Patologia morfológica e molecular aplicadas à inovação diagnóstica e vigilância da leishmaniose visceral / Morphological and molecular pathology applied to diagnostic innovation and surveillance of visceral leishmaniasis

O conceito de Saúde Única surgiu para ressaltar a união indissociável entre a saúde animal, humana e ambiental. Nesse contexto, a leishmaniose visceral americana (LVA) é considerada uma importante doença de saúde pública no Brasil, devido a sua crescente expansão geográfica e aumento na incidência de casos humanos. A LVA é uma doença parasitária, zoonótica, causada pela Leishmania (Leishmania) infantum (syn. chagasi) e transmitida por flebotomíneos do gênero Lutzomyia. Os cães são considerados os principais reservatórios do parasito nas áreas urbanas. O diagnóstico da LVA é baseado em aspectos epidemiológicos, clínicos e laboratoriais. A demonstração da presença do parasito através de exames diretos em tecidos biológicos do hospedeiro é o diagnóstico de escolha, principalmente, em municípios em que a transmissão de LVA ainda não tenha sido confirmada. Diversas metodologias podem ser aplicadas com essa finalidade. O objetivo desse trabalho é apresentar as técnicas citológicas, anatomo-patológicas e moleculares em amostras fixadas em formalina e incluídas em parafina para o diagnóstico da leishmaniose visceral em humanos e cães. Esses dados são complementares à apresentação realizada no I Simpósio Internacional de Leishmaniose Visceral, realizado nos dia 23 e 24 de Abril de 2018, e organizado pelo Instituto Adolfo Lutz em São Paulo-SP, Brasil. (AU)

The One Health concept emerged to highlight the inseparable link between animal, human and environmental health. In this context, American Visceral Leishmaniasis (AVL) is considered an important public health disease in Brazil, due to its increasing geographic expansion and in the incidence of human cases. AVL is a parasitic and zoonotic disease caused by Leishmania (Leishmania) infantum (syn. chagasi) and transmitted by sandflies of the genus Lutzomyia. Dogs are considered the main reservoirs of the parasite in urban areas. The diagnosis of AVL is based on epidemiological, clinical and laboratory aspects. The demonstration of the presence of the parasite through direct examinations in biological tissues of the host is the diagnosis of choice, mainly in municipalities where the transmission of AVL has not yet been confirmed. Several methodologies can be applied for this purpose. The objective of this work is to present the cytological, anatomopathological and molecular techniques in formalin fixed and paraffin embedded samples for the diagnosis of visceral leishmaniasis in humans and dogs. These data are complementary to the present study at the First International Symposium on Visceral Leishmaniasis, held on April 23 and 24, 2018, and organized by Adolfo Lutz Institute in São Paulo, Brazil. (AU)

Patologia morfológica e molecular aplicadas à inovação diagnóstica e vigilância da leishmaniose visceral / Morphological and molecular pathology applied to diagnostic innovation and surveillance of visceral leishmaniasis

O conceito de Saúde Única surgiu para ressaltar a união indissociável entre a saúde animal, humana e ambiental. Nesse contexto, a leishmaniose visceral americana (LVA) é considerada uma importante doença de saúde pública no Brasil, devido a sua crescente expansão geográfica e aumento na incidência de casos humanos. A LVA é uma doença parasitária, zoonótica, causada pela Leishmania (Leishmania) infantum (syn. chagasi) e transmitida por flebotomíneos do gênero Lutzomyia. Os cães são considerados os principais reservatórios do parasito nas áreas urbanas. O diagnóstico da LVA é baseado em aspectos epidemiológicos, clínicos e laboratoriais. A demonstração da presença do parasito através de exames diretos em tecidos biológicos do hospedeiro é o diagnóstico de escolha, principalmente, em municípios em que a transmissão de LVA ainda não tenha sido confirmada. Diversas metodologias podem ser aplicadas com essa finalidade. O objetivo desse trabalho é apresentar as técnicas citológicas, anatomo-patológicas e moleculares em amostras fixadas em formalina e incluídas em parafina para o diagnóstico da leishmaniose visceral em humanos e cães. Esses dados são complementares à apresentação realizada no I Simpósio Internacional de Leishmaniose Visceral, realizado nos dia 23 e 24 de Abril de 2018, e organizado pelo Instituto Adolfo Lutz em São Paulo-SP, Brasil.

