Hemolymph of triatomines presents fungistatic activity against Cryptococcus neoformans and improves macrophage function through MCP-I/TNF-α increase

Triatomines are blood-feeding arthropods belonging to the subfamily Triatominae (Hemiptera; Reduviidae), capable of producing immunomodulatory and water-soluble molecules in their hemolymph, such as antimicrobial peptides (AMPs). In this work, we evaluated the antifungal and immunomodulatory activity of the hemolymph of Meccus pallidipennis (MPH) and Rhodnius prolixus (RPH) against Cryptococcus neoformans. Methods: We assessed the activity of the hemolymph of both insects on fungal growth by a minimum inhibitory concentration (MIC) assay. Further, RAW 264.7 macrophages were cultivated with hemolymph and challenged with C. neoformans. Then, their phagocytic and killing activities were assessed. The cytokines MCP-1, IFN-γ, TNF-α, IL-10, IL-12, and IL-6 were measured in culture supernatants 4- and 48-hours post-infection. Results: Both hemolymph samples directly affected the growth rate of the fungus in a dose-dependent manner. Either MPH or RPH was capable of inhibiting fungal growth by at least 70%, using the lowest dilution (1:20). Treatment of RAW 264.7 macrophages with hemolymph of both insects was capable of increasing the production of MCP-I and TNF-α. In addition, when these cells were stimulated with hemolymph in the presence of C. neoformans, a 2- and a 4-fold increase in phagocytic rate was observed with MPH and RPH, respectively, when compared to untreated cells. For the macrophage killing activity, MPH decreased in approximately 30% the number of viable yeasts inside the cells compared to untreated control; however, treatment with RPH could not reduce the total number of viable yeasts. MPH was also capable of increasing MHC-II expression on macrophages. Regarding the cytokine production, MCP-I and TNF-α, were increased in the supernatant of macrophages treated with both hemolymphs, 4 and 48 hours after stimulation. Conclusion: These results suggested that hemolymph of triatomines may represent a source of molecules capable of presenting antifungal and immunomodulatory activity in macrophages during fungal infection.(AU)

Cryptococcal meningitis in a patient with chronic hepatitis C treated with pegylated-interferon and ribavirin

Various adverse events have been reported during combination therapy with pegylated (PEG)-interferon-alpha and ribavirin, although opportunistic infections, especially cryptococcal meningitis, are very rare. A 61-year-old woman complained of headaches and a fever during treatment of a chronic hepatitis C virus (HCV) infection. She had been treated for 7 months. Her headaches were refractory to analgesics, and she developed subtle nuchal rigidity. The cerebral spinal fluid (CSF) revealed a white blood cell count of 205/mm3, 51 mg/dL protein, 35 mg/dL glucose, and negative Cryptococcus antigen. The CSF culture resulted in no growth. Five days later, the CSF was positive for Cryptococcus antigen. We administered amphotericin B and flucytosine, followed by fluconazole. Approximately 2 months later, she was discharged. For the first time, we report a case of cryptococcal meningitis during the treatment of chronic HCV with PEG-interferon-alpha and ribavirin.

Cryptococcosis in Colombia: Results of the national surveillance program for the years 2006-2010 / Criptococosis en Colombia: resultados de la encuesta nacional, 2006-2010

Introduction: A survey on cryptococcosis is being conducted regularly in Colombia since 1997. We present hereby the results corresponding to patients diagnosed from 2006 to 2010. Objective: To analyze the data obtained during this period. Materials and methods: Retrospective analysis of the corresponding surveys. Results: A total of 526 surveys originating from 72% of the Colombian political divisions were received during the 5-year period. Most patients (76.6%) were males and 74.9% were 21-50 years old. The most prevalent risk factor was HIV infection (83.5%) with cryptococcosis defining AIDS in 23% of the cases. In the general population the estimated mean annual incidence rate for cryptococcosis was 2.4 x 106 inhabitants while in AIDS patients this rate rose to 3.3 x 103. In 474 surveys stating clinical features, most frequent complaints were headache 84.5%, fever 63.4%, nausea and vomiting 57.5%, mental alterations 46.3%, meningeal signs 33.0%, cough 26.4% and visual alterations 24.5%. Neurocryptococcosis was recorded in 81.8% of the cases. Laboratory diagnosis was based on direct examination, culture and latex in 29.3% cases. From 413 Cryptococcus isolates analyzed, 95.6% were identified as C. neoformans var. grubii, 1% C. neoformans var. neoformans, and 3.4% C. gattii. Treatment was reported for 71.6% of the cases with amphotericin B alone or in combination with fluconazole prescribed in 28%. Conclusions: Surveys done through passive surveillance continue to be sentinel markers for HIV infection and represent a systematic approach to the study of opportunistic problems regularly afflicting AIDS patients since cryptococcosis requires no compulsory notification in Colombia.

