Determining the Presence of 5-Fluorouracil in Hamster Saliva by HPLC / Determinação, por CLAE, da Presença do 5-Fluorouracil em Saliva de Hamsters

Abstract Introduction: Various methods of analysis for the assay of chemotherapeutic agent 5-Fluorouracil (5-FU) in human and animal biological fluids have previously been reported. However, there is no standardization for detecting 5-FU in the hamsters' saliva that received the chemotherapeutic agent. Objective: Considering that the administration of 5-FU in some way changes the morphology and function of the salivary glands, and that the presence of the chemotherapeutic agents in the oral mucosa may lead to some oral complications, the aim of this study was to determine the presence of 5-FU in the hamsters' saliva that received the chemotherapeutic agent, by means of the High Performance Liquid Chromatography technique (HPCL) since this animal model is used in studies of 5-FU induced oral mucositis and glandular hypofunction. Methods: Twelve animals were divided into 4 groups: CP and CPI, in which the animals received pilocarpine (CP) or pilocarpine + isoproterenol (CPI) and the chemotherapy vehicle intraperitoneally; and Groups QP and QPI, in which the animals received the same secretagogues listed above, and the chemotherapeutic agent 5-FU, respectively. After the secretagogue administration, saliva was collected from all the animals for a period of 60 mins. Subsequently, the saliva was frozen at -80 ˚C for later determination of the chemotherapeutic agent by HPLC. After the the chromatograms analysis, and based on the results obtained, it was possible to identify the presence of 5-FU in the saliva samples from hamsters that received the chemotherapeutic agent intraperitonally, by the HPLC technique. (AU)

Resumo Vários métodos de análise para o ensaio do quimioterápico 5-Fluorouracil (5-FU) em fluidos biológicos de humanos e animais, foram previamente relatados. No entanto, não há uma padronização para detecção de 5-FU na saliva de hamsters que receberam o quimioterápico. Considerando que a administração do 5-FU altera de alguma maneira a morfologia e função das glândulas salivares, e que a presença do quimioterápico na mucosa oral pode levar a algumas complicações orais, este trabalho teve como objetivo de determinar a presença de 5-FU na saliva de hamsters que receberam o quimioterápico pela técnica de Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE), uma vez que este modelo animal é usado nos estudos com mucosite oral e hipofunção glandular, induzidas por 5-FU. Doze animais foram divididos em 4 grupos: CP e CPI, onde os animais receberam intraperitonealmente pilocarpina (CP) ou pilocarpina + isoproterenol (CPI) e o veículo do quimioterápico, e os grupos QP e QPI, onde os animais receberam, respectivamente, os mesmos secretagogos listados acima e o quimioterápico 5-FU. Após a administração do secretagogo, foi coletada a saliva de todos os animais, por um período de 60 min. Em seguida, a saliva foi congelada a -80 ˚C para posterior determinação do quimioterápico por CLAE. Após análise dos cromatogramas, e com base nos resultados obtidos, foi possível identificar a presença do 5-FU nas amostras de saliva de hamsters que receberam o quimioterápico via intraperitoneal pela técnica da CLAE. (AU)

High peak of carbamylated hemoglobina discordant with urea level: a case report / Pico alto da hemoglobina carbamilada discordante com o nível de ureia: relato de caso

ABSTRACT Hemoglobin A1c (HbA1c) measurement is commonly performed in diabetes mellitus patients to monitor glycemic control over the last three to four months. Carbamylated hemoglobin, which is the hemoglobin that binds to isocyanic acid derived from urea, is one of the possible analytical interference in the uremic patient. When measured by ion-exchange high-performance liquid chromatography (HPLC), carbamylated hemoglobin forms a peak that overlaps the peak of HbA1c, causing a falsely elevated HbA1c result. We report a case of a 60-years-old man who had a spurious increase in HbA1c, with a high carbamylated hemoglobin peak disproportionate to the urea value. Subsequent hemoglobin analysis using hemoglobin electrophoresis and HPLC hemoglobin testing system suggested hemoglobin J (Hb J) variant. Our case highlighted the possibility of misleading HbA1c interpretation in the presence of a high carbamylated hemoglobin peak, but not proportionate to urea value. In this study, Hb J was detected. A method free from hemoglobin variant interference should be used ideally, and monitoring glycemic control should be performed using alternative methods, such as serum fructosamine or continuous glucose monitoring.

