Validación de un juego de reactivos (CUALINEN-HCG) para la detección cualitativa de gonadotropina coriónica humana en el embarazo / Validation of a kit of reagents (CUALINEN-HCG) for the qualitative detection of human chorionic gonadotropin in pregnancy

Se presentaron los resultados de la estandarización de un juego de reactivos (CUALINEN-HCG) para la detección de la gonadotropina coriónica humana (HCG) en muestras de orina de mujeres embarazadas y de su validación diagnóstica en el nivel primario. CUALINEN-HCG es un microELISA de doble captura, que cuenta con un anticuerpo monoclonal específico para la subunidad b de la hCG (AcM-b hCG-IG1) y de conjugados enzimáticos con el sustrato colorimétrico correspondiente, obtenido y purificado en el Instituto Nacional de Endocrinología. Los resultados de la validación analítica del CUALINEN-HCG mostraron que era capaz de distinguir entre muestras de orinas positivas y negativas con una relación positivo/negativo de 10 veces; se obtuvieron coeficientes de variación del 6 (por ciento) en estudios de precisión (interensayos e intraensayos) realizados para el control positivo. Se procesaron 91 muestras de orina matutina de mujeres con amenorrea de entre 4 y 16 sem a partir de la última fecha de menstruación. En las que el embarazo fue diagnosticado posteriormente. Se logró la validación en el nivel primario del CUALINEN-HCG con una sensibilidad y especificidad diagnóstica de 85 y 95 (por ciento), respectivamente y una exactitud diagnóstica del 90 (por ciento). Se recomendó su uso como herramienta auxiliar para el diagnóstico del embarazo en nivel primario a partir de la primera semana de ausencia de la menstruación (5 sem de amenorrea)(AU)

Desarrollo de un método inmunoenzimático para determinar progesterona / Development of an immunoenzimatic method to determine progesterone

Se desarrolló un método inmunoenzimático, competitivo, en fase líquida, con separación por anticuerpos acoplados a partículas magnetizables, para determinar progesterona en plasma; se basa en la competencia por los sitios de unión de un anticuerpo monoclonal, entre la hormona presente en la muestra y un conjugado hormona-enzima, en presencia de agentes bloqueadores de las proteínas de transporte de esteroides del plasma. El complejo antígeno-anticuerpo es atrapado por un segundo anticuerpo antiglobulina de ratón acoplado a partículas magnetizables que permite separarlo de los componentes no reaccionantes del sistema y desarrollar en su superficie la reacción de color con la que se cuantifica el analito. Este sistema no requiere extracción de los esteroides del plasma con solventes orgánicos, ni centrifugación y el producto final de la reacción puede ser leído en un colorímetro convencional. Todo lo anterior lo hace accesible al equipamiento de un laboratorio de bioquímica clínica convencional. Se estudiaron los parámetros de calibración y de calidad de ambos métodos, se compararon con 2 sistemas analíticos comerciales similares y con los resultados de la determinación de progesterona en 200 muestras y se comprobó que no existían diferencias estadísticas entre ellos. Se concluyó que este sistema cuenta con los requisitos necesarios para ser incorporado como método de rutina en los laboratorios del Sistema Nacional de Salud(AU)

An immunoenzimatic, competitive liquid stage method , with separation by antibodies coupled to magnetizable particles was developed to determine progesterone in plasma, It is based on the competence for the binding sites of a monoclonal antibody between the hormone present in the sample and a hormone-enzime conjugate in the presence of blocking agents of the proteins transporting steroids from plasma. The antigen-antibody complex is trapped by a second mouse antiglobulin antibody coupled to magnetizable particles that allow to separate it from the non reacting components of the system and to develop in its surface the color reaction with which the analyte is quantified. This system does not require either extraction of the steroids from plasma with organic solvents or centrifugation and the final product of the reaction may be read in a conventional colorimeter. All this make it accessible to the equipment of a laboratory of conventional clinical biochemistry. The parameters of calibration and quality of both methods were studied and compared with 2 similar commercial analytic systems and with the results of progesterone determination in 200 samples. It was proved that there were no statistical differences between them. It was concluded that this system has all the necessary requirements to be incorporated as a routine method in the laboratories of the National Health System(AU)

Diagnóstico precoz de embarazo en la atención primaria mediante determinación cualitativa de gonadotropina coriónica humana / Early diagnosis of pregancy in primary care by qualitative determination of HCG

