Molecular detection and phylogenetic analysis of Wolbachia infection in common mosquito species in Henan Province / 中国血吸虫病防治杂志

OBJECTIVE@#To investigate the infection and genotypes of Wolbachia in common mosquito species in Henan Province, so as to provide insights into management of mosquito-borne diseases.@*METHODS@#Aedes, Culex and Anopheles samples were collected from cowsheds, sheepfolds and human houses in Puyang, Nanyang City and Xuchang cities of Henan Province from July to September, 2022, and the infection of Wolbachia was detected. The 16S rDNA and wsp genes of Wolbachia were amplified and sequenced. Sequence alignment was performed using the BLAST software, and the obtained 16S rDNA gene sequence was compared with the sequence of the 16S rDNA gene in GenBank database. In addition, the phylogenetic trees were created based on 16S rDNA and wsp gene sequences using the software MEGA 11.0.@*RESULTS@#A total 506 female adult mosquitoes were collected from three sampling sites in Nanyang, Xuchang City and Puyang cities from July to September, 2022. The overall detection of Wolbachia was 45.1% (228/506) in mosquitoes, with a higher detection rate in A. albopictus than in Cx. pipiens pallens [97.9% (143/146) vs. 50.6% (85/168); χ2 = 88.064, P < 0.01]. The detection of Wolbachia in Cx. pipiens pallens was higher in Xuchang City (96.8%, 62/64) than in Nanyang (15.6%, 7/45) and Puyang cities (27.1%, 16/59) (χ2 = 89.950, P < 0.01). The homologies of obtained Wolbachia 16S rDNA and wsp gene sequences were 95.3% to 100.0% and 81.7% to 99.8%. Phylogenetic analysis based on wsp gene sequences showed Wolbachia supergroups A and B in mosquito samples, with wAlbA and wMors strains in supergroup A and wPip and wAlbB strains in supergroup B. Wolbachia strain wAlbB infection was detected in A. albopictus in Puyang and Nanyang Cities, while Wolbachia strain wPip infection was identified in A. albopictus in Xuchang City. Wolbachia strain wAlbA infection was detected in Cx. pipiens pallens sampled from three cities, and one Cx. pipiens pallens was found to be infected with Wolbachia strain wMors in Nanyang City.@*CONCLUSIONS@#Wolbachia infection is commonly prevalent in Ae. albopictus and Cx. pipiens pallens from Henan Province, and Wolbachia strains wAlbB and wAlbA are predominant in Ae. albopictus, while wPip strain is predominant in Cx. pipiens pallens. This is the first report to present Wolbachia wMors strain infection in Cx. pipiens pallens in Henan Province.

Impact of the microbiome on mosquito-borne diseases

Mosquito-borne diseases present a significant threat to human health, with the possibility of outbreaks of new mosquito-borne diseases always looming. Unfortunately, current measures to combat these diseases such as vaccines and drugs are often either unavailable or ineffective. However, recent studies on microbiomes may reveal promising strategies to fight these diseases. In this review, we examine recent advances in our understanding of the effects of both the mosquito and vertebrate microbiomes on mosquito-borne diseases. We argue that the mosquito microbiome can have direct and indirect impacts on the transmission of these diseases, with mosquito symbiotic microorganisms, particularly Wolbachia bacteria, showing potential for controlling mosquito-borne diseases. Moreover, the skin microbiome of vertebrates plays a significant role in mosquito preferences, while the gut microbiome has an impact on the progression of mosquito-borne diseases in humans. As researchers continue to explore the role of microbiomes in mosquito-borne diseases, we highlight some promising future directions for this field. Ultimately, a better understanding of the interplay between mosquitoes, their hosts, pathogens, and the microbiomes of mosquitoes and hosts may hold the key to preventing and controlling mosquito-borne diseases.

Infection of Aedes mosquitoes by native Wolbachia in urban cemeteries of Southern Mexico / Infección de mosquitos Aedes con Wolbachia nativa en cementerios urbanos del sur de México

Abstract: Objective: To evaluate the prevalence of Wolbachia infections in Aedes spp. field populations from cemeteries of Southern Mexico. Materials and methods: Six cemeteries were selected to be sampled in the central part of the Soconusco region, Chiapas. Aedes albopictus and Ae. aegypti mosquitoes were collected during the rainy season of 2015. Females were analyzed individually by PCR to determine the presence of Wolbachia. Results: A field overall prevalence of 38% was found; only Ae. albopictus mosquitoes were positive. Conclusion: Local strains of Wolbachia were detected and have the potential to be applied as a biological method for vector control.

