Treatment of recalcitrant vitiligo by autologous non-cultured and trypsinized melanocyte grafting in the west of Iran

Abstract Background Vitiligo is a common disease with a high burden, and its recalcitrant type is unresponsive to current medical treatments. Autologous non-cultured and trypsinized melanocyte grafting, which is a simple and experience-based procedure, has been suggested for the treatment of vitiligo. Objective To assess autologous non-cultured and trypsinised melanocyte grafting in recalcitrant vitiligo. Methods This clinical trial was done on 28 patients (20 females and 8 males). After demarcation and preparation of both donor and recipient sites, both sites were shaved by a curette. The materials harvested from the donor site were trypsinized and centrifuged. The resulting suspension was mixed with hyaluronic acid gel and was spread over the shaved recipient area. Results Twenty-eight patients with a total of 108 lesions and a mean age of 25.93 ± 7.11 years were included in the present study. Generalized vitiligo (57.1%) was the most common clinical type and the face and neck regions (38%) were the most frequent treated sites. Good to excellent repigmentation was seen in the face and neck, trunk, upper extremity, and genitals in 31 (57.4%), 11 (20.4%), 9 (16.7%) and 3 (5.5%) patients, respectively. Face and neck showed significantly better results (p < 0.05). Study limitations Low sample size and single-center study. Conclusion Autologous non-cultured and trypsinized melanocyte grafting is a safe method with satisfactory outcomes in recalcitrant vitiligo. Appropriate training of physicians and proper use of specialists' experiences can be effective in increasing the improvement rate.

Anti-inflammatory, anti-oxidative and anti-apoptotic effects of Heracleum persicum L. extract on rats with gentamicin-induced nephrotoxicity

Objective:To evaluate the effect of Heracleum persicum L. against gentamicin-induced nephrotoxicity in rats. Methods:Thirty-six Wistar rats were divided into 6 groups including control (normal saline), gentamicin (80 mg/kg/d for 10 d), Heracleum persicum (750 mg/kg/d), and gentamicin (10 d) + Heracleum persicum extract at three different doses (250, 500, and 750 mg/kg/d for 40 d). Urine creatinine, urea, protein, and albumin levels were determined. In addition, serum urea, creatinine, sodium, potassium, cytokines (TNF-α, IL-1β, IL-6, and IL-10), glutathione peroxidase activity, total antioxidant capacity, kidney malondialdehyde, stereological parameters, and expressions of apoptosis-related genes (p53, Bax, Bcl-2, and caspase-3) were measured. The LD50 of Heracleum persicum extract was determined based on Lorke's method. Histopathological evaluation was also performed. Results:In addition to decreased urine protein and albumin, and increased creatinine and urea, co-treatment with gentamicin and Heracleum persicum significantly reduced levels of creatinine and urea, and increased sodium and potassium in serum. Heracleum persicum treatment also improved stereological parameters and serum inflammatory cytokines. There was a significant increase in serum glutathione peroxidase activity and total antioxidant capacity as well as a reduction in malondialdehyde level. Furthermore, treatment with Heracleum persicum extracts downregulated p53, caspase-3, and Bax and upregulated Bcl-2 expressions. In histopathological evaluation, Heracleum persicum extracts showed protection against gentamicin-induced renal damages. Conclusions:Heracleum persicum exhibits protective effects against gentamicin-induced structural and functional renal impairments.

Crab shell extract improves serum biochemical markers and histological changes of pancreas in diabetic rats / El extracto de cáscara de cangrejo mejora los marcadores bioquímicos del suero y los cambios histológicos del páncreas en ratas diabética

SUMMARY: Diabetes mellitus is a common metabolic disease. There are many natural agents available to control and treat diabetes. Crab shell extract has antioxidant properties. The aim of present study was to investigate the effect of crab shell hydroalcoholic extract on blood glucose, liver enzymes, nitric oxide and antioxidant capacity of serum and histological structure of pancreas in diabetic rats. In this experimental study, thirty five male Wistar rats (180-220 g) were divided into control, diabetic and experimental groups (n=7). Diabetes was induced by intraperitoneal injection of streptozotocin (60 mg/kg). Rats were treated for 14 days by crab shell extract with 100, 200 and 400 mg/kg doses. Fasting blood glucose, serum levels of liver enzymes, nitric oxide (NO) and total antioxidant capacity were evaluated. Changes of pancreatic tissue were determined using a modified aldehyde fuchsin staining method. Data were analyzed using one-way ANOVA. Differences were considered statistically significant at P<0.05. Crab shell extract induced a significant reduction in blood glucose, serum levels of nitric oxide and ALT (P=0.033). Also, there were a significant increase in total antioxidant capacity (FRAP) (P=0.007), and insignificant decrease in serum levels of AST. The extract improved pancreatic tissue changes caused by diabetes. In conclusion, antioxidant and anti-diabetic effects of crab shell increase total antioxidant capacity of serum and decreased blood glucose, serum nitric oxide and ALT levels.