Se presentan los resultados de la aplicación de un método cualitativo no instrumental, auxiliar de la práctica clínica para el diagnóstico del embarazo en un consultorio médico. El ensayo se basó en la detección de la hormona gonadotropina coriónica en la orina de mujeres fértiles con amenorrea, mediante un immunoensayo enzimático desarrollado en el Instituto Nacional de Endocrinología. La determinación se caracterizó por una sensibilidad del 85 porciento, una especificidad del 95 porciento y una exactitud del 90 porciento(para un límite de clasifiación positivo de 100 UI de HC g/L). La coincidencia del método cualitativo con uno cuantitativo fue del 90 porciento. Aunque la sensibilidad del método cualitativo fue inferior a los requerimientos expuestos en la literatura especializada revisada, se recomienda su uso por los médicos de la familia, como una arma auxiliar en el diagnóstico precoz del embarazo, por su elevada especificidad, buena correlación con el método cuantitativo y su relativa sencillez operacional

Validación retrospectiva del proceso de purificación del anticuerpo monoclonal Inmunoglobulina Anti-gonadotropina coriónica humana / Retrospective validation of the purification process of immunoglobulin anti-human chorionic gonadotropin monoclonal antibody

Con el objetivo de verificar que el proceso de purificación del anticuerpo monoclonal (AcM) IG1 antigonadotropina coriónica humana (hCG) se mantenía operando bajo condiciones controladas que garantizaban la calidad del producto se llevó a cabo la validación retrospectiva del mismo. Se analizaron los resultados de 21 procesos cromatográficos sucesivos en protein A-Sepharose CL-4B. Se evaluaron los parámetros: recuperación, pureza y actividad inmunológica del producto. Se comprobó, según la información recopilada, que la recuperación estuvo en el rango de 90-98, 16 porciento, con un valor promedio 93,19 porciento, una desviación estándar de 2,70 y un coeficiente de variación de 2,90 porciento, la pureza entre 90 y 99,3 porciento con un valor promedio de 95,48 porciento, una desviación estándar de 2,47 y un coeficiente de variación de 2,59 porciento y la actividad inmunológica determinada por radioinmunoensayo y expresada como ng de hormona marcada unida por milígramos de anticuerpos entre 4,013 y 6,210 ng de hCG marcada unida por mg de AcM, con un valor promedio de 4,72, una desviación estándar de 0,60 y un coeficiente de variación de 12,75 porciento. Se concluyó que el proceso se encontraba transcurriendo bajo las condiciones diseñadas de forma reproducible, lo cual garantiza la calidad del AcM

Evaluación de un anticuerpo monoclonal antigonadotropina coriónica para detectar embarazo / Evalution of a monoclonal antibody chorionic antigonadotropin to detect pregnancy

Se evaluó el anticuerpo monoclonal B8 producido en el INEN para ser utilizado en el desarrollo de un método analítico para detectar embarazo. Los resultados de este método fueron evaluados utilizando como referencia los métodos tradicionales como tacto vaginal y biopsia de endometrio. Se encontró que es capaz de detectar el embarazo con 80 por ciento de sensibilidad y 100 por ciento de especificidad. El anticuerpo monoclonal valido B8 cumple con los requisitos de calidad para ser utilizado en el método inmunoenzimático con que contamos pues los resultados obtenidos no dieron diferencias significativas con el monoclonal en uso

Evaluación en condiciones de rutina, de un Microelisa para determinar microalbuminuria / Evaluation under routine conditions of a microelisa to determine microalbuminuria

Se realizó este trabajo para evaluar el funcionamiento, en condiciones óptimas y de rutina, de un microelisa para determinar microalbuminuria, desarrollado en el Instituto Nacional de Endocrinología. Los coeficientes de variación intra e interensayo del control de calidad alto; así como los parámetros de la curva estándar durante la validación en condiciones óptimas estuvieron acordes con lo reportado para estos métodos; sin embargo, en condiciones de rutina, se hallaron para los controles de calida bajo y alto, variaciones aleatorias que incidieron sobre la precisión del ensayo. Para robustecer el método se sugiere: utilizar agua de calidad analítica tipo I, reajustar la curva dosis-respuesta o desarrollar un ELISA tipo "sandwich"