The One Health concept emerged to highlight the inseparable link between animal, human and environmental health. In this context, American Visceral Leishmaniasis (AVL) is considered an important public health disease in Brazil, due to its increasing geographic expansion and in the incidence of human cases. AVL is a parasitic and zoonotic disease caused by Leishmania (Leishmania) infantum (syn. chagasi) and transmitted by sandflies of the genus Lutzomyia. Dogs are considered the main reservoirs of the parasite in urban areas. The diagnosis of AVL is based on epidemiological, clinical and laboratory aspects. The demonstration of the presence of the parasite through direct examinations in biological tissues of the host is the diagnosis of choice, mainly in municipalities where the transmission of AVL has not yet been confirmed. Several methodologies can be applied for this purpose. The objective of this work is to present the cytological, anatomopathological and molecular techniques in formalin fixed and paraffin embedded samples for the diagnosis of visceral leishmaniasis in humans and dogs. These data are complementary to the present study at the First International Symposium on Visceral Leishmaniasis, held on April 23 and 24, 2018, and organized by Adolfo Lutz Institute in São Paulo, Brazil.

O perfil epidemiológico e o desempenho da GAL-3 e CK-19 em lesões foliculares e suspeitas para malignidade da tireoide / The epidemiological profile and the performance of GAL-3 and CK-19 in follicular lesions and suspicious for malignancy of the thyroid

Objetivos: Analisar dados epidemiológicos de pacientes submetidos à PAAF, classificados como lesões foliculares (classe IV) e suspeitos para malignidade (classe V) pelo Sistema Bethesda para Laudos Citopatológicos da Tireoide e avaliar o desempenho do painel imunocitoquímico com os marcadores CK-19, Galectina-3 e HBME-1 no diagnóstico destes pacientes. Metodologia: Estudo retrospectivo transversal, que analisou 24 laudos anatomopatológicos do Centro de Patologia de Curitiba, entre 2011 e 2014, classificados como classe IV e V do Sistema Bethesda, cujas lâminas foram avaliadas pela imunocitoquímica, usando-se os marcadores CK-19, GAL-3 e HBME-1. Resultados: 83,3% dos pacientes eram mulheres, com idade média de 45,7 anos. O tamanho médio das lesões foi 12,5mm, localizadas 56,5% no lobo D. O painel de marcadores apresentou sensibilidade 100%, especificidade 90,5% e eficácia 95,5% para as lesões avaliadas. Conclusão: A imunocitoquímica demostrou-se um exame pré-operatório eficaz para diferenciação de lesões foliculares e suspeitas para malignidade do carcinoma papilífero da tireoide

Objectives: To analyze epidemiological data of patients who undergone FNA that was classified as follicular lesions (Class IV) and suspicious for malignancy (Class V) by the Bethesda System for Reporting Thyroid Cytopathology and evaluate the performance of immunocytochemical panel with markers CK-19, Galectin-3 and HBME-1 in these patients. Methodology: This is a cross-sectional retrospective study. It was analyzed 24 pathological between 2011 and 2014, from the Curitiba Pathology Center, classified as Class IV and V in the Bethesda System for Reporting Thyroid Cytopathology, which slides were stained with immunocytochemistry using the markers: CK19 GAL-13 and HBME-1. Results: In this study 83.3% of the patients were women with a mean age of 45.7 years. The average size of the nodules was 12.5mm and 56.5% was located in the right lobe. Regarding the diagnosis of follicular lesions and suspicious for malignancy, the sensitivity of the exam with the standard biological markers used was 100%, specificity 90,5% and efficacy 95.5%. Conclusion: The immunocytochemistry demonstrated to be an effective pre-operative exam for differentiation of follicular lesions and suspicious for malignancy of papillary thyroid carcinoma

Leucemia linfocítica b em cão jovem: relato de caso / B - lymphocytic leukemia in young dog: case report / Leucemia linfocítica b en perro joven: relato de caso

O presente relato teve como objetivo descrever um caso de leucemia linfocítica B em um cão da raça maltês, fêmea, com três anos de idade, demonstrando a metodologia de diagnóstico e a variação da patologia clínica após o tratamento exclusivamente por esplenectomia. A linfocitose acentuada observada no hemograma e presença proliferativa de linfócitos na medula óssea determinou a suspeita da leucemia linfocítica. A leucemia linfocítica B foi diagnosticada por meio da citologia aspirativa da medula óssea, imunocitoquímica e citometria de fluxo. O tratamento foi exclusivamente por esplenectomia e dois anos após a cirurgia o animal não apresentou recidiva da afecção.

