Restricted feeding modulates peripheral clocks and nutrient sensing pathways in rats

ABSTRACT Objective: Feeding restriction in rats alters the oscillators in suprachiasmatic, paraventricular, and arcuate nuclei, hypothalamic areas involved in food intake. In the present study, using the same animals and experimental protocol, we aimed to analyze if food restriction could reset clock genes ( Clock, Bmal1 ) and genes involved in lipid metabolism ( Pgc1a, Pparg, Ucp2 ) through nutrient-sensing pathways ( Sirt1, Ampk, Nampt ) in peripheral tissues. Materials and methods: Rats were grouped according to food access: Control group (CG, food ad libitum ), Restricted night-fed (RF-n, food access during 2 h at night), Restricted day-fed (RF-d, food access during 2 h in the daytime), and Day-fed (DF, food access during 12 h in the daytime). After 21 days, rats were decapitated at ZT3 (0900-1000 h), ZT11 (1700-1800 h), or ZT17 (2300-2400 h). Blood, liver, brown (BAT) and peri-epididymal (PAT) adipose tissues were collected. Plasma corticosterone and gene expression were evaluated by radioimmunoassay and qPCR, respectively. Results: In the liver, the expression pattern of Clock and Bmal1 shifted when food access was dissociated from rat nocturnal activity; this phenomenon was attenuated in adipose tissues. Daytime feeding also inverted the profile of energy-sensing and lipid metabolism-related genes in the liver, whereas calorie restriction induced a pre-feeding increased expression of these genes. In adipose tissues, Sirt1 expression was modified by daytime feeding and calorie restriction, with concomitant expression of Pgc1a , Pparg , and Ucp2 but not Ampk and Nampt . Conclusion: Feeding restriction reset clock genes and genes involved in lipid metabolism through nutrient-sensing-related genes in rat liver, brown, and peri-epididymal adipose tissues.

Clinical features and molecular analysis of arginine-vasopressin neurophysin II gene in long-term follow-up patients with idiopathic central diabetes insipidus / Apresentação clínica e análise molecular do gene da arginina-vasopressina neurofisina II de pacientes com diabetes insípido central idiopático com longo seguimento

INTRODUCTION: Central diabetes insipidus (DI) characterized by polyuria, polydipsia and inability to concentrate urine, has different etiologies including genetic, autoimmune, post-traumatic, among other causes. Autosomal dominant central DI presents the clinical feature of a progressive decline of arginine-vasopressin (AVP) secretion. OBJECTIVE: In this study, we characterized the clinical features and sequenced the AVP-NPII gene of seven long-term follow-up patients with idiopathic central DI in an attempt to determine whether a genetic cause would be involved. METHODS: The diagnosis of central DI was established by fluid deprivation test and hyper-tonic saline infusion. For molecular analysis, genomic DNA was extracted and the AVP-NPII gene was amplified by polymerase chain reaction and sequenced. RESULTS: Sequencing analysis revealed a homozygous guanine insertion in the intron 2 (IVS2 +28 InsG) of the AVP-NPII gene in four patients, which represents an alternative gene assembly. No mutation in the code region of the AVP-NPII gene was found. CONCLUSIONS: The homozygous guanine insertion in intron 2 (IVS2 +28 InsG) is unlikely to contribute to the AVP-NPII gene modulation in DI. In addition, the etiology of idiopathic central DI in children may not be apparent even after long-term follow-up, and requires continuous etiological surveillance.

INTRODUÇÃO: O diabetes insípido (DI) central, caracterizado por poliúria, polidipsia e inabilidade em concentrar a urina, apresenta diferentes etiologias, incluindo causas genética, autoimune, pós-traumática, entre outras. O DI central autossômico dominante apresenta a característica clínica de falência progressiva da secreção da arginina-vasopressina (AVP). OBJETIVO: No presente estudo, caracterizou-se a apresentação clínica e sequenciou-se o gene AVP-NPII de sete pacientes com DI central idiopático seguidos de longa data na tentativa de determinar se uma causa genética estava envolvida na etiologia. MÉTODOS: O diagnóstico do DI central foi estabelecido por meio do teste de jejum hídrico e infusão de salina hipertônica. Para a realização da análise molecular, o DNA genômico foi extraído e o gene AVP-NPII foi amplificado pela reação em cadeia da polimerase e, posteriormente, sequenciado. RESULTADOS: A análise do sequenciamento do gene AVP-NPII revelou uma inserção em homozigose de uma guanina no íntron 2 (IVS2 +28 InsG) em quatro pacientes, correspondendo a um arranjo alternativo do gene. Nenhuma mutação da região codificadora do gene AVP-NPII foi encontrada. CONCLUSÕES: A inserção em homozigose de uma guanina no íntron 2 (IVS2 +28 InsG) provavelmente não contribui na modulação do gene AVP-NPII no DI. Adicionalmente, a etiologia do DI central idiopático em crianças pode não se tornar evidente mesmo após um longo período de seguimento, necessitando de contínua vigilância da etiologia.

