Efeito Anti-Hipertensivo de Novos Agonistas do Receptor de Adenosina em Ratos Espontaneamente Hipertensos / Antihypertensive Effect of New Agonist of Adenosine Receptor in Spontaneously Hypertensive Rats

Resumo Fundamento A hipertensão arterial sistêmica é um fator de risco para disfunções cardíacas, renais e metabólicas. A busca por novas estratégias para prevenir e tratar doenças cardiovasculares levou à síntese de novas N-acilidrazonas para produzir efeito anti-hipertensivo. Os receptores de adenosina são um alvo alternativo para reduzir a pressão arterial devido à sua ação vasodilatadora e propriedades antioxidantes, que podem reduzir o estresse oxidativo característico da hipertensão arterial sistêmica. Objetivo Avaliar o perfil anti-hipertensivo de novos compostos contendo selênio desenvolvidos para melhorar sua interação com os receptores de adenosina. Métodos Foi avaliada a reatividade vascular, registrando-se a tensão isométrica da aorta torácica pré-contraída de ratos Wistar machos após exposição a concentrações crescentes de cada derivado (0,1 a 100 μM). Para investigar o efeito anti-hipertensivo em ratos espontaneamente hipertensos, foram determinadas a pressão arterial sistólica, pressão arterial diastólica, pressão arterial média e a frequência cardíaca após administração intravenosa de 10 e 30 μmol/kg do composto selecionado LASSBio-2062. Resultados Os compostos denominados LASSBio-2062, LASSBio-2063, LASSBio-2075, LASSBio-2076, LASSBio-2084, LASSBio-430, LASSBio-2092 e LASSBio-2093 promoveram vasodilatação com concentrações efetivas médias de 15,5 ± 6,5; 14,6 ± 2,9; 18,7 ± 9,6; 6,7 ± 4,1; > 100; 6,0 ± 3,6; 37,8 ± 11,8; e 15,9 ± 5,7 μM, respectivamente. O LASSBio-2062 (30 μmol/kg) reduziu a pressão arterial média em ratos espontaneamente hipertensos de 124,6 ± 8,6 para 72,0 ± 12,3 mmHg (p < 0,05). A ativação do receptor de adenosina subtipo A3 e dos canais de potássio parece estar envolvida no efeito anti-hipertensivo do LASSBio-2062. Conclusões O novo agonista do receptor de adenosina e ativador dos canais de potássio é um potencial agente terapêutico para o tratamento da hipertensão arterial sistêmica.

Abstract Background Systemic arterial hypertension is a risk factor for cardiac, renal, and metabolic dysfunction. The search for new strategies to prevent and treat cardiovascular diseases led to the synthesis of new N-acylhydrazones to produce antihypertensive effect. Adenosine receptors are an alternative target to reduce blood pressure because of their vasodilatory action and antioxidant properties, which may reduce oxidative stress characteristic of systemic arterial hypertension. Objective To evaluate the antihypertensive profile of novel selenium-containing compounds designed to improve their interaction with adenosine receptors. Methods Vascular reactivity was evaluated by recording the isometric tension of pre-contracted thoracic aorta of male Wistar rats after exposure to increasing concentrations of each derivative (0.1 to 100 μM). To investigate the antihypertensive effect in spontaneously hypertensive rats, systolic, diastolic, and mean arterial pressure and heart rate were determined after intravenous administration of 10 and 30 μmol/kg of the selected compound LASSBio-2062. Results Compounds named LASSBio-2062, LASSBio-2063, LASSBio-2075, LASSBio-2076, LASSBio-2084, LASSBio-430, LASSBio-2092, and LASSBio-2093 promoted vasodilation with mean effective concentrations of 15.5 ± 6.5; 14.6 ± 2.9; 18.7 ± 9.6; 6.7 ± 4.1; > 100; 6.0 ± 3.6; 37.8 ± 11.8; and 15.9 ± 5.7 μM, respectively. LASSBio-2062 (30 μmol/kg) reduced mean arterial pressure in spontaneously hypertensive rats from 124.6 ± 8.6 to 72.0 ± 12.3 mmHg (p < 0.05). Activation of adenosine receptor subtype A3 and potassium channels seem to be involved in the antihypertensive effect of LASSBio-2062. Conclusions The new agonist of adenosine receptor and activator of potassium channels is a potential therapeutic agent to treat systemic arterial hypertension.

