Liposomes as potential carriers for ketorolac ophthalmic delivery: formulation and stability issues / Liposomes as potential carriers for ketorolac ophthalmic delivery: formulation and stability issues

ABSTRACT Drug delivery to treat ocular disorders locally is a challenging endeavor. Traditional ocular dosage form - eye drops - exhibits poor availability, consequently inefficient therapeutic response. The objective of the study was to formulate and characterize a ketorolac tromethamine ocular system with a prolonged release pattern based on liposomes as a vesicular carrier and to design once daily liquid preparation realizing the thermal in situ gelation principle. Liposomes were prepared by film hydration method. The influence of cholesterol concentration, pH and volume of hydration medium, and type and concentration of charging imparting agents were studied. Liposomes were characterized via, morphological examination, vesicular size, and encapsulation efficiency, and in vitro release performance, moreover its stability was assessed. The results obtained highlighted that liposomes showed a closed vesicular multi-lamellar structure. Ketorolac was successfully encapsulated within the liposomal structure in a cholesterol and charge inducing agent concentration-dependent behaviour. The dispersion of liposomes within thermosensitive Poloxamer in situ gel was able to retard the release of the drug by diffusion providing a controlled prolonged delivery. The liposomal formulations were physically stable for six months. Ketorolac tromethamine in situ liposomal gel representing an efficient alternative in terms of ocular retention and patient compliance when compared with conventional eye drops.

Evaluación de la estabilidad del sistema de diagnóstico inmunoenzimático DAVIH VIH-2 / Evaluation of the stability of the immunoenzymatic diagnostic system DAVIH VIH-2

Introducción: el estudio de la estabilidad de los componentes y el producto terminado constituye un importante requisito regulatorio en los diagnosticadores. Objetivo: realizar un estudio de estabilidad en tiempo real durante doce meses del sistema inmunoenzimático (ELISA) DAVIH VIH-2. Métodos: se realizó un estudio de estabilidad en tiempo real durante doce meses en tres lotes del diagnosticador DAVIH VIH-2, ELISA indirecto diseñado para la detección de anticuerpos contra el virus de inmunodeficiencia humana tipo 2 en suero o plasma humano. Se controlaron los requisitos de calidad de los componentes de acuerdo a sus especificaciones. Se estudió la normalidad de valores de densidad óptica/valor límite y la homogeneidad de las medias y varianzas mediante las dócimas de Grubbs y Cochran. Se estimó la precisión en los controles positivo y negativo del sistema y en seis muestras con diferente reactividad al virus de inmunodeficiencia humana tipo 2 mediante el cálculo del coeficiente de variación y se confeccionaron las cartas de control de los valores de las medias de densidad óptica respecto al tiempo. Resultados: los requisitos de calidad de cada componente se cumplieron durante 12 meses, excepto las características funcionales del conjugado a partir de los seis meses. Los valores en las dócimas de Grubbs y Cochran fueron menores que los valores críticos tabulados para α del 1 y 5 por ciento por lo que existió homogeneidad en las medias y las varianzas en todo el periodo. El coeficiente de variación se mantuvo inferior al 10 por ciento excepto en las muestras con reactividad media y baja, mientras que en las cartas de control, los valores de densidad óptica se mantuvieron en el límite de la media ±2 desviaciones estándar hasta el noveno mes(AU)

Estabilidade do ácido peracético no processo de desinfecção prévia à lavagem / Peracetic acid stability in disinfection process prior to wash

Objetivo: Avaliar a efetividade antimicrobiana e a estabilidade de formulações de ácido peracético com (Apc) e sem inibidor (Aps) de corrosão. Materiais e Métodos: Corpos de prova em aço inoxidável foram contaminados com Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Candida albicans, sangue e saliva e imersos em ácido peracético (Aps e Apc) por dez, quinze e trinta minutos. Após estes períodos, Apc e Aps foram neutralizados, agitados durante um minuto e a suspenção obtida foi semeada (ágar sangue), incubada (24h/37 °C) e as unidades formadoras de colônia (UFC) contadas. Este procedimento foi realizado seis vezes ao dia por 18 dias não consecutivos por um período de trinta dias. Corpos de prova contaminados e não submetidos à desinfecção foram utilizados como grupo controle. Resultados: Houve redução significativa das médias diárias de crescimento dos microrganismos para os dois grupos teste (Aps e Apc) quando comparados ao grupo controle (p= 0,0000) sem diferença estatística significativa entre eles (p= 0,7517). Conclusão: As duas soluções de ácido peracético mostraram-se eficientes no processo de desinfecção, sendo a solução sem inibidor de corrosão estável por um período maior...

Objective: To evaluate the stability of formulations of peracetic acid with (Apc) and without inhibitor (Aps) of corrosion in the disinfection process prior to washing. Materials and Methods: Specimens of stainless steel were contaminated with Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Candida albicans, blood and saliva and immersed in peracetic acid (Aps and Apc) for ten, fifteen and thirty minutes. After these periods, Aps and Apc were neutralized, stirred and the suspension obtained was seeded (blood agar) incubated (24h/37°C) and colony forming units counted. This procedure was carried out six times a day for 18 consecutive days for a period of thirty days. Contaminated specimens and not disinfected were used as control group. Results: There was significant reduction in the daily growth average of microorganisms for the two test groups (Aps and Apc) when compared to control group (p = 0.0000) with no significant statistical difference between them (p = 0.7517). Conclusion: The two solutions of peracetic acid were effective in the disinfection process, with the solution without corrosion inhibitor stable for a longer period...

Estabilidade dos anticorpos anti-HIV em amostras de soro armazenadas por períodos de dois a dezoito anos / Stability of anti-HIV antibodies in serum samples stored for two to eighteen years periods

Introduction: The antibodies have an important role in the serodiagnosis, constituting the most widely used biomarkers to detect and confirm various diseases. Objective: To investigate the reproducibility of anti-human immunodeficiency virus (HIV) antibodies reactivity, to assess the stability of the sera samples stored at -20ºC for two to eighteen years. Method: Sera were collected in the period 1988-2004 for routine anti-HIV antibodies diagnostic testing. The remaining samples stored at -20ºC, were analyzed in this study. Serum sample stability was assessed by enzyme-linked immunosorbent assay/enzyme immunoassay (ELISA/EIA), indirect immunofluorescence assay (IFA), and Western blot (WB) for detecting anti-HIV antibodies. The previously found results (1988-2004) and those obtained in 2006 were subjected to Kappa index analysis. Result: In the period 1988-to 2004, the degree of concordance of the ELISA/EIA, IFA and WB results were considered, good (k = 0.80), regular (k = 0.35), and good (k = 0.63), respectively. Conclusion: Regarding HIV serologic test, the serum samples were stable for 18 years in ELISA/EIA and for 4 years in IFA technique, however, for the WB methodology it was not possible to determine the time of stability of the anti-HIV antibodies...