This report aimed to describe a case of B lymphocytic leukemia in maltese female dog, three years old, demonstrating the methodology of diagnostic and variation of clinical pathology after treatment exclusively by splenectomy. The accentuate lymphocytes observed in blood counts and presence of proliferative lymphocytes in the bone marrow were determined to diagnostic of lymphocytic leukemia. The B lymphocytic leukemia was diagnosed by bone marrow aspiration cytology, immunocytochemistry and flow cytometry. The treatment was exclusively by splenectomy and two years after the surgery the animal showed no recurrence of the disease.

El objetivo de ese relato ha sido describir un caso de leucemia linfocítica B en un perro, raza maltés, hembra, de tres años, demostrando la metodología de diagnóstico y la variación de la patología clínica, después del tratamiento exclusivamente por esplenectomía. La linfocitosis aguda, observada en el hemograma, y la presencia de proliferación de linfocitos en la médula ósea, determinó la sospecha de leucemia linfocítica. La leucemia linfocítica B fue diagnosticada mediante la citología por aspiración de médula ósea, inmunocitoquímica y citometría de flujo. El tratamiento fue exclusivamente por esplenectomía y dos años después de la cirugía el animal no mostró recurrencia de la enfermedad.

O perfil epidemiológico e o desempenho da GAL-3 e CK-19 em lesões foliculares e suspeitas para malignidade da tireoide / The epidemiological profile and the performance of GAL-3 and CK-19 in follicular lesions and suspicious for malignancy of the thyroid

Objetivos: Analisar dados epidemiológicos de pacientes submetidos à PAAF, classificados como lesões foliculares (classe IV) e suspeitos para malignidade (classe V) pelo Sistema Bethesda para Laudos Citopatológicos da Tireoide e avaliar o desempenho do painel imunocitoquímico com os marcadores CK-19, Galectina-3 e HBME-1 no diagnóstico destes pacientes. Metodologia: Estudo retrospectivo transversal, que analisou 24 laudos anatomopatológicos do Centro de Patologia de Curitiba, entre 2011 e 2014, classificados como classe IV e V do Sistema Bethesda, cujas lâminas foram avaliadas pela imunocitoquímica, usando-se os marcadores CK-19, GAL-3 e HBME-1. Resultados: 83,3% dos pacientes eram mulheres, com idade média de 45,7 anos. O tamanho médio das lesões foi 12,5mm, localizadas 56,5% no lobo D. O painel de marcadores apresentou sensibilidade 100%, especificidade 90,5% e eficácia 95,5% para as lesões avaliadas. Conclusão: A imunocitoquímica demostrou-se um exame pré-operatório eficaz para diferenciação de lesões foliculares e suspeitas para malignidade do carcinoma papilífero da tireoide

Objectives: To analyze epidemiological data of patients who undergone FNA that was classified as follicular lesions (Class IV) and suspicious for malignancy (Class V) by the Bethesda System for Reporting Thyroid Cytopathology and evaluate the performance of immunocytochemical panel with markers CK-19, Galectin-3 and HBME-1 in these patients. Methodology: This is a cross-sectional retrospective study. It was analyzed 24 pathological between 2011 and 2014, from the Curitiba Pathology Center, classified as Class IV and V in the Bethesda System for Reporting Thyroid Cytopathology, which slides were stained with immunocytochemistry using the markers: CK19 GAL-13 and HBME-1. Results: In this study 83.3% of the patients were women with a mean age of 45.7 years. The average size of the nodules was 12.5mm and 56.5% was located in the right lobe. Regarding the diagnosis of follicular lesions and suspicious for malignancy, the sensitivity of the exam with the standard biological markers used was 100%, specificity 90,5% and efficacy 95.5%. Conclusion: The immunocytochemistry demonstrated to be an effective pre-operative exam for differentiation of follicular lesions and suspicious for malignancy of papillary thyroid carcinoma

Aplicação do Método “Plasma Tromboplastina/Trombina” no Preparo de Amostras Citológicas para Pesquisa de Câncer no Laboratório de Anatomia Patológico / Application of the “Plasma-Thromboplastin/Thrombin” Method for Preparation of Cytological Samples for Cancer Research in Pathological Anatomy Laboratories

