Aeromonas hydrophila and Campylobacter jejuni isolated in fresh tuna (Thunnus spp) sold in São Paulo, Brazil / Detecção de Aeromonas hydrophila e Campylobacter jejuni em atum (Thunnus spp) fresco comercializado em São Paulo, Brasil

Aeromonas hydrophila and Campylobacter jejuni are bacteria of emerging importance in public health. However, little has been published about fish contaminated by these pathogens. The present study aimed to verify the presence of Aeromonas hydrophila and Campylobacter jejuni in fresh tuna samples (Thunnus spp.) caught off the coast of Santa Catarina State and distributed in the wholesale market of São Paulo/SP. A total of 85 tuna fillet samples were collected and examined by PCR and bacteriological analyses. Aeromonas spp. was detected in 11/85 (13%) samples, with 10/11 (90.9 %) being confirmed as Aeromonas hydrophila by PCR. Campylobacter spp. was found in 10/85 (11.7%) samples, 10/10 (100%) identified as Campylobacter jejuni by PCR and conventional biochemical analyses. Both pathogens were found in 2/85 (2.3%) samples. This is the first report on the contamination of fresh tuna by Campylobacter jejuni and Aeromonas hydrophila in Brazil. In addition to show that tuna can be a vehicle for transmission of pathogens when consumed raw, it emphasizes the importance of further studies to support the control these pathogens in fish...

Aeromonas hydrophila e Campylobacter jejuni são bactérias de importância emergente em saúde pública, porém com escassos trabalhos publicados na área de pescado. O presente estudo investigou a presença de Aeromonas hydrophila e Campylobacter jejuni em amostras de atum (Thunnus spp.) fresco, capturados no litoral de Santa Catarina e distribuídos no comércio atacadista de São Paulo, SP. Foram colhidas 85 amostras de filé de atum e processadas por análises bacteriológicas e PCR. Do total, 11/85 (13%) amostras foram positivas para Aeromonas spp., sendo 10/11 (90,9%) confirmadas como Aeromonas hydrophila pela PCR. Para Campylobacter spp., 10/85 (11,7%) foram positivas, sendo 10/10 (100%) identificadas como Campylobacter jejuni pelas provas bioquímicas tradicionais e PCR ressaltando-se que duas (2/85 - 2,3%) amostras de atum albergavam ambos os patógenos. Trata-se do primeiro relato no Brasil de contaminação de atum fresco por Campylobacter jejuni e Aeromonas hydrophila, indicando que este alimento ingerido in natura pode ser um veículo de transmissão de agentes patogênicos, ressaltando-se a importância de estudos adicionais que deem suporte ao controle desses microrganismos em pescado consumido cru...

Detection of CDT toxin genes in Campylobacter spp. strains isolated from broiler carcasses and vegetables in São Paulo, Brazil

Campylobacteriosis is a worldwide distributed zoonosis. One of the main virulence factors related to Campylobacter spp. in animals and humans is the cytolethal distending toxin (CDT), encoded by three adjacent genes (cdtA, cdtB, cdtC). The occurrence of Campylobacter spp. in samples of vegetables has not been reported in Brazil yet, and has seldom been described in the international literature. The detection of CDT in these strains has not been reported, either. The objectives of the present study were to determine the occurrence of Campylobacter spp. strains carrying virulence factors in samples of poultry and vegetables (lettuce and spinach) from different points of sale, thus verifying if vegetables are as an important vehicle for potentially virulent Campylobacter spp. strains as poultry. Twenty four strains were identified as Campylobacter jejuni by phenotypic and genotypic methods: 22 from broiler carcasses and two from lettuce samples. Three strains were identified as Campylobacter coli: two from broiler carcasses and one from lettuce. The presence of the cdt genes were detected in 20/24 (83.3%) C. jejuni strains, and 3/3 (100%) C. coli strains. The isolation of Campylobacter spp. strains with the cdt gene cluster in lettuce samples points to a new possible source of contamination, which could have an impact in the vegetable production chain and risk to public health. Results show that potentially virulent C. jejuni and C. coli strains remain viable in samples of broiler carcasses and vegetables at the points of sale.