Introdução: Os anticorpos possuem papel fundamental no sorodiagnóstico e constituem os mais difundidos biomarcadores empregados na detecção e na confirmação de diversas doenças. Objetivo: Verificar a reprodutibilidade dos resultados de anticorpos contra o vírus da imunodeficiência humana (HIV) para avaliar a estabilidade dos soros armazenados a -20ºC durante período de dois a dezoito anos. Método: Os soros utilizados foram provenientes de amostras remanescentes da rotina diagnóstica para detecção de anticorpos anti-HIV, no período de 1988 a 2004, os quais estavam armazenados em freezer a -20ºC. A estabilidade das amostras de soro foi avaliada por meio de enzyme-linked immunosorbent assay/enzyme immunoassay (ELISA/EIA), imunofluorescência indireta (IFI) e Western blot (WB) para detecção de anticorpos anti-HIV, e os resultados dos testes realizados anteriormente (1988-2004) e os obtidos em 2006 foram submetidos à análise do índice Kappa. Resultado: No período de 1988-2004, os graus de concordância dos resultados do ELISA/EIA, IFI e WB foram considerados, respectivamente, bom (k = 0,80), regular (k = 0,35) e bom (k = 0,63). Conclusão: No que diz respeito à sorologia para HIV, as amostras de soro foram estáveis por 18 anos no ELISA/EIA e por quatro anos na técnica de IFI, no entanto, para a metodologia de WB, não foi possível determinar o tempo de estabilidade dos anticorpos anti-HIV...

Estabilidade dos soros para o controle de qualidade interno de testes imunodiagnósticos de HIV/AIDS / Study on the stability of internal quality control sera for HIV/AIDS immunodiagnostic tests

Introduction: The use of reference materials in order to assure and perform the quality control of analytical measurements is a requirement in clinical laboratories. Objectives: Stability of serum samples, kept frozen at -20°C for long-term storage and at varied temperatures during short periods, was evaluated by investigating the persistency of anti-human immunodeficiency virus (HIV) antibodies reactivity on enzyme-linked immunosorbent assay/enzyme immunoassay (ELISA/EIA), Western blot and indirect immunofluorescence assays. Method: The analyzed sera were part of serum panels (comprised of anti-HIV positive and negative samples), produced at the Immunology Center of Instituto Adolfo Lutz, which have been the reference specimens for producing the internal quality assurance sera of HIV/acquired immunodeficiency syndrome (AIDS) immunodiagnostic assays. Sera stability was assessed in samples stored at -20°C for 56 weeks, and at various temperature conditions: from 2°C to 8°C (refrigerator), from 15°C to 25°C (room temperature), at 37°C (incubator) and at -80°C (freezer) for 24 and 48 hours. The statistical analyses on HIV-negative serum samples (long-term storage) were significant (p < 0.05), and neither adverse effects on these samples as the occurrence of false-positive results nor false-negative results in HIV antibody positive sera were found in both studies. Conclusion: It was possible to conclude that the reference material remained stable for 48 hours at different temperatures (short-term) and it remained stable at -20°C for 56 weeks (long-term)...

Introdução: A utilização de materiais de referência para assegurar e desempenhar o papel de controle de qualidade das medições analíticas é requisito em laboratórios clínicos. Objetivo: O presente estudo avaliou a estabilidade das amostras de soro, armazenadas a -20°C por um longo período de tempo e durante curto prazo em diferentes temperaturas, quanto à invariabilidade da reatividade de anticorpos contra o vírus da imunodeficiência humana (HIV), por meio de enzyme-linked immunosorbent assay/enzyme immunoassay (ELISA/EIA), Western blot e imunofluorescência indireta. Método: As amostras analisadas foram provenientes de painéis de soros (constituídos de amostras anti-HIV positivo e negativo), produzidos no Centro de Imunologia do Instituto Adolfo Lutz (IAL), os quais têm sido material de referência para o preparo de amostras do controle de qualidade interno de testes imunodiagnósticos de HIV/síndrome da imunodeficiência adquirida (AIDS). A avaliação da estabilidade dos soros foi efetuada em amostras armazenadas a -20°C por 56 semanas e nas diferentes condições de temperaturas: de 2°C a 8°C (geladeira), de 15°C a 25°C (ambiente), 37°C (estufa) e -80°C (freezer), durante 24 e 48 horas. Os resultados das análises de tendência das amostras de soro HIV negativo (armazenamento de longo prazo) foram significantes (p < 0,05) e nenhum efeito adverso foi observado nessas amostras, como a ocorrência de resultados falso-positivos, tampouco foram detectados resultados falso-negativos em amostras de soro positivas para detecção de anticorpos anti-HIV em ambas as avaliações. Conclusão: Foi possível concluir que o material de referência manteve-se estável por 48 horas nas diferentes temperaturas (curto prazo) e permaneceu estável a -20°C por 56 semanas (longo prazo)...

Hypotensive effect and endothelium-dependent vascular action of leaves of Alpinia purpurata (Vieill) K. Schum

The aims of this study were to evaluate the chemical profile, vascular reactivity, and acute hypotensive effect (AHE) of the ethanolic extract of leaves of Alpinia purpurata (Vieill) K. Schum (EEAP). Its chemical profile was evaluated using HPLC-UV, ICP-OES, and colorimetric quantification of total flavonoids and polyphenols. The vascular reactivity of the extract was determined using the mesenteric bed isolated from WKY. AHE dose-response curves were obtained for both EEAP and inorganic material isolated from AP (IAP) in WKY and SHR animals. Cytotoxic and mutagenic safety levels were determined by the micronucleus test. Rutin-like flavonoids were quantified in the EEAP (1.8 ± 0.03%), and the total flavonoid and polyphenol ratios were 4.1 ± 1.8% and 5.1 ± 0.3%, respectively. We observed that the vasodilation action of EEAP was partially mediated by nitric oxide (·NO). The IAP showed the presence of calcium (137.76 ± 4.08 μg mg-1). The EEAP and IAP showed an AHE in WKY and SHR animals. EEAP did not have cytotoxic effects or cause chromosomic alterations. The AHE shown by EEAP could result from its endothelium-dependent vascular action. Rutin-like flavonoids, among other polyphenols, could contribute to these biological activities, and the calcium present in EEAP could act in a synergistic way.