Realizar uma revisão da literatura sobre a aplicação dométodo “plasma-tromboplastina/trombina” no preparo de “cell block”de amostras citológicas para pesquisa de câncer no laboratório deAnatomia Patológica. Material e Métodos. Para a elaboração do estudoforam realizadas buscas na base de dados PubMed, SciELO e LILACSutilizando os descritores “Cell block effusion”, “Cell block preparation”e “Cell block method”. Resultados: O método “plasma-tromboplastina/trombina” tem sido descrito no preparo de diferentes tipos de amostrascitológicas: efusões (líquidos das cavidades pleural, peritoneal,pericárdica), lavado peritoneal, aspirados e amostras em meio líquido.A descrição da técnica não foi realizada em alguns estudos ou foirealizada apenas parcialmente e com variações entre eles com relaçãoà velocidade e tempo de centrifugação, quantidades de plasma,trombina e tromboplastina. Os estudos que comparam o método“plasma-tromboplastina/trombina” com outros métodos de preparo do“cell block”, usando diferentes tipos de amostra, são escassos, emuitas vezes, com pequeno número de amostras e isto dificulta umaconclusão definitiva sobre suas vantagens sobre outras técnicas. Osmétodos mais usados no preparo do “cell block” são os que utilizamágar e plasma-tromboplastina/trombina. As vantagens do “métodoplasma-tromboplastina” em relação aos outros métodos são execuçãofácil, baixo custo, ausência de artefatos celulares relacionados aoaquecimento, melhor celularidade, melhor distribuição celular emelhores resultados da imunocitoquímica. Conclusão: O “cell block”preparado pelo método “plasma-tromboplastina/trombina” pode serconsiderado uma ferramenta diagnóstica complementar aocitocentrifugado e aplicável na rotina de laboratórios de AnatomiaPatológica públicos e privados para a pesquisa de câncer...

To perform a literature review on the application of the“plasma-thromboplastin/thrombin” method for cell block preparationof cytological samples in cancer research in pathological anatomylaboratories. Material and Methods: Bibliographical searches werecarried out in the databases PubMed, SciELO and LILACS using thedescriptors “cell block effusion”, “cell block preparation” and “cellblock method”. Results: The “plasma-thromboplastin/thrombin” methodhas been described for preparation of different types of cytologicalsamples, including effusions (liquids from the pleural, peritoneal andpericardial cavities), peritoneal lavage, aspirated samples, and samplesin liquid medium. The description of the technique was not reported insome studies or was performed just partially. Variations in the studieswere found with regard to centrifugation time and speed, as well as toquantity of plasma, thrombin and thromboplastin used. Only a fewstudies have compared the “plasma-thromboplastin/thrombin method”with other cell block preparation methods using different types ofsamples. The studies have frequently included a small sample size,which makes it difficult to establish a solid conclusion on theadvantages of this method over other approaches. The most commonlyused methods for cell block preparation include those using agar andthromboplastin/thrombin. The advantages of the “plasma/thromboplastin” method in relation to other methods are easiness toimplement, low cost, no cell artifacts related to heating, bettercellularity, better cellular distribution and better immunocytochemistryresults. Conclusion: Cell block preparation using the plasmathromboplastin/thrombin method can be considered a diagnostic tooladjunctive to the cytocentrifuged one that is applicable to the routineof public and private pathological anatomy laboratories for cancerresearch...

Isolamento, caracterização e diferenciação de células-tronco mesenquimais do líquido amniótico equino obtido em diferentes idades gestacionais / Isolation, characterization and differentiation of mesenchymal stem cells derived from equine amniotic fluid obtained from different gestacional ages

O interesse nas pesquisas com células-tronco derivadas de anexos fetais de diversas espécies cresceu exponencialmente nas últimas décadas em virtude de serem fontes de células-tronco adultas com potencial de diferenciação em diversas linhagens celulares que apresentam pouca ou nenhuma imunogenicidade, apresentando-se assim como alternativa de grande importância para a formação de bancos celulares. Apesar do crescente interesse, os estudos para espécie equina ainda são escassos. O objetivo deste trabalho foi isolar, caracterizar e diferenciar células-tronco mesenquimais (CTMs) derivadas do líquido amniótico equino obtidas do terço inicial, médio e final da gestação (LA-CTMs), comparando suas características. Foram colhidas 23 amostras de líquido amniótico as quais foram submetidas às análises morfológica, imunocitoquímica, imunofenotípica por citometria de fluxo e às diferenciações osteogênica, adipogênica e condrogênica in vitro. Todas as amostras demonstraram adesão ao plástico e morfologia fibroblastóide. No ensaio imunocitoquímico as células de todos os grupos foram imunomarcadas para CD44, PCNA e vimentina com ausência de marcação para citoqueratina e Oct-4. Na citometria de fluxo observou-se a expressão de CD44 e CD90 e ausência de expressão de CD34, sendo que os marcadores CD44 e CD90 mostraram padrão de expressão decrescente em relação ao desenvolvimento gestacional. As amostras obtidas de todas as fases da gestação foram capazes de diferenciação nas linhagens osteogênica, condrogênica e adipogênica. Portanto, as células obtidas do líquido amniótico apresentaram características morfológicas, imunofenotípicas e potencial de diferenciação típicos das CTMs, demonstrando que a colheita pode ser realizada em qualquer fase gestacional. No entanto, mais pesquisas devem ser realizadas principalmente quanto à expressão de marcadores de pluripotencialidade (como o Oct-4) e ao seu potencial de diferenciação em linhagens extra mesodermais já relatados na literatura.