Detection of Brucella abortus DNA in illegal cheese from São Paulo and Minas Gerais and differentiation of B19 vaccinal strain by means of the polymerase chain reaction (PCR)

A total of 192 samples of illegal cheese from different regions of the states of São Paulo and Minas Gerais, Brazil, were analyzed for the isolation and detection of Brucella spp. DNA by means of microbiological culture and polymerase chain reaction (PCR), respectively. Samples that yielded positive results were submitted to the analysis of the occurrence of Brucella abortus (biovars 1, 2 e 4), as well as to the differentiation of DNA in B19 vaccinal strain or Brucella abortus field strain using PCR. Although the microorganism was not isolated from any sample, PCR detected 37 positive samples (19.27 percent) using genus-specific primers. From these, all (100 percent) were Brucella abortus. Differentiation of the strain showed that 30/37 samples (81.08 percent) were vaccinal strain B19 and seven (18.92 percent) were Brucella abortus field strains. Results showed that diagnostic sensitivity of PCR was greater than that of microbiological culture. The standardization of the reaction for the differentiation of vaccinal and field strains enabled the analysis of all samples positive for Brucella abortus. It is, therefore, a reliable method, also applicable to natural infections caused by the microrganism.

Foram analisadas 192 amostras de queijo clandestinas provenientes de várias regiões do Estado de São Paulo e Minas Gerais, Brasil, para isolamento e detecção de DNA de Brucella spp. através das técnicas de cultivo microbiológico e reação da polimerase em cadeia (PCR), respectivamente. Para as amostras positivas foi pesquisada a ocorrência da espécie Brucella abortus (biovares 1, 2 e 4), além da diferenciação do DNA em cepa vacinal B19 ou de campo por PCR. Não foi possível isolar o microrganismo de nenhuma amostra, porém, na PCR, 37 amostras (19,27 por cento) foram positivas na reação com primers gênero específicos e destas, todas (100 por cento) foram comprovadas como sendo Brucella abortus. A diferenciação da cepa revelou que 30/37 amostras (81,08 por cento) eram cepa vacinal B19 e sete (18,92 por cento) eram cepas de Brucella abortus de campo. Os resultados mostraram uma maior sensibilidade diagnóstica da PCR em relação ao cultivo microbiológico, e a padronização da reação de diferenciação da cepa em vacinal ou campo permitiu que todas as amostras positivas para Brucella abortus fossem analisadas, sendo uma metodologia confiável e aplicável a infecções naturais pelo microrganismo.

Survey of chicken abattoir for the presence of Campylobacter jejuni and Campylobacter coli

The genus Campylobacter is of great importance to public health because it includes several species that may cause diarrhea. These species may be found in water, food and in the intestinal tract of chickens. This study investigated the presence of Campylobacter jejuni and Campylobacter coli in chicken abattoirs in São Paulo State, Brazil. A total of 288 samples of feces, feathers, scald water, evisceration water, chiller water, and the rinse water of eviscerated, not eviscerated and chilled carcasses were collected in six chicken abattoirs. Polymerase Chain Reaction (PCR) was performed in Campylobacter spp.-positive isolates using the gene HIP, specific for hippuricase enzyme from Campylobacter jejuni and aspartokinase gene, specific to detect Campylobacter coli. The percentage of positive isolates of Campylobacter jejuni was 4.9 percent (14/288). Isolation was greater in feces samples (22 percent, 8/36). One sample was positive for the species C. coli. In conclusion, the results indicate that it is necessary to improve quality control for Campylobacter spp. in chicken abattoirs.

O gênero Campylobacter tem grande destaque em saúde pública, principalmente por pertencerem a este gênero várias espécies que podem causar diarréia. Estas espécies podem ser encontradas em amostras de água, alimentos e no trato intestinal das aves. Este estudo investigou a presença de Campylobacter jejuni e Campylobacter coli em abatedouros de aves no Estado de São Paulo. As 288 amostras foram coletadas em seis estabelecimentos e incluíram: fezes; penas; água de escaldamento, de evisceração e de resfriamento; e água de enxaguadura de carcaça não eviscerada, eviscerada e resfriada. Após o isolamento microbiológico das amostras positivas de Campylobacter spp. foi realizada uma Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) utilizando o gene HIP, da hipuricase, específico para Campylobacter jejuni e o gene da enzima aspartoquinase, específico para Campylobacter coli. A porcentagem de amostras positivas para Campylobacter spp. foi de 4,9 por cento (14/288), sendo que o isolamento foi maior em amostras de fezes (22 por cento, 8/36). Foi isolada uma amostra positiva para C. coli. Em conclusão, os resultados indicam que há uma necessidade de melhorar a qualidade higiênico-sanitária do controle de Campylobacter em abatedouros de aves.