Resumen: Objetivo: Evaluar la presencia de Wolbachia en poblaciones de campo de Aedes spp. en cementerios del Sur de México. Material y métodos: Se seleccionaron seis cementerios como sitios de colecta para las poblaciones silvestres de Aedes albopictus y Ae. aegypti, en la región del Soconusco, Chiapas, durante la época de lluvias 2015. Se determinó la infección por Wolbachia en hembras individuales por PCR. Resultados: Se obtuvo una infección de 38% por Wolbachia en Ae. albopictus. Conclusión: Existen cepas locales de Wolbachia en los mosquitos y poseen el potencial de aplicarse como medida de control biológico de vectores.

Bartonella rochalimae, B. grahamii, B. elizabethae, and Wolbachia spp. in Fleas from Wild Rodents near the China-Kazakhstan Border

The Alataw Pass, near the Ebinur Lake Wetland (northwest of China) and Taldykorgan (east of Kazakhstan), is a natural habitat for wild rodents. To date, little has been done on the surveillance of Bartonella spp. and Wolbachia spp. from fleas in the region. Here we molecularly detected Bartonella spp. and Wolbachia spp. in wild rodent fleas during January and October of 2016 along the Alataw Pass-Kazakhstan border. A total of 1,706 fleas belonging to 10 species were collected from 6 rodent species. Among the 10 flea species, 4 were found to be positive for Wolbachia, and 5 flea species were positive for Bartonella. Molecular analysis indicated that i) B. rochalimae was firstly identified in Xenopsylla gerbilli minax and X. conforms conforms, ii) B. grahamii was firstly identified in X. gerbilli minax, and iii) B. elizabethae was firstly detected in Coptopsylla lamellifer ardua, Paradoxopsyllus repandus, and Nosopsyllus laeviceps laeviceps. Additionally, 3 Wolbachia endosymbionts were firstly found in X. gerbilli minax, X. conforms conforms, P. repandus, and N. laeviceps laeviceps. BLASTn analysis indicated 3 Bartonella species showed genotypic variation. Phylogenetic analysis revealed 3 Wolbachia endosymbionts were clustered into the non-Siphonaptera Wolbachia group. These findings extend our knowledge of the geographical distribution and carriers of B. rochalimae, B. grahamii, B. elizabethae, and Wolbachia spp. In the future, there is a need for China-Kazakhstan cooperation to strengthen the surveillance of flea-borne pathogens in wildlife.

Phylogeny of the Trichogramma endosymbiont Wolbachia, an alpha-proteobacteria (Rickettsiae) / Filogenia do endosimbionte Wolbachia em Trichogramma, an alpha-proteobacteria (Rickettsiae)

Abstract Wolbachia (Hertig) endosymbionts are extensively studied in a wide range of organisms and are known to be transmitted through the egg cytoplasm to the offsping. Wolbachia may cause several types of reproductive modifications in arthropods. In Trichogramma species, parthenogenesis-inducing Wolbachia bacteria allow females wasps to produce daughters from unfertilized eggs and these bacteria are present in at least 9% of all Trichogramma species. Phylogenetic studies have led to the subdivision of the Wolbachia clade in five supergroups (A, B, C, D and E) and Wolbachia from Trichogramma belong to supergroup B. Here, using the wsp gene, four groups of Wolbachia that infect Trichogramma species were distinguished and the addition of a new group "Ato" was suggested due to the addition of Wolbachia from Trichogramma atopovirilia (Oatman and Platner). Specific primers were designed and tested for the "Ato" group. Seventy-five percent of all evaluated Wolbachia strains from Trichogramma fell within "Sib" group.