RESUMEN La prueba de la hemoglobina glicosilada A1c (HbA1c) se realiza comúnmente en pacientes con diabetes mellitus para monitorear el control glucémico durante los últimos tres o cuatro meses. La hemoglobina carbamilada, que es la hemoglobina que se une al ácido isociánico derivado de la urea, es una de las posibles interferencias analíticas en el paciente urémico. Cuando se mide mediante cromatografía líquida de alta eficacia (HPLC) de intercambio iónico, la hemoglobina carbamilada forma un pico que se superpone al pico de HbA1c, lo que provoca un resultado de HbA1c falsamente elevado. Presentamos el caso de un hombre de 60 años que tuvo un aumento espurio de HbA1c, con un pico de hemoglobina carbamilada alto desproporcionado al valor de urea. El análisis de hemoglobina posterior mediante electroforesis de hemoglobina y el sistema de prueba de hemoglobina HPLC sugirió una variante de hemoglobina J (Hb J). Nuestro caso destacó la posibilidad de una interpretación engañosa de la HbA1c en presencia de un pico de hemoglobina carbamilada alto, pero no proporcional al valor de urea. En este estudio, se detectó Hb J. Lo ideal sería utilizar un método libre de interferencia de variantes de hemoglobina, y la monitorización del control glucémico debería realizarse mediante métodos alternativos, como la fructosamina sérica o la monitorización continua de la glucosa.

RESUMO A dosagem de hemoglobina A1c (HbA1c) é comumente realizada em pacientes com diabetes mellitus para monitorar o controle glicêmico nos últimos três a quatro meses. A hemoglobina carbamilada - hemoglobina que se liga ao ácido isociânico derivado da ureia - é uma das possíveis interferências analíticas no paciente urêmico. Quando medida por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) por troca iônica, a hemoglobina carbamilada forma um pico que se sobrepõe ao pico da HbA1c, causando um resultado falsamente elevado da HbA1c. Relatamos o caso de um homem de 60 anos de idade que apresentava um aumento espúrio de HbA1c, com alto pico de hemoglobina carbamilada desproporcional ao valor de ureia. A análise subsequente da hemoglobina usando eletroforese de hemoglobina e sistema de teste de hemoglobina por HPLC sugeriu a variante de hemoglobina J (Hb J). Nosso caso destacou a possibilidade de interpretação enganosa da HbA1c na presença de um pico alto de hemoglobina carbamilada, mas não proporcional ao valor da ureia. Neste estudo, foi detectada a Hb J. Um método isento de interferência de variantes da hemoglobina deve ser idealmente usado, e o monitoramento do controle glicêmico deve ser feito usando métodos alternativos, como frutosamina sérica ou monitoramento contínuo da glicose.

Degradação do repelente DEET pelas lacases do Pleurotus ostreatus / Degradation of repellent DEET by Pleurotus ostreatus laccases

Objetivo: Avaliar a capacidade de remediação do DEET em meio líquido, pelo fungo de decomposição branca Pleurotus ostreatus usando como indutor enzimático os resíduos sólidos do cacau e realizar bioensaios de toxicidade com as amostras pós-tratamento, para aplicações em tratamentos de águas. Método: Foi realizada a produção enzimática com resíduos do Cacau. A biorremediação com o caldo enzimático foi realizada em erlenmeyers de 250mL, contendo a solução do composto, tampão acetato de sódio pH 5 e o caldo batata, incubados à 28°C, com rotação de 120 rpm, por 48 horas. Já com o fungo ativo, o mesmo foi incubado a 28 ºC e teve em seu meio a adição do composto. As amostras foram quantificados em Cromatografia líquida de alta performance (CLAE). O teste de adsorção foi feito com o fungo autoclavado e analisado após 14 dias. Resultado: O composto se apresentou possivelmente tóxico e a remediação mostrou uma tendência linear de degradação com o fungo de 39%. Conclusão: Pleurotus ostreatus é um candidato promissor para o tratamento de contimanações geradas por DEET.