Molecular subtyping of Campylobacter jejuni subsp. jejuni strains isolated from different animal species in the state of São Paulo, Brazil

O objetivo do presente trabalho foi caracterizar geneticamente estirpes de Campylobacter jejuni subsp. jejuni isoladas de humanos e de diferentes origens animais (bovinas, suínas, cães, primatas, javalis, suínos e aves de corte). Um total de 828 amostras (fezes, carcaças, fetos abortados e útero histerectomizado) foram analisadas por métodos de rotina bacteriológica e 36 estirpes de C. jejuni foram isoladas. Trinta estirpes de origem fecal humana foram obtidas de laboratórios de análises clínicas da cidade de São Paulo. As 66 estirpes de C. jejuni isoladas foram submetidas à caracterização genética. Oligonucleotídeos baseados no gene fla A foram usados na reação de polimerase em cadeia (PCR) e amplificou um fragmento de 702 pb. Os produtos obtidos pela PCR foram avaliados pelas técnicas de seqüenciamento e análise genealógica. Análise da variabilidade genética das 66 estirpes revelou 44 diferentes subtipos de C. jejuni. Um subtipo de origem humana apresentou seqüência idêntica à de C. jejuni depositada no GenBank (GENBANK acesso número AF050186). A subtipagem das estirpes de C. jejuni baseadas no seqüenciamento da região variável do gene fla A e na análise do alinhamento das seqüências pelo método da Máxima Parcimônia, mostraram-se altamente discriminatórios fornecendo melhores condições para a correta diferenciação entre estirpes originárias de surto e as isoladas esporadicamente. Este foi o primeiro estudo de subtipagem molecular de estirpes de C. jejuni de origem humana e animal utilizando a técnica do seqüenciamento com análise genealógica realizado no Estado de São Paulo, Brasil.

Detection of Leptospira spp. in the semen and urine of bulls serologically reactive to Leptospira interrogans serovar hardjo

O presente trabalho avaliou a PCR na detecção de leptospiras em sêmen e urina de dez touros sorologicamente reagentes, comparando seus resultados com aqueles obtidos por outras técnicas de diagnóstico. Foram realizadas duas colheitas de materiais em dias alternados. As amostras de sêmen e de urina foram separadas em alíquotas para visualização direta em microscopia de campo escuro, inoculação em hamsters (apenas para o sêmen), isolamento em meio de cultura e PCR. Nenhum hamster apresentou positividade na prova de soroaglutinação microscópica (SAM); fragmentos de rins e fígado desses animais foram utilizados para a tentativa de isolamento em meio de cultura, sendo positivo o cultivo a partir do rim de hamster inoculado com semen de um touro, e do fígado de hamsters inoculados com o semen de três touros. O isolamento em meio de cultura foi negativo para todas as amostras de sêmen, mas foi positivo para cinco amostras de urina. Na PCR não houve resultado positivo para as amostras de sêmen, e apenas uma amostra de urina apresentou resultado positivo, sendo coincidente com uma das culturas positivas. Não foi possível visualizar leptospiras em nenhuma das amostras por exame direto em microscopia de campo escuro.

Detecção de Campylobacter jejuni em carcaças e cortes de frangos, pela reação da polimerase em cadeia / Determination of Campylobacter jejuni in carcasses and cuts of chickens, by the polymerase chain reaction

As bactérias do gênero Campylobacter apresentam-se amplamente distribuídas na natureza, sendo isoladas de diversas espécies animais, tanto domesticas como silvestres. Atribui-se como via de transmissão para o ser humano, o contato direto com animais portadores, o consumo de água e alimentos de origem animal contaminados, mormente carnes de aves mal processadas e a ingestão de leite não pasteurizado. No Brasil, tem sido relatada a presença de Campylobacter spp. em casos de diarréia aguda ou crônica a até em indivíduos assintomáticos. O presente trabalho tem por objetivo pesquisar a presença de Campylobacter jejuni em amostras de carcaças e cortes de frangos, de abatedouros do Estado de São Paulo, pelas técnicas de isolamento bacteriano e pela Reação de Polimerase em Cadeia (PCR). Das 74 amostras analisadas, 5 (6,75 por cento) foram positivas pela PCR para Campylobacter jejuni. A técnica da PCR mostrou-se mais sensível e específica que o exame bacteriológico, que pode falhar na detecção de Campylobacter spp. em amostras muito contaminadas, congeladas ou aditivadas. Oferece também vantagens devido à rapidez e facilidade de execução, tendo em vista que o controle deste patógeno será cada vez mais exigido em função do mercado internacional de carne de frango.