RESUMEN: La diabetes mellitus es una enfermedad metabólica común. Hay muchos agentes naturales disponibles para controlar y tratar la diabetes. El extracto de cáscara de cangrejo tiene propiedades antioxidantes. El objetivo del presente estudio fue investigar el efecto del extracto hidroalcohólico de la cáscara de cangrejo sobre la glucosa sérica, las enzimas hepáticas, el óxido nítrico y la capacidad antioxidante del suero y la estructura histológica del páncreas en ratas diabéticas. En este estudio experimental, treinta y cinco ratas Wistar machos (180220 g) se dividieron en cinco grupos: control, diabéticos y experimentales (n = 7). La diabetes se indujo por inyección intraperitoneal de estreptozotocina (60 mg / kg). Las ratas se trataron durante 14 días con extracto de cáscara de cangrejo con dosis de 100, 200 y 400 mg / kg. Se evaluaron la glucosa en sangre en ayunas, las enzimas hepáticas, el óxido nítrico sérico y la capacidad antioxidante total. Los cambios en el tejido pancreático se determinaron usando un método de tinción de aldehído fucsina modificado. Los datos se analizaron utilizando ANOVA unidireccional. Las diferencias se consideraron estadísticamente significativas a P <0,05. El extracto de cáscara de cangrejo indujo una reducción significativa en la glucosa en sangre, en los niveles séricos de óxido nítrico y ALT (P = 0,033). Además se observó un aumento significativo en la capacidad antioxidante total (FRAP) (P = 0.007), y una disminución insignificante en los niveles séricos de AST. El extracto mejoró los cambios en el tejido pancreático causados por la diabetes. En conclusión, los efectos antioxidantes y antidiabéticos de la cáscara de cangrejo aumentan la capacidad antioxidante total de suero y la disminución de la glucosa en la sangre, el óxido nítrico sérico y los niveles de ALT.

Hepatoprotective effects of Tibulus terrestris hydro-alcholic extract on non-alcoholic fatty liver- induced rats / Efectos hepatoprotectores del extracto hidro-alcohólico de Tribulus terrestris en ratas con inducción de hígados grasos no alcólicos

Non-alcoholic fatty liver induces many complications to the liver tissue and also serum related parameters. Medicinal plants are the safe therapeutic strategy for the treatment of diseases. In this regards, the present study was conducted to evaluate the effect of Tribulus terrestris (T. terrestris) extract on non-alcoholic fatty liver in rats. In this experimental study, thirty male Wistar rats were divided into five groups (n=6). Animals in experimental groups were received high fructose diet (70 %) (HDF) daily alone or in combined with daily intraperitoneal injection of 500, 700 and 1000 mg/kg extract of T. terrestris. Control group of rats was feed with standard chow. The serum levels of biomarkers of liver and serum lipid profiles were assessed, also histopathological examination of liver tissue done. Data were analyzed using One-way ANOVA method followed by Tukey's post-hoc multiple comparison test and P<0.05 was considered statistically significant. There were significant improvements for biomarkers of liver tissue (P<0.05) and serum lipid profiles (P<0.01) in the HFD-fed rats that were treated with T. terrestris extract compare to HFD-fed group. In addition, accumulation of lipids in hepatocytes was significantly reduced in the HFD-fed + extract administrated groups in comparison to HFD-fed rats (P<0.01). T. terrestris extract has protective effects against non-alcoholic fatty liver by changing biomarkers of liver tissue, serum lipid profiles and histopathological anomalies of liver tissue, to normal range.

El hígado graso no alcohólico induce muchas complicaciones al tejido hepático y también en ciertos parámetros relacionados con el suero. Las plantas medicinales son la estrategia terapéutica segura para el tratamiento de enfermedades. En este sentido, el presente estudio se realizó para evaluar el efecto del extracto de Tribulus terrestris (T. terrestris) sobre el hígado graso no alcohólico en ratas. En este estudio experimental se dividieron 30 ratas macho Wistar en cinco grupos (n = 6). Los animales de los grupos experimentales recibieron dietas altas en fructosa (70 %) (HDF) al día o en combinación con inyección intraperitoneal diaria de 500, 700 y 1000 mg / kg de extracto de T. terrestris. El grupo control de ratas fue alimentado con alimento estándar. Se evaluaron los niveles séricos de biomarcadores hepáticos y perfiles de lípidos séricos, así como un examen histopatológico del tejido hepático. Los datos se analizaron utilizando el método ANOVA de una vía seguido de la prueba de comparación múltiple post-hoc de Tukey y el P<0,05 se consideró estadísticamente significativo. Hubo mejoras significativas en los biomarcadores del tejido hepático (P <0,05) y en los perfiles de lípidos séricos (P <0,01) en las ratas alimentadas con HFD que se trataron con extrato de T. terrestris comparado con el grupo alimentado con HFD. Además, la acumulación de lípidos en los hepatocitos se redujo significativamente en los grupos alimentados con HFD + extracto, en comparación con las ratas alimentadas con HFD (P <0,01). El extracto de T. terrestris tiene efectos protectores sobre el hígado graso no alcohólico, provocando modificaciones en los marcadores biológicos del tejido hepático, los perfiles lipídicos del suero y las anomalías histopatológicas del tejido hepático, hasta un rango normal.