The interest in stem cells derived from fetal annexes of many species has exponentially increased during the last decades, because they are adult stem cell sources with potential of differentiation in several cell lineages; which present little or no immunogenicity and are an alternative with great importance for storage cell banks. Despite the rising interest, studies for the equine species are still rare. The aim of this study was to isolate, characterize and differentiate mesenchymal stem cells derived from equine amniotic fluid obtained from initial, middle and late third of gestation (AF-MSCs), and compare their results. Twenty three samples from equine amniotic fluid were evaluated by morphological, immunocytochemical and immunophenotypical (Flow cytometer) assays and osteogenic, adipogenic and chondrogenic in vitro differentiation. All samples demonstrated plastic adhesion and fibroblastoid morphology. The immunocytochemical assay demonstrated cells from all the studied groups were positive for CD44, PCNA and vimentin and negative for cytokeratin and Oct-4. Flow cytometry demonstrated expression of CD44 and CD90 and no expression of CD34, where CD44 and CD90 markers presented decreasing pattern of expression in relation to the gestational development. All samples collected from all gestational phases were capable to differentiate in osteogenic, chondrogenic and adipogenic lineages. Thus, cells obtained from equine amniotic fluid presented morphological and immunophenotypical characteristics and potential of differentiation typical of MSCs showing that the collection can be performed at any stage of pregnancy. However, more studies should be performed about the expression of pluripotent markers as Oct-4 and the differentiation potential for extra mesodermal lineages prior demonstrated in the literature.

Topografia de ligação de proteínas do plasma seminal à membrana de espermatozoides bovinos epididimários e ejaculados / Binding patterns of seminal plasma plasma proteins on bovine epididymal and ejaculated sperm membrane

The present study was designed to investigate the topographical distribution of seminal plasma (SP) proteins on epididymal and ejaculated bovine sperm. Using immunocytochemistry and confocal microscopy the binding patterns of bovine SP proteins BSP-A3, albumin, transferrin, prostaglandin D-synthase (PGDS) and nucleobindin in ejaculated and cauda epididymal sperm from adult bulls were evaluated. Experiments were performed using sperm from 5 males. Data showed a positive signal, only detected for anti-PGDS, in the acrosomal cap of epididymal and ejaculated sperm. In ejaculated sperm, a very weak signal for nucleobindin 2 in the midpiece and equatorial regions was detected, using the anti-rat nucleobindin. BSP-A3 was detected on all sperm regions studied, with a more evidenced signal in acrosome and midpiece. However, no binding was detected for albumin or transferrin in neither epididymal nor ejaculated sperm. In conclusion, PGDS, BSP-A3 and nucleobindin interact directly with bovine sperm, with specific topographic distribution. These findings may add to the knowledge of how these proteins modulate sperm functions, thus providing fundamental support for studies designed to evaluate how they influence sperm functions.

Investigou-se a distribuição topográfica da ligação de proteínas seminais à membrana de espermatozoides bovinos epididimários e ejaculados. Utilizando imunocitoquímica e microscopia confocal, avaliaram-se a topografia de ligação das proteínas BSP-A3, albumina, transferrina, prostaglandina D sintetase (PGDS) e nucleobindina 2 (NUC2) à membrana espermática. Os experimentos foram realizados utilizando espermatozoides de cinco touros. Os resultados mostraram que, para espermatozoides epididimários, somente detectou-se a PGDS na crista do acrossomo. Nos espermatozoides ejaculados, a PGDS ligou-se de forma mais intensa à crista acrossômica, enquanto a NUC2 apresentou sinal bastante fraco na peça intermediária e região equatorial. A BSP-A3 ligou-se a todas as regiões estudadas, de forma mais intensa na peça intermediária e acrossomo. Nenhum sinal foi detectado para albumina ou transferrina, seja em espermatozoides epididimários ou ejaculados. Concluiu-se que PGDS, BSP-A3 e NUC2 interagem diretamente com espermatozoides bovinos, e mostrou distribuição topográfica específica. Estes achados permitem melhor compreensão sobre o papel desempenhado por essas proteínas na regulação da função espermática e da fertilidade.