Objective: We evaluated the remediation capacity of DEET in liquid medium by the white decomposition fungus Pleurotus ostreatus using the solid residues of cocoa as an enzymatic inducer and performed toxicity bioassays with the post-treatment samples, for water treatment applications. Method: Enzymatic production with cocoa residues was performed. Bioremediation with the enzyme broth was performed in a 250mL erlenmeyer flasks, containing the solution of the compound, sodium acetate buffer pH 5 and the potato broth, incubated at 28 °C, with rotation of 120 rpm, for 48 hours. With the active fungus, the same was incubated at 28 ºC and had in its culture medium the addition of the compound. The samples were quantified in high performance liquid chromatography (HPLC). The adsorption test was performed with the autoclaved fungus and analyzed after 14 days. Results: The compound was possibly toxic and the remediation showed a linear tendency of degradation of 39% with the fungus. Conclusion: Pleurotus ostreatus is a promising candidate for the treatment of contaminants generated by DEET.

Análise de limite de galactosamina em hexosaminas totais em amostras injetáveis de heparina sódica suína / Galactosamine limit analysis in total hexosamines in injectable porcine sodium heparin samples

Introdução: A pesquisa, uma das vertentes da vigilância sanitária, tem sua importância justificada pela busca de respostas aos diversos prejuízos relativos à saúde. A heparina, produto biológico com propriedades anticoagulantes e antitrombóticas, esteve relacionada com eventos adversos entre 2007 e 2008. Diante do ocorrido, os compêndios oficiais atualizaram a monografia para matéria-prima. No entanto, há uma deficiência de monografias para avaliação do produto final. Objetivo: Propor método físico-químico de análise de limite de galactosamina em hexosaminas totais a partir do produto acabado de heparina sódica suína. Método: Foi desenvolvido método analítico a partir da cromatografia líquida de alta eficiência por troca iônica e detecção amperométrica, com as devidas avaliações de adequação do sistema para posterior análise de três amostras de heparina sódica suína, as quais foram previamente submetidas ao protocolo de preparo de amostra através da coluna Micro Bio-Spin™. Resultados: As amostras foram comparadas com a solução de adequação do sistema e matéria-prima de heparina sódica suína, sendo possível detectar presença de galactosamina em uma das três amostras analisadas em quantidade inferior ao limite estipulado pela Farmacopeia Americana. Conclusões: Conclui-se que o método é eficiente para análise do produto acabado e, por isso, será sugerido à Farmacopeia Brasileira.

Introduction: Research, one of the core areas of health surveillance, has its importance justified by its search for answers to various health problems. Heparin, a biological product with anticoagulant and antithrombotic properties, has been related to adverse events between the years 2007­2008. Because of that, the official compendiums updated the monograph for raw material. However, there is a lack of monographs that evaluate the final product. Objective: The goal of this study is to propose a physicochemical method of analysis of the limits of galactosamine in total hexosamine from the finished product of porcine sodium heparin. Method: We developed an analytical method from the ionexchange high performance liquid chromatography with amperometric detection, with the appropriate evaluations of the system suitability for posterior analysis of three samples of porcine sodium heparin previously submitted to the sample preparation protocol through the Micro Bio-Spin column. Results: The samples were compared to the solution of the system suitability and raw material of porcine sodium heparin. We could detect the presence of galactosamine in one of the three analyzed samples in lower amounts than the limit stipulated by the American pharmacopeia. Conclusions: We concluded that the aforementioned method is efficient for the analysis of the finished product and that is the reason why it will be suggested to the Brazilian pharmacopeia.

