Analysis of Adherence to Fluoxetine Treatment through its Plasma Concentration

Abstract Depression plays an important role in non-adherence to medical recommendations. Fluoxetine is a first line of depression treatment. This study aimed to evaluate adherence to drug therapy in fluoxetine users by different methods. A cross-section study was conducted with 53 depressed patients on fluoxetine for at least six months. Drug therapy adherence was assessed by validated questionnaires [Brief Medication Questionnaire (BMQ) and Morisky-Green test (MG)] and by the blood concentration of fluoxetine and its active metabolite norfluoxetine. Blood samples were taken before the daily first dose of fluoxetine. The plasmatic concentration of fluoxetine and norfluoxetine indicated that 58.5% volunteers were within the recommended therapeutic range and thus considered adherent to drug therapy. However, questionnaires indicated a non-adherent majority: 41.5% patients had a high degree of adherence in MG and only 13.2% were adherent to pharmacological treatment in BMQ. Most fluoxetine users showed a plasma concentration of fluoxetine and norfluoxetine within the therapeutic range, despite the low adherence to the drug therapy evaluated by the questionnaires. Thus, we suggest that plasma levels of fluoxetine and norfluoxetine could be used as the main method to check adherence to treatment.

Seasonal variation of vitamin D among healthy adult men in a subtropical region

SUMMARY OBJECTIVE: To evaluate seasonal variation of 25(OH)vitamin D [25(OH)D3] levels, and factors associated with it, in healthy adult men, who exercised outdoors for 50 min., at least twice a week, from 10AM to 4PM, in a Brazilian semitropical region. METHODS: Blood samples were collected at the end of each season for 25(OH)D3, measured by liquid chromatography with tandem mass spectrometry. Ultraviolet irradiation was estimated by radiometer, calculating the daily photobiological response to vitamin D synthesis in human skin (D-VitD). The prevalence of 25(OH)D3 <20ng/mL changed with the seasons (p=0.000): 8.7% (n=6/69), 1.5% (n=1/66), 0 (n=0/64), and 21.7% (n=13/60), respectively, at the end of winter, spring, summer, and autumn. The prevalence, adjusted for multiple comparisons, was higher in winter than summer (p=0.026), and in autumn than spring (p=0.001) and summer (p=0.000). There were no associations of 25(OH) D3 levels with BMI (p=0.207), body fat (p=0.064), and phototype (p=0.485), in univariate analysis. It was associated with D-VitD in the 30 days before blood sampling (p=0.000), after adjustment to body fat. The prevalence of 25(OH)D3 <30ng/mL varied seasonally (p=0.000): 69.6% (n=48/69), 68.2% (n=45/66), 43.8% (n=28/64), and 88.4% (n=53/60), respectively, in winter, spring, summer, and autumn. CONCLUSIONS: In a Brazilian subtropical region, a seasonal variation in 25(OH)D3 was observed in healthy adult males, although they spent at least 50 min outdoors twice a week, wearing shorts and T-shirts. 25(OH)D3 <20ng/mL was 21.7% in autumn; D-vitD 30 days prior to blood sampling was the only factor independently associated with 25(OH)D3 levels.

RESUMO OBJETIVOS: Avaliar a sazonalidade da 25(OH)vitamina D3 [25(OH)D3] e fatores associados em homens adultos saudáveis, que se exercitavam ao ar livre pelo menos 50 min duas vezes por semana, das 10 às 16h, em uma região subtropical. MÉTODOS: Sangue foi colhido no fim das estações para medir 25(OH)D3, por cromatografia líquida em tandem com espectroscopia de massas. A radiação ultravioleta foi estimada por radiômetro, calculando diariamente a resposta fotobiológica para sintetizar vitamina D na pele humana (D-VitD). RESULTADOS: A prevalência de 25(OH)D3 <20ng/mL foi sazonal (p=0.000): 8.7% (n=6/69), 1.5% (n=1/66), 0% (n= 0/64), e 21.7% (n=13/60), respectivamente, no final do inverno, primavera, verão e outono. A prevalência, ajustada para comparações múltiplas, foi maior no inverno do que no verão (p=0.026) e no outono do que na primavera (p=0.001) e verão (p=0.000). A 25(OH)D3 não se associou com o índice de massa corporal (p=0.207), gordura corporal (p=0.064) ou fototipo (p=0.485), na análise univariada. Associou-se à D-VitD nos 30 dias antes da coleta de sangue (p=0.000), ajustada para gordura corporal. Houve sazonalidade na prevalência de 25(OH)D3 <30ng/mL (p=0.000): 69.6% (n=48/69), 68.2% (n=45/66), 43.8% (n=28/64), e 88.4% (n=53/60), respectivamente, no inverno, primavera, verão e outono. CONCLUSÕES: Em uma região subtropical, houve sazonalidade na 25(OH)D3 em homens adultos, saudáveis, embora se exercitassem ao ar livre pelo menos 50 minutos duas vezes por semana, usando shorts e camiseta. 25(OH)D3 <20ng/mL foi 21.7% no outono e a D-vitD 30 dias antes da coleta do sangue foi o único fator associado de modo independente à 25(OH)D3.

Effects of chronic exposure to hexavalent chromium in water on oxidative stress parameters in Wistar rats

Hexavalent chromium [Cr (VI)] is a metal utilized in different industries and consequently disposed in the environment. It is a toxic substance and its reduction to trivalent Cr [Cr (III)] generates intermediates, which are responsible for the oxidation of molecules, and cause the oxidative stress. Therefore, the aim of this study was to evaluate if Cr (VI) could induce oxidative stress in Wistar rats. In this study, Wistar rats were chronically exposed to 25 and 50 ppm of potassium dichromate in drinking water for 30 days. The levels of Cr were evaluated in the blood and tissues (liver, kidneys, and lungs). Oxidative stress was determined in the liver, kidneys, and lungs and was evaluated by DFCH, TBA-RS and carbonyl test. Antioxidant enzymes were evaluated through catalase (CAT), superoxide dismutase (SOD) and glutathione peroxidase (GPx) activities. Regarding the results, Cr concentration was significantly elevated in all tissues, however, it was lower in the lungs. In relation to the oxidative stress parameters, there was a significant increase of DCFH levels in the kidneys and carbonyls in liver and kidneys. Regarding the antioxidant enzymes, SOD was decreased in all organs and GPx was diminished in the kidneys. These data indicated that Cr (VI) could induce oxidative stress in the kidneys and liver due to an imbalance between oxidative and antioxidant parameters. The lungs were little affected, possibly by the lowest chromium accumulation.