Introducción. Desde 1997 se viene realizando un programa nacional de vigilancia sobre la criptococosis en Colombia. Se presentan los resultados correspondientes a los pacientes diagnosticados entre el 2006 y el 2010. Objetivo. Analizar los datos obtenidos durante este periodo. Materiales y métodos. Análisis retrospectivo de las encuestas. Resultados. Durante los cinco años mencionados se recibieron 526 encuestas representativas del 72 % de la división política colombiana. La mayoría de pacientes (76,6 %) eran hombres y 74,9 % estaban entre los 21 y los 50 años. El factor de riesgo prevalente fue la infección por VIH (83,5 %), y la criptococosis definió el sida en 23 % de los casos. La incidencia anual promedio en la población general fue de 2,4 por un millón de habitantes mientras que, en pacientes con sida, aumentó a 3,3 por 1.000. En 474 encuestas se informaron manifestaciones clínicas; las más frecuentes fueron: cefalea (84,5 %), fiebre (63,4 %), náuseas y vómito (57,5 %), alteraciones mentales (46,3 %), signos meníngeos (33 %), tos (26,4 %) y alteraciones visuales (24,5 %). La neurocriptococosis se reportó en 81,8 % de los casos. El diagnóstico se hizo por examen directo, cultivo y antigenemia en 29,3 % de los casos. De 413 aislamientos recuperados, 95,6 % fueron C. neoformans var. grubii, 1 % C. neoformans var. neoformans, y 3,4 % C. gattii. En 71,6 % de los casos para el tratamiento se administró anfotericina B y en 28 % se combinó con fluconazol. Conclusiones. La vigilancia pasiva continúa siendo un marcador centinela para la infección por VIH, y constituye una aproximación sistemática al estudio de infecciones oportunistas en pacientes con sida, debido a que la criptococosis no es de notificación obligatoria en Colombia.

Vertebro-cerebral cryptococcosis mimicking tuberculosis: A diagnostic dilemma in countries with high burden of tuberculosis.

We report a case of a 30-year-old immunocompetent man with disseminated cryptococcosis who was initially treated with antitubercular therapy due to clinical and radiological diagnosis of vertebro-cerebral tuberculosis. The diagnosis of Cryptococcus infection was made due to incidental isolation of this fungus from blood culture with negative cerebrospinal fluid culture results. Though disseminated cryptococcosis with central nervous system, skeletal, and skin involvement is an uncommon manifestation of Cryptococcus neoformans infection, a high clinical suspicion and early initiation of therapy is needed to recognise and treat such patients efficiently.

Screening for cryptococcal antigenemia in anti-retroviral naive AIDS patients in Benin City, Nigeria

Cryptococcus neoformans is the most incriminated fungal pathogen causing meningitis in acquired immune deficiency syndrome [AIDS] patients, and is known to constitute a major cause of deaths in AIDS patients. This study thus aimed to determine the baseline sero-prevalence of Cryptococcus neoformans infection in anti-retroviral naive [ART-naive] AIDS patients using the serum Cryptococcal antigen [crag] detection method. Baseline effect of variation in CD4 counts, as well as sex and age with sero-positivity for crag were also determined. This descriptive cross-sectional study included 150 [61 males and 89 females] ART-naive AIDS patients attending the Human Immunodeficiency Virus clinic [HIV] at the University of Benin Teaching hospital, Benin City, Nigeria, within the period from February 2011- July 2011. Forty [18 males and 22 females] HIV positive outpatients with CD4 counts >200 cells/microl who were ART-naive were recruited and used as controls. The sero-prevalence of crag in the patients and the control group was measured using the cryptococcal antigen latex agglutination system [CALAS] [Meridian Bioscience, Europe] and CD4 counts were measured using flow cytometry [Partec flow cytometer, Germany]. Of the 150 ART-naive AIDS patients with CD4 counts

