Caracterización molecular del gen GBA en pacientes cubanos con enfermedad de Gaucher / Molecular characterization of the GBA gene in Cuban patients with Gaucher disease

La enfermedad de Gaucher (EG) es el trastorno relacionado con el depósito lisosomal de mayor prevalencia a nivel mundial. Presenta un patrón de herencia autosómico recesivo y se origina fundamentalmente por mutaciones en el gen GBA, localizado en la región cromosómica 1q21, que codifica la enzima lisosomal ácido β-glucosidasa. En el presente trabajo se describen los resultados obtenidos por el laboratorio de Biología Molecular del Centro Nacional de Genética Médica, La Habana, Cuba, en el análisis del gen GBA en pacientes cubanos con sospecha clínica de la EG. Fueron estudiados siete pacientes no emparentados, caracterizados clínicamente y con diagnóstico bioquímico y/o histológico. Se realizó el estudio de cuatro mutaciones mediante amplificación de secuencias del gen GBA y digestión con enzimas de restricción. En los casos en que ninguna de las mutaciones estudiadas por análisis directo estuvo presente, las muestras se sometieron a cribado de mutaciones y secuenciación de ADN. El análisis molecular permitió identificar la mutación presente en el 100(percent) de los cromosomas analizados. Fueron detectadas las mutaciones L444P, N370S e I403T. El presente estudio estableció una metodología para el diagnóstico por biología molecular de la enfermedad de Gaucher en la población cubana que permite ofrecer un servicio diagnóstico efectivo y rápido en pacientes con sospecha de la enfermedad y en posibles portadores…(AU)

Análisis genético molecular de las mutaciones c.2299delG y c.2276C>G en el gen USH2A en pacientes cubanos con síndrome Usher tipo 2 / Genetic analysis of c.2299delG and c.2276C>G mutations in USH2A gene in Cuban patients with Usher syndrome type 2

El síndrome Usher tipo 2 (USH2) es una entidad clínica con herencia autosómica recesiva, caracterizada por una pérdida auditiva neurosensorial moderada a severa sin alteración vestibular, y pérdida visual progresiva debido a retinosis pigmentaria. Alteraciones en tres genes pueden causar la enfermedad, siendo la mutación c.2299delG, en el gen USH2A, la más frecuente en varios países. La mutación c.2276C>G (p.C759F), también localizada en USH2A, ha sido descrita en pacientes con retinosis pigmentaria recesiva no sindrómica o con USH2. El espectro de mutaciones para los genes implicados en el síndrome Usher en los pacientes cubanos aún no ha sido establecido. Este trabajo tuvo como objetivo analizar la presencia de las mutaciones c.2299delG y c.2276C>G en pacientes cubanos con sospecha clínica de USH2. Fueron estudiados 40 individuos no emparentados. El análisis genético molecular se realizó mediante el método de PCR-digestión enzimática, seguido de electroforesis. La mutación c.2299delG estuvo presente en 7 de los 40 casos estudiados (17,5(percent); tres resultaron homocigóticos y cuatro heterocigóticos. La mutación c.2276C>G no fue detectada en ninguno de los pacientes estudiados. La introducción del diagnóstico molecular de estas mutaciones al servicio asistencial, contribuye al mejoramiento del asesoramiento genético a las familias cubanas donde se segrega la enfermedad. Se deben continuar los estudios moleculares para identificar otras mutaciones presentes en los genes implicados en el USH2 en la población cubana…(AU)

Diagnóstico molecular del síndrome de X frágil mediante PCR específica de metilación / Molecular diagnosis of Fragile X syndrome through methylation-specific PCR

El síndrome de X frágil (SXF) es causado por el silenciamiento epigenético del gen FMR1, debido al incremento por encima de 200 repeticiones del trinucleótido CGG localizado en su región 5 no traducida. Las expansiones entre 55 y 200 repeticiones, denominadas premutación (PM), tienden a expandirse a mutación completa (MC) cuando se transmiten por vía materna. Los individuos con PM pueden desarrollar el síndrome de temblor/ataxia asociado a X frágil o insuficiencia ovárica primaria asociada a X frágil (FXPOI). En este trabajo se describen los resultados del análisis molecular del gen FMR1 en 251 individuos con sospecha clínica de SXF o con historia familiar de esta enfermedad, así como en 14 fetos de madres con riesgo de tener hijos afectados. El análisis se realizó empleando PCR específica de metilación. Se identificaron 16 varones y 4 hembras con MC, 3 varones mosaicos, y 4 varones y 21 mujeres con PM, 8 de ellas con un alto riesgo de transmitir la enfermedad. Se confirmó el diagnóstico clínico de FXPOI en dos mujeres y de SXF en 20 pacientes con discapacidad intelectual. La distribución de frecuencias alélicas difiere de la reportada para otras poblaciones…(AU)