Os objetivos deste estudo foram avaliar o perfil químico de folhas de Alpinia purpurata K. Schum (AP), assim como a reatividade vascular e o efeito hipotensor agudo (EHA) do extrato etanólico de folhas de AP (EEAP). Avliou-se o perfil químico utilizando-se HPLC-UV, ICP-OES e quantificação colorimétrica de flavonoides e polifenóis totais. A reatividade vascular foi determinada utilizando leito mesentérico isolado de ratos WKY. Curvas dose-resposta do EEAP e do material inorgânico da AP (IAP) foram realizadas em animais SHR e WKY. Determinaram-se a segurança citotóxica e mutagênica pelo teste de micronúcleos. Flavonoides tipo rutina foram quantificados no EEAP (1,8±0,03%) e flavonoide total e polifenóis foram de 4,1±1,8% e 5,1±0,3%, respectivamente. Observou-se ação vasodilatadora do EEAP, mediada parcialmente pelo óxido nítrico (·NO). O IAP revelou a presença de cálcio (137,76±4.08 μg.mg-1 de Ca). O EEAP e IAP apresentaram EHA em animais WKY e SHR. Não se observaram efeitos citotóxicos e alterações cromossômicas provocadas pelo EEAP. O EEAP mostrou um EHA que poderia resultar de ação vascular dependente do endotélio. Rutina, entre outros polifenóis e flavonoides, poderia estar contribuindo para essas atividades biológicas e o cálcio presente no EEAP, poderia agir de maneira sinérgica.

Evaluación preclínica y estudio de estabilidad de extractos a partir del follaje de Momordica charantia Lin / Obtaining and characterizing the Momordica charantia Linn leaf extracts

El objetivo del presente trabajo fue la evaluación preclínica y el estudio de estabilidad de extractos a partir del follaje de Momordica charantia Lin. Se obtuvieron extractos acuoso e hidroalcohólico para los cuales se establecieron las especificaciones de calidad mediante la evaluación de tres lotes y se estudió su estabilidad por el método de vida de estante durante 12 meses. A los extractos se le evaluó el potencial genotóxico mediante ensayos de micronúcleos en médula ósea de ratón y aberraciones cromosómicas en linfocitos de sangre periférica. La actividad hipoglicemiante oral fue evaluada en animales con hiperglicemia temporal inducida por carga de glucosa. Como resultados se establecieron las especificaciones de calidad de los extractos acuoso e hidroalcohólico, los mismos mostraron estabilidad por 6 meses para el extracto acuoso y 12 meses para el extracto hidroalcohólico. No mostraron efecto genotóxico en los ensayos evaluados y mostraron efecto hipoglicemiante oral a la dosis de 450 mg/kg.

The objective of this investigation was the preclinical evaluation and the stability study of the Momordica charantia Linn hydroalcoholic and aqueous leaf extracts. The hydroalcoholic and aqueous extracts were obtained and the quality specifications were determined by evaluating three lots. The stability of the extracts was evaluated for 12 months. The genotoxic potential of the extracts was evaluated by mouse bone marrow micronucleus test and chromosome aberration test. The hypoglycemic effect was determined by oral glucose tolerance test. As results, the quality specifications were established and the aqueous extract was stable for 6 months and the hydroalcoholic extract for 12 months. A genotoxic effect was not observed in both extracts and the hypoglycemic effect was observed at the oral dose of 450 mg/kg of body weight.

Efeito da aplicação tópica de um verniz de TiF4 quimicamente estável na desmineralização do esmalte dentário bovino: estudo in vitro / Effect of topical application of a chemically stable TiF4 varnish on the demineralization of bovine enamel: an in vitro study

Objetivo: Avaliar, in vitro, o efeito preventivo da aplicação tópica de um verniz à base de tetrafluoreto de titânio quimicamente estável e de um verniz à base de fluoreto de sódio sobre o esmalte bovino, mediante ciclagem de pH. Metodologia: A amostra foi constituída por 75 blocos de esmalte bovino 3×3 mm, sendo 15 aleatoriamente alocados em cada um dos cinco grupos: G1: Dentifrício Fluoretado + Verniz sem princípio ativo; G2: Dentifrício Fluoretado + Verniz à base de TiF4 (4 minutos); G3: Dentifrício Fluoretado + Verniz à base de TiF4 (24 horas); G4: Dentifrício Fluoretado + Verniz à base de NaF (24 horas); G5: Dentifrício Fluoretado. A ciclagem de pH foi realizada por um período de 14 dias, constando de oito ciclos, a 37 °C. Os blocos tratados foram mantidos em solução desmineralizante por oito horas e, por 16 horas, em solução remineralizante, sendo submetidos à análise da superfície em microscopia eletrônica de varredura e espectroscopia de energia dispersiva. Resultado: O verniz à base de TiF4 promoveu uma maior proteção ao esmalte quando comparado com os demais grupos. Mesmo após o período de ciclagem, foram encontrados fósforo, cálcio, sódio, magnésio, titânio, cloro, silício, alumínio, enxofre, potássio, oxigênio e flúor na superfície do esmalte. Conclusão: O aspecto da estrutura adamantina submetida à ação do tetrafluoreto de titânio revelou a presença de uma película protetora. O cálcio e o fósforo foram os principais compostos inorgânicos encontrados no esmalte, sendo observadas alterações na constituição química da camada superficial adamantina em função do tratamento com fluoreto instituído.