Insuficiência adrenal primária no adulto: 150 anos depois de Addison / Primary adrenal insufficiency in adults: 150 years after Addison

Thomas Addison descreveu pela primeira vez, há 150 anos, uma síndrome clínica de perda de sal em indivíduos com hiperpigmentação cutânea, associada à destruição da glândula adrenal. Atualmente, a insuficiência adrenal ainda representa uma condição de risco, pois seu diagnóstico é freqüentemente não reconhecido nas fases iniciais da doença. A adrenalite tuberculosa era a causa mais freqüente na maioria dos casos descritos inicialmente, mas, na atualidade, a doença de Addison auto-imune está presente em uma grande porcentagem de pacientes com insuficiência adrenal primária. No presente trabalho, apresentamos a prevalência das diferentes causas, manifestações clínicas e achados laboratoriais, incluindo a determinação de anticorpos anticórtex adrenal e anti-21-hidroxilase em pacientes acompanhados com insuficiência adrenal primária seguidos nos Ambulatórios das Divisões de Endocrinologia da Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP) e da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto - USP (FMRP-USP).

A utilização da octreotida subcutânea ou LAR como teste preditivo e no tratamento da acromegalia / Usefulness of subcutaneous or long-acting octreotide as a predictive test and in the treatment of acromegaly

Avaliamos as concentrações de GH, IGF-1 e IGFBP-3 em 10 pacientes com acromegalia em atividade, antes e após tratamento com octreotida subcutânea (OCT-sc) e LAR (OCT-LAR). Verificamos o valor preditivo dos testes agudo e de curto prazo (após 21 dias) na resposta do GH e IGF-1. As avaliações de médio prazo foram realizadas após 6 meses de tratamento com cada formulação. Os valores de GH (µg/l; IFMA), nadir de GH no oGTT e IGF-1 (µg/l; IRMA) pré-tratamento foram 13,9±6,3; 11,4±6,3; 717±107, respectivamente. Os tratamentos de 21 dias com OCT-sc ou OCT-LAR reduziram os níveis de GH (2,9±1,1 e 4,4±1,2) e IGF-1 (491±80 e 512±80). Redução após 6 meses de tratamento foi similar com as duas formulações: GH basal (2,8±0,9 e 1,9±0,5), nadir GH-GTT (1,6±0,4 e 1,6±0,5) e IGF-1 (583±107 e 515±83). A IGFBP-3 não foi bom parâmetro para avaliação destes pacientes. O teste agudo não foi indicador da ocorrência de efeitos colaterais. Os testes, agudo e de curto prazo, foram capazes de predizer a resposta do GH ao tratamento crônico com a OCT-sc e OCT-LAR.

Insuficiência adrenal crônica e aguda / Adrenal insufficiency

Os glicocorticóides apresentam um importante papel na regulação metabólica, nos sistemas cardiovascular, imune, nervoso, e na resposta adaptativa ao estresse. A insuficiência adrenal pode ser causada por uma doença primária da adrenal (baixas concentrações plasmáticas de cortisol e altas de ACTH) ou secundária a doenças do eixo hipotálamoipofisário (baixas concentrações plasmáticas de cortisol e de ACTH). A falta crônica de glicocorticóide leva a sintomas insidiosos e inespecíficos (mal-estar geral, fraqueza, inapetência, perda de peso, queixas gastrintestinais). Adicionalmente, quando há também deficiência de mineralocorticóide, a hipotensão, síncope, desidratação e choque cardiocirculatório, com hiponatremia e hipercalemia podem associar-se ao quadro clinico. O tratamento consiste na reposição de cortisol (hidrocortisona VO, 12 a 15 mg/’m POT. 2’ de superfície corporal, acetato de cortisona VO, 25mg/dia e prednisona VO, 5 a 10 mg/dia) na insuficiência adrenal secundária e de cortisol e minelocorticóide (9’alfa’ fluorohidrocortisona VO, 0,1 mg/dia) na primária. Doenças infecciosas, traumas e cirurgias podem precipitar uma crise aguda, chamada crise addisoniana, situação esta de risco de vida, quando não tratada. O tratamento consiste de reposição do volume intravascular com cloreto de sódio (soro fisiológico 0,9por cento 2 L/hora) e glicocorticóides (100 mg EV de hidrocortisona a cada 6 h). Desde que a crise addisoniana é freqüentemente desencadeada por processo infeccioso, o diagnóstico de infecção deve ser confirmado e, se presente, o uso de antibioticoterapia deve ser preconizado

