Design of an allele-specific PCR assay to genotype the rs12255372 SNP in a pilot study of association between common TCF7L2 polymorphisms and type 2 diabetes in Venezuelans

Objective The global burden of diabetes mellitus will impact strongly American countries in the coming decades. Type 2 diabetes mellitus (T2DM) is a multifactorial disease and the basis for its genetic susceptibility remains not fully understood. Different population studies have demonstrated that variants of the TCF7L2 gene are strongly associated with an increased risk of T2DM. Moreover, institutions or countries with limited budget to conduct genetic research need cost effective methods for detecting DNA variants. Subjects and methods We standardized a rapid and simple allele-specific PCR method for genotyping the rs12255372 single nucleotide polymorphism (SNP) in a pilot study exploring the association of three TCF7L2 polymorphisms (rs7903146, rs12255372 and DG10S478) with T2DM in 70 patients and 73 controls from Venezuela. Results The performance of the designed allele-specific PCR reaction for rs12255372 genotyping was reliable and accurate. Patients carrying the TCF7L2 rs7903146 T allele (CT + TT genotypes) and heterozygous CT genotype had a significantly higher risk for T2DM (OR = 2.9 and 2.3, respectively). Although rs12255372 and DG10S478 risk alleles predominated in T2DM group no statistical significance was found. Conclusions We developed a novel allele-specific PCR method for easier and rapid detection of rs12255372 polymorphism without the use of expensive instrumentation and reagents. Our study in a relatively small sample of the Venezuelan population replicated the association of the rs7903146 SNP with T2DM. Further studies with larger sample size and more biochemical data should be conducted to explore the genetic basis of T2DM susceptibility in Venezuela.

Incremento en la expresión del ARNm del receptor c-Met en el cáncer gástrico / Increased expression of the c-Met receptor mRNA in gastric cancer

El cáncer gástrico es una de las patologías malignas más frecuentes en el mundo. En las últimas décadas la atención se ha centrado en posibles alteraciones de factores genéticos que incluyen la activación de proto-oncogenes y/o la inactivación de genes supresores tumorales. El producto del C-MET proto-oncogen y su ligando, el factor de crecimiento del hepatocito (HGF), han sido implicados en la proliferación y migración celular en el cáncer gástrico. En este estudio se analizó a nivel molecular la amplificación del ARNm del receptor c-Met a partir del tejido tumoral gástrico de pacientes a quienes se les practicó gastrectomías, utilizando el método del ácido guanidina-tiocianato-fenol-cloroformo, y el método semicuantitativo de la Reacción en Cadena de la Polimerasa con Transcriptasa Reversa (RT-PCR), encontrándose que los elevados niveles del ARNm del receptor c-Met en las muestras tumorales de los pacientes están relacionados con mayor invasión en la profundidad de la pared gástrica (r = 0,762, p<0,01), incremento en la metástasis a los ganglios linfáticos (r = 0,766, p<0,01), alta frecuencia en tumores pocos diferenciados o indiferenciados (r = 0,912, p<0,001), aumento en el estadiaje del cáncer gástrico (r = 0,838, p<0,001), y en la sobreexpresión por el método inmunohistoquímico (IHQ) de la estreptavidina-biotina marcada de su receptor a nivel proteico (r = 0,858, p<0,001). La amplificación del ARNm y/o la sobreexpresión a nivel proteico del receptor c-Met, pudieran ser utilizados como factores pronósticos en el cáncer gástrico.