Objective: To evaluate the in vitro preventive effect of topical application of achemically stable titanium-tetrafluoride (TiF4) varnish and a sodium fluoride (NaF) varnish on bovine enamel by pH cycling test. Methodology: The sample consisted of 75 blocks of bovine enamel measuring 3x3mm, which were randomly assigned to 5 groups of 15, as follows: G1: Fluoridated dentifrice + varnish without active principle; G2: fluoridated dentifrice + TiF4 varnish (4 minutes); G3: fluoridated dentifrice + TiF4 varnish (24 hours); G4:fluoridated dentifrice + NaF varnish (24 hours); G5: fluoridated dentifrice.A pH cycling was carried out for a period of 14 days, consisting of 8 cycles at 37 °C. The treated blocks were kept in demineralizing and remineralizing solutions for 8 and 16 hours, respectively, being then subjected to surface analysis under scanning electron microscopy and dispersive energy spectroscopy. Result: The TiF4 varnishshowed a greater protection to enamel when compared with the other groups.Even after the cycling period, the following elements were found on the enamel surface: phosphorus, calcium, sodium, magnesium, titanium, chlorine, silicon, aluminum, sulfur, potassium, oxygen and fluorine. Conclusion: The adamantine structure subjected to the action of titanium tetrafluoride revealed the presence of a protective pellicle.Calcium and phosphorus were the major inorganic compounds found in enamel. Furthermore, there were changes in the chemical composition of the adamantine surface layer as a result of the treatment with fluoride.

Determinação de fumonisina B1 por CLAE: estudo da estabilidade do derivado fumonisina B1-orto-ftaldialdeído / Determination of fumonisin B1 by HPLC: stability study of the fumonisin B1-ortho-phthaldialdehyde derivative

Este estudo avaliou a estabilidade do derivado fumonisina B1-orto-ftaldialdeído sob diferentes condições de pH, tempo e temperatura, durante a reação de derivatização e as análises cromatográficas. Na derivatização, a máxima fluorescência emitida pelo derivado foi obtida empregando-se a solução de tetraborato de sódio 0,1 M em pH 9,0, e esta não diferiu significativamente das emitidas em pH 8,0, 8,5,9,5 e 10,0. Em 2 minutos de reação, obteve-se a máxima fluorescência, e esta não diferiu significativamente das emitidas em 4, 6 e 8 minutos de reação. A variação de 0,5 unidade no pH da solução tampão fosfato de sódio 0,1 M, empregada como fase móvel, influenciou significativamente na separação cromatográfica e na detecção do derivado fumonisina B1-orto-ftaldialdeído; em pH entre 3,3 e 3,8, obtiveram-se as maiores intensidades de fluorescência. O aumento na temperatura da coluna cromatográfica resultou na redução de intensidade da fluorescência. O derivado fumonisina B1-orto-ftaldialdeído manteve-se estável entre 20 e 27 °C. A 30 °C, houve redução significativa em 26,5% na intensidade da fluorescência emitida pelo derivado.

Avaliação da reatividade de fibroblastos provenientes de animais silicóticos: estabelecimento de sistema de cultura em 3D / Assessment of reactivity of fibroblasts from fibrotic animals: establishing 3D culture system

A silicose é uma doença pulmonar, de caráter restritivo, causada pela inalação de partículas de sílica cristalina. Se caracteriza pela indução de uma inflamação crônica associada à intensa proliferação de fibroblastos e acúmulo exacerbado de componentes de matriz extracelular, e para a qual não há um tratamento eficaz. Os fibroblastos são considerados alvos cruciais em doenças de natureza fibrótica e o desenvolvimento de sistemas que permitam avaliar a reatividade destas células é de fundamental importância na busca por terapias anti-fibróticas. No presente estudo foi desenvolvido um sistema de cultura primária em 3D (esferóides), utilizando fibroblastos provenientes do pulmão de camundongos normais e silicóticos objetivando analisar comparativamente os aspectos morfológicos/funcionais de ambas as populações celulares. Os fibroblastos foram obtidos a partir da dissociação mecânica/enzimática dos pulmões de camundongos Swiss-Webster 7 dias após a instilação intranasal de salina (controle) ou sílica (10 mg/animal). Após a terceira passagem, as células foram cultivadas em placas de 96 poços, revestidas com agarose, na ausência ou presença de IL-13 (40 ng/mL), sendo os esferóides avaliados quanto a aspectos morfológicos (tamanho/diâmetro médio/constituição), e funcionais tais como: proliferação, produção de citocinas (TGF-(beta)e quimiocinas (MCP-1)) e de colágeno. Através da análise por microscopia de luz invertida, verificamos que os esferóides contendo fibroblastosde animais normais e silicóticos mostraram progressiva diminuição do tamanho/diâmetro, e maior densidade, ao longo do tempo analisado (1 – 4 dias), com os silicóticos apresentando valores sempre superiores aos dos controles. A estimulação com IL-13 induziu claro aumento de tamanho/diâmetro em ambas as populações de esferóides. A análise por microscopia eletrônica de varredura (MEV) revelou haver diferenças morfológicas importantes entre os grupos normal e silicótico, no que tange ao formato e à constituição celular, com expressivo aumento no conteúdo de matriz extracelular detectado na condição de estimulação com IL-13. De forma interessante, foi observado que os esferóides silicóticos apresentaram níveis basais aumentados de proliferação celular e secreção de TGF-(beta), assim como de colágeno, em comparação aos dos controles. Tanto esferóides normais quanto silicóticos foram sensíveis à estimulação com IL-13, sendo verificado aumento equivalente na taxa de proliferação e nos níveis de TGF-(beta)e MCP-1 em ambos os grupos. No que tange a produção de colágeno, os esferóides normaismostraram-se responsivos à IL-13 enquanto os silicóticos não. Em conjunto, nossos achados mostraram que os fibroblastos pulmonares de camundongos adultos são:(i) passíveis de serem cultivados em sistema de cultura 3D; (ii) responsivos à estimulação com IL-13 e que; (iii) os esferóides silicóticos apresentam características de ativação em comparação aos normais. Além disso, este modelo mostrou-se reprodutível e promissor quanto a possibilidade de utilização futura na busca por compostos com atividade anti-fibrótica.

In vitro study on the interaction of ketotifen fumarate with anhydrous theophylline

The purpose of the present study was to investigate the interaction between ketotifen fumarate and anhydrous theophylline in aqueous media of various pH (1.2 and 6.8). Using Job's continuous-variation analysis and Ardon's spectrophotomeric measurement methods, the values of the stability constants of theophylline with ketotifen were determined at a fixed temperature (37 ºC) at various pH. The stability constants, ranging between 5.66 and 9.92, were derived from Ardon's plot, indicating that comparatively stable complexes had formed as a result of an interaction between the drugs. However, following the interaction of theophylline with ketotifen, stability constants were <1 at gastric pH (1.2) and intestinal pH (6.8). Concurrent administration of ketotifen and theophylline could result in the formation of a stable complex and this is likely to reduce the therapeutic activities of both drugs.