Isolation of breast cancer stem cell from MDA-MB231 cell line using vincristine / Aislamiento de células madre de cáncer de mama de la línea celular MDA-MB231 utilizando vincristina

Cancer has been considered as a stem cell disease. Suspension culture combined with anti-cancer drugs has recently been proposed for isolation of cancer stem cells (CSCs). In the current study, Vincristine as an anti-cancer drug combined with suspension culture was used for isolation and purification of CSCs from human breast cancer cell line (MDA-MB231). The cells were treated with different concentrations of vincristine (0, 2, 4, 6 and 8 ng/ml). Stem cells were identified with the expression of OCT4, nanog, SOX2 and nucleostemin genes by RT-PCR. Mammosphere forming unit was measured upon suspension culture containing EGF, bFGF, LIF, B27, insulin and BSA. The isolated mammospheres were investigated for CD44 expression. Results showed that 4 ng/ml of vincristine for 72 hours could be utilized as the best and most reliable dose which eliminates around 80 % of non-cancer stem cells with no destructive effect on CSCs' viability (P> 0.05). RT-PCR demonstrated that drug treated cells expressed OCT4, nanog, SOX2 and nucleostemin. Mammosphere formation unit of cells pretreated with vincristine was significantly higher than unpretreated ones (P>0.05). Immunofluorescence staining for CD44 depicted high expression of CSC marker among the isolated mammospheres. Vincristine combined with suspension culture can be considered as an appropriate method to isolate CSC.

El cáncer ha sido considerado como una enfermedad de células madre. Recientemente se ha propuesto cultivo en suspensión en combinación con medicamentos contra el cáncer para aislamiento de las células madre del cáncer (CMC). En este estudio se utilizó la vincristina como fármaco anticanceroso combinado con cultivo en suspensión para el aislamiento y purificación de las células madre cancerosas, de la línea celular de cáncer de mama humano (MDA-MB231). Las células se trataron con diferentes concentraciones de vincristina (0, 2, 4, 6 y 8 ng/ml). Las células madre se identificaron mediante la expresión de los genes OCT4, Nanog, SOX2 y nucleostemin por RT-PCR. La unidad de formación mammosphere se midió a través de cultivo en suspensión que contenía EGF, bFGF, LIF, B27, insulina y BSA. Los mammospheres aislados fueron estudiados para la expresión de CD44. Los resultados mostraron que 4 ng/ml de vincristina durante 72 horas podrían ser utilizados como la mejor y más fiable dosis que permite eliminar alrededor del 80 % de las células madre no cancerosas, sin causar un efecto destructivo sobre la viabilidad de las CMC (P> 0,05). La RT-PCR mostró que en las células tratadas con él fármaco hubo expresión de los genes OCT4, Nanog, SOX2 y nucleostemin. La unidad de formación de las células pretratadas con vincristina fue significativamente más alta que las unidades sin tratamiento previo (P>0,05). La inmunofluorescencia para CD44 muestró una alta expresión del marcador de CMC entre mammospheres aisladas. La vincristina en combinación con el cultivo en suspensión puede ser considerado como un método apropiado para aislar CMC.

Tribulus terrestris hydroalcoholic extract effect on cisplatin-induced apoptosis in mice kidney / Efecto del extracto hidroalcohólico de Tribulus terrestris sobre la apoptosis Inducida por cisplatino en el riñón de ratones

Cisplatin (EBEWE Pharma, Unterach, Austria) is an anti-cancer drug used in chemotherapy. One of the limiting major side effects of cisplatin is nephrotoxicity. Tribulus terrestris (TT) has been used as an synthetic or herbal protective agents for kidney disorders. The present study amid to investigate the Tribulus terrestris Hydroalcoholic extract effect on cisplatin-induced apoptosis in mice kidney. Male adult mice (n= 30) were divided into control group and 4 experimental groups (n= 6). Control group received saline, the first experimental group received cisplatin (5.5 mg/kg) and other three experimental groups received cisplatin (5.5 mg/kg) and different doses of hydroalcoholic extact of TT (100, 300 and 500 mg/kg i.p) respectively. The kidneys were removed after 4 days of injections, and TUNEL assay on mice's kidneys were performed. Weights of body and kidneys and apoptotic index were assessed. Data analysis was performed using one-way ANOVA followed by Tukey's post hoc test. The results showed that cisplatin lead to a reduction in the weight of body and kidney (P <0.01), and increased apoptotic index significantly compared to the control group (P <0.001), while in treated groups with TT, the weights of body and kidney were significantly higher compared with cisplatin group, but apoptotic index did not show significant differences. These parameters reached normal range after administration of fruit extracts of TT for 4 days. The study demonstrates that extract of TT could have protective effect on cisplatin- induced apoptosis of kidney. This may be related to the presence of antioxidant components acting via a multitude of central and peripheral mechanisms.