Resumo Endosimbiontes do gênero Wolbachia (Hertig) são extensivamente estudados em uma ampla gama de organismos e são conhecidos por serem transmitidos via citoplasma do ovo hospedeiro para seu descendente. Wolbachia pode causar vários tipos de alterações reprodutivas nos artrópodes. Nas espécies de Trichogramma, a reprodução partenogenética induzida por Wolbachia, possibilita as fêmeas dos parasitoides a produção de fêmeas a partir de ovos não fertilizados e estas bactérias estão presentes em pelo menos 9% de todas as espécies de Trichogramma. Estudos filogenéticos têm levado a subdivisão do clado Wolbachia em cinco supergrupos (A, B, C, D and E). Wolbachia em Trichogramma pertence ao supergrupo B. Com o gene wsp foi possível se distinguir quatro grupos de Wolbachia que infectam Trichogramma e adicionar um novo grupo (Ato) devido a inclusão de Wolbachia detectada em Trichogramma atopovirilia (Oatman and Platner, 1983). Primers específicos foram construídos e testados para o grupo "Ato". Setenta e cinco por cento de todas as linhagens de Wolbachia que infectam Trichogramma se enquadraram dentro do grupo "Sib".

Knowledge And Practice Regarding Dengue Fever And Acceptance Towards Wolbachia Among Universiti Kebangsaan Malaysia Medical Centre Healthcare Staff

@#Field trials of Wolbachia-transinfected mosquitoes, as a biological approach to curb dengue transmission, have been initiated. This study aimed to determine the knowledge regarding dengue fever (DF), practice of vector control, and acceptance of Wolbachia as a dengue control method among Universiti Kebangsaan Malaysia Medical Centre (UKMMC) healthcare staff. A questionnaire assessing knowledge regarding DF, vector control practices, and acceptance of Wolbachia was conducted among 330 UKMMC healthcare staff via convenience sampling. More than 70% of the respondents had good knowledge regarding DF, good vector control practice, and good acceptance of Wolbachia. Being female and having household income >MYR3000 had higher odds of having good knowledge regarding DF [(aOR 2.40; 95%CI 1.13, 5.12) and (aOR 3.86; 95%CI 1.91, 7.80)]. Having household income >MYR3000 had higher odds of having good vector control practice (aOR 2.33; 95%CI 1.20, 4.54) while academicians were three times (1-0.24) less likely to have good vector control practice than non-academicians (aOR 0.24; 95%CI 0.13, 0.48). Good acceptance of Wolbachia was associated with being academicians (aOR 8.83; 95%CI 2.60, 29.96) and having good knowledge regarding DF (aOR 6.07; 95% CI 2.89, 12.74). Gender, different income level and type of occupation have significant association with either good knowledge regarding DF or practice on vector control. Different type of occupation and level of knowledge also were notably significantly associated with good acceptance on Wolbachia as dengue biological control. These factors may be the focus for future plan to enhance the knowledge, acceptance and practice regarding DF and its control.

Molecular Identification of Bartonella melophagi and Wolbachia Supergroup F from Sheep Keds in Xinjiang, China

To confirm that Bartonella and Wolbachia were carried by sheep keds (Melophagus ovinus) in southern Xinjiang of China, 17 M. ovinus samples, which were collected in Aksu Prefecture, Xinjiang, were randomly selected. In this study, the Bartonella gltA and Wolbachia 16S rRNA gene were amplified through conventional PCR and the sequence of those amplified products, were analyzed. The results demonstrated that Bartonella was carried by all of the 17 sheep keds and Wolbachia was carried by 15 out of them. Bartonella was identified as B. melophagi. Three strains of Wolbachia were supergroup F and 1 strain has not been confirmed yet. It is the first report about Wolbachia supergroup F was found in sheep keds and provided the molecular evidence that B. melophagi and Wolbachia supergroup F were carried by sheep keds in Aksu Prefecture of southern Xinjiang, China. The 2 pathogens were found in sheep keds around Taklimakan Desert for the first time.