Distribución de las mutaciones más frecuentes de fibrosis quística en Cuba / Distribution of the most frequent cystic fibrosis mutations in Cuba

Se han identificado más de 1900 mutaciones en el gen CFTR, responsable de la fibrosis quística; algunas de ellas son frecuentes en la mayoría de las poblaciones, mientras que otras caracterizan a una población o familia en particular. Dada la heterogenicidad multinacional y teniendo en cuenta los origenes étnicos de la población cubana, el objetivo de este estudio fue caracterizar la distribución de las mutaciones mas frecuentes en las diferentes regiones del país. Se extrajo ADN a partir de muestras de sangre periférica. La detección de p.F508del, p.G542X, p.R1162X, p.R334W, p.R553X y c.3120+1G>A se realizó mediante la Reacción en Cadena de la Polimerasa, seguido de una digestión enzimática y electroforesis en gel de agarosa. Posteriormente se calculó la frecuencia de las mutaciones relacionadas para cada una de las regiones del país. De los 252 pacientes estudiados, 106 fueron de la región Occidental, 65 de la central y 81 de la región Este del país. Teniendo en cuenta el origen étnico de nuestra población, cabe esperar una heterogeneidad elevada de la fibrosis quística. Las mutaciones más frecuentes detectadas están distribuidas de forma general por toda la isla, en relación con el impacto de los genes europeos, africanos y nativo-americanos, así como en dependencia de la migración entre las diferentes regiones del país…(AU)

Implementación del diagnóstico molecular de la deficiencia de la alfa-1-antitripsina en Cuba / Alpha 1-antitrypsyn deficiency molecular diagnosis implementation in Cuba

La deficiencia de alfa-1-antitripsina es una enfermedad hereditaria con un patrón de herencia autosómico recesivo. La frecuencia génica reportada en Cuba en la década del año 70 es de 0,022 y 0,019 para las mutaciones Z y S respectivamente, que son las mutaciones más frecuentes. Los síntomas, respiratorios y/o hepáticos, asociados a estas son severos y considerados la segunda causa de transplante hepático en niños. Se presentan los resultados de la estandarización de la técnica de PCR para la detección de las mutaciones S y Z y de la implementación en Cuba de la detección de estas mutaciones asociadas a la deficiencia de alfa-1-antitripsina. Se presentan los resultados del estudio de 24 muestras de pacientes con diagnóstico clínico de la enfermedad y 10 controles sanos, donde se detectaron siete alelos S y un alelo Z, lo que demuestra la capacidad de la técnica para detectar todos los alelos posibles…(AU)

Estudio familiar de las hemofilias A y B: 5 años de experiencia en la detección de portadoras / Family study of hemophilia A and B: 5 years of experience in carrier detection

La hemofilia se caracteriza por ser una enfermedad congénita del trastorno de la coagulación y constituye un desorden recesivo ligado al cromosoma X. El estudio molecular se realiza por estudios indirectos por ser causada por mutaciones heterogéneas en los genes del FVIII y FIX. Se realizó el estudio de 40 familias afectadas con hemofilia A (HA) y 10 hemofilia B (HB). La extracción de ADN se realizó por el método de precipitación salina a 293 muestras de sangre y 19 de líquido amniótico, y se hizo el análisis de los polimorfismos St14, Bcl I y Hind III para la HA y Taq I, Xmn I y Dde I para la HB. Se usó la técnica de PCR. En el caso de la HA se obtuvo el 35 por ciento de informatividad para St14 y Hind III y 32,5 para Bcl 1. El polimorfismo Dde I fue el más informativo para la HB con el 33 por ciento; mientras que Taq I representó el 10 por ciento de informatividad y XmnI el 0 por ciento. Se comprobó que de las 40 familias analizadas con HA, 23 fueron informativas. Por otra parte, fueron informativas 4 familias de las afectadas con HB. Se realizaron 19 diagnósticos prenatales con previa determinación del sexo fetal, incluidos 3 varones enfermos

Hemophilia is a congenital disease of coagulation disorder and it is a recessive disorder linked to X-chromosome. The molecular study is conducted by indirect studies due to it is caused by heterogeneous mutations in gen of FVIII and FIX in 40 families with hemophilia A (HA) and 10 with hemophilia B (HB). DNA extraction was carried out by saline precipitation method in 293 blood samples and 19 samples of amniotic fluid, as well as the analysis of St14, Bcl I and Hind III polymorphism for the AH and Taq I, Xmn I and Dde I for BH. The PCR technique was used. In the caser of AH it was possible to achieve a 35 percent of information for St14 and Hind III and a 32.5 percent for Bcl. Dde polymorphism supplied more information for BH for a 33 percent; whereas the Taq I represented the 10 percent of information and Xmn I the 0 percent. We verified that from the families analyzed with HA, in 23 of them we there was information. Besides, in 4 families affected by HB there was information. A total of 19 prenatal diagnoses were made with a previous determination of fetus sex, including 3 males ill