El cisplatino (EBEWE Pharma, Unterach, Austria) es un medicamento contra el cáncer utilizado en quimioterapia. Uno de los principales efectos secundarios limitantes del cisplatino es la nefrotoxicidad. Tribulus terrestris (TT) ha sido utilizado como agente protector sintético o herbal para los trastornos renales. El objetivo fue investigar el efecto del extracto hidroalcohólico de TT sobre la apoptosis inducida por cisplatino en el riñón de ratones. Se utilizaron ratones adultos machos (n= 30), que fueron divididos en 4 grupos, un control y tres grupos experimentales (n= 6). El grupo control recibió solución salina; el primer grupo experimental recibió cisplatino (5,5 mg/kg) y los otros tres grupos experimentales recibieron cisplatino (5,5 mg/kg) con diferentes dosis de extracto hidroalcohólico de TT (100, 300 y 500 mg/kg vía ip) respectivamente. Los riñones fueron retirados después de 4 días de aplicadas las inyecciones, y se realizó el ensayo TUNEL en los riñones. Se evaluó el peso corporal de los ratones, el peso de los riñones y el índice de apoptosis. El análisis de datos se realizó mediante ANOVA de un factor seguido por la prueba post hoc de Tukey. Los resultados mostraron que el cisplatino con plomo provocó una reducción en el peso corporal y el riñón (P <0,01) y un aumento significativo del índice de apoptosis en comparación con el grupo control (P <0,001), mientras que en los grupos tratados con TT, los pesos corporales y de los riñones fueron significativamente mayores en comparación con el grupo de cisplatino, pero el índice de apoptosis no mostró diferencias significativas. Estos parámetros alcanzaron niveles normales después de la administración de extracto de TT durante 4 días. El estudio demuestra que el extracto de TT podría tener un efecto protector sobre la apoptosis inducida por cisplatino en el riñón, que podría estar relacionado con la presencia de componentes antioxidantes que actúan a través de múltiples mecanismos centrales y periféricos.

Protective effect of Tribulus terrestris hydroalcoholic extract against cisplatin­induced apoptosis on testis in mice / Efecto protector del extracto hidroalcohólico de Tribulus terrestris contra la apoptosis inducida por cisplatino sobre los testículos en ratones

Cisplatin is an anti-cancer drug used in chemotherapy. One of the limiting side effects of cisplatin is decreasing genital gland function, azoospermia and oligospermia. Tribulus terrestris (TT) has been used as an aphrodisiac. The present study amid to investigate protective effect of TT hydroalcoholic extract against cisplatin-induced apoptosis on testis in mice. Male adult mice (n=30) were divided into control and 4 experimental groups (n=6). Control group received saline, first experimental group received cisplatin (5.5 mg/kg) and other three experimental group received cisplatin (5.5 mg/kg) and different doses of hydroalcoholic extact of TT (100, 300 and 500 mg/kg/i.p) respectively. Day after the last injection, histopathology and histomorphic analysis and also TUNEL assay on mice testis were performed. Weights of body and testis, seminiferous tubules diameter and apoptotic index were assessed. Data analysis was performed using one-way ANOVA followed by Tukeys' test. The results showed that cisplatin lead to a reduction in the weight of body and testes, and significantly increased apoptotic index compared to the control group (P<0.001), while in treated groups with TT, the weights of body and testis and seminiferous tubules diameter were significantly higher compared with cisplatin group (P<0.001), but apoptotic index did not show significant differences. The study demonstrates that extract of TT could protective effect of on cisplatin-induced apoptosis of testis and seminiferous tubules diameter that may be related to the presence of antioxidant components acting via a multitude of central and peripheral mechanisms.

El cisplatino es un medicamento anticancerígeno utilizado en tratamientos de quimioterapia. Uno de los efectos secundarios que limitan el uso del cisplatino es la disminución en la función de la glándula genital, provocando azoospermia y oligospermia. El Tribulus terrestris (TT) se ha utilizado como un afrodisíaco. El objetivo fue investigar el efecto protector del extracto hidroalcohólico de TT contra la apoptosis inducida por el cisplatino en los testículos de ratones. Ratones machos adultos (n=30) fueron divididos en un grupo control y cuatro grupos experimentales (n=6). Al grupo control se le administró una solución salina, mientras que el primer grupo experimental recibió cisplatino (5,5 mg/kg) y los tres restantes recibieron cisplatino (5,5 mg/kg) con diferentes dosis del extracto hidroalcohólico de TT (100, 300 y 500 mg/kg/ip), respectivamente. El día posterior a la última inyección, se realizaron análisis histopatológicos y morfométricos, junto al ensayo TUNEL, de los testículos de los ratones. Se registró el peso corporal y testicular de cada ratón, así como el diámetro de los túbulos seminíferos e índice de apoptosis. Los datos fueron analizados mediante ANOVA de una vía, seguida de la prueba de Tukey. El cisplatino provocó una reducción del peso corporal y testicular, y un aumento del índice de apoptosis, que fue significativo en comparación con el grupo control (P<0,001), mientras que en los grupos tratados con TT, el peso corporal y testicular, junto al diámetro de los túbulos seminíferos fueron significativamente mayores en comparación con el grupo tratado con cisplatino (P<0,001), sin embargo, el índice de apoptosis no mostró diferencias significativas. El estudio demuestra que el extracto de TT podría poseer un efecto protector de la apoptosis inducida por cisplatino sobre los testículos, así como en el diámetro de los túbulos seminíferos, lo que podría relacionarse con la presencia de componentes antioxidantes que actúan a través de diversos mecanismos, centrales y periféricos.