Gastric cancer is one of the most common malignancies in the world. In the last decades, the attention has been focused in possible alterations of genetic factors that include proto-oncogene activation and/or the tumor suppressor gene inactivation. The product of the proto-oncogene c-MET and its ligand, hepatocyte growth factor (HGF), have been implicated in cell proliferation and migration in gastric cancer. In this study we analyzed at the molecular level, the amplification of c-Met receptor mRNA from gastric tumor tissue of patients who underwent gastrectomy, using the acid guanidinium-thiocyanate-phenol-chloroform method and the semiquantitative Reverse Transcriptase-Polymerase Chain Reaction (RT-PCR) method. It was found that high levels of c-Met receptor mRNA in tumor samples from patients are associated with greater depth of invasion in the gastric wall (r = 0.762, p<0.01), increase in metastases to lymph nodes (r = 0.766, p<0.01), high frequency of poorly differentiated or undifferentiated tumors (r = 0.912, p<0.001), increase in the gastric cancer staging (r = 0.838, p<0.001), and the overexpression, by the immunohistochemistry method (IHC) of the labeled streptavidin-biotin, of the c-Met receptor at the protein level (r = 0.858, p<0.001). The amplification of mRNA and/or protein level overexpression of the c-Met receptor could be used as prognostic factors in gastric cancer.

Eficacia de la triple cura y su relación con el genotipo de Helicobacter pylori: pacientes con dispepsia de la region centroccidental de Venezuela / Pharmacological triple therapy`s efficacy and it`s association with Helicobacter pylori`s genotype: patients suffering from dyspepsia on Venezuela`s central western region

Introducción: El Helicobacter pylori es una bacteria reconocida como agente causal de gastritis crónica, además de asociarse al desarrollo de úlcera gástrica, duodenal y está relacionada con el desarrollo de cáncer gástrico. Materiales y métodos: Se realizó un estudio de tipo experimental, incluyendo a los pacientes que acudieron a la consulta de Gastroenterología del Hospital "Dr. Antonio María Pineda" Barquisimeto en los meses de juniooctubre de 2009 presentando dispepsia, criterios de inclusión y exclusión; se les practicó endoscopia digestiva superior con biopsia de mucosa gástrica para test de ureasa rápida, estudio histológico y determinación de los genotipos de cagA y vacA H. pylori por Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR). Al confirmar la infección por la bacteria se indicó tratamiento con amoxicilina, claritromicina y pantoprazol durante 14 días consecutivos. A las 8 semanas de culminada la medicación, se practicó el segundo estudio endoscópico superior con toma de biopsias para test de ureasa rápida y estudio anatomopatológico. Resultados: Un total de 60 pacientes fueron incluidos, 76,7% mujeres y 23,3% hombres, edad promedio 38,3 años. La prevalencia de infección por H. pylori fue de 98,3% por test de ureasa y 86,67% por histología, el síntoma más frecuente asociado antes, durante y posterior a la medicación con triple cura fue la epigastralgía. Hubo un predominio de los genotipos cagA en 84,5% y las formas alélicas s1/m1 55,2%. El 56,3% de los pacientes que presentaban genotipo vacA s1/m1 respondió al tratamiento. Un 56,7% de los pacientes no respondió a la terapia triple, el 66,7% contaba con la forma alélica s2/m2 del vacA y 57,1% presentaba el genotipo cagA-positivo. Conclusión: La triple cura resulto ineficaz en el tratamiento para la infección por Helicobacter pylori en la población estudiada y presentar la forma alélica vacA s1/m1 es estadísticamente significativo para responder a esta terapia farmacológica...

Introduction: Helicobacter pylori is a bacteria known as causal agent of chronic gastritis, as well as being associated to the development of gastric and duodenal ulcer and related to the development of gastric cancer. Goal: to establish the triple therapy based pharmacological treatment efficacy on patients with dyspepsia and proved H. pylori infection. Materials and methods: It was done an experimental type study, including patients that underwent evaluation on "Dr. Antonio Maria Pineda" University Hospital´s gastroenterology service, in Barquisimeto, between June – October 2009, who presented dyspepsia and fulfilled the inclusion exclusion criteria, they underwent a superior digestive endoscopy with gastric mucous membrane biopsy for fast urease test, histologic evaluation, and polymerase chain reaction (PCR) test aid establishment of cagA and vacA H. pylori genotype. When H. pylori infection was confirmed, a 14 continuous days amoxicillin, clarithromycin and pantoprazole based treatment was prescribed. 8 weeks later the ending of the pharmacological treatment a second superior digestive endoscopy including rapid urease test and histopathological assessment biopsy was performed. Results: 60 patients were included, 76,7% women and 23,4% men, average age 38,3 years old. The H. pylori’s prevalence were 98,3% by rapid urease test and 86,67 by histological assess, the most frequent related symptom before, through an after pharmacological triple therapy was epigastric pain. There was cagA genotype and s1/m1 allelic form predominance by 84, 5% and 55,2% respectively. 56,3% of vacA s1/m1 patients had a positive response to treatment. Triple therapy failed on 56,7% of patients, of them, 66,7% had the s2/m2 vacA´s allelic form and 57,1% had cagA genotype...