Effect of the B-amyloid peptide on microglia activation: ATP release / Efecto del péptido B-amiloide en la activación de la microglía: liberación de ATP

Estudios previos han mostrado un papel clave de las células microgliales en los procesos neuroinflamatorios asociados con algunas enfermedades neurodegenerativas, como la enfermedad de Alzheimer (EA). La microglía detecta varios tipos de moléculas difusibles que regulan el múltiple repertorio de funciones microgliales. Entre ellos, los nucleótidos extracelulares, actuando sobre los receptores P2 microgliales, llevan a cabo un papel central. En este sentido, el receptor P2X7 ionotrópico ha sido reconocido como un regulador clave de las respuestas inflamatorias mediadas por la microglia. Se sabe que la microglía libera ATP y otros nucleótidos al medio extracelular. Aunque se han propuesto varios mecanismos, tales como la liberación a través de conexinas o panexinas, no se puede descartar un origen vesicular para estos nucleótidos liberados, basándose en la actividad del transportador vesicular de nucleótidos (VNUT).En este trabajo hemos analizado si la expresión de VNUT y el receptor P2X7, así como la liberación de ATP, podrían modificarse en la microglía reactiva. Para lograr la activación de la microglía estimulamos las células con el lipopolisacárido (LPS). Además, analizamos el efecto del péptido β1-amiloide, β1-42, que puede activar también las células microgliales, sobre la expresión de VNUT y la liberación de ATP en la microglía. (AU)

Previous studies have shown a key role of microglial cells in the neuroinflammatory processes associated with some neurodegenerative diseases, such as Alzheimer’s disease (AD). Microglia sense several types of diffusible molecules that regulate the multiple repertoire of microglial functions. Among them, extracellular nucleotides, acting on microglial P2 receptors, have central roles. In this sense, the ionotropic P2X7 receptor has gained recognition as a key regulator of microglial-mediated inflammatory responses. It is known that microglia releases ATP and other nucleotides to the extracellular medium. Although several mechanisms, such as release trough conexins or panexins, has been proposed, a vesicular origin for this released nucleotides, relying on the activity of the vesicular nucleotide transporter (VNUT), cannot be ruled out.In this work we evaluated whether the expression of VNUT and the P2X7 receptor, as well as the ATP release, could be modified in the reactive microglia. To achieve microglia activation we stimulated the cells with the lipopolysaccharide (LPS). Moreover, we analyzed the effect of the β-amyloid peptide β1-42, which is also able to activate the microglial cells, on the expression of VNUT and the ATP release in the microglia. (AU)

Asociación entre el volumen plaquetario medio y la resistencia a aspirina e inhibidores del receptor p2y12 en pacientes ancianos con síndrome coronario agudo / Association between Mean Platelet Volume and Resistance to Aspirin and P2Y12 Receptor Inhibitors in Elderly Patients with Acute Coronary Syndrome

RESUMEN Introducción: La resistencia a antiagregantes y el volumen plaquetario medio (VPM) son predictores de eventos en el síndrome coronario agudo (SCA). La asociación entre ambos ha sido poco estudiada. Objetivos: Evaluar si existe asociación entre la resistencia a la aspirina (AAS) e inhibidores del receptor P2Y12 (iP2Y12) y el VPM en pacientes mayores de 65 años con SCA. Material y métodos: Se incluyeron pacientes mayores de 65 años con diagnóstico de SCA. Se dividieron en: grupo 1 (resistencia a ambos antiagregantes), grupo 2 (a uno de los antiagregantes) y grupo 3 (a ningún antiagregante). Se midió la agregación plaquetaria entre las 12 y 24 horas poscarga (por light transmission aggregometry). Se consideró resistencia a iP2Y12 a un porcentaje máximo de agregación (PMA) con ADP > 60% y a la AAS a un PMA con ARA > 20%. En el seguimiento se consi-deró el punto final combinado de muerte global y reinternación cardiovascular. Resultados: Se incluyeron 195 pacientes que recibieron AAS e iP2y12 (120 recibieron clopidogrel y 75 ticagrelor); grupo 1 (19%), grupo 2 (34,4%) y grupo 3 (46,6%). El VPM se asoció a la resistencia a ambos antiagregantes (OR 1,02 (IC 95% 1,01-1,05), p = 0,03. A su vez, el VPM y el GRACE fueron predictores independientes del punto combinado (HR 1,03 (IC 95% 1,01-1,07), p = 0,04 y HR 1,02 (IC 95% 1,01-1,04), p = 0,02), respectivamente. Conclusiones: El VPM se asoció a la presencia de resistencia a ambos antiagregantes. En el seguimiento el VPM y el score GRACE fueron predictores del punto combinado.