Comparação do efeito do bochecho de triclosan + copolímero + fluor, com a clorexidina, sobre a taxa de formação da placa dentária, retenção de antimicrobiano na placa dentária e na saliva e redução de estreptococos do grupo mutans na saliva: estudo clínico randomizado, cruzado, duplo-cego controlado / Comparison of the effect of triclosan + copolymer + fluoride mouthwash, with chlorhexidine on the rate of formation of dental plaque, retention of the antimicrobial in dental plaque and saliva and reduction of mutans streptococci in saliva. Randomized, crossover study, double-blind controlled

O objetivo deste estudo foi avaliar comparativamente o efeito do bochecho diário com solução de digluconato de clorexidina à 0,12% (TA - controle) em relação à solução de 0,03% de triclosan, 1% copolímero (Gantrez® ) e 0,05% de fluoreto de Sódio (TB - teste) em função da taxa de formação de placa dentária, retenção do antimicrobiano na placa dentária e saliva e redução de estreptococos do grupo mutans na saliva. Material e Método: Participaram deste estudo clínico randomizado, cruzado, com duplo cegamento e dois períodos de tratamento, 26 voluntários de ambos os gêneros e idade entre 18 e 30 anos (média de 24 anos), divididos em 2 grupo: G1(n=13) e G2 (n=13). Em cada período de tratamento os participantes realizaram 2 bochechos diários de 60 segundos cada, um ao se levantar e outro doze horas após, por sete dias. Resultado: A redução do índice de placa foi muito semelhante em ambos os grupos, já a análise por cromatografia líquida de alta eficiência não evidenciou traços dos antimicrobianos após 12 horas do uso dos enxaguatórios por 1 e 7 dias na placa dentária nem na saliva. A ação antimicrobiana evidenciou efeito estatisticamente significativo para tratamento (antes e após bochecho) com agente antimicrobiano (clorexidina e triclosan). A clorexidina foi mais eficaz que o triclosan (22,8% e 8,9% de redução, respectivamente). Conclusão: 1) Tanto o triclosan quanto a clorexidina, mostraram-se eficazes na redução da placa dentária dos voluntários. 2) Nenhum dos antimicrobianos permanecem na cavidade bucal após 12 horas do uso. 3) O uso de enxaguatórios bucais com clorexidina e triclosan, complementa o controle mecânico da placa dentária por sua eficaz ação antimicrobiana sobre os estreptococos do grupo mutans, reduzindo o risco de cárie dos pacientes.

The aim of this study was to comparatively evaluate the effect of daily rinsing with a solution of chlorhexidine digluconate 0,12% (TA- control) with the solution 0,03% triclosan + 1% copolymer (Gantrez ® ) + sodium fluoride 0,05% (TB- test) according of the rate of dental plaque formation, retention of antimicrobial agent in dental plaque and saliva by high performance liquid chromatography and reduction on mutans streptococci in saliva .Material and Method: In this randomized clinical study, crossover, double blinding with two treatment periods, 26 volunteers of both genders with between 18-30 years ( average 24 years), was divide into 2 groups: G1 (n=13) and G2 (n=13). In each treatment period the volunteers realized two daily mouthwashes of 60 seconds each, the first to get up and other twelve hours later, for 7 days. Results: The reduction of rate of dental plaque formation was same in bouth groups; high performance liquid chromatography analysis wasn't show trace of antimicrobial after 12 hours use of mouthwashes by 1 or 7 days in dental plaque or in saliva .The antimicrobial action showed statistically significant effect for treatment (before and after rinsing) with antimicrobial agent (chlorhexidine x triclosan). The chlorexidine digluconate was more effective than triclosan (22,8% and 8,9 decrease, respectively). Conclusion: 1) As far as triclosan, chlorhexidine, were effective in reducing dental plaque volunteers. 2) None of the antimicrobial agents remain in the oral cavity after 12 hours of use. 3) The use of mouthwashes containing chlorhexidine and triclosan, complements the mechanical control of 18 dental plaque for their effective antimicrobial action on mutans streptococci, reducing caries risk patients

Níveis de alfa-tocoferol no soro e colostro de lactantes e associação com variáveis maternas / Alpha-tocopherol level in serum and colostrum of breastfeeding women and association with maternal variables