Carcinoma medular de tireóide: da definiçäo às bases moleculares / Medullary thyroid carcinoma: from definition to genetic bases

O carcinoma medular de tireóide (CMT) é um tumor maligno raro com origem nas células parafoliculares da tireóide, tendo como principal produto secretório a calcitonina. Representa 3 a 10 por cento de todos os tumores tireoidianos e é responsável por um grande número de mortes em portadores de câncer de tireóide. Em 75-90 por cento dos pacientes, o CMT ocorre de forma esporádica e, nos demais casos, é uma doença hereditária autossômica dominante com alto grau de penetrância e variabilidade de expressäo, podendo fazer parte de 3 síndromes distintas: neoplasia endócrina múltipla (NEM) 2A, NEM 2B ou CMT familiar. As diferentes formas clínicas do CMT, principalmente as hereditárias, estäo relacionadas com mutações no proto-oncogene RET, as quais resultam em ativaçäo constitutiva do receptor de membrana tirosina-quinase RET. A distinçäo entre estas formas é de extrema relevância clínica por causa das diferenças apresentadas entre elas em termos de prognóstico e pela necessidade de um rastreamento familiar, aconselhamento genético e seguimento das formas hereditárias. A eficiência do rastreamento genético, pela pesquisa de mutações no proto-oncogene RET, está bem estabelecida no diagnóstico e na identificaçäo de portadores assintomáticos das formas hereditárias de CMT, permitindo uma intervençäo cirúrgica precoce e efetiva, reduzindo a morbidade e a mortalidade associadas a esta doença.

Padronizaçäo do teste de infusäo de salina hipertônica para o diagnóstico do diabetes insípido com dosagem de vasopressina plasmática / Standartization of hypertonic saline infusion test

No presente estudo avaliamos a reserva neuro-hipofisária de arginina vasopressina (AVP) e a sensaçäo de sede por meio do estímulo osmótico com infusäo de soluçäo salina hipertônica (NaCl 5 por cento; 0,06 ml/kg/min/120min) em oito indivíduos normais e em 11 pacientes portadores de diabetes insípido (DI), sendo nove com DI central (DIC), um com DI central parcial (DIP) e um com DI nefrogênico (DIN). O grupo controle apresentou uma elevaçäo das concentraçöes de AVP plasmática com pico máximo médio de 4,5 pg/ml (intervalo: 2,4 a 8,0 pg/ml) ao estímulo osmótico, com correlaçäo positiva (r=0,63; p<0,0001) entre as concentraçöes plasmáticas de AVP e osmolalidade plasmática (pOsm). O limiar osmótico de liberaçäo de AVP encontrado foi em média de 278 mOsm/kg. Os pacientes com DIC näo apresentaram elevaçäo da concentraçäo plasmática de AVP frente ao aumento da pOsm (basal de 0,5 e pico de 0,8 pg/ml). O paciente com DIP apresentou uma resposta reduzida da AVP (<2,0 pg/ml) e no paciente com DIN a AVP elevou-se a concentraçöes suprafisiológicas (>20 pg/ml). O limiar osmótico de sede foi 280 mOsm/kg nos grupos controle e DIC. A "plotagem" do pico máximo de AVP e da pOSm permitiu diferenciar os pacientes com DI do grupo controle. Concluímos que o teste de infusäo de soluçäo salina hipertônica com dosagem de AVP plasmática é um método útil para a investigaçäo do eixo neuro-hipofisário permitindo o diagnóstico diferencial dos tipos de DI. Além disso, este teste avalia o limiar da sede.