como manchas escuras,"black spots", de tamanhos variados, na superfície do exoesqueleto e abdome, no rostro, nos urópodes, nos pereiópodes e nas pinças. Na cultura bacteriológica isolaram-se os gêneros Aeromonas, Pseudomonas e Vibrio, bactérias quitinolíticas comumente associadas a esta enfermidade. Estes micro-organismos estão presentes na água e se comportam como oportunistas. Aproveitando lesões prévias do exoesqueleto, passam a utilizá-lo como substrato, causando necrose nas áreas afetadas e mutilações, ou mesmo morte, dependendo da extensão e comprometimento da superfície corporal atingida. Além destes agentes oportunistas, foram também isolados Staphylococcus sp. coagulase negativa, Escherichia coli e Proteus sp. Estas lesões foram decorrentes de falhas no manejo alimentar e sanitário e do descontrole da densidade populacional nos tanques de criação.

Clostridia presence in bullfrog (Rana catesbeiana Shaw, 1802) mouth myiasis lesions / PRESENÇA DE CLOSTRIDIA EM LESÕES DE MIÍASE BUCAL EM RÃ TOURO (Rana catesbeiana SHAW, 1802)

It is described, in two different occurrences, the presence of clostridia in mouth lesions of bullfrog, Rana catesbeiana, caused by fly larvae of commercial froggery in São Paulo State, Brazil. The lesion determined in tongue and surrounding mucous a destruction with palate perforation near the eye and mouth bottom. The bacteriological research lead to the identification of Clostridium perfringens and Cl. sordellii, in the point of view of anaerobes. Among aerobes, it was found Citrobacter sp and Aeromonas sp, both opportunistic and well known as pathogens to anfibians, besides Escherichia coli and Shigella sp. The lesion contamination with aerobic bacteria associated with local blood circulation produced local necrosis, what contributed to the development of anaerobic agents.

Relata-se, em duas ocorrências, a presença de clostridia em lesões bucais provocadas pela ação de larvas de mosca em rãs touro, Rana catesbeiana, observadas em ranários comerciais no Estado de São Paulo, Brasil. As lesões determinaram destruição parcial da língua e de áreas da mucosa e tecidos adjacentes, com perfurações do palato junto ao olho e assoalho bucal. A pesquisa bacteriológica possibilitou determinar a presença de anaeróbios como Clostridium perfringens e C. sordellii. Entre os agentes aeróbios deve-se destacar Citrobacter sp e Aeromonas sp, ambos de características oportunísticas e de reconhecida importância na patologia de anfíbios, além de Escherichia coli e Shigella sp. A contaminação das lesões por bactérias aeróbias e o comprometimento da irrigação sanguínea levaram à necrose, favorecendo a instalação e o consequente desenvolvimento de agentes anaeróbios.

Nodules with calcium deposit in bullfrog (Rana catesbeiana Shaw, 1802) tadpole and imago / NÓDULOS COM DEPÓSITO DE CÁLCIO EM GIRINOS E IMAGOS DE RÃ TOURO (Rana catesbeiana SHAW, 1802)

It is described the occurrence of nodule in tadpole and imago of bullfrog Rana catesbeiana in São Paulo State, Brazil. Initially it was observed a great mortality of tadpole in metamorphosis phases and after that the mortality was also observed in imago and young frogs. For tadpoles this pathology was noted in subcutaneous tissue of on the tail and posterior portion of head. The nodules were round, with 2,0 3.0 mm of diameter with a dense content The histopathological examination showed a calcium deposit inside the nodulation without abscess characteristic because of the lack of inflammatory cells. The bacteriological examination of the same material revealed the presence of Streptococcus spp; Corynebacterium spp; Citrobacter freundii and Aeromonas hydrophila. The search of alcohol-acid-resistant rods was negative. The principal hypothesis formulated for this occurrence was by metabolic cause, subsequently an infective process      

É relatada a ocorrência de nódulos subcutâneos em girinos e imagos de rã touro, Rana catesbeiana, no Estado de São Paulo, Brasil. Inicialmente foi observada alta mortalidade de girinos nas primeiras fases da metamorfose e posteriormente em imagos e rãs jovens. Os girinos apresentavam formações nodulares subcutâneas na cauda e na porção inferior da cabeça e as rãs jovens, o mesmo tipo de formação na cabeça. Os nódulos eram esféricos, amarelados, capsulados, únicos ou agrupados, medindo de 2 a 3 mm de diâmetro e com conteúdo denso. O exame histopatológico evidenciou na formação nodular um grande depósito de sais de cálcio. Não se observou comprometimento do tecido muscular periférico e não se caracterizou a constituição de abcessos, face à ausência de células inflamatórias. O exame bacteriológico do conteúdo nodular e do fígado revelou a presença de Streptococcus spp; Corynebacterium spp, Citrobacter freundii e Aeromonas hydrophila. A pesquisa de bacilos álcool-ácido resistentes foi negativa. É aventada origem metabólica irritativa, consequente a um processo infeccioso.    

Nodules with calcium deposit in bullfrog (Rana catesbeiana Shaw, 1802) tadpole and imago / NÓDULOS COM DEPÓSITO DE CÁLCIO EM GIRINOS E IMAGOS DE RÃ TOURO (Rana catesbeiana SHAW, 1802)

It is described the occurrence of nodule in tadpole and imago of bullfrog Rana catesbeiana in São Paulo State, Brazil. Initially it was observed a great mortality of tadpole in metamorphosis phases and after that the mortality was also observed in imago and young frogs. For tadpoles this pathology was noted in subcutaneous tissue of on the tail and posterior portion of head. The nodules were round, with 2,0 3.0 mm of diameter with a dense content The histopathological examination showed a calcium deposit inside the nodulation without abscess characteristic because of the lack of inflammatory cells. The bacteriological examination of the same material revealed the presence of Streptococcus spp; Corynebacterium spp; Citrobacter freundii and Aeromonas hydrophila. The search of alcohol-acid-resistant rods was negative. The principal hypothesis formulated for this occurrence was by metabolic cause, subsequently an infective process

É relatada a ocorrência de nódulos subcutâneos em girinos e imagos de rã touro, Rana catesbeiana, no Estado de São Paulo, Brasil. Inicialmente foi observada alta mortalidade de girinos nas primeiras fases da metamorfose e posteriormente em imagos e rãs jovens. Os girinos apresentavam formações nodulares subcutâneas na cauda e na porção inferior da cabeça e as rãs jovens, o mesmo tipo de formação na cabeça. Os nódulos eram esféricos, amarelados, capsulados, únicos ou agrupados, medindo de 2 a 3 mm de diâmetro e com conteúdo denso. O exame histopatológico evidenciou na formação nodular um grande depósito de sais de cálcio. Não se observou comprometimento do tecido muscular periférico e não se caracterizou a constituição de abcessos, face à ausência de células inflamatórias. O exame bacteriológico do conteúdo nodular e do fígado revelou a presença de Streptococcus spp; Corynebacterium spp, Citrobacter freundii e Aeromonas hydrophila. A pesquisa de bacilos álcool-ácido resistentes foi negativa. É aventada origem metabólica irritativa, consequente a um processo infeccioso.