OBJETIVOS: Diagnosticar bioquimicamente o estado nutricional de vitamina E de lactantes por meio da análise do alfa-tocoferol no soro e no colostro, verificar sua associação com variáveis maternas e determinar a prevalência de deficiência de vitamina E nessas mulheres. MÉTODOS: Participaram do estudo 103 puérperas que foram classificadas quanto às seguintes variáveis maternas: idade, estado nutricional pré-gestacional, ganho de peso gestacional, paridade e tipo de parto. Amostras de soro e colostro foram coletadas em jejum no pós-parto imediato e o alfa-tocoferol foi analisado por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). Para definir o estado nutricional de vitamina E, foi adotado ponto de corte sérico (697,7 μg/dL). A análise estatística foi realizada com o uso do teste t de Student para amostras independentes e correlação de Pearson. As diferenças foram consideradas significativas quando p<0,05. RESULTADOS: A concentração média de alfa-tocoferol foi 1.125,1±551,0 μg/dL no colostro e 1.138,6±346,0 μg/dL no soro, indicativo de estado nutricional bioquímico adequado. Entretanto, ao analisar as puérperas individualmente, constatamos que 16% apresentaram valores abaixo do esperado para esta vitamina. As mulheres submetidas à cesárea apresentaram níveis de alfa-tocoferol no colostro (1.280±591 μg/dL) significativamente maiores em relação àquelas cuja via de parto foi a normal (961,7±370 μg/dL) (p<0,05). Verificou-se que as parturientes com excesso de peso pré-gestacional tiveram concentração da vitamina no colostro maior (1.331,5±548 μg/dL) quando comparadas às mulheres com baixo peso (982,1±374 μg/dL) ou eutrofia (992,3±346 μg/dL) (p<0,05). Entretanto, as demais variáveis estudadas não apresentaram associação com o alfa-tocoferol do colostro. Além disso, nenhuma variável mostrou estar relacionada aos níveis da vitamina no soro materno e não foi demonstrada correlação entre os níveis de alfa-tocoferol no soro e no leite. CONCLUSÕES: Apesar do diagnóstico de satisfatório estado nutricional, as lactantes apresentaram risco importante de deficiência subclínica para vitamina E. Sugere-se que a concentração de alfa-tocoferol presente no colostro esteja associada ao tipo de parto e ao estado nutricional pré-gestacional da mulher.

PURPOSE: To determine the nutritional status of vitamin E in breastfeeding women through the analysis of alpha-tocopherol concentration in serum and colostrum, to analyze its relation with maternal variables and to determine the prevalence of vitamin E deficiency in these women. METHODS: The study included 103 mothers who were classified according to maternal variables: age, nutritional status before pregnancy, gestational weight gain, parity and mode of delivery. Colostrum and serum samples were collected under fasting conditions in the immediate postpartum period. Alpha-tocopherol was analyzed by high performance liquid chromatography (HPLC). A serum cutoff of 697.7 μg/dL was adopted to define the nutritional status of vitamin E. Statistical analysis was performed with the Student's t test for independent samples and Pearson's correlation. Differences were significant when p<0.05. RESULTS: The average concentration of alpha-tocopherol was 1.125±551.0 μg/dL in colostrum and 1,138.6±346.0 μg/dL in serum, indicating adequate biochemical nutritional status. However, when analyzing the mothers individually, a 16% rate of subclinical vitamin E deficiency was detected. Women undergoing cesarean delivery had significantly higher alpha-tocopherol levels in colostrum (1.280±591 μg/dL) compared with those undergoing normal delivery (961.7±370 μg/dL) (p<0.05). It was found that mothers who were overweight before pregnancy had higher vitamin concentration in colostrum (1,331.5±548 μg/dL) when compared to underweight women (982.1±374 μg/dL) or women of normal weight (992.3±346 μg/dL) (p<0.05). However, the other variables were not associated with alpha-tocopherol in colostrum. Moreover, no variable showed association with vitamin E levels in maternal serum and no correlation was demonstrated between the alpha-tocopherol levels in serum and in milk. CONCLUSIONS: Despite the diagnosis of satisfactory nutritional status, breastfeeding women showed significant risk of subclinical vitamin E deficiency. We suggest that the concentration of alpha-tocopherol in colostrum be associated with type of delivery and pre-gestational nutritional status of women.