Factors related to decreased vitamin D levels in men with spinal cord injury living in a subtropical region / Fatores relacionados a níveis reduzidos de vitamina D em homens com lesão da medula espinhal vivendo em uma região subtropical

AIMS: To evaluate the levels of vitamin D, parathyroid hormone and calcium in individuals with spinal cord injury and to identify related factors. METHODS: A cross-sectional study included men with spinal cord injury, living in the South Region of Brazil. A questionnaire was applied to evaluate socioeconomic data, life habits and health. The time elapsed since the spinal cord injury was considered. Vitamin D was evaluated in plasma via liquid chromatography; calcium and PTH were measured in serum by a colorimetric method and electrochemiluminescence respectively. For data analysis, linear regression and chi-square test were utilized. Values of p<0.05 were considered significant. RESULTS: The study included 39 paraplegic or tetraplegic men with spinal cord injury. The mean age was 35.52±9.78 years, and the mean time since injury was 6.09±5.55 years. The mean biochemical levels were: 19.0 ±6.98 ng/mL for vitamin D; 9.54±0.52 mg/dL for total calcium; and 34.81±10.84 pg/mL for parathyroid hormone. Individuals with sun exposure for more than two hours daily had higher vitamin D levels than those exposed up to one hour per day (p=0.001). Linear regression identified an inverse relationship between lesion time and vitamin D levels (regression coefficient: -0.424; p=0.029), while the other parameters did not show significant differences regarding the time elapsed since the lesion. Subjects with income above four minimum wages had higher vitamin D values (mean 25.67±5.45 ng/mL) when compared to those with income up to four minimum wages (mean 18.43±6.79 ng/mL) (p=0.021). CONCLUSIONS: Levels of vitamin D were inversely correlated to the time elapsed since the spinal cord injury, probably due to insufficient sun exposure resulting from prolonged limitation of mobility. In addition, lower levels of vitamin D were associated to lower income. These factors may aggravate bone loss associated with decreased mobility resulting from spinal cord injury.

OBJETIVOS: Avaliar os níveis de vitamina D, hormônio paratireoide e cálcio em indivíduos com lesão medular e identificar fatores relacionados. MÉTODOS: Estudo transversal incluiu homens com lesão da medula espinhal, vivendo na Região Sul do Brasil. Foi aplicado um questionário para avaliar dados socioeconômicos, hábitos de vida e saúde. Foi investigado o tempo transcorrido após a lesão medular. A vitamina D foi avaliada no plasma por meio de cromatografia líquida; o cálcio e o hormônio paratireoideo foram dosados no soro por um método colorimétrico e eletroquimioluminescência respectivamente. Para a análise de dados, foram utilizadas regressão linear e teste do qui-quadrado. Valores de p<0,05 foram considerados significativos. RESULTADOS: O estudo incluiu 39 homens paraplégicos ou tetraplégicos com lesão da medula espinhal. A média de idade foi de 35,52±9,78 anos e o tempo médio de lesão foi de 6,09±5,55 anos. As médias dos níveis bioquímicos foram: 19,0±6,98 ng/mL para vitamina D, 9,54±0,52 mg/dL para cálcio total e 34,81±10,84 pg/mL para hormônio paratireoideo. Indivíduos com exposição ao sol por mais de duas horas por dia apresentaram maiores níveis de vitamina D do que os expostos até uma hora por dia (p=0,001). A regressão linear identificou uma relação inversa entre o tempo de lesão e os níveis de vitamina D (coeficiente de regressão: -0,424; p=0,029), enquanto os outros parâmetros não apresentaram diferença significativa em relação ao tempo decorrido desde a lesão. Os indivíduos com renda acima de quatro salários mínimos apresentaram maiores valores de vitamina D (média de 25,67±5,45 ng/mL) quando comparados com aqueles com renda até quatro salários mínimos (média 18,43±6,79 ng/mL) (p=0,021). CONCLUSÕES: Os níveis de vitamina D foram inversamente correlacionados com o tempo decorrido desde a lesão da medula espinhal, provavelmente devido à exposição insuficiente ao sol resultante da limitação prolongada da mobilidade. Níveis mais baixos de vitamina D foram associados a menor renda. Estes fatores podem agravar a perda óssea associada à diminuição da mobilidade resultante da lesão da medula espinhal.

Study of correlation between imatinib mesylate plasma levels and hematological profile of patients undergoing treatment for chronic myeloid leukemia / Estudo da correlação entre os níveis plasmáticos de mesilato de imatinibe e o perfil hematológico de pacientes com leucemia mieloide crônica em tratamento

ABSTRACT Introdution: Chronic myeloid leukemia (CML) is a genetic disorder of hematopoietic stem cells, resulting in a myeloproliferative expansion of blood cells. CML is associated with the presence of the Philadelphia chromosome (Ph), generating an oncogene (BCR-ABL). The current treatment of choice is imatinib mesylate (IM). Objective: To correlate serum levels of MI with hematological parameters in patients with CML. Method: A retrospective cross-sectional study in patients treated for CML. Serum level of IM was determined by a high-performance liquid chromatography with diode array detector (HPLC-DAD), and statistical analysis was performed using SPSS version 20.0 software. Results: We studied 55 CML patients - 24 men (43.6%) and 31 women (56.4 %) - with a mean age of 54 years, who used IM. Among these, 45 patients were in the chronic phase (81.6 %); seven, in the accelerated phase (13.1%); and three, in the blast crisis (5.2%). Patients received a mean IM dose of 434 mg/day. Serum levels of the patients presented an average of 1,092 ± 617 ng/ml, and, in all, 47 patients (85.4%) had hematologic response (HR). Conclusion: There was no correlation between the number of leukocytes, platelets and hemoglobin and the serum level of IM, although there is a trend with respect to hemoglobin (p = 0.062).