Adiponectin effect on nitric oxide secretion by normal and endometriotic human endometrial stromal cells: in vitro study / Efecto de la adiponectica sobre la secreción de óxido nítrico por células estromales de endometrio humano, normales y con endometriosis: estudio in vitro

Endometriosis is an estrogen-dependent disease in reproductive age women. Adiponectin and Nitric oxide (NO) have an important role in physiologic functions especially in human reproductive system. Levels of NO increased in the endometriosis patients but serum adiponectin levels decreased in woman with endometriosis. The aim of this study was to determine adiponectin effect on nitric oxide secretion by cultured normal and endometriotic human endometrial stromal cells. In this experimental study, normal (n= 10) and endometriotic endometrial biopsies (n= 10) were taken in sterile condition. Stromal cells isolated and cultured in in DMEM/ F12 medium and treated with adiponectin concentrations (0, 10, 100, and 200 ng/ml) for 24 and 48 hours. NO assay was done on their supernatants by Greiss method. Data was analyzed by one way ANOVA and p<0.05 was considered significant. There was significant difference between endometriosis groups in NO secretion in all dose of adiponectin and time (p<0.05). In normal groups there was significant difference in 48 hours (p<0.05) but no significant change in 24 hours (p>0.05). Adiponectin effects nitric oxide secretion of cultured human endometriotic stromal cells.

La endometriosis es una enfermedad dependiente de estrógenos que se presenta en mujeres en edad reproductiva. La adiponectina y el óxido nítrico (ON) tienen un papel importante en las funciones fisiológicas, especialmente en el sistema reproductivo humano. Los niveles de ON aumentan en los pacientes con endometriosis, pero los niveles de adiponectina en suero disminuyen. El objetivo fue determinar el efecto de la adiponectina sobre la secreción de ON por las células estromales de endometrio humano, tanto normales como con endometriosis, en medio de cultivo. En este estudio experimental, las células estromales de endometrio normales (n= 10) y las biopsias de endometrio con endometriosis (n= 10) se tomaron en condiciones de esterilidad. Las células estromales fueron aisladas y cultivadas en un medio DMEM/F12, y se sometieron a distintas concentraciones de adiponectina (0, 10, 100, y 200 ng/ml) durante 24 y 48 horas. El ensayo con ON se realizó a los sobrenadantes obtenidos por el método de Greiss. Los datos recolectados fueron analizados por ANOVA de una vía y un valor p<0,05 se consideró significativo. Entre los grupos con endometriosis, en referencia a la secreción de ON, no hubo diferencia significativa en todas las dosis de adiponectina y los tiempos estipulados (p<0,05). En los grupos normales, hubo diferencia significativa a las 48 horas (p<0,05), pero ningún cambio significativo a las 24 horas (p>0,05). La adiponectina tiene efectos sobre la secreción de óxido nítrico por las células estromales endometriales humanas en cultivo.

Protective effect of Tribulus terrestris hydroalcoholic extract against cisplatin-induced cytotoxicity on sperm parameters in male mice / Efecto protector del extracto hidroalcohólico de Tribulus terrestris contra la citotoxicidad inducida por cisplatino sobre parámetros espermáticos en ratones macho

Cisplatin is an anti-cancer drug used in chemotherapy. One of the limiting side effects of cisplatin is decreasing genital gland function, azoospermia and oligospermia. Tribulus terrestris has been used as an aphrodisiac. The present study amid to investigate protective effect of Tribulus terrestris hydroalcoholic extract against cisplatin-induced cytotoxicity on sperm parameters in mice. Male adult mice (n=30) were divided into control and 4 experimental groups (n=6). Control group received saline, first experimental group received cisplatin (5.5 mg/kg) and other three experimental groups received cisplatin (5.5 mg/kg) and different doses of hydroalcoholic extact of Tribulus terrestris (100, 300 and 500 mg/kg/i.p) respectively. On the day after the last injection, blood samples were collected for serum Nitric oxide (NO) assay. Also weights of body and testis, sperm parameters and seminiferous tubules diameter were assessed. Data analysis was performed using one-way ANOVA followed by Tukeys' test. The results showed that cisplatin lead to a reduction in the weight of body and testes, sperm parameters and increased level serum of NO significantly compared to the control group (P<0.05), while in treated groups with Tribulus terrestris, the weights of body and testes, sperm parameters, seminiferous tubules diameter were significantly higher compared with cisplatin group (P<0.05), but serum level of NO did not show significant differences. The study demonstrates that extract of Tribulus terrestris could protective effect against cisplatin- induced cytotoxicity on sperm parameters that may be related to the presence of antioxidant components acting via a multitude of central and peripheral mechanisms.