Determinação de captopril por HPLC acoplado a espectômetro de massa: aplicação em estudo de bioequivalência / Determination of captopril by hplctandem mass spectrometry: application in a bioequivalence study

Objetivo: Avaliar a bioequivalência de três diferentes formulações de captopril 25mg (Capoten® como formulação de referência e Captopril produzido pela FURP e Farmanguinhos como formulações testes) em 24 voluntários saudáveis de ambos os sexos. Métodos: Os voluntários selecionados eram livres de doenças, como confirmado pelo exame físico, psiquiátrico, ECG e exames laboratoriais. O estudo foi do tipo aberto, cruzado, em três períodos com 5 dias de intervalo entre eles. As amostras plasmáticas foram obtidas num intervalo de 24 horas e as concentrações de Captopril foram determinadas por cromatografia líquida de fase reversa acoplada à espectrometria de massa (LC-MS-MS). Resultados: A média geométrica para Capoten®/Captopril-FURP 25mg foi 96.9% para AUC0-24, 95.58 % para AUC0-?, e 98.17% for Cmax. O intervalo de confiança (IC) de 90% foi de 84.8-100.65%, 88.5-109.42% e 82.52 116.8%, respectivamente. A média geométrica para Capoten®/ Captopril-Farmanguinhos 25mg foi 99.63 % para AUClast, 98.52% para AUC0-?, e 95.52 para Cmax. O IC de 90% foi de 87.23-113.8%, 86.06-112.79% e 80.29-113.64%, respectivamente. Portanto, os IC de 90% para Cmax, AUClast, AUC0-? estavam dentro da variação de 80-125% proposta pelo Food and Drug Administration. Conclusão: Os comprimidos de 25mg Captopril-FURP e Captopril Farmanguinhos foram bioequivalentes ao Capoten® 25mg em sua taxa e extensão de absorção.

Objective: To assess three different captopril tablet formulations of 25mg for their bioavailability (Capoten® as the reference formulation and Captopril from FURP and Farmanguinhos as the test formulations) in 24 healthy volunteers of both sexes. Methods: The volunteers were free from serious disease, as assessed by physical and psychiatric examination, EKG, and laboratory tests. The study was open, with a three-period crossover design and a five-day washout period. Plasma samples were obtained over a 24-hour interval. Captopril concentrations were determined by reversed phase liquid chromatography tandem mass spectrometry (LC-MS-MS). Results: The geometric mean for Capoten® /Captopril - FURP 25 mg was 96.9 % for AUC0-24, 95.58 % for AUC0-?, and 98.17% for Cmax. The 90% confidence intervals (CI) were 84.8-100.65%, 88.5-109.42% and 82.52-116.8%, respectively. The geometric mean for Capoten®/Captopril-Farmanguinhos 25 mg was 99.63 % for AUClast, 98.52% for AUC0-?, and 95.52 for Cmax. The 90% CI were 87.23-113.8%, 86.06-112.79% and 80.29-113.64%, respectively. Therefore, the 90% CI for Cmax, AUClast, AUC0-? were within the 80-125% interval proposed by the Food and Drug Administration. Conclusion: Captopril- FURP and Captopril-Farmanguinhos 25 mg tablets were bioequivalent to Capoten® 25 mg, according to both the rate and extent of absorption.