ABSTRACT Background: Antiplatelet resistance and mean platelet volume (MPV) are event predictors in acute coronary syndrome (ACS). However, the association between both has been poorly studied. Objective: The aim of this study was to evaluate the association between MPV and resistance to aspirin (ASA) and P2Y12 receptor inhibitors (P2Y12i) in elderly patients with ACS. Methods: Patients over 65 years old with diagnosis of ACS were included in the study. They were divided into group 1 (re-sistance to both antiplatelet agents), group 2 (resistance to one antiplatelet agent) and group 3 (no resistance to antiplatelet agents). Platelet aggregation was measured between 12 and 24 hours postload (by light transmission aggregometry). Resis-tance to P2Y12i was considered as maximum percentage of aggregation (MPA) with adenosine diphosphate (ADP) >60% and resistance to ASA as MPA with arachidonic acid (ARA) >20%. The composite endpoint of global death and cardiovascular re-hospitalization was considered during follow-up. Results: One hundred and ninety five patients included in the study received ASA and P2Y12i (120 received clopidogrel and 75 ticagrelor). Nineteen percent of patients belonged to group 1, 34.4% to group 2 and 46.6% to group 3. Mean platelet volume was associated with resistance to both antiplatelet agents [OR 1.02 (95% CI 1.01-1.05), p=0.03], while MPV and the GRACE score were independent predictors of the composite endpoint [HR 1.03 (95% CI 1.01-1.07), p=0.04] and [HR 1.02 (95% CI 1.01-1.04), p=0.02], respectively. Conclusions: Mean platelet volume was associated with the presence of resistance to both antiplatelet agents. During follow-up, MPV and the GRACE score were predictors of the composite endpoint.

Terapia fotodinâmica na artrite experimental induzida por Paracoccidioides brasiliensis / Photodynamic therapy in experimental arthritis induced by Paracoccidioides brasiliensis

OBJETIVOS: Avaliar a eficácia da terapia fotodinâmica com Brilliant Blue G no tratamento de um modelo experimental de artrite por Paracoccidioides brasiliensis (P. brasiliensis). MÉTODOS: Após a indução de artrite experimental com isolado de P. brasiliensis da linhagem Pb18 nos joelhos de ratos Wistar, os animais foram divididos em grupos e submetidos a terapia fotodinâmica com fotossensibilizador Brilliant Blue G intra-articular e a laserterapia apenas, sem o Brilliant Blue G. Todos os grupos receberam seus respectivos tratamentos do sétimo ao 11º dia. Para análise do edema foi mensurado o diâmetro latero-lateral do joelho de cada animal diariamente e após o período de tratamento os animais foram sacrificados para dissecação do joelho experimental e coleta de sangue para análise por ELISA, a fim de quantificar os níveis de anticorpos anti-P. brasiliensis. RESULTADOS: A aplicação da terapia fotodinâmica foi capaz de impedir a formação de edema quando comparado ao controle (p>0,005), bem como a produção de anticorpos anti-Gp-43 de P. brasiliensis (p=0,001). No exame anatomopatológico foi possível observar maior grau de sinovite e maior presença de granulomas com o fungo em seu interior no grupo que não recebeu tratamento quando comparado aos grupos que receberam a terapia fotodinâmica. CONCLUSÕES: A terapia fotodinâmica foi eficaz para atenuar a artrite experimental induzida por P. brasiliensis no modelo articular proposto.

AIMS: To evaluate the effectiveness of photodynamic therapy with Brilliant Blue G in the treatment of an experimental model of arthritis by Paracoccidioides brasiliensis (P. brasiliensis). METHODS: After the induction of experimental arthritis with isolated from P. brasiliensis of lineage Pb18 in the knees of Wistar rats, the animals were divided into groups and submitted to photodynamic therapy with intra-articular Brilliant Blue G photosensitizer and laser therapy only, without Brilliant Blue G. All groups received their respective treatments from the seventh to the 11th day. For edema analysis, the knee lateral-lateral diameter of each animal was measured daily and after the treatment period the animals were sacrificed for experimental knee dissection and blood collection for analysis by ELISA, in order to quantify levels of anti-P. brasiliensis antibodies. RESULTS: The results showed that the application of photodynamic therapy was able to prevent the formation of edema when compared to the control (p>0.005), as well as the production of anti-Gp-43 antibodies from P. brasiliensis (p=0.001). In the anatomopathological examination it was possible to observe a higher degree of synovitis and a greater presence of granulomas with the fungus inside the group that did not receive treatment when compared to the groups that received the photodynamic therapy. CONCLUSIONS: Photodynamic therapy was effective in attenuating the experimental arthritis induced by P. brasiliensis in the proposed joint model.