Papel de la bacteria endosimbionte Wolbachia en el control de enfermedades vectoriales: dengue, zika y chikunkunya / (Role of endosymbiont bacteria Wolbachia in the control of vectorial diseases such as dengue, zika and chikunkunya)

ResumenWolbachia es un género de bacterias perteneciente al orden Rickettsiales, que participa en diversas relaciones simbióticas con varios organismos, principalmente artrópodos y nematodos.Debido a su capacidad para inducir ciertos fenotipos reproductivos en sus hospederos, constituye un atractivo candidato para su uso como control biológico de plagas y vectores. Con el fin de proporcionar información sobre esta bacteria y sus posibles aplicaciones de control en la lucha contra el dengue y otras enfermedades transmitidas por vectores, se realizó una revisión utilizando las bases de datos de Pubmed y BINASS. Como metodología se incluyeron artículos en lengua inglesa, referentes a Wolbachia y su uso como control biológico, entre 2001 y 2017, hallados bajo las palabras clave: Wolbachia, control biológico, dengue, zika, chikungunya. Se puede resaltar que la aplicación de esta estrategia de control biológico en Costa Rica constituye un reto que involucraría el apoyo de autoridades políticas, trabajando en conjunto con los sectores académico y comunitario.

AbstractWolbachia is a genus of bacteria belonging to the order Rickettsiales that participates in diverse symbiotic relationships with several organisms, mainly arthropods and nematodes. Due to its ability to induce certain reproductive phenotypes in its hosts, it is an attractive candidate for its use as a biological agent to control of pests and vectors. In order to provide information on this bacterium and its potential control applications in the fight against dengue and other vector-borne diseases, a review was performed using Pubmed and BINASS databases. Articles in English referring to Wolbachia and its use as biological control between 2001 and 2017 where included in the search; and were found under the key words: Wolbachia, biological control, dengue, zika, chikungunya.It can be emphasized that the implementation of this biological control strategy in Costa Rica constitutes a challenge that would involve the support of the political authorities working along with the academic and community sector.

O papel da resistência a inseticidas e da densidade de Aedes aegypti na disseminação da Wolbachia em populações nativas do Rio de Janeiro, Brasil / The role of insecticide resistance and Aedes aegypti density in the spread of Wolbachia in native populations of Rio de Janeiro, Brazil

No Brasil encontra-se em andamento liberações de Aedes aegypti infectados com Wolbachia, uma bactéria que reduz, experimentalmente, a transmissão de arbovírus como os vírus dengue, chikungunya e Zika. Testes em áreas da Austrália, Indonésia e Vietnã confirmaram uma invasão rápida e estável de Ae. aegypti contendo a cepa wMel sobre a população selvagem. No Rio de Janeiro, liberações semanais de Ae. aegypti com Wolbachia (linhagem wMelBr) foram iniciadas em setembro de 2014. Entretanto, diferentemente do observado naqueles países, a primeira liberação de Ae. aegypti infectados com Wolbachia na América Latina não logrou êxito. Durante 20 semanas consecutivas, a linhagem wMelBr foi liberada no Rio, mas um platô inesperado (devido à introdução semanal de milhares de mosquitos e ao efeito da incompatibilidade citoplasmática) foi observado nas semanas 7 a 19. Primeiramente, realizamos experimentos de marcação-soltura-recaptura durante as liberações para verificar o número de mosquitos liberados e a densidade populacional dos mosquitos selvagens. Após esses resultados, dobramos o número de indivíduos liberados. Comparamos também a aptidão física (fitness) dos mosquitos wMelBr com a dos nativos. Os mosquitos wMelBr apresentaram tamanho de asas maior, menor mortalidade e uma razão sexual de 1,2: 1 para as fêmeas e, a análise de mtDNA, não mostrou falha na transmissão materna da bactéria. Todas estas características favorecem a invasão da wMelBr. Entretanto, apesar da frequência de wMelBr atingir 65% em campo na semana 20, ela caiu dramaticamente nas quatro semanas seguintes ao fim das liberações. Animado pelo aumento de venda de inseticidas spray, o dono da mercearia local manifestou desejo de que as liberações fossem incessantes, chamando-nos atenção para o possível status da resistência a inseticidas na linhagem liberada