El cisplatino es un medicamento contra el cáncer utilizado en la quimioterapia. Uno de los efectos secundarios limitantes de cisplatino es la decreciente función glándular genital, azoospermia y oligospermia. Tribulus terrestris ha sido utilizado como un afrodisíaco. En el presente estudio se investiga el efecto protector del extracto hidroalcohólico de Tribulus terrestris (TT) contra la citotoxicidad inducida por cisplatino en los parámetros espermáticos en ratones. Ratones adultos machos (n = 30) fueron divididos en 4 grupos control y experimentales (n = 6). En el grupo control se administró solución salina, el primer grupo experimental recibió cisplatino (5,5 mg/kg) mientras que otros tres grupos experimentales recibieron cisplatino (5.5 mg/kg) además de diferentes dosis de extracto hidroalcohólico de TT (100, 300 y 500 mg/kg/IP) respectivamente. El día siguiente de la última inyección, se analizaron muestras de sangre para expresión de óxido nítrito (ON). Además, fueron evaluados el peso del cuerpo y testículos, los parámetros espermáticos y el diámetro de los túbulos seminíferos. Los datos fueron analizados mediante análisis ANOVA y la prueba de Tukey. El uso de cisplatino causó reducción del peso corporal y testicular, parámetros espermáticos y aumento significativo de los valores de ON en comparación con el grupo control (P<0,05), mientras que los grupos tratados con TT, fue significativamente mayor el peso corporal y testicular, parámetros espermáticos y diámetro de los túbulos seminíferos en comparación al grupo tratado con cisplatino (P<0,05). No se observaron diferencias significativas en los valores ON. El extracto de TT puede tener un efecto protector frente a la citotoxicidad inducida por el cisplatino sobre los parámetros espermáticos, al estar relacionado a la presencia de componentes antioxidantes que actúan mediante mecanismos centrales y periféricos.

Neuronal differentiation of PC12 and embryonic stem cells in two- and three-dimensional in vitro culture.

The quality of neuronal differentiation and reduction in apoptosis that occurred in two-dimensional (2D) and three-dimensional (3D) culture conditions is compared. PC12 and embryonic stem cells are two commonly utilized cell lines for the study of neuronal regeneration. These cells were induced to neuronally differentiate by adding NGF and retinoic acid respectively. Total neurite length and expression of neuronal markers (MAP-2 and β3-tubulin) was assessed by morphometry and immunocytochemistry. Also, TUNEL assay was used to detect apoptosis. Upon exposure to a differentiation media in the 3D fibrin gel, PC12 and embryonic stem cells stopped dividing, had increased adhesion to the substratum, extended neurite processes and expressed neuronal markers. The same results, however, were not observed with the 2D culture. Also, the apoptosis index performed by TUNEL assay demonstrated a reduction in the degree of apoptosis in the 3D culture compared to 2D culture. Fibrin matrix supports growth and neuronal differentiation of PC12 and embryonic stem cells. In addition, the 3D culture enhanced cellular resistance to apoptosis when compared to the 2D culture. It appears as if a 3D culture system may offer a better technique for future neuronal tissue engineering investigations.

A histological assessment of the cell death induced by haloperidol on prefrontal cortex / Una evaluación histológica de la muerte celular inducida por haloperidol en la corteza prefrontal

Neuroleptic drugs such as haloperidol has side effects on extrapyramidal pathways. Tardive Dyskinesia is the most important complication. The most characteristic feature of this Tardive Dyskinesia is involuntary movements of mouth and face. In regard to this problem, the induction of gliosis and cell death in the nervous tissue are considered. In this study, adult Sprague-Dawley rats were used as experimental models. Rats were divided into control and experimental groups. The rats were kept in the animal house under standard conditions during experiments. The control rats were intraperitoneally treated with normal saline for 6 days. The experimental samples were treated for the same time with 2, 5 and 10 mg haloperidol. After the trial period, the rats were killed following general anesthesia and their brains were removed after perfusion with a 4 percent formalin solution. Then, 1 mm cuts of the brains were obtained. After that, 5 um tissue sections were prepared and stained with hematoxylin and eosin. The stained sections were examined by optical microscopy. The results showed that the short-term use of haloperidol does not lead to gliosis process in the rat cerebral cortex. The short-term use of 10 mg haloperidol results in cell death in the rat cerebral cortex. Cell death was not observed in the control group and the groups that had received 2 mg and 5 mg doses of haloperidol. According to previous studies, it can be concluded that the gliosis process is induced in the cerebral cortex only following the long-term use of haloperidol. It is considered as a secondary cause of the neuroleptic drugs side effects. The primary cause of these side effects is the induction of cell death in neurons.