Estudio epidemiológico de la Criptococosis / Crytococosis epidemiologic study

En este trabajo, se realizó un estudio clínico-epidemiológico de la criptococosis, de tipo mixto, dividido en 3 secciones: SECCIÓN I: Los pacientes con criptococosis, estudio descriptivo. Se evaluaron 110 historias clínicas cuyo diagnóstico se realizó entre los años de 1994-2003, en 4 centros de referencia asistencial del país. Se tomaron en cuenta caracteres demográficos, clínicos y paraclínicos. Un 82,7 por ciento tenía SIDA y un 17,3 por ciento eran VIH seronegativos. La clínica más frecuentemente observada fue la encefalitis o meningoencefalitis (98,2 por ciento). La mortalidad fue de un 30,00 por ciento, predominantemente en pacientes con SIDA, a razón de 7.3:1. Entre los indicadores de mal pronóstico de la población evaluada, la alteración del estado de conciencia fue la que ejerció el mayor peso. SECCIÓN II: Los aislados de Cryptococcus spp, estudio experimental. Se evaluó la utilidad del medio agar cerebro-corazón con sangre, para el aislamiento de las cepas a partir de las muestras clínicas, entre los años 2001-2003. Se estudiaron un total de 132 cepas de cryptococcus spp, unas aisladas de muestras clínicas y otras conservadas en micotecas en los últimos 10 años. En este trabajo se introdujo la prueba de auxanograma por la técnica de Beijerinck modificada por Araujo, la cual resultó tener una elevada sensibilidad y especificidad. Se comprobó la utilidad del Caldo Urea de Stuart para la realización de la prueba de la ureasa a levaduras de este género. SECCIÓN III: La cepa de crytococcus spp y el paciente, estudio descriptivo. Se evaluó la relación existente entre la variedad de C. neoformans aislado y el patrón genotípico del mismo con repsecto a caracteres demográficos, clínica, paraclínica y evolución, entre otros presentadores por el paciente al cual se le aisló la cepa. Se encontró una diferencia estadísticamente significativa en la asociación entre C. neoformans var gattii y la presencia de alteración de los pares craneales.

Anti-Cryptococcal-Globulin-Latex production for rapid detection of cryptococcus neoformans polysaccharide antigen in cryptococcosis

Cryptococcosis has become the fourth leading life-threatening opportunistic infection in patients with AIDS, but also occurs in non-AIDS patients. In view of the increasing numbers of infection during last decade in Iran, use of rapid, sensitive and specific test for diagnosis of cryptococcal disease has become important than ever. We aimed to produce the reagents for latex cryptococcal antigen test. The antigen was prepared from NCPF 3168 strain of Cryptococcus neoformans. Anticapsular antiserum of C. neoformans raised in rabbits and latex carboxylate- modified beads were coated with antiserum. The maximally- reactive globulin dilution was obtained at dilution of 1:400. For evaluation of efficacy of reagents, challenged 38 BALB/C mice and other 38 mice were used as controls. The mice were bled and autopsied. Brain, heart and lung were checked by direct, histopathological and cultural examination for cryptococcosis. The sera from case and control mice were tested with Immunomycologic [Immy] kit and also our produced reagents [OPR] for detection of cryptococcal antigen. Moreover, 15 cerebrospinal fluid and 15 serum samples from patients with cryptococcal meningitis, 30 with aspergillosis, 30 with suspected other fungal infections, and 30 from healthy individuals were tested as well. The results showed that the sensitivity [97.3%] and specificity [100%] of OPR was quite comparable with those of Immy kit. Therefore, it could be regarded as a substitute for commercial kits

Enzyme-linked immunosorbent assay for detection and quantification of Cryptococcus neoformans antigen

An enzyme-linked immunosorbent assay was standardized for the detection of cryptococcal antigen in serum and cerebrospinal fluid. The system was evaluated in clinical samples from patients infected by human immunodeficiency virus with and without previous cryptococcosis diagnosis. The evaluated system is highly sensitive and specific, and when it was compared with latex agglutination there were not significant differences. A standard curve with purified Cryptococcus neoformans antigen was settled down for the antigen quantification in positive samples

Cinética de citocinas y de anticuerpos en ratones resistentes y susceptibles a la infección por Cryptococcus neoformans / Kinetics of cytokines and antibodies in resistant and susceptible to Cryptococcus neoformans infection mice