A wMelBr permanecera em endocruzamento por 17 gerações em laboratório e os genótipos de resistência a piretroides (PI) diminuíram de 68% para 3,5%. Ou seja, havíamos liberado mosquitos altamente suscetíveis a PI em uma área cuja população selvagem que era altamente resistente. Após isso, uma segunda linhagem (wMelRio), com alelos de resistência a PI, foi gerada em laboratório e liberada simultaneamente em dois locais no Rio de Janeiro. Os alelos de resistência foram mantidos em wMelRio, em laboratório, por introdução de 50% de machos selvagens a cada duas gerações. Após 18 meses sem liberações adicionais, a frequência da wMelRio em campo era > 90%, em ambos os locais, evidenciando o sucesso em campo. A linhagem wMelRio é resistente a PI e ao larvicida temephos, e suscetível ao malathion e ao diflubenzuron, os compostos químicos atualmente utilizados no controle vetorial. Modelos matemáticos foram aplicados para testar como diferentes estratégias de liberação (variações na suscetibilidade a inseticidas das linhagens, custo de fitness da resistência a inseticidas) aumentam a chance de invasão da Wolbachia. Nossos resultados indicam uma invasão bem sucedida em duas situações: 1) liberando-se mosquitos suscetíveis em um ambiente sem uso de inseticidas (pode causar uma reversão nos níveis de resistência aos inseticidas); e 2) liberando-se mosquitos resistentes (wMelRio) em uma população resistente (como no Rio de Janeiro), mesmo com um elevado uso de inseticidas. Portanto, a implementação da tecnologia de liberação de Ae. aegypti infectado com Wolbachia como potencial estratégia para redução da transmissão de arbovírus deve considerar o perfil de resistência aos inseticidas da população selvagem, e da linhagem liberada, para alcançar uma invasão bem sucedida em campo. (AU)

Antifilarial and Antibiotic Activities of Methanolic Extracts of Melaleuca cajuputi Flowers

We evaluated the activity of methanolic extracts of Melaleuca cajuputi flowers against the filarial worm Brugia pahangi and its bacterial endosymbiont Wolbachia. Anti-Wolbachia activity was measured in worms and in Aedes albopictus Aa23 cells by PCR, electron microscopy, and other biological assays. In particular, microfilarial release, worm motility, and viability were determined. M. cajuputi flower extracts were found to significantly reduce Wolbachia endosymbionts in Aa23 cells, Wolbachia surface protein, and microfilarial release, as well as the viability and motility of adult worms. Anti-Wolbachia activity was further confirmed by observation of degraded and phagocytized Wolbachia in worms treated with the flower extracts. The data provided in vitro and in vivo evidence that M. cajuputi flower extracts inhibit Wolbachia, an activity that may be exploited as an alternative strategy to treat human lymphatic filariasis.

Finding Wolbachia in Filarial larvae and Culicidae Mosquitoes in Upper Egypt Governorate

Wolbachia is an obligatory intracellular endosymbiotic bacterium, present in over 20% of all insects altering insect reproductive capabilities and in a wide range of filarial worms which is essential for worm survival and reproduction. In Egypt, no available data were found about Wolbachia searching for it in either mosquitoes or filarial worms. Thus, we aimed to identify the possible concurrent presence of Wolbachia within different mosquitoes and filarial parasites, in Assiut Governorate, Egypt using multiplex PCR. Initially, 6 pools were detected positive for Wolbachia by single PCR. The simultaneous detection of Wolbachia and filarial parasites (Wuchereria bancrofti, Dirofilaria immitis, and Dirofilaria repens) by multiplex PCR was spotted in 5 out of 6 pools, with an overall estimated rate of infection (ERI) of 0.24%. Unexpectedly, the highest ERI (0.53%) was for Anopheles pharoensis with related Wolbachia and W. bancrofti, followed by Aedes (0.42%) and Culex (0.26%). We also observed that Wolbachia altered Culex spp. as a primary vector for W. bancrofti to be replaced by Anopheles sp. Wolbachia within filaria-infected mosquitoes in our locality gives a hope to use bacteria as a new control trend simultaneously targeting the vector and filarial parasites.