O objetivo do presente estudo foi investigar a interação entre o fumarato de cetotifeno e a teofilina anidra em meios aquosos com vários pH (1,2 e 6,8). Utilizando a análise da variação contínua de Job e os métodos de medida espectrofotométrica de Ardon, os valores das constantes de estabilidade da teofilina com o cetotifeno foram determinados em temperatura fixa (37 oC) em vários pH. As constantes de estabilidade, variando entre 5,66 e 9,92 derivaram-se a partir do delineamento de Ardon, indicando, comparativamente, que complexos estáveis se formaram como resultado da interação entre os fármacos. Entretanto, seguindo a interação da teofilina com o cetotifeno, as constantes de estabilidade foram <1, em pH gástrico (1,2) e intestinal (8,8). A administração concomitante de cetotifeno e teofilina poderia resultar na formação de complexo estável, o que reduz a atividade terapêutica de ambos os fármacos.

Condição sociossexual de uma população de pôneis da raça Brasileira / Social-sexual condition of the Brazilian Pony Breed population

A formação dos haréns em pôneis envolve variáveis como as concentrações plasmáticas de testosterona, a idade e a dominância entre garanhões. Os objetivos deste estudo foram verificar a estabilidade e a repetibilidade da composição dos haréns e as relações entre as concentrações plasmáticas de testosterona e a condição sociossexual dos reprodutores. A estabilidade dos haréns dependeu do status reprodutivo das fêmeas. A presença de éguas gestantes no harém levou a uma maior estabilidade, enquanto que as em estro, ao procurarem outros garanhões para serem cobertas, provocaram instabilidade. A condição de dominante do garanhão foi importante para a manutenção do número de éguas no seu harém. Todos os garanhões tiveram as suas concentrações plasmáticas médias de testosterona aumentadas, em média, 77,6 por cento, quando foram expostos às éguas e quando formaram haréns (85,6 por cento), enquanto que os do grupo de solteiros tiveram as concentrações mais baixas. Portanto, fatores envolvidos na formação e estabilidade dos haréns nas populações selvagens parecem também exercer influência nas domesticadas e, consequentemente, podem interferir no desempenho destes animais durante a estação reprodutiva.

The formation of harems in ponies involves factors as testosterone level of stallion, age and dominance. The objectives were to verify the stability and repeatability of the composition of harems and the relationships between plasmatic levels of testosterone and the social-sexual condition of the stallions. The stability of harems depended of reproductive status of females and dominance of stallion. All the stallions had their mean testosterone plasmatic levels increased, in average, 77, 6 percent, when were exposed to the mares, and when they formed harems (average of 85, 6 percent), while the stallions of bachelor group had lower levels.

Anafilaxia após ingestão de mandioca em pacientes com alergia ao látex: relato de 2 casos / Anaphylaxis after ingestion of manioc in patients with allergy to latex: reprt of 2 cases

Objective: To report the first cases in our country of patients with latex allergy who developed anaphylaxis with urticaria and bronchospasm after eating maníoc, suggesting the presence of cross-reactivity between these allergens. Methods: Latex allergy was confirmed by assessing specific IgE through in vivo (prick tests) and in vitro (ImmunoCAP) tests. 5kin tests to aeroallergens, manioc and other foods were also conducted. Allergy to manioc was confirmed with oral challenge tests. ImmunoCAP inhibition assays were performed with extract of manioc and latex to assess cross reactivity. Results: 5kin tests to aeroallergens were negative. The skin prick tests with commerciallatex extracts were positive in both patients. Prick-to-prick with raw and cooked manioc was also positive. Both patients had positive skin tests for fresh papava and one of them for pineapple. Tests were negative for banana, kiwi and chestnut. Both had high serum specific IgE to latex. Both patients had a reaction with the open challenge test with manioc. ImmunoCAP inhibition assays revealed cross-reactivity between latex and manioc. Conclusion: Although previous reports have already suggested cross-reactivity between latex and manioc, this is the first report of cross reactivity between these allergens in our country, and indicates that manioc should definitely be added to the growing Iist of foods that present cross-reactívity with latex.

Objetivo: Primeira descrição em nosso meio de reação anafilátíca, com urticária e broncoespasmo após a ingestão de mandioca (Manihot utilissima) em pacientes com alergia ao látex, sugerindo a presença de uma reatividade cruzada entre estes dois alérgenos. Métodos: A alergia ao látex foi confirmada através da pesquisa de IgE específica in vivo (testes de puntura) e in vitro (ImmunoCAP, PHADIA, Brasil). Testes cutâneos para aeroalérgenos comuns, mandioca e outros alimentos também foram realizados. A alergia a mandioca foi avaliada pela determinação de IgE específica in vivo e confirmada através de testes de provocação oral com a mandioca. Ensaios de inibição do ImmunoCAP foram realizados com extrato de mandioca e de látex para avaliar a reatividade cruzada. Resultados: Os testes cutâneos para aeroalérgenos comuns foram negativos. Os testes cutâneos de puntura com extratos comerciais de látex foram positivo em ambos os pacientes. Prick-to-prick com mandioca crua e cozida também foram positivos. Ambos tiveram testes cutâneos positivos para mamão fresco e um deles para abacaxi. Os testes foram negativos para a banana, kiwi e castanha. Ambos tinham níveis séricos elevados de IgE específica ao látex. Ambos os pacientes tiveram reação com a provocação aberta com a mandioca. Ensaios de inibição do ImmunoCAP revelaram reatividade cruzada entre o látex e mandioca. Conclusão: Esse é o primeiro relato de reação cruzada entre estes dois alérgenos no Brasil. Os resultados reforçam que a mandioca deve ser definitivamente adicionada à crescente lista de alimentos que apresentam reação cruzada com o látex da borracha.

Development and validation of an HPLC method for stability evaluation of nystatin

A liquid chromatography method for evaluating the stability of Nystatin (Nys) in an ointment was developed and validated, since the traditional pharmacopeial microbiological methods are unable to indicate stability. The stress experiments showed that Nys was found to significantly degrade in alkaline and acidic conditions and also under oxidative stress. Lower levels of degradation were detected under heat and with the sample exposed to Xenon light. Resolutions higher than 2 for Nys and degradation products (DP) chromatographic peaks were achieved by using an Inerstil ODS-3 column, isocratic elution with methanol:water and UV detection at 305 nm. The system was found to be linear over a range of 102 to 310 IU mL-1 and proved precise, since the RSD( percent) was 0.24 percent for the six replicates tested. The method also exhibited good levels of recovery (from 98.24 percent to 100.74 percent). Therefore, the validation fulfilled pharmacopeial requirements and the procedure was found to be reliable, precise, accurate and selective for determination of Nys and its degradation products.