Los fármacos neurolépticos como el haloperidol tiene efectos secundarios sobre las vías extrapiramidales. La discinesia tardía es la complicación más importante. El rasgo más característico de esta discinesia tardía son movimientos involuntarios de la boca y cara. En lo que respecta a este problema, se consideran la inducción de gliosis y muerte celular en el tejido nervioso. En este estudio, fueron utilizados ratas Sprague - Dawley adultas como modelos experimentales. Las ratas se dividieron en grupos control y experimentales, y se mantuvieron en condiciones estándar durante los experimentos. Las ratas control fueron tratadas por vía intraperitoneal con solución salina normal durante 6 días, y las experimentales durante el mismo tiempo con 2 , 5 y 10 mg de haloperidol. Luego, las ratas se sacrificaron y sus cerebros se extrajeron después de la perfusión con una solución de formalina al 4 por ciento, obteniendo cortes de 1 mm de los cerebros. Se prepararon y se tiñeron con hematoxilina y eosina en secciones de tejido de 5 micras, y se examinaron por microscopía óptica. Se observó que el uso a corto plazo del haloperidol no conduce a proceso de gliosis en la corteza cerebral de rata. El uso a corto plazo de 10 mg de haloperidol produjo muerte celular en la corteza cerebral de rata. La muerte celular no se observó en el grupo control ni en los grupos que habían recibido 2 y 5 mg de haloperidol. De acuerdo con estudios anteriores, se concluye que el proceso de gliosis se induce en la corteza cerebral sólo tras el uso a largo plazo de exposición al haloperidol. Se considera como una causa secundaria de los efectos adversos de los fármacos neurolépticos. La principal causa de estos efectos secundarios, es la inducción de muerte celular en neuronas.

Sonic hedgehog inhibition induces mouse embryonic stem cells to differentiate toward definitive endoderm.

In the experimental group (shh inhibited group), there were significant decreases in the expression of Oct4, Nanog, Shh, GATA4, Brachyury and Goosecoid, while increases were observed for TAT and Pdx1. The expression of Sox17 did not differ between two control and experimental groups. In experimental group, the amount of GSC positive cells was somehow lower but it seems that there was no difference for Sox17. Shh inhibition induces ESCs to differentiate toward definitive endoderm by committing mesendodermal lineages.

The effect of cannabis sativa hydroalcoholic extract on sperm parameters and testis histology in rats / Efecto del extracto hidroalcohólico de cannabis sativa sobre los parámetros espermáticos e histología testicular en ratas

Cannabis Sativa is a multiuse herb in traditional medicine, its hydroalcoholic extract (10, 50, and 100 mg/kg) administered interaperitoneally for 14 consequent days to Wistar male rats resulted in significant decrease in progressive motility of sperm. Sperm count and seminiferous tubules diameter decreased significantly in comparison with control group. Also decrease in animal body weight in doses of 50 and 100 mg/kg was observed. Changes in testes weight and serum testosterone were not significant. Cannabis sativa extract has negative effect on sperm parameters such as motility, sperm count, and seminiferous tubules diameter.

La Cannabis Sativa es una hierba de múltiples usos en la medicina tradicional. Su extracto hidroalcohólico (10, 50, y 100 mg/kg) administrado intraperito-nealmente durante 14 días consecutivos a ratas Wistar macho produjo una disminución significativa en la motilidad progresiva de los espermatozoides. El recuento de espermatozoides y el diámetro de los túbulos seminíferos se redujo significativamente en comparación con el grupo control. También se observó disminución del peso corporal de los animales en dosis de 50 y 100 mg/kg. Cambios en el peso de los testículos y la testosterona sérica no fueron significativos. El extracto de Cannabis sativa tiene un efecto negativo sobre los parámetros seminales tales como la motilidad, conteo espermático, y el diámetro de los túbulos seminíferos.

Co-culture of Mouse Two-cell Embryos on Human Endometrial Stromal Cells in Proliferative and Secretory Phases / Co-cultivo de Dos Células Embrionarias de Ratón sobre Células Estromales Endometriales Humanos en Fases Proliferativa y Secretora

There were no significant differences in the distribution of embryos reaching to 2- cells, 4- cells, morula or blastocysts culturing on human endometrial stromal cells (Secretory or proliferative phases). The percent of morula in stage A (without fragmentation), stage B (<25% fragmentation), stage C (25-50% fragmentation) and stage D (>50% fragmentation) and did not showed significant differences between two coculture groups. Thus, the phase that the endometrial stromal cells were in thereby did not affect on the quality of embryos.

No hubo diferencias significativas en la distribución de los embriones en los cultivos que llegan a las 2 y 4 células, mórula o blastocistos sobre las células del estroma endometrial (fases proliferativa y secretora). El porcentaje de mórulas en etapa A (sin fragmentación), etapa B (<25% fragmentación), etapa C (25-50% de fragmentación) y etapa D (>50% fragmentación), y no mostraron diferencias significativas entre los dos grupos de co-cultivo. Así, la fase en la que se encontraban las células estromales endometriales no afectaron la calidad de los embriones.

Age at menarche and related factors in girlsof urban areas of Markazi (Central) province of Iran / Edad de la menarquia y factores relacionados en las niñas de zonas urbanas de la provincia Markazi (Central) de Irán

The age at menarche is an indicator of racial, geographical and nutritional patterns of different societies. This cross-sectional study conducted on 1223 girls aged 14-20 in the Markazi (Central) Province, Iran in 2010. In this research, the age at menarche, as the main variable, was determined for each city and compared between different cities. The statistical analyses included c2 test for determining statistically significant differences, variance analysis for determining the difference between groups, and Pearson correlation coefficient for determining the relationship between variables. The average age of first menstruation was 13.21+/-1.33 years in the Markazi Province, with no significant difference among the cities of the province. This age is inversely related to body mass index (BMI), nutritional status and weight. The pattern of distribution of BMI is similar for all the cities in the province. Although, the average age at menarche in the Markazi (central) Province, a cold area, is higher compared to warmer regions in Iran, it may be more influenced by race than by the climate. Considering the lower age at menarche in Markazi Province compared to previous similar studies, it may be stated that social well-being and nutritional standards have improved in the province.