Capacidade de bloqueio a patógenos de cepas de Wolbachia em Aedes sp

A bactéria Wolbachia pipientis tem sido investigada como nova estratégia de controle biológico que pode ser usada simultaneamente com as medidas de controle de vetores já existentes. O potencial desse endossimbionte para o controle de doenças trasnmitidas por vetores está na sua capacidade de induzir diversos efeitos no hospedeiro, dentre eles a capacidade de bloquear patógenos. Nos dias de hoje existem técnicas de transinfecção que permitem criar associações entre Wolbachia e hospedeiros que não abrigam a bactéria naturalmente. Estudos anteriores têm demonstrado que nesses casos o fenótipo de bloqueio é mais intenso em comparação àquele observado em mosquitos com infecção natural. As infecções nativas podem se atenuar depois de um processo de coevolução entre o hospedeiro e o endossimbionte, entretanto, sob condições específicas, possivelmente seja observada uma capacidade residual de interferência a patógenos. Uma dessas circunstâncias pode ser a carga parasitária adquirida pelo vetor em uma alimentação sanguínea. Diante do exposto, realizamos uma análise comparativa entre a capacidade de bloqueio em duas espécies de Aedes infectados com Wolbachia, o mosquito Aedes fluviatilis com a cepa natural wFlu, e o Aedes aegypti transinfectado com a cepa wMel. Mosquitos tratados com tetraciclina foram usadas como controle para cada espécie. Investigamos a capacidade de bloqueio para o Dengue vírus e para o modelo de malária aviária Plasmodium gallinaceum.

Os mosquitos foram infectados diretamente em aves com curvas ascendentes de parasitemias ou via alimentação sanguínea artificial e os intestinos foram dissecados 7 dias após infecção para contagem de oocistos. Em outra série de experimentos vírus dengue sorotipo 3 foi adicionado a sangue humano para obter titulações que variaram de 106 a 103 PFU/mLe as cargas virais foram quantificadas aos 7 e 14 dias pós infecção sanguínea por RT-qPCR.

Em contraste ao que foi observado para o P. gallinaceum,observamos diferentes respostas ao virus nas duas espécies de Aedes, a cepa wMel induziu forte interferencia a este patógeno enquanto que wFlu levou ao aumento da susceptibilidade no Ae. fluviatilis aos 7 dias pós infecção. Diante desses resultados investigamos a presença do vírus na saliva de Ae. fluviatilis. Mais uma vez foi observado aumento da susceptibilidade dos mosquitos da linhagem wFlu e detectamos a presença do virus em parte das salivas coletadas. Nossos dados sugerem que a cepa wMel não é eficiente no bloqueio do P. gallinaceum, o que indica que a capacidade de interferencia não é uma característica universal para os diferentes patógenos. Constatamos que a carga parasitária não é um fator que induz a capacidade de bloqueio em Ae fluviatilis, já que esse feito não foi observado em nenhuma das parasitemias testadas. Criticamente, demonstramos o potencial aumento da susceptibilidade de Ae. fluviatilis ao vírus dengue em uma infecção nativa de Wolbachia. Nossos resultados destacaram que a análise da capacidade de bloqueio a patógenos em mosquitos transinfectados com Wolbachia é complexa e que o estudo de espécies correlatas naturalmente infectadas por este endossimbionte podem ajudar a esclarecer questões relacionadas com o fenótipo de bloqueio de infecção a patógenos.

ITS-2 sequences-based identification of Trichogramma species in South America / Identificação molecular de espécies de Trichogramma na América do Sul via sequenciamento da região ITS-2

Abstract ITS2 (Internal transcribed spacer 2) sequences have been used in systematic studies and proved to be useful in providing a reliable identification of Trichogramma species. DNAr sequences ranged in size from 379 to 632 bp. In eleven T. pretiosum lines Wolbachia-induced parthenogenesis was found for the first time. These thelytokous lines were collected in Peru (9), Colombia (1) and USA (1). A dichotomous key for species identification was built based on the size of the ITS2 PCR product and restriction analysis using three endonucleases (EcoRI, MseI and MaeI). This molecular technique was successfully used to distinguish among seventeen native/introduced Trichogramma species collected in South America.