Leptospira spp detection by Polymerase Chain Reaction (PCR) in clinical samples of captive black-capped Capuchin monkey (Cebus apella)

Leptospirosis is a widely distributed zoonosis that affects domestic and wild animals, and that has the man as the end point of its epidemiological chain. Leptospirosis diagnosis in primates is more difficult than in other animal species, as clinical signs and lesions are less evident and antibody response is detected only for short periods. The aim of this article was to describe the detection of Leptospira spp using polymerase chain reaction (PCR), in clinical samples from one captive black-capped Capuchin monkey (Cebus apella), which presented characteristics compatible with leptospirosis (jaundice and haemorrhagic kdney) in the macroscopic post-mortem examination. A friable kidney fragment and urine sample were cultured and submitted to experimental inoculation in guinea pigs and PCR using genus specific primer pair targeting the 16S rRNA region from Leptospira interrogans serovar canicola. Isolation of the agent was negative both in culture and experimental inoculation. The PCR amplification of the clinical samples showed a 330 pb amplified fragment that corresponds to the Leptospira genus. Based on these results PCR was considered an important tool for leptospira detection in nonhumam primates, more sensitive and specific than other techniques, especially considering that the viability of the pathogen was not possible. These advantages enable the detection of the leptospiras in urine and kidney, even when autolysed, frozen or badly conserved, which prevented the isolation and experimental inoculation from positive results.

Comparison of electrophoretic protein profiles of campylobacter jejuni subsp. jejuni isolated from different animal species

Electrophoretic protein profiles of Campylobacter jejuni subsp. jejuni strains isolated from feces of seven animal species, including man, were compared. Fourteen strains (two from each species) plus two human strains and the reference one, were ruptured by ultrasound and their total soluble proteins were analyzed by SDS-PAGE technique in a 12(per cent) polyacrylamide gel with computerized densitometric reading by the molecular analyst software. All the strains had bands in common that correspond to 45 and 66 Kda molecular weight. The disagreement corresponded to a 97 to 200 Kda molecular weight region. From the 17 strains, 13 (76.5 per cent), were classified as biotype I, three (17.6 per cent) as biotype II and one (5.8 per cent) as biotype III. Since protein extracts were obtained from cells grown under identical conditions, and thus, able to express the same phenotype, this disagreement region could be related to different genotypes or serotypes.

Evaluation of the counterimmunoelectrophoresis reaction as a serodiagnosis test for swine leptospirosis

Avaliou-se a reação de contraimunoeletroforese (CIE) como teste gênero-específico para diagnóstico da leptospirose suína, usando-se três extratos solúveis de Leptospira sp, sorovares pomona, icterohaemorrhagiae e patoc, obtidos pelo tratamento com Triton X-100 a quente e aplicados a amostras de soro de suínos subdivididos em três grupos: Grupo 1, 10 suínos experimentalmente infectados com estirpe Pomona; Grupo 2, 50 suínos naturalmente infectados e Grupo 3, controle. As amostras de soros foram submetidas à reação de CIE e os resultados comparados aos da Soroaglutinação Microscópica (SAM), técnica de referência pela WHO. Os Grupos 1 e 3 foram monitorados por 93 dias após a inoculação (p.i.). Pela SAM a soroconversão do Grupo 1 ocorreu por volta do 10º dia p.i., enquanto pela CIE, empregando-se qualquer extrato antigênico, foi anterior à SAM. Quando a CIE foi realizada frente a antigeno homólogo à infecção, seus resultados foram equivalentes aos da SAM, não se verificando o mesmo frente aos antígenos heterólogos. Neste aspecto, os Grupos 1 e 3 mostraram comportamento diferente pois não houve diferença significativa entre os resultados da CIE frente aos três antígenos, o que poderia significar serem independentes do sorovar responsável pelo surto ou infectante. Embora a CIE seja segura, rápida, de fácil execução, de baixo custo e ideal para análise em grande escala de amostras, revelou-se de limitada capacidade gênero-específica, o que não é desejavel para testes de triagem de campo; mas poderia ser útil na detecção precoce de resposta sorológica em relação à SAM.

Infertilidade e abortamentos em rebanho bovino causados por campylobacter fetus subsp.fetus: profilaxia e tratamento / Infertility and abortions in cattle due to campylobacter fetus subsp.fetus: control procedures and treatment

Campylobacter fetus subs.fetus foi isolado do conteúdo estomacal de um feto abortado, de lavado e "swabs" prepuciais de um touro provenientes de um rebanho que apresentava elevados índices de infertilidade, repetiçöes de cio, várias coberturas para fertilizaçäo e casos de abortamento.Instituiu-se antibioticoterapia tópica e sistêmica, recomendando-se repouso sexual do macho e das fêmeas por 30 dias.Após esse período foram feitos examesbacteriológicos de controle que se mostraram negativos, näo havendo ocorrência de novos abortamentos.Os autores discutem o papel do Campylobacter fetus subsp.fetus nafertilidade de bovinos