Um método indicador de estabilidade por cromatografia líquida foi desenvolvido e validado para a análise de Nistatina (Nys) em uma pomada, uma vez que os métodos microbiológicos tradicionais não têm a habilidade de serem indicadores de estabilidade. A nistatina degradou significativamente em condições alcalinas e ácidas e também em meio oxidante. Quando a amostra foi exposta a luz de xenônio, foram observados menores níveis de degradação. A resolução entre os picos cromatográficos de Nys e seus produtos de degradação (PD) foi maior que 2, utilizando-se uma coluna Inerstil ODS-3, eluição isocrática com metanol: água e detecção no UV em 305 nm. O sistema foi linear entre a faixa de 102 a 310 UI mL-1 e preciso uma vez que o DPR( por cento) foi de 0,24 por cento entre as seis replicatas testadas. Além disso, o método exibiu bons níveis de recuperação (de 98,24 por cento a 100,74 por cento). Consequentemente, considera-se que a validação atendeu a todos os requisitos farmacopêicos e o método pode ser considerado confiável, preciso, exato e seletivo para determinação de Nys e seus produtos de degradação.

Estudio de estabilidad de tabletas de propiltiouracilo 50 mg / Study of the 50 mg Propylthiouracil tablets stability

Se desarrolló el estudio de estabilidad de las tabletas de propiltiouracilo 50 mg y se determinó su fecha de vencimiento. Este estudio se realizó por los métodos de vida de estante y de estabilidad acelerada mediante cromatografía líquida de alta eficiencia, validados en el Centro de Investigación y Desarrollo de Medicamentos. El estudio de vida de estante se desarrolló por un periodo de 24 meses a temperatura ambiente; mientras que el estudio de estabilidad acelerada se efectuó sometiendo el producto a la influencia de la luz, la humedad y la temperatura; se realizó el anàlisis durante 3 meses, para los 2 primeros y durante 6 meses para el estudio de la temperatura. La formulación de propiltiouracilo tabletas 50 mg cumplió con las especificaciones de calidad descritas en la farmacopea. Los resultados del estudio de estabilidad por vida de estante después de transcurridos los 24 meses indicaron que el producto mantenía los paràmetros que determinan su calidad durante ese tiempo, y en los estudios acelerados no se observó degradación significativa del producto. Se estableció 2 años como fecha de vencimiento en las condiciones señaladas.

Autors developed a stability study of 50 mg Propylthiouracil tablets and determination of its expiry date. This study was conducted by fixed life methods and of accelerated stability by high-performance liquid chromatography, validated in Drugs Research and Development Center. Fixed life study was conducted during 24 months at room temperature; whereas the accelerated stability study was conducted exposing the product to light influence, humidity and temperature; during 3 months a analysis was performed for the two first ones and over 6 months in the case of temperature study. Propylthiouracil formula (50 mg tablets) fulfilled the quality specifications described in Pharmacopeia. Results of stability study by fixed life after 24 monhts showed that thr product maintain the parameter determining its quality during this period, and in the accelerted studies there was not a significant degradation of product. Two years was the expity date established in above mentioned conditions.

Estudo de compatibilidade fármaco/excipiente e de estabilidade do prednicarbato por meio de técnicas termoanalíticas, e encapsulação do fármaco em sílica mesoporosa do tipo SBA-15 / Compatibility drug/excipient and stability studies of prednicarbate by thermal analysis, and loading of drug in mesoporous silica type SBA-15

Nos últimos 30 anos, a incidência da dermatite atópica aumentou de 4 para 12% em toda população mundial, acarretando um aumento significativo nos custos envolvidos no seu tratamento, tanto para as famílias, quanto para os sistemas de saúde. Para a dermatite atópica que ocorre de maneira suave à moderada, os corticosteróides de uso tópico são usualmente utilizados. Dentre eles, o prednicarbato se destaca por ser um potente agente antiinflamatório e por ter um baixo potencial em causar atrofia de pele. Neste trabalho, inúmeras técnicas de análise e de caracterização, em especial as técnicas de DSC e TG, foram utilizadas para auxiliar no desenvolvimento racional de uma formulação farmacêutica semi-sólida de uso tópico contendo o prednicarbato como ingrediente ativo. Diversas aplicações da análise térmica voltada à tecnologia farmacêutica foram apresentadas. A estrutura química do produto sólido intermediário originado na primeira etapa do processo de decomposição térmica do prednicarbato foi determinada a partir da associação dos resultados termoanalíticos àqueles obtidos pelas técnicas de RMN, CLAE-EM/EM e espectroscopia de absorção na região do infravermelho. Avaliando-se os resultados, foi possível correlacionar à etapa de decomposição térmica do fármaco com a eliminação do grupo químico carbonato ligado ao seu C17. As curvas TG/DTG das misturas físicas 1:1 entre o prednicarbato e os excipientes álcool estearílico e estearato de glicerila mostraram uma redução da temperatura em que o processo de decomposição térmica do fármaco se inicia (Tonset TG), enquanto que para a mistura prednicarbato/pirrolidona carboxilato sódio, a presença do excipiente pouco interferiu no início do processo ( ΔTMáx dm / dt=0 DTG = 3 ºC), mas originou um aumento da taxa de decomposição (ΔTpico DTG = 35 ºC). A alteração da estabilidade térmica do prednicarbato evidenciada no estudo de compatibilidade com o excipiente estearato de glicerila foi também observada na avaliação da Ea...