Resumo Sequências do Espaço Transcrito Interno 2 (ITS2) têm sido utilizadas em estudos taxonômicos e sua utilidade constatada pela confiabilidade que o método confere à identificação das espécies de Trichogramma. Esta técnica molecular foi bem sucedida em distinguir dezessete espécies nativas e introduzidas de Trichogramma, coletadas na América do Sul. As sequências do DNAr variaram de 379 a 632 pb. Em 11 linhagens de T. pretiosum estudadas, o endosinbionte Wolbachia foi detectado pela primeira vez. Estas linhagens telítocas foram encontradas no Peru (9), Colômbia (1) e Estados Unidos (1). Uma chave dicotômica para identificação de espécies foi construída baseada no tamanho do produto da PCR do ITS2 e em análises de restrição utilizando-se três endonucleases (EcoRI, MseI and MaeI).

Wolbachia spp. interfere na detecção molecular de Ehrlichia canis e Anaplasma platys em cães com microfilaremia / Wolbachia spp. interferes with molecular detection of Ehrlichia canis and Anaplasma platys in microfilaremic dogs

This report aimed to study the interference in molecular testing for Ehrlichia canis and Anaplasma platys in blood of 155 dogs from the coastal region of Rio de Janeiro. Five Anaplasmataceae positive samples but negative for E. canis and A. platys, from microfilaremic animals, were chosen for sequencing. These sequences, when compared to Gen et Bank database, showed 88% to 100% similarity with Wolbachia spp. denoting an interference in the detection of DNA from other members of Anaplasmataceae, possibly due to a high concentration of Wolbachia spp. DNA.(AU)

Análise do conteúdo de uma tecnologia para raciocínio diagnóstico de enfermagem / Análisis de contenido de una tecnología para el razonamiento diagnóstico en enfermería / Content analysis of a technology to the nursing diagnostic reasoning

RESUMO Objetivo: submeter à análise do conteúdo uma estratégia metacognitiva de avaliação indireta no pré-encontro com o cliente. Método: estudo metodológico. Utilizou-se o índice de concordância e confiabilidade entre juízes para os critérios de pertinência, adequação, clareza, concisão e precisão de uma tecnologia para raciocínio diagnóstico de enfermagem por iniciantes por meio de formulário eletrônico. Fizeram parte da amostra 13 juízes. Os dados foram analisados por estatística descritiva. Resultados: houve alta concordância e confiabilidade interavaliadores para 85 itens relacionados à etapa de coleta de dados e descrição da estratégia. Apenas cinco itens não alcançaram os critérios de validação e devem ser reformulados. Conclusão: a avaliação indireta no préencontro é pertinente ao processo de raciocínio diagnóstico, sendo possível desenvolver habilidades e competências diagnósticas no iniciante por meio de estratégias, propostas em uma tecnologia inovadora sob a forma de diagrama. .

RESUMEN Objetivo: analizar el contenido de una estrategia metacognitiva de la evaluación indirecta en la reunión previa con el cliente. Método: investigación metodológica; se utilizó el índice de concordancia y confiabilidad interevaluadores a los criterios de pertinencia, claridad adecuación, concisión y precisión de una tecnología para el razonamiento diagnóstico de enfermería para los principiantes a través de medios electrónicos. La muestra estuvo conformada por 13 jueces. Los datos fueron analizados utilizando estadística descriptiva. Resultados: alta confiabilidad interevaluadores de 85 artículos relacionados con la etapa de recolección de datos y la descripción de la estrategia. Sólo 05 artículos no alcanzaron los criterios de validación y deben ser modificados. Conclusión: se concluye que la evaluación indirecta en la reunión previa es relevante para el proceso de razonamiento de diagnóstico, es posible desarrollar habilidades y destrezas de diagnóstico a los principiantes a través de estrategias, propuestas sobre la tecnología innovadora en la forma de un diagrama. .

ABSTRACT Objective: to undergo a content analysis of a metacognitive strategy of indirect assessment in the pre-encounter with the client. Method: methodological study. Agreement and inter-rater reliability index for the criteria: relevance, adequacy, clarity, conciseness and accuracy of a technology to the nursing diagnosis reasoning for novices through an electronic form. The sample consisted of 13 raters. Data were analyzed using descriptive statistics. Results: high agreement and inter-rater reliability for 85 items related to data collection stage and the strategy description. Only fi ve items did not reach the validation criteria and must be rewritten. Conclusion: indirect assessment of the pre-encounter is relevant to the diagnostic reasoning process, being possible to develop competencies and diagnostic skills in the novice through strategies, proposals on innovative technology in the form of a diagram. .