RESUMO Introdução: Leucemia mieloide crônica (LMC) é uma desordem genética de células-tronco hematopoiéticas, resultando em uma expansão mieloproliferativa das células sanguíneas. A LMC está associada à presença do cromossomo Philadelphia (Ph), o que gera um oncogene (BCR-ABL). Atualmente, o tratamento de primeira escolha é o mesilato de imatinibe (MI). Objetivo: Correlacionar os níveis séricos de MI com parâmetros hematológicos em pacientes com LMC. Método: Estudo transversal retrospectivo em pacientes com LMC em tratamento. O nível sérico de MI foi determinado por um sistema de cromatografia líquida de alta eficiência com detector de arranjo de diodos (CLAE-DAD), e a análise estatística foi realizada no programa SPSS versão 20.0. Resultados: Foram estudados 55 pacientes - 24 homens (43,6%) e 31 mulheres (56,4%) - com média de idade de 54 anos, portadores de LMC que utilizavam MI. Destes, 45 encontravam-se em fase crônica (81,6%); sete, em fase acelerada (13,1%) e três, em crise blástica (5,2%). Os pacientes em questão receberam uma média de dose do MI de 434 mg/dia. O nível sérico dos pacientes apresentou média de 1.092 ± 617 ng/ml e, ao todo, 47 pacientes (85,4%) apresentaram resposta hematológica (RH). Conclusão: Não houve correlação do número de leucócitos, plaquetas e hemoglobina com o nível sérico de MI, embora exista uma tendência observada com relação à hemoglobina (p = 0,062).

Oxidative stress in patients with type 2 diabetes mellitus treated with metformin / Estresse oxidativo em pacientes com diabetes mellitus tipo 2 em tratamento com metformina

AIMS: To evaluate oxidative stress parameters in patients with type 2 diabetes mellitus treated with metformin, relating these values to its side effects, plasma levels, glycemic control, diabetic complications, lipid profile, and the influence of pharmacotherapeutic follow-up. METHODS: Patients with type 2 diabetes mellitus, on metformin and in pharmacotherapeutic follow-up for four months, were evaluated. The pharmacotherapeutic follow-up consisted in providing information and answering patients' questions about medication and disease. In addition, administration times, dosages, and presence or absence of side effects related to the use of metformin were verified. Glycemic and lipid profile, oxidative stress (superoxide dismutase and malondialdehyde) and plasma metformin were evaluated. Pearson's correlation and Spearman's correlation were performed to evaluate the relationship between the variables at the beginning of the study. The independent t-test and Mann-Whitney U test were used to assess the difference between the groups with and without diabetic complications. The range of values between the beginning and end of the study was evaluated using Student's t-test or Wilcoxon U test. The significance level was set at 5%. RESULTS: The initial sample consisted of 49 patients aged 59±9 years with a body mass index of 29.8±5.1 kg/m2 , who have had diabetes for a median time of 36 months (interquartile range of 1-240) and have been on metformin for a median time of 36 months (interquartile range of 1-180). Twenty-five patients left the study between the second and fourth meetings. Malondialdehyde levels differed between before and after pharmacotherapeutic follow-up, being positively correlated with blood glucose, glycohemoglobin, and triglyceride level, and negatively correlated with metformin and superoxide dismutase. Blood glucose, glycohemoglobin, and malondialdehyde levels increased, whereas metformin levels decreased in the group with diabetic complications, and there was a correlation between malondialdehyde and the number of diabetic complications per patient. CONCLUSIONS: In this sample of patients with type 2 diabetes mellitus treated with metformin, oxidative stress was more pronounced in those with poor glycemic control and diabetic complications.

OBJETIVOS: Avaliar parâmetros de estresse oxidativo em pacientes com diabetes mellitus tipo 2 em uso de metformina, relacionando estes valores a seus efeitos adversos, níveis plasmáticos, controle glicêmico, complicações diabéticas, perfil lipídico, e a influência do acompanhamento farmacoterapêutico. MÉTODOS: Foram avaliados pacientes com diabetes mellitus tipo 2, em uso de metformina, em acompanhamento farmacoterapêutico por quatro meses. O acompanhamento farmacoterapêutico consistiu na prestação de informações e no esclarecimento de dúvidas dos pacientes sobre a medicação e a doença. Além disto, foram verificados os horários, as doses e a presença ou não de efeitos adversos relacionados ao uso de metformina. Foram avaliados perfil glicêmico e lipídico, estresse oxidativo (superóxido dismutase e malondialdeído) e metformina plasmática. Foram realizados os testes de correlação de Pearson e de Spearman para avaliar as relações entre as variáveis no início do estudo. Para testar a diferença entre os grupos com e sem complicações diabéticas, foram utilizados o t-teste independente ou o teste U de MannWhitney. A gama de valores entre o início e o final do estudo foi avaliada utilizando o teste t de Student ou o teste de Wilcoxon U. Foi adotado um nível de significância de 5%. RESULTADOS: A amostra inicial foi composta por 49 pacientes com idade de 59±9 anos e índice de massa corporal de 29,8±5,1 kg/m2 , com diabetes por uma mediana de tempo de 36 (intervalo interquartil 1-240) meses e em uso de metformina há uma mediana de 36 (intervalo interquartil 1-180) meses. Vinte e cinco pacientes deixaram o estudo entre a segunda e a quarta reunião. Os níveis de malondialdeído diferiram entre antes e após o acompanhamento farmacoterapêutico, correlacionando-se positivamente com glicemia, glicohemoglobina e triglicerídeos e negativamente com metformina e superóxido dismutase. Encontrou-se elevação da glicemia, glicohemoglobina e malondialdeído, e diminuição da metformina no grupo com complicações diabéticas, e foi identificada correlação entre malondialdeído e o número de complicações diabéticas por paciente. CONCLUSÕES: Nesta amostra de pacientes com diabetes mellitus tipo 2 em tratamento com metformina, o estresse oxidativo foi mais pronunciado nos que apresentavam pior controle glicêmico e complicações diabéticas.