Papel dos receptores purinérgicos em modelo animal de doença de Parkinson / Role of purinergic receptors in an animal model of Parkinsons Disease

A Doença de Parkinson é uma doença altamente incapacitante e de grande prevalência. Pouco se sabe sobre sua etiologia e os tratamentos atuais consistem na diminuição dos sintomas, uma vez que ainda não foi encontrada uma maneira de reverter o déficit de neurônios dopaminérgicos observados nos pacientes acometidos. Sabe-se que os receptores purinérgicos são encontrados por todo o sistema nervoso central, não só no indivíduo adulto como também em diferentes estágios do desenvolvimento embrionário e estão envolvidos com proliferação e diferenciação celular. Este trabalho estudou a participação dos receptores purinérgicos em modelo animal de doença de Parkinson por lesão dos neurônios dopaminérgicos da via nigroestriatal com 6-OH dopamina (6-OHDA). Realizamos a análise do perfil de expressão gênica dos diferentes receptores após a lesão e subsequente modulação. Observamos expressão gênica alterada dos receptores P2X7 e P2Y6 até 5 semanas após a lesão. O uso do antagonista do receptor P2X7 Brilliant Blue G (BBG) induziu a regeneração da via nigroestriatal e o uso do antagonista do receptor P2Y6 MRS2578 preveniu a morte dos neurônios. Como esses efeitos foram acompanhados pela inativação de células microgliais, supõe-se que o controle do microambiente neuroinflamatório causado pela injeção de 6-OHDA seja a principal causa do efeito antiparkinsoniano observado pelo tratamento com BBG e MRS2578. Além disso, o transplante celular com células precursoras neuraisnão foi capaz de reverter o comportamento hemiparkinsoniano dos animais lesionados. Apesar do uso concomitante com BBG reduzir o comportamento, parece que esse efeito deve-se ao BBG per se, uma vez que o tratamento somente com o antagonista de P2X7 foi mais eficaz. De maneira geral, a modulação da atividade dos receptores purinérgicos se mostrou uma ferramenta promissora na pesquisa de cura e compreensão das bases moleculares da Doença de Parkinson

Parkinson's disease is a highly disabling and prevalent disease. Little is known about its etiology and the current treatments consist in the reduction of the symptoms, since there is no known method to reverse the dopaminergic neurons deficit observed in patients. Purinergic receptors are found throughout the central nervous system, not only in the adult individual but also at different stages of embryonic development, and are involved in proliferation and differentiation. This work investigated the role of purinergic receptors in the animal model of Parkinson's disease induced by 6-OH dopamine (6-OHDA) injection and consequent death of dopaminergic neurons of the nigrostriatal pathway. Patterns of purinergic receptors gene expression after the lesion and subsequent modulation were analyzed. We observed altered gene expression of P2X7 and P2Y6 receptors within 5 weeks of injury. The use of the P2X7 receptor antagonist Brilliant Blue G (BBG) induced the regeneration of the nigrostriatal pathway and treatment with P2Y6 receptor antagonist MRS2578 prevented the death of the neurons. Since these effects were accompanied by the inactivation of microglial cells, it is assumed that the control of neuroinflammatory milieu caused by the 6-OHDA injection is the main cause of the antiparkinsonian effect observed by the treatment with BBG and MRS2578. In addition, transplantation with neural precursor cells was not able to reverse the hemiparkinsonian behavior of injured animals. Although concomitant use with BBG improved cell engraftment, it appears that this effect is due to BBG per se, since treatment with only this P2X7receptor antagonist was more effective. In general, modulation of purinergic receptor activity showed to be a promising tool in the research of cure and understanding of the molecular bases of Parkinson's Disease

Participação dos receptores purinérgicos na ação estimulatória da crotoxina sobre a produção de espécies reativas do oxigênio por linhagem de monócito humano (THP-1) / Participation of purinergic receptors in the stimulatory action of crotoxin on the production of reactive oxygen species by human monocyte (THP1)