In the last 30 years the incidence of atopic dermatitis increased from 4 to 12% around the world, resulting in a significant increase in costs involved to its treatment, both for families and for health systems. For atopic dermatitis that occurs on a weak to moderate way, the topical corticosteroids are frequently used. Among them, the prednicarbate has special attention due to its potent anti-inflammatory activity and due to its low potential in causing skin atrophy. In this work, several analytical and characterization techniques, especially the DSC and TG, were used to assist in the rational development of a semi-solid pharmaceutical formulation for topical use containing prednicarbate as active ingredient. A lot of applications of thermal analysis focused on pharmaceutical technology were presented. The elucidation of chemical structure of the solid product formed at the first thermal decomposition step of the prednicarbate was performed using the thermoanalytical results and results obtained by NMR, HPLC-MS/MS and infrared spectroscopy. Assessing the results, it was possible to correlate the thermal decomposition step of prednicarbate with to elimination of carbonate group bonding to its C17, and subsequent formation of double-bond between C17 and C16. The TG/DTG curves of the binaries mixtures between the drug and stearyl alcohol and glyceryl stearate showed a significant change in the first thermal decomposition step of prednicarbate. For the 1:1 physical mixture between prednicarbate and sodium pirrolidone carboxylate, the TG/DTG curves showed an increase in the thermal decomposition rate of the drug (ΔTpico DTG = 35 ºC), but the presence of pirrolidone almost did not interfere at the beginning of this first thermal decomposition stage (ΔTMáx dm / dt=0 DTG = 3 ºC). The change of thermal stability of prednicarbate observed in the compatibility study with glyceryl stearate excipient was also observed during the evaluation of Ea value of this...

Estabilidad de dos tinturas de Pedilanthus tithymaloides (L) Poit (ítamo real) / Stability of two Pedilanthus tithymaloides (L) Poit (ítamo real) tinctures

Pedilanthus tithymaloides (L) Poit (ítamo real) se emplea tradicionalmente y en estomatología por la acción antiinflamatoria. Objetivos: evaluar la estabilidad de 2 tinturas de ítamo real almacenadas en condiciones de refrigeración y temperatura ambiente durante 1 año...

Pedilanthus tithymaloides (L) Point (ítamo real) is traditionally used in dentistry due to its antiinflammatory effect. Objectives: to evaluate the stability of two itamo real tinctures stored under refrigeration conditions and at room temperature for one year...

Tropomiosinas e reatividade cruzada / Crossreactivity of tropomyosin

Objetivo: Apresentar e discutir a relevância da tropomiosina como panalérgeno e implicações clínicas de sua reatividade cruzada. Métodos: Revisão da literatura que aborda aspectos bioquímicos e moleculares da tropomiosina como alérgeno presente em ácaros, baratas, camarão, lagosta, caracol e helmintos, em particular Ascaris lumbricoides e Schistossoma mansoni. Buscou-se enfatizar a relevância desta família de proteínas como panalérgenos em estudos clínicos que analisaram as implicações da hipótese de reatividade cruzada desta proteína, levando à sensibilização do paciente infectado por helminto e ao reconhecimento e apresentação da tropomiosina, tornando-o igualmente sensibilizado a ácaros, baratas e outras fontes de tropomiosina de invertebrados, aumentando a chance de desenvolvimento de atopia e doenças alérgicas, particularmente asma. Resultados: A superfamília das tropomiosinas é considerada a mais prevalente fonte de alérgenos alimentares de origem animal. Existe alta homologia de sequência quando comparamos separadamente tropomiosinas de seres vertebrados e invertebrados, porém esta homologia torna-se baixa quando comparadas as sequências de grupos vertebrados versus invertebrados. Estudos apontam que existem diferentes desfechos para indivíduos parasitados quanto ao aumento da prevalência de doenças alérgicas. O mesmo para indivíduos sob imunoterapia específica para ácaros em indivíduos com alergia alimentar a tropomiosina. Conclusões: Tropomiosinas são proteínas altamente conservadas entre invertebrados e induzem resposta IgE mediada. Quanto maior a distância evolucionária dos seres vivos, menor a homologia de sequência de suas tropomiosinas (vertebrados versus invertebrados). Existe fundamento para a reatividade cruzada das tropomiosinas. Mais estudos são necessários para avaliar se a reatividade cruzada entre tropomiosinas de invertebrados é clinicamente relevante, de forma á permitir recomendações precisas aos pacientes.

Objective: To present and discuss tropomyosin relevance as a pan allergen and the implication of its cross reactivity. Methods: Review of the literature from the biochemical and molecular aspects of tropomyosin as an allergen present in mite, cockroach, shrimp, lobster, snail and helminthes, particularly Ascaris lumbricoides and Schistossoma mansoni. Here we aimed to remark the relevance of this protein family as pan allergens in clinical trials which analyzed the implications of the cross reactivity hypothesis, where a patient infected by helminthes would be at risk to develop sensitivity to other tropomyosin sources, especially from mites and cockroaches, enhancing the odds of atopy and allergic diseases development, particularly asthma. Results: Tropomyosin superfamily is considered the most prevalent source of animal food allergen. There is a high homology sequence when tropomyosins are compared within the vertebrate group and invertebrate group, but there is a low sequence homology when vertebrate tropomyosin is compared to invertebrate tropomyosin. Clinical trials were inconsistent to confirm that helminthiasis would increase the prevalence of allergic diseases and there are different outcomes for tropomyosin food allergic patients that undergo immunotherapy. Conclusions: Tropomyosins are highly conserved proteins among invertebrates and induce IgE antibody responses. The higher tropomyosin evolutionary distance the lower the degree of sequence identity (vertebrates vs invertebrates). Tropomyosins provide support for IgE crossreactivity. Further studies are necessary to evaluate whether the immunologic crossreactivity among invertebrate tropomyosins is clinically relevant, and to allow precise recommendations to allergic patients.

Estudio de estabilidad del sistema ELISA DAVIH AgP24 / Stability study of ELISA DAVIH-p24 Ag

Para extender el tiempo de vida útil del sistema ELISA DAVIH-AgP24, se realizó una prueba de estabilidad en anaquel. El estudio se realizó durante 12 meses, con 3 lotes consecutivos del diagnosticador. El protocolo a seguir fue ensayar la curva de calibración del control positivo, según las instrucciones de uso del sistema. Se controlaron los requisitos de calidad de cada uno de los reactivos de acuerdo con sus especificaciones. Se estudió la normalidad de los valores obtenidos en cada uno de los puntos de la curva en los meses estudiados y la homogeneidad de las medias y las varianzas utilizando como criterios de aceptación las dócimas de Grubbs y de Cochran, respectivamente. Para la precisión del ensayo, se realizó un análisis de cada uno de los puntos de la curva en los meses 1, 4, 7 y 9, mediante la utilización de cartas de control (gráficas de Levy-Jennings), estableciendo como límites ± 2 desviaciones estándar. Los requisitos de calidad de cada componente cumplieron con las especificaciones hasta el noveno mes, a partir del cual se apreciaron cambios en las características organolépticas del cromógeno tetrametilbencidina y un deterioro en las características funcionales del sistema, por causa del tampón sustrato; en el resto de los componentes no se observaron cambios. Los valores obtenidos fueron aceptados como normales hasta el noveno mes. Los valores estadísticos de Grubbs y de Cochran observados para los 6 puntos de la curva durante los 9 meses analizados fueron menores que los valores críticos tabulados para a= 5 por ciento, por lo que se concluyó que existe homogeneidad entre medias y varianzas. En los gráficos de Levey-Jennings los valores se mantuvieron dentro de los límites establecidos. Estos resultados permitieron extender el período de validez del sistema hasta 6 meses, con 50 por ciento de cobertura.