Enfermedad de chagas sistémico en fase aguda por transmisión oral: diagnóstico integral de un caso autopsiado / Acute phase of systemic chagas disease due to oral transmission: integral diagnosis of an autopsied case

Se presenta el primer caso autopsiado en Venezuela con enfermedad de Chagas por transmisión oral. Se trata de una joven de 24 años de edad con 8 semanas de embarazo quien contrajo la enfermedad conjuntamente con 71 niños y 14 adultos, la mayoría integrantes de la comunidad escolar “Rómulo Monasterios” en la localidad de Chichiriviche de la costa Vargas, donde ocurrió el segundo brote agudo de enfermedad de Chagas por transmisión oral registrado en Venezuela. El diagnóstico epidemiológico, clínico, serológico y parasitológico en sangre y líquido pleural extraídos en vida, fueron confirmados con los hallazgos histopatológicos y moleculares (PCR) de los tejidos. Se plantearon las características peculiares del caso así como algunos aspectos de la transmisión oral, ampliamente estudiados en nuestro país en animales de experimentación.

This first autopsy case with Chagas disease by oral transmissions in Venezuela is presented. This is a 24 year old girl with 8 weeks of pregnancy who contracted the disease together with 71 and 14 adults, the majority members of the school community “Romulo Monasterios” in the town of Vargas State, where occurred the second acute Chagas disease outbreak by oral transmission in Venezuela.The epidemiological, clinical, serological and parasitological diagnosis in the blood and pleural fluid extracted in life, were confirmed with the histopathology and molecular (PCR) finding in the tissues, Special features of the case are shown, as well as, some aspects of oral transmission widely studied in our country in experimental animals.

Hallazgos clínicos, endoscópicos e histológicos asociados a la infección por Helicobacter pylori considerando los genotipos CAG A y VAC A en pacientes con dispepsia: Servicio de Gastroenterología Hospital Central Universitario “Antonio María Pineda” Barquisimeto Estado Lara / Clinical, endoscopic and histological findings associated with helicobacter pylori infection considering genotypes CAG A and VAC A in patients with dyspepsia: Gastroenterology Department Hospital Central Universitario

La dispepsia afecta la calidad de vida de muchos pacientes y en muchos casos está asociada a la infección por Helicobacter pylori. Esta bacteria es reconocida como el agente causal de la gastritis crónica, se asocia al desarrollo de úlceras gástrica y duodenal y está relacionada con el desarrollo de cáncer gástrico. Como objetivo primario se planteó establecer los hallazgos clínicos, endoscópicos e histológicos asociados a la infección por Helicobacter pylori considerando los genotipos cag A y vac A en pacientes con dispepsia que acudieron al Servicio de Gastroenterología del Hospital Central Universitario “Antonio María Pineda”. Se trata de un estudio epidemiológico descriptivo de corte transversal. La población estuvo conformada por los pacientes con dispepsia que acudieron al servicio y el muestreo fue de tipo no probabilístico intencional, puesto que se tomó a la población que consultó con síntomas dispépticos y que cumplieron con los criterios de inclusión y exclusión establecidos. Dichos pacientes se interrogaron sobre síntomas dispépticos, se les realizó endoscopia digestiva superior, se describieron los hallazgos endoscópicos y se les tomó muestra para estudio histológico y de genotipificación. Se encontró una incidencia de infección por H. pylori de 98,5%, la infección predominó en el sexo femenino, los genotipos cag A positivos y las formas alélicas m1/s1 son los más frecuentes en la población estudiada y, los mismos se asocian con gastritis crónica, úlceras gástricas y metaplasia intestinal incompleta...