Related factors to atazanavir plasma levels in a cohort of HIV positive individuals with undetectable viral load

OBJECTIVE: To evaluate the factors associated with plasma concentrations of atazanavir (ATV) in a cohort of well-controlled HIV infected subjects (undetectable viremia). Design: Cross-sectional study where 69 subjects were consecutively enrolled between April and November, 2011. METHODS: Patients had to be on atazanavir for at least six months, undetectable viral load for a period equal to or longer than 12 months, T CD4+ lymphocyte count higher than 200 cells/mm³, and aged between 18 years and 70 years old. Exclusion criteria were pregnancy, any neurologic disease, active opportunistic disease, hepatitis or cancer. Atazanavir plasma levels were measured by ultra-performance liquid chromatography. RESULTS AND DISCUSSION: Overall, 54 patients (mean age of 47 years and 50% women) were included in the analysis. Those without ritonavir (unboosted atazanavir) had statistically lower plasma concentrations than those with ritonavir boosted atazanavir (p = 0.001) and total and indirect bilirubin were statistically associated with plasma concentration of atazanavir (r = 0.32 and r = 0.33 respectively; p < 0.05 in both cases). no statistical association was found among gender, ethnicity, age, weight, body mass index (BMI), lipid profile, and the plasma concentration of atazanavir. CONCLUSION: in summary, as expected, concomitant ritonavir use was the only factor associated with atazanavir plasma levels. prospective studies with a larger sample size might help to observe an association of atazanavir concentrations to other characteristics such as body weight, since the p-value showed to be close to significance (p = 0.068).

Individualização farmacocinética das doses de 5-Fluoruracil nocâncer colorretal / Pharmacokinetic Individualization of 5-Fluorouracil Doses in Colorectal Cancer / Individualización Farmacocinética de las Dosis de 5-Fluorouracil en el Cáncer Colorrectal

Introdução: O 5-Fluoruracil (5-FU) é um antimetabólito amplamente utilizado no tratamento do câncer colorretal,com significativa variabilidade na resposta terapêutica e na ocorrência de toxicidade associada à sua farmacocinética variável. Objetivo: Revisar os aspectos clínicos e laboratoriais da individualização farmacocinética dos tratamentos com5-FU em pacientes com câncer colorretal. Método: Realizou-se uma revisão de literatura nas bases de dados PubMed, Periódicos Capes, SciElo, Medline e Bireme. Foram incluídos estudos publicados a partir de 1997, com as palavraschave: 5-Fluoruracil; Individualização farmacocinética; Câncer colorretal; Monitoramento terapêutico de fármacos. Resultados: Existem evidências de uma relação entre a exposição sistêmica ao 5-FU e as respostas terapêuticas no tratamento, sendo que áreas sob a curva concentração-tempo entre 20 a 25 mg. h/L permitem um adequado balançoentre maximização da eficácia e redução da toxicidade. Também é possível avaliar a atividade da enzima diidropirimidina desidrogenase (DPD) previamente ao tratamento com 5-FU através de métodos fenotípicos, identificando os pacientesem risco de toxicidade grave. Métodos analíticos baseados em cromatografia líquida de alta eficiência estão disponíveis para determinar 5-FU em plasma de forma confiável, permitindo a disseminação do monitoramento terapêutico desse fármaco. Conclusão: Através da individualização farmacocinética é possível desenvolver regimes terapêuticos de 5-FUpersonalizados no câncer colorretal, com impactos significativos nos resultados terapêuticos.

Determinação de 25-hidroxivitamina D2 e D3 em plasma por CLAE-DAD / Determination of 25-hidroxy-vitamin D2 and D3 in plasma by HPLC-DAD

INTRODUÇÃO: O interesse pela vitamina D nos últimos anos teve aumento significativo. Estudos epidemiológicos realizados têm demonstrado um crescente aumento da deficiência de vitamina D entre a população. O marcador diagnóstico de escolha para determinar os níveis de vitamina D é a concentração de 25-hidroxivitamina D (25(OH)D), com suas frações D2 (25(OH)D2) e D3 (25(OH)D3). OBJETIVO: Desenvolver uma metodologia analítica empregando cromatografia líquida de alta eficiência com detector de arranjo de diodos (CLAE-DAD) para a determinação de 25(OH)D3 e 25(OH)D2 em plasma. MATERIAIS E MÉTODOS: 25(OH)D3 e 25(OH)D2 foram extraídos das amostras de plasma com hexano, utilizando-se dodecafenona como padrão interno (PI). Utilizou-se coluna analítica ACE 5 C18 com partículas de 5 µm e dimensões de 150 × 4,6 mm, fase móvel metanol-água (80:20; v/v) e quantificação em 265 nm. RESULTADOS: A exatidão foi entre 98,4 e 107,5%. A precisão intraensaios esteve entre 6,5% e 9,2% para 25(OH)D3 e entre 3,7% e 8,7% para 25(OH)D2. A precisão interensaios esteve entre 2,9% e 6% para 25(OH)D3 e entre 4% e 4,5% para 25(OH)D2. O limite inferior de quantificação foi 10 ng/ml. As concentrações encontradas em amostras de 32 pacientes idosos estiveram entre 10,1 e 32,4 ng/ml, caracterizando deficiência de vitamina D nesse grupo. DISCUSSÃO O método foi capaz de quantificar 25(OH)D2 e 25(OH)D3 com uma preparação de amostra relativamente simples e rápida. O método foi seletivo, com separação adequada dos metabólitos e do padrão interno e sem presença de interferentes. CONCLUSÃO: O método desenvolvido apresenta desempenho analítico adequado e pode ser aplicado em condições clínicas.

INTRODUCTION: The interest in vitamin D has increased significantly in recent years. Epidemiological studies conducted over the past 25 years have shown a steady increase in vitamin D deficiency. The diagnostic marker of choice to determine vitamin D levels is the concentration of 25-hidroxy-vitamin D (25(OH)D) in the fractions D2 (25(OH)D2) and D3 (25(OH)D3). OBJECTIVE: To develop an analytical method using high-performance liquid chromatography with diode-array detection (HPLC-DAD) for the determination of 25(OH)D2 and 25(OH)D3 in plasma. MATERIALS AND METHODS: 25(OH)D3 and 25(OH)D2 were extracted from plasma samples with hexane and dodecaphenone was used as internal standard. The separation was performed in an ACE 5 C18 column, with particle size of 5 µm (4,6 × 150 mm), mobile phase methanol-water (80:20, v/v) and quantification at 265 nm. RESULTS: Accuracy was in the range of 98.4 to 107.5%. Intra-assay precision was between 6.5 and 9.2% for 25(OH)D3 and 3.7 and 8.7 for 25(OH)D2. Inter-assay precision was between 2.9 and 6% for 25(OH)D3 and 4 and 4.5 for 25(OH)D2. The limit of quantification was 10 ng/l. Concentrations of 25(OH)D3 in samples from 32 elderly patients were between 10.1 and 32.4 ng/ml, characterizing vitamin D deficiency in this group. DISCUSSION: The method allowed the quantification of 25(OH)D2 and 25(OH)D3. Furthermore, the sample preparation was relatively simple and fast. The method was selective with an adequate separation of metabolites and internal standard with no interfering substances. CONCLUSION: Not only did the developed method show suitable analytical performance, but it may also be applied in clinical conditions.