Crotoxin (CTX), the major toxin of Crotalus durissus terrificus snake venom, induces immunomodulatory action, particularly on the macrophages function, crucial cells to innate defense mechanisms. In these cells, dual action of this toxin is observed, since both inhibition of some functional parameters such as spreading and phagocytosis, as well as respiratory burst (hydrogen peroxide-H2O2 generation and nitric oxide-NO generation), Lipoxin A4 (LXA4) and its stable analog (15-Epi-LXA4) secretion and glucose and glutamine metabolism increased. Recent studies have demonstrated the importance of these CTX stimulatory actions on the metabolism of macrophages for the control of infectious inflammatory response and for tumor progression. Furthermore, FPRs are crucial for the different effects of CTX on macrophage function and metabolism. In spite of these evidences, the mechanisms involved with the CTX stimulatory actions on the metabolism of these cells are not known in their entirety. Among the mechanisms involved in the regulation of energetic metabolism of macrophages, purinergic signaling is essential in the stimulation of cytokine secretion and the reactive oxygen species and reactive nitrogen species generation by macrophages, besides being receptors responsive to stimuli via FPRs. Therefore, the objective of the present project was to investigate the possible participation of purinergic receptors on the H2O2 production by CTX treated THP-1 monocytic cells and whether FPRs participate in this signaling. For this purpose, THP-1 cells were used, such as monocytes or macrophage-differentiated or LPS-stimulated cells. The results show that THP-1 monocytes, such as macrophages differentiated from THP-1, by previous incubation with PMA, showed a significant increase of H2O2 production in the presence of different concentrations of CTX. CTX-induced H2O2 production increased was also observed after 24 hours by differentiated and LPS-stimulated macrophages. Different CTX concentrations lead to a significant increase in the ATP releasing by THP-1, in the absence or presence of LPS. Furthermore, different concentrations of CTX enhanced visualization of P2Y11 purinergic receptors and FPRs in LPS-stimulated THP-1. Blocking of P2X and P2Y purinergic receptors by non-selective antagonists abolished CTX-induced H2O2 production. Blocking of the FPRs by the selective antagonist partially interfered with the production of this toxin-induced reaction. The results together demonstrate, in an unprecedented way, that human monocytes are responsive to the action stimulatory CTX on ROS production and release of ATP and demonstrate for the first time that purinergic receptors are involved in this CTX-stimulatory action, with the FPRs participation.

A Crotoxina (CTX), toxina majoritária do veneno de serpente Crotalus durissus terrificus (VCdt) acarreta ação imunomoduladora, particularmente sobre a funcionalidade de macrófagos, células fundamentais para os mecanismos da defesa inata. Nestas células, é observado o dualismo na ação desta toxina, uma vez que foi observada tanto inibição de alguns parâmetros funcionais, como espraiamento e fagocitose, quanto à estimulação do “burst” respiratório (da geração de peróxido de hidrogênio-H2O2 e óxido nítrico-NO), da secreção de lipoxina A4 (LXA4) e seu análogo estável (15-Epi-LXA4) e do metabolismo de glicose e glutamina. Estudos recentes vêm demonstrando a importância dessas ações estimulatórias da CTX sobre o metabolismo de macrófagos para o controle da resposta inflamatória infecciosa e para a progressão tumoral. Ainda, receptores para peptídeo formil (Formyl Peptide Receptors-FPRs), ligantes de LXA4/15-Epi-LXA4 são cruciais para os diferentes efeitos da CTX sobre função e metabolismo de macrófagos. Apesar dessas evidencias não são conhecidos, na sua totalidade, os mecanismos envolvidos com as ações estimulatórias da CTX sobre o metabolismo destas células. Dentre os mecanismos envolvidos na regulação do metabolismo energético de macrófagos, a sinalização purinérgica é essencial na estimulação de secreção de citocinas e na geração de espécies reativas do oxigênio e do nitrogênio por macrófagos, além de serem receptores responsivos a estímulos via FPRs. Portanto, o objetivo do presente projeto foi investigar a possível participação dos receptores purinérgicos (RPs) sobre a produção de H2O2 por células monocíticas da linhagem THP-1, tratadas com CTX e se FPRs participam desta sinalização. Para tanto, foram utilizadas as células THP-1, como monócitos ou diferenciados em macrófagos ou estimulados por LPS. Os resultados mostram que os monócitos THP-1, como macrófagos diferenciados a partir de THP-1, por meio da incubação prévia com PMA, apresentaram aumento significativo da produção de H2O2 na presença das diferentes concentrações de CTX. O aumento da produção de H2O2 induzido pela CTX também foi observado após 24 horas, por macrófagos diferenciados e estimulados com LPS. Diferentes concentrações de CTX acarretam importante aumento de liberação de ATP por THP-1, na ausência ou presença de LPS. Ainda, as diferentes concentrações de CTX induziram aumento da visualização de receptores purinérgicos P2Y11 e FPRs em THP-1 estimuladas com LPS. O bloqueio dos receptores purinérgicos P2X e P2Y por antagonistas não seletivos aboliu a produção de H2O2 induzida pela CTX. O bloqueio dos FPRs pelo antagonista seletivo interferiu parcialmente com a produção deste reativo induzido pela toxina. Os resultados em conjunto demonstram, de maneira inédita, que monócitos humanos são responsivos à ação estimulatória da CTX sobre a produção de ROS e liberação de ATP e demonstram, pela primeira vez, que receptores purinérgicos estão envolvidos nesta ação estimulatória da CTX, com a participação dos FPRs.