Dyspepsia affects quality of life for many patients and often is associated with Helicobacter pylori infection. This bacterium is recognized as the causative agent of chronic gastritis, is associated with development of gastric and duodenal ulcers and, with the development of gastric cancer. Primary objective was raised to establish the clinical, endoscopic and histological findings associated with Helicobacter pylori infection considering genotypes cag A and vac A in patients with dyspepsia who attended the Gastroenterology Service of Hospital Central Universitario “Antonio María Pineda”. This is a cross-sectional descriptive epidemiological study. The population consisted of patients with dyspepsia who attended the gastroenterology service. The sampling was intentionally non-probabilistic, since we only took the people who consulted with dyspeptic symptoms and met the established criteria of inclusion and exclusion. These patients were questioned about dyspeptic symptoms, underwent upper gastrointestinal endoscopy, endoscopic findings were described and samples were taken for histology and genotyping. We found an incidence of H. pylori of 98.5%, infection prevailed in females, the genotypes cag A positive and m1/s1 allelic forms are most frequent in the population studied and, the same is associated with chronic gastritis, gastric ulcers and intestinal metaplasia incomplete...

Polimorfismo del codón 72 de TP53 y riesgo de cáncer gástrico: estudio caso-control en individuos de la región centroccidental de Venezuela / TP53 codon 72 polymorphism and gastric cancer risk: a case-control study in individuals from the central-western region of Venezuela

El polimorfismo del codón 72 del gen TP53 ha sido asociado con un riesgo elevado para el desarrollo de cáncer. Este polimorfismo origina dos variantes de la proteína, una con un residuo de Arginina (CGC), y otra con Prolina (CCC). El objetivo del estudio fue analizar la asociación de este polimorfismo con el riesgo de desarrollar cáncer gástrico en individuos procedentes de la región centroccidental de Venezuela, considerada de alto riesgo para esta neoplasia maligna. El ADN fue extraído de biopsias de adenocarcinoma gástrico incluídas en parafina (n = 65) y biopsias endoscópicas de pacientes con gastritis crónica (n = 87). El polimorfismo del codón 72 de TP53 fue determinado por PCR-RFLP. Se observó un incremento significativo de la frecuencia del alelo Arg en los pacientes con cáncer gástrico (P = 0,037), originando un riesgo 4,6 veces mayor (95% IC 1,0-21,3) de desarrollar esta enfermedad. Se evidenció un incremento del genotipo Arg/Arg en adenocarcinoma gástrico poco diferenciado (OR: 3,1; 95% IC 1,0-9,2), y del genotipo Arg/Pro en adenocarcinoma de moderado/buen grado de diferenciación (OR: 3,5; 95% IC 1,1-11,0) al comparar con el grupo de cáncer gástrico, y este último también al contrastar con los individuos con gastritis crónica (OR: 2,4; 95% IC 1,1-5,2). Los resultados de este estudio sugieren que la condición de portador del alelo Arg podría estar asociado con el desarrollo de cáncer gástrico en esta región de Venezuela.