Canabinoides sintéticos: drogas de abuso emergentes / Synthetic cannabinoids: emerging drugs of abuse

CONTEXTO: A Cannabis sativa (cannabis, maconha, marijuana) é uma droga de abuso com efeitos psicoativos e potencial terapêutico bastante conhecidos. Um grande número de canabinoides foi sintetizado na tentativa de excluir ou minimizar os efeitos psicotrópicos e mantendo as aplicações terapêuticas. Os canabinoides sintéticos representam o mais recente avanço das designer drugs. OBJETIVOS: Este trabalho busca trazer informações sobre a utilização de canabinoides sintéticos como drogas de abuso emergentes, principalmente sob a forma de spice ou herbal blends. MÉTODOS: Foi realizada uma pesquisa bibliográfica na base de dados PubMed utilizando os descritores de assunto "synthetic cannabinoids", "spice", "legal highs", "herbal blends", "psychosis cannabis" e suas combinações. RESULTADOS: Foram encontrados canabinoides sintéticos nos produtos Spice, confirmando que os incensos herbais realmente surgiram como drogas de abuso emergentes. CONCLUSÃO: Não está claro se a utilização de canabinoides sintéticos e de Spice é uma moda passageira ou se irá se estabelecer em nossa sociedade. No entanto, o fenômeno das designer drugs, especialmente canabinoides sintéticos, representa um desafio presente para o sistemas de saúde no mundo globalizado, tornando-se necessária a pesquisa clínica e forense desses produtos.

BACKGROUND: Cannabis sativa (cannabis, marijuana) is a drug of abuse with well known psychoactive effects and therapeutic potential. A large number of cannabinoids chemically similar to Δ9-THC, the main active metabolite of marijuana, were synthesized in an attempt to exclude or minimize the psychotropic effects, maintaining the therapeutic potential. OBJECTIVES: The aim of this work was to review of the use of synthetic cannabinoids as emerging drugs of abuse, especially in the form of spice or herbal blends. METHODS: A bibliographic search was performed in PubMed employing the terms "synthetic cannabinoids", "spice", "legal highs", "herbal blends", "psychosis cannabis" and cross references. RESULTS: A number of synthetic cannabinoids can be found in Spice products, confirming that herbal incense emerged as new drugs of abuse. DISCUSSION: It is unclear whether the use of synthetic cannabinoids and Spice is a fad or will be established as common practice in our society. However, the phenomenon of designer drugs, especially synthetic cannabinoids, will remain a challenge to health authorities in the globalized world, requiring additional clinical and forensic research.

Frequency of the anti-glutamic acid decarboxylase immunological marker in patients with diabetes duration longer than three years in southern Brazil / Frequência do marcador imunológico de anti-decarboxilase do ácido glutâmico em pacientes com diabetes há mais de três anos no Sul do Brasil

CONTEXT AND OBJECTIVE: The anti-GAD (glutamic acid decarboxylase) antibody is considered to be an important marker for type 1 diabetes mellitus (DM1), with frequency that varies depending on the population studied and the duration of the disease. Therefore, the aim of this study was to determine the frequency of this autoantibody in a group of patients in southern Brazil with DM1 that had been diagnosed more than three years previously. DESIGN AND SETTING: Analytical cross-sectional study with a control group conducted at the Biomedicine Laboratory of Universidade Feevale. METHODS: This study was conducted between June 2007 and December 2008, and 109 individuals were enrolled during this period. Fifty-eight were DM1 patients and 51 were individuals free from DM1 and without any history of diabetes, who constituted the control group. RESULTS: In the DM1 group, the mean age was 27 ± 1.7 years and 50 percent were men. The mean fasting blood glucose in the DM1 group was 208 ± 15 mg/dl and mean HbA1c (glycosylated hemoglobin) was 8.7 ± 0.25 percent. In the control group, the mean fasting blood glucose and HbA1c were 82 mg/dl and 5.0 percent respectively. Thirty-seven individuals with DM1 (63.8 percent) were positive for anti-GAD, and this proportion was significantly larger than in the control group. CONCLUSIONS: These results show the high prevalence of anti-GAD in the population of diabetic patients in southern Brazil, thus indicating that the antibody was still present a long time after the disease had been diagnosed.

CONTEXTO E OBJETIVO: O anticorpo anti-decarboxilase do ácido glutâmico (anti-GAD) é considerado um importante marcador no diabetes mellitus tipo 1 (DM1), cuja frequência varia segundo a população estudada e o tempo de duração da doença. Assim, o objetivo deste estudo foi determinar a frequência deste auto-anticorpo em um grupo de pacientes localizados no Sul do Brasil com mais de três anos de diagnóstico de DM1. TIPO DE ESTUDO E LOCAL: Estudo transversal analítico com grupo controle, realizado no Laboratório de Biomedicina da Universidade Feevale. MÉTODOS: Este estudo foi realizado no período de Junho de 2007 a Dezembro de 2008, em que 109 indivíduos foram incluídos, sendo 58 destes com DM1 e 51 indivíduos sem DM1 e sem antecedentes de diabetes, que constituíram o grupo controle. RESULTADOS: No grupo DM1, a idade média foi 27 ± 1,7 anos e 50 por cento eram homens. A média da glicemia de jejum no grupo DM1 foi 208 ± 15 mg/dL e a HbA1c média foi 8,7 ± 0.25 por cento. No grupo controle a glicemia de jejum média e a HbA1c (hemoglobina glicosilada) foram 82 mg/dL e 5,0 por cento, respectivamente. O anti-GAD foi positivo em 37 (63,8 por cento) indivíduos com DM1, valores significativamente maiores quando comparados com os do grupo controle. CONCLUSÕES: Estes resultados mostram a alta prevalência do anti-GAD na população de pacientes diabéticos da região Sul do Brasil, indicando que o anticorpo está presente após um longo período de diagnóstico da doença.

