RESUMO
The present study evaluated the efficacy of various culture media for performing the isolation and growth of the rubella virus inoculated into SIRC cells. Rubella virus RA-27/3 strain and RVi/SãoPaulo/BRA99wild type strain (GenBank number DQ458965) were inoculated into SIRC cell line and cultivated in 199, DMEM, MEM and RPMI media. The inoculated cells when examined on phase contrast microscopy showed the characteristic rounded and multipolar cells. The CPE was observed at the first 48 hours cultivation in the respective tested media. The curve of the infectivity increase was higher in the cultures maintained in DMEM and RPMI media. Hence, the SIRC cellular lineage cultivated in DMEM or RPMI media is an excellent substratum for performing the rubella virus isolation. These findings are relevant since the SIRC has been one of the few cell lines described in the literature which presents a cytopathic effect, and on that account it can be useful for carrying out the virus isolation from clinical specimens.
O presente estudo avaliou a eficiência de vários meios de cultura no isolamento e crescimento do vírus da rubéola inoculado na linhagem celular SIRC. O vírus da rubéola padrão RA27/3 e o vírus selvagem RVi/SãoPaulo/BRA99 (GenBank número DQ458965) foram inoculados na linhagem celular SIRC e cultivada nos meios de cultura 199, DMEM, MEM e RPMI. As células inoculadas observadas em microscopia de fase apresentaram aspecto arredondado, com produção de células multinucleadas. O efeito citopático foi observado após 48 horas de cultivo nos respectivos meios de cultura testados e a curva do crescimento da infectividade do vírus foi maior nas células cultivadas em meios DMEM e RPMI. Os resultados obtidos indicam que SIRC é um ótimo substrato para crescimento do vírus da rubéola, uma vez que poucas linhagens celulares descritas na literatura apresentam efeito citopático considerável e mostram que o potencial dessa linhagem celular ser utilizadas para efetuar o isolamento do vírus da rubéola em amostras clínicas.
RESUMO
Owing to the efficient strategies for measles virus (MV) surveillance in São Paulo State, Brazil, no circulation of native measles virus was registered during the period from 2001 to 2007. In Sao Paulo State the imported measles cases were registered, being one in 2001, one in 2002, and in 2005 an unvaccinated 18-month-old child presenting fever and exanthema admitted to a private hospital was the target of epidemiological study. The Center of Epidemiological Surveillance found out that a brother of this child had had a similar disease one week before. The measles virus infection was confirmed at Adolfo Lutz Institute by detecting the MV-specific IgM antibody, by virus isolation on Vero/hSLAM cells culture, and by means of MV-RNA amplification on RT-PCR technique. A region of nucleoprotein gene from isolated virus was amplified. The phylogenetic analysis data showed that the isolated virus corresponded to genotype D5. This genotype circulates in the Asian continent, and it had circulated before in Sao Paulo State.
No estado de São Paulo, Brasil, em função da eficiente estratégia para a vigilância do vírus do sarampo (VS), não houve registro de casos nativos de sarampo no período de 2001 a 2007. No estado de São Paulo foram registrados casos de sarampo importados, sendo 01 paciente em 2001, outro em 2002 e em 2005 foi alvo de investigação uma criança não vacinada, de 18 meses de idade com exantema e febre, que foi admitida em hospital privado. O Centro de Vigilância Epidemiológica descobriu que o irmão desta criança teve uma doença semelhante uma semana antes. A infecção pelo vírus do sarampo foi confirmada no Instituto Adolfo Lutz pela detecção de anticorpo IgM anti-VS, isolamento do vírus por meio de cultivo em células Vero/hSLAM e amplificação de RNA viral por RT-PCR. A região do gene da nucleoproteína do vírus isolado foi amplificada. O resultado da análise filogênica mostrou que o vírus isolado correspondeu ao genótipo D5. Este genótipo circula no continente da Ásia e há relatos sobre sua anterior circulação em São Paulo.
RESUMO
Human parvovirus B19 was identified and characterized in sample collected from a patient who was infected in Japan, and the symptoms as fever and rash appeared after arriving to Brazil. The occurrence of virus infection was confirmed by both assays: Elisa parvovirus B19-specific IgM antibody detection and polymerase chain reaction (PCR). A fragment of NS1-VP1 region was directly submitted to nucleotide sequencing. Partial phylogenetic analysis of B19 sequences, including several sequences available in GenBank, indicated that the isolated HPV B19 corresponded to genotype 1.
O parvovirus humano B19 foi isolado e caracterizado de amostra clínica de um paciente, infectado no Japão, e que apresentou os sintomas de febre e erupção cutânea após sua chegada ao Brasil. A infecção por parvovírus foi confirmada por meio de seguintes ensaios: Elisa para detecção de anticorpos IgM antiparvovirus B19 e técnica de polymerase chain reaction (PCR). Um fragmento da região NS1-VP1 foi diretamente submetido ao seqüenciamento do nucleotídeo. A análise filogenética parcial do B19, frente às várias seqüências disponíveis no GenBank, indicou que PV B19 isolado correspondeu ao genótipo 1.