Codon 72 polymorphism of the tumor suppressor gene TP53 has been associated with a higher risk in the development of several types of cancer. The polymorphism results in a variant protein with either an arginine (CGC) or a proline residue (CCC). The aim of this study was to analyze the association of the TP53 codon 72 polymorphism with the risk of developing gastric cancer in a high-risk population from the central-western region of Venezuela. DNA was extracted from paraffin-embedded gastric adenocarcinoma biopsies (n = 65) and endoscopic biopsies from chronic gastritis patients (n = 87). TP53 codon 72 polymorphism was determined by PCR-RFLP from all samples. Patients with gastric cancer had a significantly higher frequency (P = 0.037) of the Arg allele than those with chronic gastritis. A logistic regression analysis suggested that Arg carrier individuals had a 4.6-fold higher risk (95% CI 1.0-21.3) of developing gastric cancer. An increment of the Arg/Arg genotype was observed in poor-differentiated gastric adenocarcinoma (OR: 3.1; 95% CI 1.0-9.2), and of the Arg/Pro genotype in well/ moderate-differentiated adenocarcinoma samples (OR: 3.5; 95% CI 1.1-11.0), when comparing within the gastric cancer samples; and the last group also when contrasting it with chronic gastritis patients (OR: 2.4; 95% CI 1.1-5.2). The results of this study suggest that the carriage of the Arg allele could be associated with the development of gastric cancer in this Venezuelan population.

Distribución deppolimorfismos genéticos de inteleuquina-1 en individuos de la región centroccidental de Venezuela / Distribution of Interleukin-1 Genetic Polymorphisms in Central-Western Region Individuals of Venezuela

Las citoquinas pertenecientes a familia de la interleuquina-1 (IL-1) están codificadas por tres genes diferentes: IL-1A, IL-1B, e IL-1RN, los cuales codifican para IL-1 α, IL-1β, y el antagonista endógeno del receptor de IL-1 (IL-1ra), respectivamente. Las IL-1α e IL-1β actúan como citoquinas pro-inflamatorias, mientras que la IL-1ra se comporta como anti-inflamatoria. Han sido reportados varios polimorfismos bialélicos en los genes de IL-1B, incluyendo IL-1B-511(C/T) e IL-1B+3954(C/T), mientras que IL-1RN presenta en el intrón 2 un polimorfismo VNTR penta-alélico. Los polimorfismos funcionalmente relevantes de estos genes han sido correlacionados con un amplio conjunto de condiciones autoinmunes e inflamatorias crónicas, así como con cáncer. Con el fin de determinar la distribución de estos polimorfismos en la región centroccidental de Venezuela, se estudiaron 100 individuos no relacionados aparentemente sanos. Se extrajo ADN genómico a partir de sangre periférica, y se procedió a la tipificación de los polimorfismos IL-1B-511 e IL-1B+3954 por PCR-RFLP y VNTR de IL-1RN por PCR. Se determinaron las frecuencias alélicas y genotípicas con el programa Arlequín ver. 2.000. Se observó un predominio del alelo T (52%) y del alelo C (82%) en IL-1B-511 y IL-1B+3954, respectivamente. Mientras que para IL-1RN los genotipos más frecuente fueron el 1/1 (47%) y 1/2 (41%). Se compararon los resultados con las frecuencias poblacionales encontradas en otros países, destacándose diferencias significativas con poblaciones de diferente origen étnico. Los resultados podrían proporcionar una referencia valiosa para estudios futuros de asociación con cáncer y enfermedades inflamatorias en Venezuela.

The cytokines belonging to the family of interleukin-1 (IL-1) are encoded by three different genes: IL-1A, IL-1B, and IL-1RN, which encode for IL-1α, IL-1β and the endogenous receptor antagonist for IL-1 (IL-1Ra), respectively. IL-1α and IL-1β operate as pro-inflammatory cytokines, while the IL-1Ra as anti-inflammatory. It has been reported several biallelic polymorphisms in the genes of IL-1B, including IL-1B-511(C/T) and IL-1B+3954(C/T), while IL-1RN presents in intron 2 a penta-allelic VNTR polymorphism. The functionally relevant polymorphisms of these genes have been correlated with a wide range of chronic inflammatory and autoimmune conditions, as well as cancer. In order to determine the distribution of these polymorphisms in the Central-Western region of Venezuela, 100 unrelated apparently healthy individuals were studied. DNA was extracted from peripheral blood, and proceded to the characterization of polymorphisms IL-1B-511 and IL-1B +3954 by PCR-RFLP and VNTR IL-1RN by PCR. Allelic and genotypic frequencies were determined awith the program Arlequin v. 2.0. There was a predominance of T allele (52%) and the C allele (82%) for IL-1B-511 and IL-1B +3954, respectively. While for IL-1RN the more frequent genotypes were 1/1 (47%) and 1/2 (41%). We compare the results with the population frequencies found in other countries, highlighting differences with significant populations of different ethnic origin. These results could provide a valuable reference for future studies of association with cancer and inflammatory diseases in Venezuela.