Estudo de controle de qualidade físico-químico de suspensões orais manipuladas de naproxeno sódico / Physical and chemical quality control of compounded naproxen sodium oral suspensions

Objetivo: Este trabalho objetivou realizar um estudo comparativo de controle de qualidade entre a suspensão de referência de naproxeno sódico, Flanax®, denominada R, e suspensões obtidas de seis farmácias de manipulação na cidade de Natal, Rio Grande do Norte, denominadas A, B, C, D, E e F, com concentrações de 25mg/mL. Realizaram-se ensaios para determinação do teor, pH, homogeneidade, identificação, volume e características organolépticas.Métodos: O método utilizado para o doseamento mostrou precisão, exatidão, linearidade e especificidade.Resultados: As formulações obtidas nas farmácias B, C e E apresentaram teor abaixo das especificações farmacopeicas, enquanto a formulação F apresentou um teor acima do recomendado. Em relação ao pH, as suspensões C, E e F apresentaram valores fora das especificações. Quanto à homogeneidade, as amostras obtidas das farmácias C e E foram reprovadas. Observou-se que a maioria das amostras apresentou volume compatível ao rotulado, exceto a amostra C. Conclusão: Os resultados indicaram a necessidade de uma maior fiscalização pelos órgãos competentes, de forma a garantir a segurança do paciente e a qualidade dos medicamentos produzidos pelas farmácias de manipulação

Molecular characterization of hemoglobin D Punjab traits and clinical-hematological profile of the patients / Caracterização molecular dos traços de hemoglobina D Punjab e perfil clínico-hematológico dos pacientes

CONTEXT AND OBJECTIVE: Hemoglobin (Hb) D hemoglobinopathies are widespread diseases in northwestern India and usually present with mild hemolytic anemia and mild to moderate splenomegaly. The heterozygous form of Hb D is clinically silent, but coinheritance of Hb D with Hb S or beta-thalassemia produces clinically significant conditions like thalassemia intermedia of moderate severity. Under heterozygous conditions with coinheritance of alpha and beta-thalassemia, patients show a degree of clinical variability. Thus, our aim was to molecularly characterize the Hb D trait among individuals who were clinically symptomatic because of co-inheritance of alpha deletions or any beta-globin gene mutations. DESIGN AND SETTING: This was a cross-sectional study conducted in an autonomous tertiary-care hospital. METHODS: Complete blood count and red cell indices were measured using an automated cell analyzer. Quantitative assessment of hemoglobin Hb F, Hb A, Hb A2 and Hb D was performed by means of high performance liquid chromatography (HPLC). DNA extraction was done using the phenol-chloroform method. Molecular analyses on common alpha deletions and common beta mutations were done using the Gap polymerase chain reaction and Amplification Refractory Mutation System, respectively. RESULTS: We evaluated 30 patients and found clinical variation in the behavior of Hb D traits. In six patients, the Hb D traits were clinically symptomatic and behaved like those of thalassemia intermedia. Molecular characterization showed that three out of these six were IVS-1-5 positive. CONCLUSIONS: HPLC may not be the gold standard for diagnosing symptomatic Hb D Punjab traits. Hence, standard confirmation should include molecular studies.

CONTEXTO E OBJETIVO: Hemoglobinopatias da hemoglobina (Hb) D são doenças amplamente disseminadas no noroeste da Índia e geralmente se apresentam com anemia hemolítica leve e esplenomegalia leve a moderada. A forma heterozigótica de Hb D é clinicamente silenciosa, mas co-herança de Hb D com Hb S ou beta-talassemia produzem condições clinicamente significativas, como talassemia intermediária de gravidade moderada. Em condição heterozigótica com co-herança de alfa e beta-talassemia, pacientes mostram variabilidade clínica. Assim, nosso objetivo foi a caracterização molecular dos traços da Hb D em individuos clinicamente sintomáticos, devido à co-herança de deleções de alfa ou quaisquer mutações gênicas de beta-globina. TIPO DE ESTUDO E LOCAL: Estudo transversal; realizado em um hospital de cuidado terciário autônomo. MÉTODOS: Hemograma completo e índices de células vermelhas foram medidos pelo analisador automatizado de células. Avaliação quantitativa de hemoglobina Hb F, Hb A, Hb A2 e Hb D foi realizada por cromatografia líquida de alta eficiência. Extração de DNA foi feita pelo método de fenol-clorofórmio. Estudo molecular para deleções comuns de alfa e mutações comuns de beta foi feito por Gap-reação em cadeia da polimerase e amplificação refratária de mutação, respectivamente. RESULTADOS: Avaliamos 30 pacientes e verificamos variação clínica no comportamento dos traços da Hb D. Em seis pacientes, os traços da Hb D foram clinicamente sintomáticos e se comportavam como os de talassemia intermédia. A caracterização molecular mostrou que três desses seis pacientes eram IVS-1-5 positivos. CONCLUSÕES: HPLC pode não ser o padrão ouro para o diagnóstico de traços de Hb D Punjab sintomáticos. Assim, a confirmação padrão ouro deve incluir estudos moleculares.