Imunocitoquímica e imunohistoquímica para o diagnóstico laboratorial da leishmaniose tegumentar / Immunocytochemistry and immunohistochemistry for laboratorial diagnosis of cutaneous leishmaniasis

0 aumento significativo do número de casos notificados da Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) e a expansão geográfica da endemia tem motivado o desenvolvimento de novas tecnologias para auxiliar no diagnóstico das leishmanioses, visando minimizar as restrições apresentadas pelos testes diagnósticos disponíveis nos serviços de saúde. 0 presente trabalho empregou imunocitoquimica e imunohistoquímica (ICQ/IHQ) como métodos diagnósticos laboratoriais para LTA. Amostras de culturas de Leishmania in vitro e cortes histológicos de lesões em animais infectados experimentalmente foram submetidos a ICQ/IHQ, utilizando anticorpos policlonais desenvolvidos para este estudo e o complexo avidina-biotina modificado (Ultra Streptavidin®). Em comparação com outras técnicas empregadas para o diagnóstico da LTA, nos casos avaliados, a IHQ apresentou resultados semelhantes aos da histopatologia com coloração HE, com sensibilidade de 33,3% para formas amastigotas. Quando considerada a presenva de antígenos de Leishmania no padrão celular, a IHQ apresentou uma sensibilidade de 83,3%, significativamente maior que na histopatologia e compatível com metodos padrão ouro de cultura e PCR. As metodologias de ICQ/IHQ desenvolvidas neste trabalho foram capazes de demonstrar em biópsias de lesões, a presença de formas amastigotas e antígenos de Leishmania, oferecendo contribuição adicional ao diagnóstico da LTA, sendo de facil aplicação e podendo ser utilizada no sistema público de saúde.

The significant increase in cutaneous leishmaniasis (CL) notified cases and the geographic expansion of this endemy has motivated the development of new techniques to help in leishmaniasis diagnosis, seeking the minimization of the restrictions imposed by the diagnostic tests available at the health services. The current study applied immunocytochemistry and immunohystochemistry methods (ICC/IHC) for laboratory diagnosis of CL. Imprints and histological sections from tissue infected with Leishmania were submitted to ICC/IHC methods using polyclonal antibodies developed for this study and a modified avidin-biotin complex (Ultra Streptavidin®). The samples also were submitted for routinely stained hematoxylin and eosin (H&E) specimens and gold standard methods (culture and PCR). Compared with other useful techniques for the CL diagnosis, ICC/IHC showed the same sensitivity results (33%) as H&E stain for amastigotes recognition. When the presence of Leishmania antigens was evaluated, ICC/IHC presented 83,3% sensitivity, i.e., higher than that detected by histopathology and equivalent with gold standard methods (culture and PCR). The ICC/IHC techniques developed in the current study were able to recognize amastigote forms and also Leishmania antigens in lesion biopsies, offering an additional help to CL diagnosis and it can be easily applied in the public health system.

CHARACTERIZATION OF Salvia bogotensis ANTI-LECTINIGYS AND THEIR APPLICATION IN IMMUNOCYTOCHEMICAL STUDIES INVOLVING TN ANTIGEN DETECTION / CARACTERIZACIÓN DE IGYS ANTI-LECTINA DE Salvia bogotensis Y SU APLICACIÓN EN ESTUDIOS CITOQUÍMICOS PARA LA DETECCIÓN DEL ANTÍGENO TN / CARACTERIZAÇÃO DA IGYS ANTI-LECTINA DE Salvia bogotensis E A SUA APLICAÇÃO EM ESTUDOS CITOQUÍMICOS PARA A DETECÇÃO DO ANTIGÉNIO TN

Immunoglobulins isolated from egg yolk (IgY) are tools which are currently used in different fields of the biological sciences; they have clear advantages over mammalian serum IgGs. We have established the conditions for obtaining anti-Salvia bogotensis lectin IgYs in previous work; their use in immunocytochemical studies requires that their main molecular characteristics are known as well as the conditions for IgY-lectin interaction. Salvia bogotensis lectin (SBoL) can specifically recognise Tn antigen, a recognised tumoral marker in many types of cancer but additional tools are required for evidencing this interaction in cells. Given the availability of S. bogotensis anti-lectin IgY, this work was aimed at molecularly characterising these IgYs and evaluating their application in immunocytochemical studies for detecting Tn antigen in tumour cells. Purified IgYs' isoelectric points, molecular weight and carbohydrate content were determined. Homologous and heterologous lectins were obtained for establishing the specificity of antibody interaction with the lectin; they were assayed by ELLSA. Biotin-or peroxidase-labelled IgYs were prepared; Tn antigen was specifically detected by CELISA and immunocytochemistry in MCF-7 and HeLa cell-lines with the lectin which was revealed with the labelled IgYs. Results showed that anti-SBoL IgY antibodies represent a highly sensitive tool for specific Tn antigen recognition assays.