Caracterizacióndde variantes alélicas de citocrmo cyp2d6 en la población de laa región centroccidental de Venezuela / Characterization Of Cytochrome Cyp2d6 Allele Variants In The Population Of The Central-Western Region Of Venezuela

El gen CYP2D6 codifica para una monooxigenasa perteneciente al citocromo P450, la cual está involucrada en la biotransformación de un gran número de drogas comúnmente prescritas, como antidepresivos, antineoplásicos y antihipertensivos. Algunos efectos adversos, así como falla terapéutica pueden ser relacionados con la actividad anormal de CYP2D6 producto de polimorfismos en el gen de dicha enzima. Con el fin de predecir la frecuencia de algunos fenotipos metabolizadores pobres de CYP2D6 en la población de la región centroccidental de Venezuela se determinaron las frecuencias alélicas y genotípicas de las variantes alélicas CYP2D6*3, *4 y *6. Se extrajo ADN genómico a partir de sangre periférica de 100 individuos voluntarios aparentemente sanos, y se procedió a la genotipificación por PCR tetra-primer alelo-específica y análisis por electroforesis en geles de agarosa. Se compararon las frecuencias obtenidas con poblaciones de otros países. El alelo más frecuente fue CYP2D6*4 con 16,5%, mostrando una diferencia significativa con la reportada con poblaciones asiáticas. Este trabajo constituye un estudio preliminar en la caracterización de un grupo más amplio de alelos de CYP2D6 con el fin de asistir al desarrollo de una farmacoterapia individualizada en nuestro país.

The CYP2D6 gene encodes for a monooxygenase belonging to the cytochrome P450, which is involved in the biotransformation of a large number of commonly prescribed drugs such as antidepressants, antihypertensive and antineoplastic. Some side effects, as well as therapeutic failure may be related to abnormal activity of CYP2D6 product of polymorphisms in the CYP2D6 gene. In order to predict the frequency of some poor metabolisers phenotypes of CYP2D6 in the population of the Central-Western region of Venezuela it was determined the allelic and genotypic frequencies of CYP2D6 *3, *4, *6 allelic variants. DNA was extracted from peripheral blood of 100 apparently healthy volunteers, and proceded to genotyping by PCR tetra-primer allele-specific analysis and agarose gel electrophoresis. We compared the frequencies obtained with those of other countries. The most frequent allele was CYP2D6 *4 with 16.5%, showing a significant difference to the reported in Asian populations. This work is a preliminary study on the characterization of a wider group of CYP2D6 alleles in order to assist the development of an individualized pharmacotherapy in our country.

Polimorfismo genético de interleuquina-1: Asociación con cáncer gástrico en la población de alto riesgo del Centroccidente de Venezuela / lnterleukin-1 genetic polymorphism: Association with gastric cancer in the high-risk Central-Western population of Venezuela