Exposição pré-natal ao etanol: toxicidade, biomarcadores e métodos de detecção / Prenatal exposure to ethanol: toxicity, biomarkers and detection methods

CONTEXTO: A exposição pré-natal ao etanol pode produzir diversos efeitos adversos no desenvolvimento fetal denominados doença espectral do alcoolismo fetal (DEAF). A detecção precoce de exposição ao etanol permite que medidas preventivas sejam tomadas para minimizar os efeitos adversos da exposição. OBJETIVOS: O presente trabalho teve como objetivo revisar os principais efeitos tóxicos do etanol no neonato e os biomarcadores de exposição ao álcool. MÉTODOS: Foi realizada uma pesquisa bibliográfica na base de dados PubMed utilizando os descritores "effects maternal ethanol exposure" e "biomarkers ethanol prenatal exposure", além de referências cruzadas dos artigos selecionados. RESULTADOS: Diversos efeitos adversos no desenvolvimento fetal têm sido descritos, especialmente os prejuízos no sistema nervoso central. Os biomarcadores de exposição mais citados na literatura são os etil ésteres de ácidos graxos (EEAG), etil glicuronídeo (EtG) e etil sulfato (EtS) utilizando mecônio e cabelo como matriz biológica. CONCLUSÃO: A detecção precoce de exposição ao álcool na vida intrauterina pode ser realizada e é um instrumento para prevenir efeitos secundários, porque possibilita a intervenção farmacológica e educacional na criança com DEAF.

BACKGROUND: Prenatal exposure to ethanol can produce a complex set of effects on fetal development, which is denominated fetal alcohol spectrum disorder (FASD). Early detection of ethanol exposure can allow the prevention of some relevant adverse effects associated to FASD. OBJECTIVES: The aim of this work was to review the main toxic effects of ethanol on the neonate and the available biomarkers of prenatal alcohol exposure. METHODS: A bibliographic search was performed in PubMed employing the terms "effects maternal ethanol exposure" and "biomarkers ethanol prenatal exposure" and cross references. RESULTS: Many adverse effects on fetal development were described, especially deficits in the central nervous system. The biomarkers of ethanol exposure more widely described were fatty acid ethyl esters (FAEEs), ethyl glucuronide (EtG) and ethyl sulphate (EtS), being meconium and hair the most common biological matrices for laboratorial evaluation. DISCUSSION: The early detection of alcohol exposure in intra-uterine life is useful to prevent the secondary effects of FASD through pharmacologic and educational intervention in affected children.

Monitoring imatinib plasma concentrations in chronic myeloid leukemia

Imatinib has proved to be effective in the treatment of chronic myeloid leukemia, but plasma levels above 1,000 ng/mL must be achieved to optimize activity. Therapeutic drug monitoring of imatinib is useful for patients that do not present clinical response. There are several analytical methods to measure imatinib in biosamples, which are mainly based on liquid chromatography with mass spectrometric or diode array spectrophotometric detection. The former is preferred due to its lower cost and wider availability. The present manuscript presents a review of the clinical and analytical aspects of the therapeutic drug monitoring of imatinib in the treatment of chronic myeloid leukemia. The review includes references published over the last 10 years. There is evidence that the monitoring of plasmatic levels of imatinib is an useful alternative, especially considering the wide pharmacokinetic variability of this drug.

Terapia gênica: o que é, o que não é e o que será / Gene therapy: what is, what is not and what will be

Terapia gênica é o tratamento baseado na introdução de genes sadios com uso de técnicas de DNA recombinante. O primeiro teste clínico bem-sucedido dessa técnica foi divulgado em 1990. Em que pese a ocorrência, em certos estudos clínicos, de efeitos adversos, alguns dos quais graves, laboratórios de pesquisa e empresas vêm continuamente desenvolvendo novos materiais e procedimentos mais seguros e eficazes. Embora ainda em estágio experimental, progressos recentes indicam oportunidades crescentes de investimento pela indústria, bem como justificam a expectativa de que, em alguns casos, essa tecnologia poderá chegar à prática clínica dentro de poucos anos.

Gene therapy is the therapeutic procedure based on the introduction of healthy genes using recombinant DNA techniques. The first successful clinical trial of this technique was published in 1990. Despite the occurrence, in certain clinical trials, of adverse effects, some of which serious, both laboratories and companies are continuously developing novel materials and establishing both safer and more effective procedures. Although still in experimental stages, recent progress both points to growing opportunities for investment by industry, as well as justify the expectation that, in some cases, this technology may reach clinical practice within a few years.

Standardization of method for determining glycosylated hemoglobin (Hb A1c) by cation exchange high performance liquid chromatography / Padronização de método para determinação de hemoglobina glicosilada (Hb A1c) por troca de cátions de alto desempenho cromatografia líquida

Hemoblobin A1c is the most important parameter for the monitoring of metabolic control of patients with diabetes mellitus. The purpose of this study was to adapt the Mono S method to a conventional HPLC system, allowing highly selective HbA1c determination without the acquisition of kits or the use of dedicated systems The results obtained were compared to the Tinaquant® immune turbidimetric method and the Bio-Rad Variant® chromatographic method. The developed method presented intra-study precision (C.V. percent) of 1.39-3.65 and inter-study precision (C.V. percent) of 2.80-3.02 percent. The determination coefficients among methods were: HPLC Mono S x Tinaquant®: r²: 0.9856 (n=60) and HPLC Mono S x HPLC Bio-Rad Variant®: r²: 0.9806 (n=16). A conversion equation between HPLC Mono S and Bio-Rad Variant® was calculated allowing yielding comparable and interchangeable values. The HPLC Mono-S is a precise, low-cost method which yields similar values to the Bio-Rad Variant® method on conventional HPLC equipment.

A hemoglobina A1c é o parâmetro laboratorial mais importante no monitoramento do controle metabólico de pacientes portadores de diabetes melito. Dentre as metodologias existentes para a quantificação desta fração de hemoglobina, a cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) baseada em troca catiônica apresenta a melhor precisão, sendo o método de escolha. O objetivo deste trabalho foi adaptar o método Mono S a um sistema de CLAE convencional permitindo a disponibilidade da determinação altamente seletiva de Hb A1c sem a aquisição de kits e comparar os resultados obtidos com o método imunoturbidimétrico Tinaquant® (Roche®) e com o método de cromatografia líquida Bio-Rad Variant®. O método desenvolvido apresentou precisão intra-ensaio de 1,39-3,65 por cento e inter-ensaio de 2,80-3,02 por cento. Os coeficientes de determinação entre os métodos foram: CLAE Mono S x Tinaquant®: r² = 0,9856 (n=60) e CLAE Mono S x Bio-Rad Variant®: r² = 0,9806 (n=16). Não foram observadas diferenças entre CLAE Mono S e Bio-Rad Variant® através de gráfico de Bland-Altman e regressão de Passing-Bablok. Foi obtida uma equação de conversão entre os valores do método teste e os valores obtidos por métodos rastreáveis ao National Glycohemoglobin Standardization Program (NGSP), permitindo a obtenção de valores comparáveis e intercambiáveis entre as metodologias com o uso de instrumentos convencionais de CLAE e com custo reduzido.