La criptococosis, micosis sistémica oportunista que afecta especialmente a individuos inmunocomprometidos, es causada por Cryptococcus neoformmans. Uno de los factores de virulencia de esta levadura es el polisacárido capsular (PSC), compuesto principalmente por el glucuronoxilomanano (GXM), antígeno (Ag) T independiente (TI) con capacidad inmunosupresora. La respuesta humoral específica contra C. neoformans parece condicionar el tiempo de sobrevida de los animales infectados siendo la IgG1 protectora mientras que la IgG3 no lo es. Los mecanismos que regulan el cambio en el isotipo o en la subclase de inmunoglobulina (Ig) no han sido claramente establecidos y aunque se supone la participación de factores solubles como las citocinas, su relación no ha sido aún demostrada. Con base en estas observaciones, el propósito de este trabajo fue estudiar en un modelo murino de criptococosis con el empleo de cepas de ratones resistentes y susceptibles (BALB/c y C57BL/6) infectados intratraquealmente, tanto la producción de anticuerpos (Ac) IgG por las células de bazo como de las citocinas interferón (IFN) gamma, interleucinas (IL) -5, IL-10, IL-12 e IL-18 en diferentes tiempos post-infección. Estos análisis permitieron determinar la producción de Acs IgG in vitro tanto en ratones infectados como en los no infectados siendo mayor en los primeros. A pesar de que la producción de Acs anti-GXM en el día 8 pos-infección fue mayor en C57BL/6 con respecto a BALB/c, se observó una disminución de la cantidad de Acs en los ratones infectdos en ambas cepas en el día 13. Los análisis del mRNA de las citocinas mostraron que en BALB/c existe una pequeña desviación de la respuesta hacia un patrón Th1 en el pulmón, pero no en el bazo, comparada con los C57BL/6. Esta diferencia entre las dos cepas, se observó solamente a nivel de pulmón, es decir en el sitio de la infección. Estos resultados sugieren que en BALB/c el patrón de citocinas Th1 podría condicionar la capacidad de producir Acs in vitro, disminuyéndola, en C57BL/6 el patrón Th2, favorecería la producción de Acs por esta cepa en condiciones similares. La infección por C. neoformans produce una reducción en la producción de Ac por células de bazo, lo que sugiere que la inmunosupresión mediada posiblemente por el GXM tiene acción sistémica. Sería importante analizar la producción de citocinas in vitro frente a este Ag para determinar su implicación en la producción de Acs IgG

Obtención de inmunoglobulina G anti-Cryptococcus / Obtention of anti-Crypstococcus neoformans immunoglobulin G

Con el objetivo de obtener una IgG anti-Cryptococcus neoformans, se llevaron a cabo simultáneamente 2 esquemas de inmunización en conejos con una cepa autóctona. Para ambos se emplearon células enteras formalinizadas que se diferenciaban entre sí en cuanto a dosis y vías de inmunización. Los sueros obtenidos fueron titulados y se seleccionó el de mayor título (1:1 024 por el método de aglutinación en lámina) el cual fue purificado mediante precipitación salina y cromatografía de intercambio iónico, con la obtención de una IgG de pureza y actividad biológica altas

Estudio comparativo mediante pruebas inmunológicas y micológicas para el diagnóstico de la criptococosis meníngea / Comparative study through immunologic and mycologic test for the diagnosis of meningeal cryptococosis

Se estudió un grupo de 24 pacientes con diagnóstico de criptococosis meníngea. Con el líquido cefalorraquídeo se realizaron métodos tradicionales de diagnóstico, como son cultivos en Sabouraud y tinción de tinta china, y se compararon con un medio de cultivo diferencial de alpiste negro (Guizotia abissinica) de producción casera, y tinción de resaltado capsular. De manera independientes se determinó y tituló antígeno criptococósico en líquido cefalorraquídeo mediante aglutinación con anticuerpos adheridos a látex (reactivo previamente preparado y estandarizado). Los resultados obtenidos se analizaron en base a la prueba de X² y no se encontraron diferencias estadísticamente significtivas entre los métodos tradicionales y los propuestos. El medio de alpiste funcionó como un método diferencial eficaz (95 por ciento). La tinción de resaltado capsular fue ligeramente superior a la tradicional, sin diferencia significativa. La cuantificación de antígeno criptococósico fue una prueba sumamente sensible (83.3 por ciento) sin que se puediera correlacionar clínicamente

Fungemia e coroidite por Cryptococcus neofarmans; relato em portador de SIDA / Fungemia and choroiditis by Cryptococcus neoformans; case report in an AIDS patient

Relatamos um caso de coroidite bilateral por C. neoformans em pacientes portador de SIDA

Deteccion de antigeno del polisacarido capsular de Cryptococcus neoformans en pacientes con SIDA y neurocriptococosis en Sao Paulo, Brasil / Detection of capsular polysaccharide antigen of Cryptococcus neoformans in patients with AIDS and neurocryptococcosis in Sao Paulo, Brazil

Antigeno del polisacarido capsular (AgPC) de Cryptococcus neoformans fue detectado por la tecnica de aglutinacion de latex (AL) en LCR y suero de pacientes con Sindrome de Inmunodeficiencia Adquirida (SIDA) y primer episodio de neurocriptococosis, usando como patron el examen micologico (examen directo y cultivo) de LCR. Se obtuvo una sensibilidad de 100 por ciento de AL para detectar AgPC de C. neoformans, el cual por su rapidez permite tratamiento especifico precoz. Titulos iniciales de AgPC de la levadura en esos pacientes pueden ser>1.000.000, pareciendo que cuando esos titulos estan presentes en suero, se relacionan con mortalidad durante el tratamiento. En los pacientes que sobrevivieron se observo que el examen micologico directo y AgPC de C. neoformans, en LCR y suero, permanecen positivos aun despues de tratamiento y mejoria clinica del paciente.