Evaluation of chemiluminescence method for the analysis of plasma homocysteine and comparison with HPLC method in children samples / Avaliação do método de quimioluminescência na análise de homocisteína plasmática e sua comparação com o método de HPLC em amostras de crianças

Objective: To compare the results for homocysteine concentration using chemiluminescence and HPLC methods in samples from school-age children. In addition, to determine the reference values for patients of this age group and assess the real prognostic value of homocysteine in healthy children. Methods: A prospective observational study was undertaken to determine plasma levels of homocysteine using two different assays, HPLC and chemiluminescence, in 185 samples from school-age children living in Santo Andre, with no chronic or inflammatory diseases, and absence of pubertal development. Results: The results were presented in percentiles and reference values were determined within this age group (7-9 years old). Homocysteine concentration ranged from 2.0 to 9.9 mumol/l (r = 0.821 and p < 0.001). Conclusions: It was verified that chemiluminescence is comparable to HPLC when both techniques are used to detect homocysteine in school-age children. There is an important correlation between both methods, which allows investigation of this amino acid as a risk factor for heart diseases.

Objetivo: Comparar os resultados da concentração de homocisteína usando os métodos de quimioluminescência e HPLC em amostras de crianças escolares. Determinar os valores de referência desse grupo etário e avaliar o valor prognóstico real da homocisteína em crianças saudáveis. Métodos: Um estudo prospectivo observacional foi executado para determinar os níveis de homocisteína usando dois ensaios diversos, o HPLC e a quimioluminescência, em 185 amostras de crianças em idade escolar moradoras da cidade de Santo André, que não apresentassem doenças crônicas ou inflamatórias, na ausência de desenvolvimento puberal. Resultados: Os resultados foram apresentados em percentis e os valores de referência foram determinados para esse grupo etário (7-9 anos). As concentrações de homocisteína variaram de 2,0 a 9,9 miumol/l (r = 0,821 e p < 0,001). Conclusões: Verificamos que o método da quimioluminescência é comparável ao método HPLC quando as técnicas são usadas para detectar a homocisteína em crianças em idade escolar. Houve importante correlação entre os dois métodos, o que permite a investigação desse aminoácido como um fator de risco para doenças cardíacas.

Obtenção de hemoglobina purificada. Uso de resinas de troca aniônica para a eliminação de fosfolipídeos residuais / Stroma-free hemoglobin: Using anion-exchange chromatography to eliminate residual phospholipids

A hemoglobina humana (Hb)vem sendo usada como ponto de partida para o desenvolvimento de substitutos para o sangue. Antes de ser submetida a reações de modificação química, a Hb precisa ser obtida com alto grau de pureza. Neste trabalho, concentrados de hemácias foram tratados por métodos convencionais para a obtenção de amostras de Hb, sob a forma de carbonil-hemoglobina (HbCO). A técnica de cromatografia de troca iônica foi usada com o objetivo de verificar-se a eficiência de resinas aniônicas na eliminação de fosfolipídeos da parede celular, ainda residuais nas soluções de HbCO. Experimentos foram realizados com duas resinas de troca aniônica, uma fraca e outra forte. Os extratos orgânicos da solução de purificada adicionalmente por meio de cromatografia em resina de troca aniônica forte, AG MP-1, foram analisados por cromatografia líquida de alta pressão (HPLC). Os resultados mostraram que a resina AG MP-1, sob as condições utilizadas, foi capaz de reter grande parte do total de fosfolipídeos pesquisados