Estudio familiar de las hemofilias A y B: 5 años de experiencia en la detección de portadoras / Family study of hemophilia A and B: 5 years of experience in carrier detection

La hemofilia se caracteriza por ser una enfermedad congÚnita del trastorno de la coagulación y constituye un desorden recesivo ligado al cromosoma X. El estudio molecular se realiza por estudios indirectos por ser causada por mutaciones heterogéneas en los genes del FVIII y FIX. Se realizó el estudio de 40 familias afectadas con hemofilia A (HA) y 10 hemofilia B (HB). La extracción de ADN se realizó por el método de precipitación salina a 293 muestras de sangre y 19 de líquido amniótico, y se hizo el análisis de los polimorfismos St14, Bcl I y Hind III para la HA y Taq I, Xmn I y Dde I para la HB. Se usó la técnica de PCR. En el caso de la HA se obtuvo el 35 por ciento de informatividad para St14 y Hind III y 32,5 para Bcl 1. El polimorfismo Dde I fue el más informativo para la HB con el 33 por ciento; mientras que Taq I representó el 10 por ciento de informatividad y XmnI el 0 por ciento. Se comprobó que de las 40 familias analizadas con HA, 23 fueron informativas. Por otra parte, fueron informativas 4 familias de las afectadas con HB. Se realizaron 19 diagnósticos prenatales con previa determinación del sexo fetal, incluidos 3 varones enfermos(AU)

Hemophilia is a congenital disease of coagulation disorder and it is a recessive disorder linked to X-chromosome. The molecular study is conducted by indirect studies due to it is caused by heterogeneous mutations in gen of FVIII and FIX in 40 families with hemophilia A (HA) and 10 with hemophilia B (HB). DNA extraction was carried out by saline precipitation method in 293 blood samples and 19 samples of amniotic fluid, as well as the analysis of St14, Bcl I and Hind III polymorphism for the AH and Taq I, Xmn I and Dde I for BH. The PCR technique was used. In the caser of AH it was possible to achieve a 35 percent of information for St14 and Hind III and a 32.5 percent for Bcl. Dde polymorphism supplied more information for BH for a 33 percent; whereas the Taq I represented the 10 percent of information and Xmn I the 0 percent. We verified that from the families analyzed with HA, in 23 of them we there was information. Besides, in 4 families affected by HB there was information. A total of 19 prenatal diagnoses were made with a previous determination of fetus sex, including 3 males ill(AU)

Estudio familiar de las hemofilias A y B: 5 años de experiencia en la detección de portadoras / Family study of hemophilia A and B: 5 years of experience in carrier detection

La hemofilia se caracteriza por ser una enfermedad congénita del trastorno de la coagulación y constituye un desorden recesivo ligado al cromosoma X. El estudio molecular se realiza por estudios indirectos por ser causada por mutaciones heterogéneas en los genes del FVIII y FIX. Se realizó el estudio de 40 familias afectadas con hemofilia A (HA) y 10 hemofilia B (HB). La extracción de ADN se realizó por el método de precipitación salina a 293 muestras de sangre y 19 de líquido amniótico, y se hizo el análisis de los polimorfismos St14, Bcl I y Hind III para la HA y Taq I, Xmn I y Dde I para la HB. Se usó la técnica de PCR. En el caso de la HA se obtuvo el 35 por ciento de informatividad para St14 y Hind III y 32,5 para Bcl 1. El polimorfismo Dde I fue el más informativo para la HB con el 33 por ciento; mientras que Taq I representó el 10 por ciento de informatividad y XmnI el 0 por ciento. Se comprobó que de las 40 familias analizadas con HA, 23 fueron informativas. Por otra parte, fueron informativas 4 familias de las afectadas con HB. Se realizaron 19 diagnósticos prenatales con previa determinación del sexo fetal, incluidos 3 varones enfermos(AU)

Hemophilia is a congenital disease of coagulation disorder and it is a recessive disorder linked to X-chromosome. The molecular study is conducted by indirect studies due to it is caused by heterogeneous mutations in gen of FVIII and FIX in 40 families with hemophilia A (HA) and 10 with hemophilia B (HB). DNA extraction was carried out by saline precipitation method in 293 blood samples and 19 samples of amniotic fluid, as well as the analysis of St14, Bcl I and Hind III polymorphism for the AH and Taq I, Xmn I and Dde I for BH. The PCR technique was used. In the caser of AH it was possible to achieve a 35 percent of information for St14 and Hind III and a 32.5 percent for Bcl. Dde polymorphism supplied more information for BH for a 33 percent; whereas the Taq I represented the 10 percent of information and Xmn I the 0 percent. We verified that from the families analyzed with HA, in 23 of them we there was information. Besides, in 4 families affected by HB there was information. A total of 19 prenatal diagnoses were made with a previous determination of fetus sex, including 3 males ill(AU)