Latex agglutination test for diagnosing cryptococcosis.

Fourteen cases of systemic cryptococcosis were admitted to Siriraj Hospital during 1987 to 1989. These included 5 male and 9 female patients aged 4-65 years. The most significant manifestation was cryptococcal meningitis and systemic lupus erythematosus was the most common underlying disease. Culture test for C. neoformans was negative after 28 days of treatment and the latex agglutination test decreased to 1+ agglutination within 49 days of treatment. The latex agglutination test may also be positive in other bacterial, fungal, connective tissue and malignant diseases. A definite diagnosis must, therefore, rely on conventional methods (finding organisms in specimens, culture for the organism). The latex agglutination test is valuable for monitoring patients (decreasing titer indicates a good response). The disease recurred in 4 cases. In cases of cryptococcal meningitis, lumbar puncture should periodically be performed to obtain cerebrospinal fluid for mycological study. In addition the patients should be observed for symptoms and signs.

Coagglutination test (COA) for Cryptococcus neoformans circulating antigen detection in cerebral spinal fluid (CSF)

Foram utilizadas 82 LCR de transplantados renais (24 pacientes), 43 LCR de pacientes com criptococose comprovada (controles positivos), 35 LCR de pacientes com outras doenças (histoplasmose, paracoccidioidomicose e infecçöes bacterianas) como controles negativos. Os primeiros foram cultivados em ágar Sabouraud com sementes de girassol e juntamente com os demais examiando pelo teste de látex para pesquisa de antígeno circulante de C. neoformans, qualitativamente. O teste de Coaglutinaçäo foi realizado qualitativamente e quantitativamente, encontrando-se títulos até a diluiçäo 1:2048. Näo foram detectadas reaçöes falso-positivas ou falso-negativas entre os controles. Como prova de valor diagnóstico demonstrou: sensibilidade - 92,1%; especificidade - 92,6% e eficiência - 92,3%. Provou também ser um teste rápido, exato e econômico, embora sua escolha dependa do pré-tratamento de LCR (80-C por 3 a 5 minutos) e soros (diluiçäo ou álcali-precipitaçäo) para evitar autoaglutinaçäo e aumentar a sensibilidade da reaçäo

Reactivity of Cryptococcus neoformans & Candida species with concanavalin A & blood grouping sera.

Forty strains of Cryptococcus neoformans, 30 of Candida albicans, 24 of C. parapsilosis and 10 strains each of C. tropicalis and C. (Torulopsis) glabrata were examined. A 0.2 per cent solution of concanavalin A (Con A) in phosphate buffered saline and commercial anti-A and anti-B blood grouping sera were used in the whole cell slide agglutination test. All the isolates of Candida species strongly reacted with Con A and over 90 per cent were agglutinated by anti-A and -B blood grouping sera. In contrast, except for one strain, Cryptococcus neoformans did not agglutinate with Con A or blood grouping sera. These findings suggest, on one hand, a fundamental difference in the sugar mosaic of the cell surface components of Cryptococcus neoformans and Candida species, and on the other, presence of similar antigenic determinant(s)/receptors on the cell surface of Candida species and human erythrocytes.

Utilizaçäo do Bouin e do Picrosirius para identificaçäo do Cryptococcus Neoformans nos tecidos humanos / The use of Bouin and Picrosirius to identify Cryptococcus neoformans in human tissue

O estudo de dois casos de criptococose humana mostra que a fixaçäo pelo líquido de Bouin conserva melhor que o formol as estruturas do fungo, permitindo sua fácil identificaçäo nos tecidos corados pela hematoxilina-eosina, evidenciando um corpo basófilo arredondado (núcleo) e envoltório (cápsula) que se mostra intensamente eosinófilo ou anfófilo. A técnica do picrosirius associada à microscopia de luz polarizada, permite observar anéis birrefringentes de brilho amarelado no envoltório, que säo vistos em praticamente todas as células fúngicas quando fixador utilizado era o Bouin