Las inmunoglobulinas aisladas de la yema de huevo (IgY) son muy utilizadas actualmente en diversos campos de las ciencias biológicas, dadas sus ventajas frente a las IgG séricas de mamíferos. En un trabajo previo establecimos las condiciones de obtención de IgY dirigidas contra la lectina de Salvia bogotensis; su utilización en estudios inmunocitoquímicos requiere conocer sus principales características moleculares y las condiciones para la interacción IgY-lectina. La lectina de Salvia bogotensis (SBoL) reconoce específicamente el antígeno Tn, marcador tumoral en muchos tipos de cáncer, pero se requieren herramientas adicionales para evidenciar esta interacción a nivel celular. Dada la disponibilidad de IgY anti-lectina de S. bogotensis, se realizó este trabajo con el objeto de caracterizar molecularmente estas IgY y evaluar su utilización en estudios inmunocitoquímicos para la detección del antígeno Tn en células tumorales. A las IgY purificadas se les determinó su punto isoeléctrico, peso molecular y contenido de carbohidratos. Para establecer la especificidad de interacción IgY-SBoL se obtuvieron lectinas homólogas y heterólogas y se ensayaron por ELLSA. La detección del antígeno Tn en las líneas celulares MCF-7 y HeLa con la lectina y las IgYs marcadas con biotina o peroxidasa se realizó por CELISA e inmunocitoquímica. Los resultados mostraron que los anticuerpos IgY anti-SBoL son una herramienta de una alta sensibilidad para los ensayos de reconocimiento específico del antígeno Tn.

Imunoglobulinas isoladas a partir de gema de ovo (IgY) são ferramentas utilizadas actualmente em diferentes áreas das ciências biológicas y apresentam vantagens claras sobre o soro de mamífero IgGs. Em investigações anteriores estabelecemos as condições para obter lectina IgYs anti-Salvia bogotensis. O seu uso em estudos imunocitoquímicos requer que as suas principais características moleculares sejam conhecidas, assim como as condições para a interacção IgY-lectina. A lectina de Salvia bogotensis (SBoL) pode reconhecer especificamente o anti-génio Tn, um reconhecido marcador tumoral em muitos tipos de cancro, mas novas ferramentas são necessárias para evidenciar esta interacção em células. Dada a disponibilidade de anti-lectina IgY de S. bogotensis, este trabalho teve como objectivo a caracterização molecular de estes IgYs e avaliar a sua aplicação em estudos imunocitoquímicos para detectar antigénio Tn em células tumorais. Foram determinados os pontos isoeléctricos, peso molecular e conteúdo de carbohidratos de IgYs purificadas. Lectinas homologas e heterologas foram obtidas para estabelecer a especificidade da interacção de anticorpo com a lectina; estes foram ensaiados por ELLSA. Foram preparados IgYs marcados com biotina ou peroxidase. O antigénio Tn foi detectado especificamente por CELISA e imunocitoquimica em linhas celulares MCF-7 y HeLa com lectina que foi revelada com as IgYs marcadas. Os resultados mostraram que os anticorpos anti-SBoL IgY representam uma ferramenta altamente especifica para ensaios de reconhecimento especifico de antigenio Tn.

Imunofenotipagem e avaliação quantitativa de linfócitos circulantes de bovinos da raça Curraleiro / Immunophenotyping and quantitative evaluation of circulating lymphocytes of cattle of the Curraleiro breed

Este estudo teve por objetivo traçar o perfil imunológico, pela marcação imunocitoquímica e quantificação de linfócitos T e B, de bovinos da raça Curraleiro. Para tal, foram utilizados 116 animais entre machos e fêmeas, de diferentes faixas etárias, provenientes de duas propriedades de criação de gado Curraleiro do Estado de Goiás, sendo alocados em grupos conforme a faixa etária, sexo e origem. As amostras de sangue foram colhidas e processadas para a realização da técnica de imunocitoquímica, sendo utilizados os marcadores linfóides espécie-específicos, anti-CD3 (MM1A-BoCD3) e anti-LB (LCTB16A-clone B-B14), para a quantificação de linfócitos T e B, respectivamente. Inicialmente os dados foram submetidos à estatística descritiva e, posteriormente, aos testes de Kruskall Wallis e Mann-Whitney. Verificou-se que, com o avançar da idade, os níveis de leucócitos, linfócitos, linfócitos T e B diminuíram. Os valores absolutos de leucócitos, linfócitos totais e linfócitos T foram maiores nos machos. Nenhum dos parâmetros avaliados sofreu influência em relação à qualidade do manejo nas propriedades.