Relation between CYP2C19 phenotype and genotype in a group of Brazilian volunteers / Relação entre genótipo e fenótipo de CYP2C19 em um grupo de voluntários brasileiros

The CYP2C19 gene presents polymorphism affecting the pharmacokinetics of several drugs of clinical importance. The purpose of this study was to investigate the correlation between CYP2C19 genotype and metabolic phenotype in a group of 38 Brazilian volunteers, evaluating the phenotype prediction capacity of the genotyping procedure. For CYP2C19 phenotyping, omeprazole was used as the probe drug, using the hydroxylation metabolic ratio as the phenotypic indicator. Venous blood samples were drawn before and three hours after an oral administration of 20 mg omeprazole. The plasma concentrations of omeprazole and hydroxy-omeprazole were determined by high performance liquid chromatography. The genotyping assay was carried out using a Real-Time-PCR-based assay, identifying the alleles *1 (completely functional), *2, *3 and *4 (null). The phenotyping procedure estimated the presence of 4 poor, 34 extensive and 1 ultra-extensive metabolizer. The genotyping identified 4 poor, 23 extensive and 11 intensive metabolizers. The groups of volunteers classified according to the number of active alleles of CYP2C19 had significant differences in the metabolic ratios of omeprazole hydroxylation. However, volunteers exhibiting the same number of active alleles presented different phenotypes. Therefore, the phenotyping of CYP2C19 is a more promising alternative to dose individualization of CYP2C19 substrate drugs.

O gene CYP2C19 apresenta polimorfismo genético, com impacto importante na farmacocinética de diversos fármacos de importância clínica. O objetivo deste estudo foi avaliar a correlação entre genótipo e fenótipo de CYP2C19 em um grupo de 38 voluntários brasileiros, avaliando a capacidade de predição do fenótipo a partir de testes de genotipagem. Para a fenotipagem, utilizou-se omeprazol (OME) como fármaco-sonda para CYP2C19, empregando sua razão metabólica de hidroxilação como indicador fenotípico. Amostras de sangue foram coletadas antes e três horas após a administração oral de 20mg do fármaco. As concentrações plasmáticas de OME e seu metabólito foram determinadas por cromatografia líquida de alta eficiência. A genotipagem de CYP2C19 foi realizada através de ensaio baseado na reação em cadeia da polimerase em tempo real, identificando os alelos *1 (completamente funcional),*2 e *3 (nulos). Pela fenotipagem foi possível estimar a presença de 3 metabolizadores lentos, 34 rápidos e 1 ultra-rápido; enquanto pela genotipagem foi determinada a presença de 4 metabolizadores lentos, 23 rápidos e 11 intermediários. Os grupos de voluntários classificados de acordo com o número de alelos ativos apresentaram diferenças significativas entre as razões metabólicas de hidroxilação de omeprazol. Entretanto, indivíduos com o mesmo genótipo apresentaram fenótipos diferentes. Desta forma, a fenotipagem apresenta-se como alternativa mais promissora para a individualização das doses de fármacos substratos de CYP2C19.

Estudo pré-analítico e de validação para determinação de malondialdeído em plasma humano por cromatografia líquida de alta eficiência, após derivatização com 2.4-dinitrofenilhidrazina / Preanalytical and validation studies for the determination of malondialdehyde in human plasma through high performance liquid chromatography after derivatization with 2.4-dinitrophenylhydrazine

O malondialdeído (MDA) é um importante biomarcador utilizado na avaliação do estresse oxidativo. O objetivo deste estudo foi desenvolver uma metodologia para a quantificação plasmática de MDA, através de cromatografia líquida de alta eficiência com detecção por arranjo de diodos (CLAE-DAD), após processo de derivatização com 2,4-dinitrofenilhidrazina (DNPH), avaliando as principais variáveis pré-analíticas. A curva de calibração em plasma (0 a 40 µM) apresentou elevada linearidade (r²=0,998). Os principais parâmetros de validação foram: recuperação absoluta: 78 por cento; limite de detecção: 0,11 µM e limite de quantificação: 0,38 µM. Os valores de MDA determinados em indivíduos adultos saudáveis (n=38) foram 3,31 ± 0,38 µM (média ± DP). Estudos de estabilidade do padrão de MDA, reagente derivatizante e MDA plasmáticos, indicaram que a solução padrão pode ser armazenada a -20 e 4 ºC.

Malondialdehyde (MDA) is an important biomarker for the evaluation of oxidative stress status. The aim of this study was to develop a method for plasma MDA quantification by high performance liquid chromatography with diode-array detection (HPLC-DAD), following derivatization with 2,4-dinitrophenylhydrazine (DNPH), evaluating the main preanalytical variables. The calibration curve in plasma (0 to 40 µM) presented high linearity (r² = 0.998). Main validation parameters were: recovery: 78 percent; LOD: 0.11 µM and LOQ: 0.38 µM. The MDA values obtained in healthy volunteers (n=38) were 3.31 ± 0.38 µM (mean ± SD). Stability studies of MDA standard solution and derivatizing reagent and plasma MDA indicated that the standard solution can be stored at -20 and 4 ºC, remaining stable for at least 30 days.