Satellite glial cells in sensory ganglia: its role in pain / Células gliais satélite de gânglios sensitivos: o seu papel na dor / Células gliales satélite de ganglios sensoriales: su papel en el dolor

BACKGROUND AND OBJECTIVES: Satellite glial cells in sensory ganglia are a recent subject of research in the field of pain and a possible therapeutic target in the future. Therefore, the aim of this study was to summarize some of the important physiological and morphological characteristics of these cells and gather the most relevant scientific evidence about its possible role in the development of chronic pain. CONTENT: In the sensory ganglia, each neuronal body is surrounded by satellite glial cells forming distinct functional units. This close relationship enables bidirectional communication via a paracrine signaling between those two cell types. There is a growing body of evidence that glial satellite cells undergo structural and biochemical changes after nerve injury, which influence neuronal excitability and consequently the development and/or maintenance of pain in different animal models of chronic pain. CONCLUSIONS: Satellite glial cells are important in the establishment of physiological pain, in addition to being a potential target for the development of new pain treatments. .

JUSTIFICATIVA E OBJETIVOS: As células gliais satélite de gânglios sensitivos são um objeto recente de pesquisa na área da dor e um possível alvo terapêutico no futuro. Assim, este trabalho tem como objetivo resumir algumas das características morfológicas e fisiológicas mais importantes destas células e reunir as evidências científicas mais relevantes acerca do seu possível papel no desenvolvimento da dor crônica. CONTEÚDO: Nos gânglios sensitivos cada corpo neuronial é envolvido por células gliais satélite, formando unidades funcionais distintas. Esta íntima relação possibilita a comunicação bidirecional, através de uma sinalização parácrina, entre estes dois tipos de células. Existe um número crescente de evidências de que as células gliais satélite sofrem alterações estruturais e bioquímicas, após lesão nervosa, que influenciam a excitabilidade neuronial e consequentemente o desenvolvimento e/ou manutenção da dor, em diferentes modelos animais de dor crônica. CONCLUSÕES: As células gliais satélite são importantes no estabelecimento da dor não fisiológica e constituem um alvo potencial para o desenvolvimento de novos tratamentos da dor. .

JUSTIFICACIÓN Y OBJETIVOS: Las células gliales satélite de ganglios sensoriales son un objeto reciente de investigación en el área del dolor y un posible objeto terapéutico en el futuro. Por tanto, este trabajo intenta resumir algunas de las características morfológicas y fisiológicas más importantes de estas células y reunir las evidencias científicas más relevantes acerca de su posible papel en el desarrollo del dolor crónico. CONTENIDO: En los ganglios sensoriales cada cuerpo neuronal está envuelto por células gliales satélite, formando unidades funcionales distintas. Esta íntima relación posibilita la comunicación bidireccional a través de una señalización paracrina entre esos 2 tipos de células. Existe un número creciente de evidencias de que las células gliales satélite sufren alteraciones estructurales y bioquímicas después de la lesión nerviosa que influyen en la excitabilidad neuronal y por ende en el desarrollo y/o en el mantenimiento del dolor en diferentes modelos animales de dolor crónico. CONCLUSIONES: Las células gliales satélite son importantes en el establecimiento del dolor no fisiológico y son un potencial objetivo para el desarrollo de nuevos tratamientos del dolor. .

[Satellite glial cells in sensory ganglia: its role in pain]. / Células gliais satélite de gânglios sensitivos: o seu papel na dor.

BACKGROUND AND OBJECTIVES: Satellite glial cells in sensory ganglia are a recent subject of research in the field of pain and a possible therapeutic target in the future. Therefore, the aim of this study was to summarize some of the important physiological and morphological characteristics of these cells and gather the most relevant scientific evidence about its possible role in the development of chronic pain. CONTENT: In the sensory ganglia, each neuronal body is surrounded by satellite glial cells forming distinct functional units. This close relationship enables bidirectional communication via a paracrine signaling between those two cell types. There is a growing body of evidence that glial satellite cells undergo structural and biochemical changes after nerve injury, which influence neuronal excitability and consequently the development and/or maintenance of pain in different animal models of chronic pain. CONCLUSIONS: Satellite glial cells are important in the establishment of physiological pain, in addition to being a potential target for the development of new pain treatments.

Modulação da diferenciação neural de células troco embrionárias por transientes de cálcio intracelulares: papéis dos receptores purinérgicos e de canais de cálcio voltagem-dependentes / Modulation of neural embryonic stem cell differentiation by intracellular Ca2+ oscillations. Roles of purinergic receptors and voltage gated Ca2+ channels