The aim of this study was to establish an immunological profile by marking and quantification of T and B lymphocytes in Curraleiro breed by immunocytochemistry. A total of 116 cattle was used, males and females of different ages, from two farms situated in the Goiás State, Brazil. The animals were allotted into groups according to age, sex and origin. Blood samples were collected and processed in accordance with immunocytochemistry standard technique using lymphoid markers species-specific, as anti-CD3 (MM1A - BoCD3) and anti-LB (LCTB16A-clone B-B14), for T and B lymphocyte counting, respectively. The data were submitted to descriptive statistics, and to Kruskall Wallis and Mann-Whitney tests. The results showed decreased levels of leukocytes, lymphocytes, T lymphocytes and B lymphocytes along the age advance. Absolute values of leukocytes, lymphocytes and T lymphocytes were higher in males than females. None of the evaluated parameters were affected by differences of the management carried out at the two farms.

O estudo da doença residual mínima em câncer de mama / The study of minimal residual disease in breast cancer patients

O termo doença residual mínima (DRM) ou micrometástase refere-se à presença de algumas células tumorais nos tecidos normais não factíveis de serem detectáveis por meio de metodologias propedêuticas convencionais como o exame clínico, métodos de imagem ou análises laboratoriais de rotina. A pesquisa de DRM em pacientes com câncer de mama se faz atualmente através da avaliação da medula óssea ou sangue periférico para a presença de células epiteliais por técnicas de imunocitoquímica ou moleculares como o Rt-PCR. Estudos citogenéticos e moleculares demonstraram que estas células albergam também alterações cromossômicas semelhantes aos tumores presentes nos pacientes e sua consistente associação com um pior prognóstico em pacientes com câncer de mama reforçam sua importância para o processo metastático. Discutiremos sumariamente, a seguir, as bases técnicas da detecção da DRM e os estudos recentes que nos permitiram conhecer algumas das características moleculares e celulares destas células malignas disseminadas. Finalizaremos este artigo com uma discussão dos trabalhos mais recentes acerca do valor prognóstico da detecção da DRM em pacientes com câncer de mama e as futuras direções da pesquisa nesta área.

Minimal residual disease (MRD) or micrometastasis refers to the presence of tumor cells in normal tissues not amenable to be detected by physical examination, laboratory tests or imaging techniques in current clinical use. The search for MRD in patients with breast cancer is currently conducted through the evaluation of the bone marrow or peripheral blood for the presence of epithelial cells by immunocytochemical or molecular techniques such as RT-PCR. Recent cytogenetical and molecular studies revealed that these cells carry chromossomal abnormalities similar to the primary tumors from which they originated and their consistent association with a wose prognosis in the patients in whom they are detectable reinforces their importance in the metastatic process. We will discuss briefly the technical aspects of the detection of MRD and the studies that evaluated the molecular and cellular characteristics of these disseminated malignant cells. We will then discuss recent work relating to the prognostic implications of MRD in breast cancer patients and the future directions of this research area.

Identificação do helicobacter pylori na estomatite aftosa recorrente através da imunocitoquímica / Identification of Helicobacter pylori in recurrent aphthous stomatitis by immunocytochemistry

A estomatite aftosa recorrente é uma afecção bucal comumente encontrada na população e vem sendo estudada por muitos pesquisadores para determinar a sua etiologia. Com a intenção de pesquisar a accociação do Helicobacter pylori com a EAR foram estudadas amostras coletadas por raspado de três sítios diferentes (mucosa labial inferior, fundo de vestíbulo inferior, úlcera) de 21 pacientes portadores de EAR que foram submetidos à técnica de imunocitoquímica, coloração pelos métodos Papanicolaou e Giemsa e comparados com amostras do grupo controle ... Comparando os resultados encontrados nas amostras provenientes da afta e as amostras do grupo controle, houve uma diferença significativa (p,0,001). Os resultados demonstram haver associação entre a EAR e a infecção pelo Helicobacter pylori.