La edad de la menarquia es un indicador de patrones raciales, geográficos y nutricionales de distintas sociedades. Este estudio transversal fue realizado el 2010 en 1223 niñas entre 14 y 20 años en la Provincia Markazi (Central), Irán. En esta investigación, la edad de la menarquia, como la variable principal, se determinaron para cada ciudad y en comparación entre las diferentes ciudades. Los análisis estadísticos incluyeron la prueba c2 para determinar diferencias estadísticamente significativas, el análisis de varianza para determinar la diferencia entre los grupos, y el coeficiente de correlación de Pearson para determinar la relación entre las variables. El promedio de edad de la primera menstruación fue 13,21+/-1,33 años en la provincia de Markazi, sin diferencias significativas entre las ciudades de la provincia. Esta edad es inversamente proporcional al índice de masa corporal (IMC), el estado nutricional y el peso. El patrón de distribución del IMC es similar para todas las ciudades de la provincia. Aunque la edad media de la menarquia en la Provincia Markazi (central), una zona de clima frío, es mayor en comparación con las regiones más cálidas en Irán, puede estar más influenciadas por la raza que por el clima. Teniendo en cuenta la baja edad de menarquia en la Provincia Markazi en comparación con estudios similares anteriores, se puede afirmar que el bienestar social y los niveles de nutrición han mejorado en la provincia.

Effect of exposure to extremely low electro-magnetic field during prenatal period on mice spleen.

Total body weight of newborns, the volume of spleen, and the number of megakaryocytes decreased following the exposure to ELF-MF (6x10-3 T and 50 Hz) at 1-5, 6-10, 11-15, and 16-20 days of pregnancy of mice. The complete period of gestation was sensitive to ELF-MF exposure; the initial days were more prone to exposure. The results suggest that the use of ELF-MF producing instruments should be limited during gestation.

Prenatal Water Deprivation Induces Apoptosis in Sexual Dimorphic Nucleus of the Brain of Male New Born Sprague-Dawley Rats / Deprivación Prenatal de Agua Induce Apoptosis en Núcleos Dimórficos Sexuales del Ccrebro de Ratas Sprague-Dawley Macho Recién Nacidas

Considering the size of some nuclei and area, sex hormones control the sexual development of the brain. The sexual development of the brain can also be influenced by environmental stress. This study aimed to clear the effect of prenatal water deprivation on the development of sexual dimorphic nucleus (SDN) of the brain. In this research, pregnant rats were divided into two groups (control and treated). For the treated animals, water was removed from the ewes for 48 h at the end of third trimester of gestation (19-21 days). TUNEL staining was used for detection of apoptosis in paraffin embedded diencephalon selected sections. The ratio of apoptotic cells to non- apoptotic ones was calculated as apoptotic index. Differences of apoptotic index and serum testosterone were examined for statistical significance using Paired T- test (p<0.05). The apoptotic index was 0.0160±.01174 percent for control and 0.1870±.02541 percent for treated groups. The concentration of serum testosterone was 22.4±1.3 for control and 13.37±3.3 for treated groups. Prenatal water deprivation induces apoptosis in developing SDN nucleus of male rats that is derived by reducing the concentration of serum testosterone. The study shows the importance of low concentration acting testosterone for development of SDN nucleus that can be affected by environmental stress.

Considerando el tamaño de algunos núcleos y áreas, las hormonas sexuales controlan el desarrollo sexual del cerebro. El desarrollo sexual del cerebro también puede verse influido por el estrés ambiental. Este estudio tuvo como objetivo establecer el efecto de la privación prenatal de agua en el desarrollo del núcleo dimórfico sexual (NDS) del cerebro. Las ratas preñadas fueron divididas en dos grupos (control y tratados). Para los animales tratados, el agua se retiró de los bebederos durante 48h al final del tercer trimestre de gestación (días 19-21). La técnica TUNEL se utilizó para detectar apoptosis en secciones del diencéfalo incluidas en parafina. La proporción de células apoptóticas y no-apoptóticas fue calculada como índice de apoptosis. Las diferencias del índice de apoptosis y testosterona sérica fueron examinadas para observar significación estadística mediante t de Student pareado (p <0,05). El índice de apoptosis fue 0,0160±0,01174 por ciento para el control y 0,1870±0,02541 por ciento para los grupos tratados. La concentración de testosterona en suero fue de 22,4±1,3 para el grupo control y 13,37±3,3 para los grupos tratados. La privación de agua prenatal indujo la apoptosis en el desarrollo del NDS de las ratas macho derivadas por la reducción de concentración de testosterona sérica. El estudio muestra la importancia de una baja concentración de testosterona para el desarrollo de los NDS, que pueden verse afectados por el estrés ambiental.