Extending useful lifetime of ELISA DAVIH-p24 Ag, an on shelf stability test was conducted. Three consecutive batches of the diagnostic kit were studied for 12 months. The applied protocol was to test the calibration curve of the positive control according to the manufacturer's instructions for the system operation. The quality requirements for each reagent, according to their specifications, were controlled. Normality in obtained values for each point of the curve in the analyzed period and also homogeneity of means and variances were studied by using Grubbs´ and Cochran´s tests, respectively. For the assay precision, each point of the curve was analyzed at 1st, 4th, 7th and 9th months by means of Levy-Jennings´ graphs, setting ± 2 standard deviations as limit values. The quality requirements of each component met the specifications up to 9th month; from that moment on, changes in the organoleptic characteristics of tetramethylbenzidine chromogen and deterioration in the operational characteristics of the system were observed due to substrate buffer. The remaining components did not change. The yielded values were accepted as normal up to the 9th month. Grubb´s and Cochran´s test values for the 6 points of the curve during the nine months were lower than the tabulated critical values for a= 5 percent, so homogeneity between means and variances was confirmed. Levey-Jennings´s graphs showed values within the set limits. These results allowed extending the validity period of the system to six months, with 50 percent coverage.

Anticorpos anti-intimina: análise da reatividade dos anticorpos policlonal e monoclonal, clonagem e expressão do fragmento variável de cadeia simples (scFv) do anticorpo monoclonal / Anti-intimin antibodies: polyclonal and monoclonal reactivity analyzes, cloning and expression of single chain fragment variable (scFv) of monoclonal antibodies

Intimina é o principal fator de virulência na patogênese de Escherichia coli enteropatogênica (EPEC) e de Escherichia coli enterohemorrágica (EHEC). A detecçãode EHEC e EPEC típica ou atípica é de fundamental impotância na definição da conduta terapêutica das infecções promovidas por E. coli, que ainda são a principal causa de diarreia aguda em crianças e adultos em muitos paises desenvolvidos e em desenvolvimento. Anticorpos são ferramentas importantes na detecção de diversos patógenos. Neste trabalho avaliou-se a sensibilidade e especificidade dos anticorpos policlonal e monoclonal anti-intimina frente a isolados de EPEC e EHEC por immunoblotting. Os anticorpos apresentam 100% de especificidade e a sensibilidade foi de 97%, 92% e 78%, quando se utilizou a fração enriquecida em IgG do soro de coelho, antissoro de rato e anticorpo monoclonal, respectivamente. Esse anticorpo monoclonal anti-intimina foi caracterizado como IgG2b e 1 μg desse corpo reconheceu 0,6 μg de intimina purificada com uma constante de dissociação de 1.3 x 10&sup-8; M. A menor reatividade do anticorpo monoclonal em relação aos anticorpos policlonais levou-nos à clonagem e expressão do fragmento variável de cadeia simples desse anticorpo (scFv). Para isto, o mRNA do hibridoma anti-intimina foi extraído, reversamente transcrito para cDNA e amplicadas as cadeias leve e pesada da fração variável do anticorpo, utilizando iniciadores aleatórios comerciais. As cadeias amplificadas foram ligadas ao vetor pGEM-T Easy e sequenciadas. Iniciadores específicos foram desenhados e utilizados em uma estratégia de amplificação e união das cadeias, formando o scFv, que por sua vez foi clonado no vetor de expressao pAE. Linhagem E. coli BL 21(DE3)pLys foi transformada com o plasmídeo pAE-scFv anti-intimina e submetida a indução proteíca. O scFv anti-intimina foi expresso de forma insolúvel, solubilizado, purificado e submetido ao ensaio de refolding. O rendimento obtido foi de 1 mg de proteina por 100mL...

Intimin is the major virulence factor involved in the pathogenesis of enteropathogenic Escherichia coli(EPEC) and enterohemorrhagic Escherichia coli(EHEC). The detection of EHEC and typical or atypical EPEC has fundamental importance in defining the therapeutic management of infections causes by E. Coli, which are still the leading cause of acute diarrhea in children and adults in many developed and developing countries. Antibodies are important tools in the detection of several pathogens. In this study it was evaluated the sensitivity and specificityit of polyclonal and monoclonal antibodies against intimin in the detection of EPEC AND EHEC by immunobloting. All employed antibodies showed 100% specifity and sensitivity was 97%, 92% and 78% for rabbit anti-intimin IgG-enriched fraction, rat antisera and monoclonal antibody, repectively. This anti-intimin monoclonal was characterized as IgG2b and 1 μg recognized 0.6 μg of purified intimin with a dissociation constant of 1.3 x 10&sup-8;M. The less extend reactivity of monoclonal led us to clone and express the single chain fragment variable of this antibody (scFV). Thus, the anti-intimin hybridoma mRNA was extrated, reverse transcribed to cDNA and the light and heavy chains of variable fragment of the antibody were amplified using commercial random primers. The chains were amplified, ligated to the pGEM-T Easy vector and the insert was sequenced. Specific primers were designed and used in strategy to amplify and link the chains, obtaining the scFv, wich was cloned into the pAE expression vector. E. coli BL21(DE3)plys was transformed with the pAE-scFv anti-intimin plasmid and subjected to induction to protein expression. The scFv anti-intimin, expressed in the insoluble fraction, was purified and submitted to refolding. The yield was 1 mg of protein per 100 mL of bacterial culture. To test the functionalityof scFv, ELISA and immunofluorescence assays were performed. The results showed 275 ng of scFv...