Receptores purinérgicos e canais de cálcio voltagem-dependentes estão envolvidos em diversos processos biológicos como na gastrulação, durante o desenvolvimento embrionário, e na diferenciação neural. Quando ativados, canais de cálcio voltagem-dependentes e receptores purinérgicos do tipo P2, ativados por nucleotídeos, desencadeiam transientes de cálcio intracelulares controlando diversos processos biológicos. Neste trabalho, nós estudamos a participação de canais de cálcio voltagem-dependentes e receptores do tipo P2 na geração de transientes de cálcio espontâneos e sua regulação na expressão de fatores de transcrição relacionados com a neurogênese utilizando como modelo células tronco (CTE) induzidas à diferenciação em células tronco neurais (NSC) com ácido retinóico. Descrevemos que CTE indiferenciadas podem ter a proliferação acelerada pela ativação de receptores P2X7, enquanto que a expressão e a atividade desse receptor precisam ser inibidas para o progresso da diferenciação em neuroblasto. Além disso, ao longo da diferenciação neural, por análise em tempo real dos níveis de cálcio intracelular livre identificamos 3 padrões de oscilações espontâneas de cálcio (onda, pico e unique), e mostramos que ondas e picos tiveram a frequência e amplitude aumentadas conforme o andamento da diferenciação. Células tratadas com o inibidor do receptor de inositol 1,4,5-trifosfato (IP3R), Xestospongin C, apresentaram picos mas não ondas, indicando que ondas dependem exclusivamente de cálcio oriundo do retículo endoplasmático pela ativação de IP3R. NSC de telencéfalo de embrião de camundongos transgênicos ou pré-diferenciadas de CTE tratadas com Bz-ATP, o agonista do receptor P2X7, e com 2SUTP, agonista de P2Y2 e P2Y4, aumentaram a frequência e a amplitude das oscilações espontâneas de cálcio do tipo pico. Dados, obtidos por microscopia de luminescência, da expressão em tempo real de gene repórter luciferase fusionado à Mash1 e Ngn2 revelou que a ativação dos receptores P2Y2/P2Y4 aumentou a expressão estável de Mash1 enquanto que ativação do receptor P2X7 levou ao aumento de Ngn2. Além disso, células na presença do quelante de cálcio extracelular (EGTA) ou do depletor dos estoques intracelulares de cálcio do retículo endoplasmático (thapsigargin) apresentaram redução na expressão de Mash1 e Ngn2, indicando que ambos são regulados pela sinalização de cálcio. A investigação dos canais de cálcio voltagem-dependentes demonstrou que o influxo de cálcio gerado por despolarização da membrana de NSC diferenciadas de CTE é decorrente da ativação de canais de cálcio voltagem-dependentes do tipo L. Além disso, esse influxo pode controlar o destino celular por estabilizar expressão de Mash1 e induzir a diferenciação neuronal por fosforilação e translocação do fator de transcrição CREB. Esses dados sugerem que os receptores P2X7, P2Y2, P2Y4 e canais de cálcio voltagem-dependentes do tipo L podem modular as oscilações espontâneas de cálcio durante a diferenciação neural e consequentemente alteram o padrão de expressão de Mash1 e Ngn2 favorecendo a decisão do destino celular neuronal

Purinergic receptors and voltage gated Ca2+ channels have been attributed with developmental functions including gastrulation and neural differentiation. Upon activation, nucleotide-activated P2 purinergic receptor and voltage-gated Ca2+ channel subtypes trigger intracellular calcium transients controlling cellular processes. Here, we studied the participation of voltage-gated calcium channels and P2 receptor activity in spontaneous calcium transients and consequent regulation expression of transcription factors related to retinoic acid-induced neurogenesis of mouse neural stem and embryonic stem cells (ESC). In embryonic pluripotent stem cells, proliferation is accelerated by P2X7 receptor activation, while receptor expression / activity needs to be down-regulated for the progress of neuroblast differentiation. Moreover, along neural differentiation time lapse imaging with means of a cytosolic calcium-sensitive fluorescent probe provided different patterns of spontaneous calcium transients (waves and spikes) showing that both, frequency and amplitude increased along differentiation. Cells treated with the inositol 1,4,5-trisphosphate receptor (IP3R) inhibitor Xestospongin C showed spikes but not waves, indicating that waves exclusively depended on calcium release from endoplasmic reticulum by IP3R activation. Cells treated with the P2X7 receptor subtype agonist Bz-ATP and the P2Y2 and P2Y4 receptor 2-S-UTP increased frequency and amplitudes of calcium transients, mainly spikes, in embryonic telencephalon neural stem cells (NSC) and NSC pre-differentiated from ESC. Data obtained by luminescence time lapse imaging of stable transfected cells with Mash1 or Ngn2 promoter-protein fusion to luciferase reporter construct revealed increased Mash1 expression due to activation of P2Y2/P2Y4 receptor subtypes, while increased expression of Ngn2 was observed following P2X7 receptor activation. In addition, cells imaged in presence of the extracellular calcium chelator EGTA or following endoplasmic reticulum calcium store depletion by thapsigargin showed a decrease in Mash1 and Ngn2 expression, indicating that both are regulated by calcium signaling. Investigation of the roles of voltage gated Ca2+ channels in neural differentiation showed that Ca2+ influx in NSC pre-differentiated from ESC is due to membrane depolarization and L-type voltage gated Ca2+ channel activation, thereby controlling cell fate decision, by stabilizing the expression of MASH1 and inducing differentiation, by phosphorylation of the transcription factor CREB. Altogether these data suggest that P2X7, P2Y2, P2Y4 receptors and L-type voltage gated Ca2+ channels can modulate spontaneous calcium oscillations during neural differentiation and consequently change the Mash1 and Ngn2 expression patterns, thus favoring the cell fate decision to the neuronal phenotype