RESUMO
Recent measles outbreaks in different countries led to an increase of laboratory measles diagnosis. Thus, we developed the IgM-Measles ELISA IAL, using measles virus antigens obtained from cell cultured in microcarriers in order to supply reagent kits to Brazilian public health laboratories. A batch of antigenic reagent was produced and evaluated in the enzyme immunoassay in comparison with clinical diagnosis and with as reference assay (IgM Capture ELISA CDC) data. This study was performed in a positive panel with 70 serum samples from patients with measles, and a negative panel with 132 samples from patients with unrelated diseases and without recent measles or vaccination history. In relation to other diagnostic methods, the IgM ELISA IAL presented sensitivity higher than 97.1%, specificity and precision of 97%, and agreement kappa (k) index higher than 0.94 (P 0.05). Moreover, the IgM antibody profile from measles acute phase revealed by the assay was similar to the reference assay. A practical analysis system for checking the quality of new reagent batches was proposed based on the diagnostic features and agreement kappa index. Our findings suggest that measles antigenic reagents can be produced with reliable quality control system, and supplied to public health laboratories for routine serodiagnosis or population surveys.
Recentes epidemias de sarampo em diferentes países induziram aumento de sorodiagnóstico do sarampo, inclusive em laboratórios de saúde pública brasileiros. Desta forma, desenvolvemos uma técnica de ELISA IgM IAL, utilizando antígenos de vírus do sarampo obtidos de células cultivadas em microcarregadores, com o objetivo de fornecer "kits" de reagentes para diferentes laboratórios. Foi produzida uma partida de reagente para esta técnica imunoenzimática, e os parâmetros diagnósticos foram avaliados em comparação com dados clínicos e de ensaio de referência (ELISA de captura IgM). O reagente foi estudado em um painel positivo tendo 70 soros de pacientes com sarampo e painel negativo com 132 soros de pacientes com doenças não relacionadas e sem história de sarampo recente ou vacinação. A técnica de ELISA IgM IAL demonstrou sensibilidade de 97,1% e 98,6%, especificidades de 97%, e índices kapa de concordância de 0,94 e 0,95 (p 0,05). O perfil de anticorpo IgM de sarampo da fase aguda foi também semelhante ao do ensaio de referência. Foi proposto ainda um sistema prático de análise para o controle de qualidade de reagentes com bases nos achados de validadação do reagente. Nossos achados sugerem que partidas de reagentes do vírus do sarampo podem ser produzidas sucessivamente e utilizadas em laboratórios de saúde pública para sorodiagnóstico de rotina ou inquérito soroepidemiológico de população.
RESUMO
A clinical and laboratory evaluation of 11 children and young adults with measleslike rash was done during the measles outbreak in the Greater São Paulo Metropolitan area at the end of 1996 and spread over the country during 1997. Measles was laboratory confirmed in 07 patients by specific IgM detection in acute serum specimens using an IgM-capture EIA, by specific IgG seroconversion in serum pairs, and by reverse transcription PCR and virus isolation in peripheral blood lymphocytes. Clinical presentations were not always classic; one of the 07 cases had received measles vaccine and corresponded to modified clinical case of measles. The 4 remaining cases were negative for measles and were diagnosed as exanthem subitum (2 cases), scarlet fever and Kawasaki disease. The present study reinforces the view that clinical features alone are not sufficient for establishing an accurate diagnosis in the post-vaccine era, and a surveillance system based on sensitive laboratory results is needed so that it can confirm IgM-negative measles cases.
Apresenta-se um estudo sobre a avaliação clínica e laboratorial de crianças e adultos jovens com exantema semelhante ao sarampo, durante a ocorrência do surto epidêmico de sarampo na região metropolitana da Grande São Paulo no final de 1996 que se alastrou por todo o país durante o ano de 1997. O diagnóstico laboratorial de sarampo foi firmado em 7 dos 11 pacientes examinados, por detecção direta de IgM específico em amostras de soro da fase aguda da doença, por soroconversão de IgG em um par de amostras da fase aguda e convalescente, pelo isolamento do vírus em culturas de linhagem B95a e pela detecção do RNA viral por PCR em linfócitos do sangue periférico e na urina. O quadro clínico apresentado pelos pacientes nem sempre correspondeu à forma clássica do sarampo. Um jovem adulto, que havia sido vacinado contra o sarampo, apresentou um quadro clínico modificado. Os 4 casos restantes foram negativos em todas as provas laboratoriais para o sarampo, tendo diagnóstico final de exantema súbito (2 casos), escarlatina e Doença de Kawasaki. O presente estudo reforça o ponto de vista de que os sinais e sintomas clínicos são geralmente insuficientes para estabelecer um diagnóstico preciso de sarampo na era pós-vacinal, sendo indispensável um sistema de vigilância baseado em resultados laboratoriais que confirmam todos os casos suspeitos, inclusive os casos de sarampo com sorologia IgM-negativa