Background: Genetic predisposition may play a role in the prevalence of gastric cancer (GC). Aim: To investigate the relationship between selected interleukin-1 (IL-1) loci polymorphisms and gastric cancer risk in the Central-Western region of Venezuela, where gastric cancer represents the first cause of cancer-related deaths. Material and methods: In a case-control study, we compared the frequencies of IL-1B-511 and IL-1B+3954 biallelic polymorphism, and the pentallelic VNTR of IL-IRN in 84 gastric adenocarcinoma paraffin-embedded biopsies and 84 endoscopic biopsies from cancer-free controls. Results: No significant increase in genotypic frequencies in gastric cancer was observed for any of the IL-1B-511 allelic combinations. However, in alogistic regression analysis, a significant association emerged for the IL- 1B+3954C carrier genotype (odds ratio (OR): 6.2; 95% confidence intervals (CI) 1.3-28.8). On the other hand, a significantly higher risk was evidenced for the IL-IRN*2/*2 genotype (OR: 7.0; 95% CI 2.3-21.5). Only patients with awell/moderately-differentiated adenocarcinoma that were homozygotes for the IL-IRN*2/*2 genotype, had a higher risk than the complete gastric cancer group (OR: 8.1, 95% CI 2.5-26.8). Some genotype combinations among IL-1B-511, IL-1B+3954 and IL-IRN showed an increased risk for developing gastric cancer and well/moderate differentiated adenocarcinoma, that was dependent of the presence of IL-IRN*2/*2 genotype. Conclusions: IL-IRN*2/*2 genotype is associated with increased risk of gastriccancer in the Venezuelan population.

Determinación por quimioluminiscencia del contenido de telómero en biopsias de archivo de cáncer de colon / Chemiluminescent measurement of telomere DNA content in archival biopsies of colon adenocarcinoma

Los telómeros son complejos nucleoproteicos que protegen los extremos de cromosomas eucariotas de fenómenos de degradación y recombinación. En humanos, los telómeros miden 10-12 kpb en células somáticas normales, pero pueden reducirse hasta apenas 1-2 kpb en células tumorales de rápido crecimiento, debido a la replicación incompleta de estas estructuras en cada división mitótica. Los telómeros se acortan con la edad, lo cual puede estar asociado a inestabilidad genómica y a un incremento del riesgo de sufrir cáncer. El análisis de fragmentos de restricción teloméricos por Southern blot es en la actualidad el método estándar para la medición de la longitud de los telómeros. Sin embargo, una determinación precisa no es posible cuando el ADN está fragmentado o es escaso, como es el caso de las biopsias incluidas en parafina. En este trabajo se adecuó un ensayo de slot blot para cuantificar el contenido relativo, en lugar de la longitud, del ADN telomérico a partir de muestras de archivo de adenocarcinoma de colon. El contenido de ADN telomérico pudo ser medido de manera reproducible con apenas 75 ng de ADN genómico altamente degradado empleando detección de la hibridización por quimioluminiscencia.

A novel reiterated family of transcribed oligo(A)-terminated, interspersed DNA elements in the genome of Trypanosoma cruzi

We report the molecular characterization of a novel reiterated family of transcribed oligo(A)-terminated, interspersed DNA elements in the genome of Trypanosoma cruzi. Steady-state level of transcripts of this sequence family appeared to be developmentally regulated, since only in the replicative forms the parasite showed expression of related sequences with a major band around 3 kb. The presence of frame shifts or premature stop codons predicts that transcripts are not translated. The sequence family also contains truncated forms of retrotransposons elements that may become potential hot spots for retroelement insertion. Sequences homologous to this family are interspersed at many chromosomes including the subtelomeric regions

Charaterization of Leishmania major Friedlin Telomeric Terminus

Here we have characterized Leishmania major (Friedlin) telomeric terminus (the very end) using recombinants obtained by a vector-adaptor cloning protocol. As in L. donovani, the last nine nucleotides of L. major terminus are 5'-GGTTAGGGT-OH 3', differing from Trypanosoma cruzi and T. brucei terminus 5'GGGTTAGGG-OH 3', thus indicating that these sequences are genus specific. We have also made a comparative analysis between L. major and L. donovani telomere-associated sequences, and described a novel non-repeated telomeric associated sequence common to L. major low molecular weight chromosomal bands