Señales purinérgicas / Purinergic signals

En la última década se ha aportado clara evidencia de que tanto nucleósidos como nucleótidos de adenina y uridina pueden funcionar como factores de señalización extracelular. Su acción es mediada por dos tipos principales de receptores de superficie denominados purinérgicos. Los receptores P1 se activan por adenosina, y son todos metabotrópicos, mientras que los receptores de nucleótidos (ATP, ADP, UTP y UDP) y nucleótidos-azúcares (UDP-glucosa y UDP-galactosa) pueden ser metabotrópicos (P2Y) o ionotrópicos (P2X). La importancia y complejidad de este sistema de señalización se evidencia por la diversidad de mecanismos de liberación de nucleótidos al medio extracelular y por la distribución ubicua de varios grupos de ectonucleotidasas capaces de catalizar la degradación y conversión de nucleótidos. Hasta el momento se han descrito y clonado una veintena de estos receptores que modulan una variedad de respuestas, como el impulso nervioso, la respuesta inflamatoria, la secreción de insulina, la regulación del tono vascular y la percepción del dolor. En la presente revisión se describen las características estructurales y farmacológicas de los receptores purinérgicos y se analiza la interacción dinámica entre estos receptores, los nucleósidos y nucleótidos, y las ectonucleotidasas, con especial atención a la dinámica de la agregación plaquetaria, la respuesta inmune y la hidratación de las mucosas respiratorias.

In the last decade evidence accumulated that nucleosides and nucleotides of both uridine and adenine can act as extracellular signaling factors. Their action is mediated by two main types of surface receptors commonly known as purinergic. P1 receptors are metabotropic and activated by adenosine, whereas receptors for nucleotides (ATP, ADP, UTP and UDP) and nucleotide-sugars (UDP-glucose and UDP-galactose) can be either metabotropic (P2Y) or ionotropic (P2X). The importance and complexity of this signaling system is evidenced by various mechanisms of nucleotide release, as well as by the ibiquitous distribution of various types of ectonucleotidases which catalyze and convert extracellular nucleotides. Up to now about twenty receptors have been cloned and found to modulate the nerve impulse, inflammatory response, insuline secretion, the regulation of the vascular tone and nociception, among other processes. In the present review we describe the main structural and pharmacological features of purinergic receptors, and analyze how the dynamic interaction between these receptors, nucleotides and nucleosides, and ectonucleotidases modulate several biological responses. Particular focus is given to platelet aggregation and thrombus formation, the immune response and the hydration of the mucosal linings of the respiratory tract.

The involvement of purinergic receptors in the kidney physiological and pathophysiological implications / O envolvimento de receptores purinérgicos no rim implicações fisiológicas e fisiopatológicas

The studies on the purinergic system in the kidney clearly showed its role on the renal hemodynamics, glomerular filtration and tubular function. The effectsof purinergic agonists on the mechanisms of tubuloglomerular feedback, and tubular transport of water and solutes, are well defined. In addition, severalstudies have documented the role of adenosine and specific ATP receptors on the processes of renal diseases, with special interest on the ischemiareperfusioninjury, renal cystic disease, glomerular and tubulointerstitial diseases. Therefore, the purinergic system has become a growing field for researchin renal physiology and pathophysiology, leading to therapeutic possibilities of using specific agonists and antagonists.

Os estudos sobre o sistema purinérgico no rim evidenciaram ao longo dos anos a sua participação na hemodinâmica renal, filtração glomerular e funçãotubular. É bem conhecida a participação de efetores purinérgicos no mecanismo de feedback túbulo-glomerular e transporte tubular de água e solutos.Além disso, vários trabalhos têm mostrado a participação da adenosina e de receptores específicos de ATP em processos de doença renal, com umespecial interesse na lesão da isquemia-reperfusão, doença cística renal, doenças glomerulares e túbulo-intersticiais. Portanto, o sistema purinérgico temse tornado alvo crescente de pesquisa em fisiologia e fisiopatologia renal, voltando-se para as possibilidades terapêuticas no uso de agentes agonistas eantagonistas específicos.