Detecção imuno-histoquímica de células apoptóticas em glioblastoma recidivante de paciente tratado com álcool perílico por via inalatória / Immunohistochemical detection of apoptotic cells in a recurrent glioblastoma patient treated with intranasal delivery of perillyl alcohol

Introdução: Estudos in vitro mostram que radioterapia e/ou quimioterapia podem ativar as vias de sinalizaçãodo receptor do fator de crescimento epidérmico (EGFR) e Ras, aumentando a resistência cruzada dascélulas de glioblastomas multiformes (GBM) ao tratamento. A inibição das atividades de EGFR e Rasatravés de inibidores tirosinas cinases elimina o antagonismo observado à administração seqüencialdestas modalidades terapêuticas, induzindo apoptose nestas células. Em estudo prévio demonstramosque o tratamento com o álcool perílico (AP), inibidor da farnesilação da Ras, induz apoptose em linhagenscelulares e células de explante de GBM. Objetivo: No presente estudo investigamos se a regressãoparcial observada em GBM recorrente de paciente tratado com administração intranasal de AP é mediadapor apoptose. Resultado: Ensaios com TUNEL (deoxynucleotidyl-mediated deoxyuridine triphosphate) ecaspase-3 ativada evidenciaram presença de células apoptóticas nas lâminas de GBM tratado. Conclusão:Esses achados sugerem que estratégias adjuvantes visando à inativação das vias de sinalização do EGFRe Ras podem melhorar tanto a eficácia de terapia isolada como de terapia multimodal em gliomas.

Background: In vitro studies demonstrated that both radiation and chemotherapy can activate EGFRand Ras signaling pathways, leading to increased cross-resistance to treatment of GBM cell. Inhibition of either EGFR or Ras activity with tytosine kinase inhibitor appears to abrogate the observed antagonism between sequentially administration of these therapeutic modalities inducing apoptosis in these cells. In a previous study, we demonstrated that in vitro treatment with perillyl alcohol (POH), an inhibitor of Ras farnezilation, induced apoptosis in human GBM cell lines and explants. Objective: In the presentstudy, we investigated if the partial regression observed in a patient with a recurrent GBM after treatmentby intranasal delivery of POH, is mediated by apoptosis. Result: Data from classical histology, terminaldeoxynucleotidyl-mediated deoxyuridine triphosphate nick-end labeling (TUNEL) assay, as well asactivation of caspase 3, showed increased apoptosis in the treated tumor. Conclusion: These findings suggest that strategies to inactivate EGFR and RAS signaling may be critical to improving not only theefficacy of single-agent therapy but also of multimodal therapy in gliomas.

Estudo exploratório da administração intranasal do monoterpeno álcool perílico em pacientes com glioma recidivante / Exploratory study of monoterpene perillylalcohol intranasal administration in patients with recurrent gliomas

Objetivo: Conduzimos estudo de fase I/II para avaliar atividade antitumoral do álcool perílico (AP) por via inalatória em pacientes com gliomas recidivantes. Pacientes e Métodos: Trinta e sete pacientes com glioma recidivante após tratamento convencional foram matriculados, dos quais 29 com glioblastoma (GBM), 5 com astrocitoma anaplásico (AA) e 3 com oligodendroglioma anaplásico (OA). O objetivo foi determinar a sobrevida livre de progressão no 6º mês e a toxicidade do AP administrado 4 vezes ao dia em pacientes refratários ao tratamento convencional. Resultados: Os resultados mostraram no 6º mês de tratamento, resposta parcial em 1 paciente (3,4%) com GBM e 1 paciente (33,3%) com OA; doença estável em 13 pacientes (44,8%) com GBM, 3 pacientes (60%) com AA e 1 paciente (33,3%) com OA; progressão da doença em 15 pacientes (51,7%) com GBM, 2 pacientes (40%) com AA e 1 paciente (33,3%) com OA. A sobrevida livre de progressão (somatório de resposta parcial e doença estável) foi de 48,2% para pacientes com GBM, 60% para pacientes com AA e 66,6% para pacientes com OA. Conclusão: O presente trabalho mostrou pela primeira vez, que a administração intranasal de um inibidor da transdução do sinal, álcool perílico, é uma estratégia segura, não invasiva, de baixo custo, e a regressão do volume tumoral em alguns pacientes é sugestivo de atividade antitumoral.

Objective: A phase I/II study to evaluate the antitumoral activity of perillyl alcohol (POH) intranasal delivery in patients with recurrent gliomas was conducted. Patients and Methods: Thirty-seven patients with recurrent gliomas after standard therapy were enrolled, of whom 29 presented with glioblastoma (GBM), 5 with anaplastic astrocytoma (AA), and 3 with anaplastic oligodendroglioma (AO). The objective was to determine progression-free survival at 6 months and the safety for POH in a 4 x daily schedule in patients who failed conventional treatment. Results: After 6 months of treatment the fol¬lowing was observed: Partial Response: 3.4% (n=1) with GBM and 33,3% (n=1) with AO; Stable Disease: 44.8% (n=13) with GBM, 60% (n=3) with AA and 33.3% (n=1) with AO; Progressive Course: 51.7% (n= 15) with GBM, 40% (n=2) with AA and 33.3% (n=1) AO. The progression free survival (sum of partial responses and stable disease) was 48.2% for patients with GBM, 60%, for AA patients and 66.6% for AO patients. Conclusion: The present work indicates, for the first time, that intranasal administration of the signal transduction inhibitor, perillyl alcohol, is a safe, non- invasive, low cost treatment and that regres¬sion of tumor size in some patients is suggestive of antitumoral activity.

Fenotipagem de enzimas metabolizadoras polimórficas e monitoramento terapêutico como uma ferramenta na farmacologia clínica dos antidepressivos tricíclicos, uma revisão / Phenotyping of polymorpghic metabolizing enzymes and therapeutic drug monitoring as a tool in the clinical pharmacology of tryicyclic antidepressants, a review

Polymorphism in drug metabolizing enzymes is related with interindividual variability in drug therapy effectiveness. The polymorphisms of oxidative enzymes of the P450 cytochrome system have been characterized, and their impacts in enzyme activity are already known. Considering their substrate specificity, CY2D6 and CYP2c19 are the most important enzymes in the tricyclic antidepressant metabolism. Several methods are avaiable in order to classify an individual regarding metabolic activity of these enzymes. Although genotyping is a fast growing approach, phenotyping seems to be more feasible as a "moment picture" of CYPs activity. Phenotyping of CYp2D6 and CYP2c19 is usually done by the use of probe drugs, with some degree of specificity for the tested enzymes. The simultaneous administration of probe drugs specific for samples of blood or urine are taken at standarized time intervals. After parent drug and metabolite quantitative analysis, usually by high-performance liquid chromatography, a pharmacokinetic parameter is used to classify the individuals as poor, extensive or ultra-fast metbolizers. One of the most promising possibilities of the individual metabolic characterization is costomizing drug therapy, wich has not been fully exploited until now...