Relationship between Neutrophil-To-Lymphocyte Ratio and Electrocardiographic Ischemia Grade in STEMI / Associação entre a Relação Neutrófilos/Linfócitos e o Grau de Isquemia Eletrocardiográfica no IAMEST

Background: Neutrophil-to-lymphocyte ratio (NLR) has been found to be a good predictor of future adverse cardiovascular outcomes in patients with ST-segment elevation myocardial infarction (STEMI). Changes in the QRS terminal portion have also been associated with adverse outcomes following STEMI. Objective: To investigate the relationship between ECG ischemia grade and NLR in patients presenting with STEMI, in order to determine additional conventional risk factors for early risk stratification. Methods: Patients with STEMI were investigated. The grade of ischemia was analyzed from the ECG performed on admission. White blood cells and subtypes were measured as part of the automated complete blood count (CBC) analysis. Patients were classified into two groups according to the ischemia grade presented on the admission ECG, as grade 2 ischemia (G2I) and grade 3 ischemia (G3I). Results: Patients with G3I had significantly lower mean left ventricular ejection fraction than those in G2I (44.58 ± 7.23 vs. 48.44 ± 7.61, p = 0.001). As expected, in-hospital mortality rate increased proportionally with the increase in ischemia grade (p = 0.036). There were significant differences in percentage of lymphocytes (p = 0.010) and percentage of neutrophils (p = 0.004), and therefore, NLR was significantly different between G2I and G3I patients (p < 0.001). Multivariate logistic regression analysis revealed that only NLR was the independent variable with a significant effect on ECG ischemia grade (odds ratio = 1.254, 95% confidence interval 1.120–1.403, p < 0.001). Conclusion: We found an association between G3I and elevated NLR in patients with STEMI. We believe that such an association might provide an additional prognostic value for risk stratification in patients with STEMI when combined with standardized risk scores. .

Fundamento: A relação neutrófilos/linfócitos (N/L) tem sido descrita como boa preditora de eventos cardiovasculares adversos futuros em pacientes com infarto agudo do miocárdio com elevação do segmento ST (IAMEST). Mudanças na porção terminal do complexo QRS também têm sido associadas a eventos adversos após IAMEST. Objetivo: Investigar a associação entre o grau de isquemia no ECG e a relação N/L em pacientes com IAMEST para determinar fatores de risco convencionais adicionais na estratificação precoce de risco. Métodos: Pacientes com IAMEST foram investigados. O grau de isquemia foi analisado a partir do ECG obtido à admissão. A contagem de leucócitos e seus subtipos foi realizada a partir de hemograma automatizado. De acordo com o grau de isquemia presente no ECG de admissão, os pacientes foram classificados em dois grupos, isquemia grau 2 (IG2) e isquemia grau 3 (IG3). Resultados: Pacientes com IG3 apresentaram valores médios significativamente menores de fração de ejeção do ventrículo esquerdo do que os pacientes com IG2 (44,58 ± 7,23 versus 48,44 ± 7,61; p = 0,001). Como esperado, a taxa de mortalidade intra-hospitalar aumentou proporcionalmente com o aumento no grau de isquemia (p = 0,036). Houve diferenças significativas nas porcentagens de linfócitos (p = 0,010) e de neutrófilos (p = 0,004) e, portanto, a relação N/L diferiu significativamente entre pacientes com IG2 e IG3 (p < 0,001). À análise de regressão logística multivariada, apenas a relação N/L emergiu como variável independente com efeito significativo sobre o grau de isquemia no ECG (odds ratio = 1,254; intervalo de confiança de 95% 1,120-1,403; p < 0,001). Conclusão: Nós encontramos uma associação entre IG3 e relação N/L aumentada em pacientes com IAMEST. Acreditamos que esta associação possa oferecer um valor prognóstico adicional para estratificação de risco em pacientes com IAMEST quando usado em combinação com escores de risco padronizados. .

Avaliação da influência da Wolbachia na infecção e transmissão vertical do vírus dengue em mosquitos Aedes aegypti

A dengue é um problema médico crescente em países subtropicais e tropicais. A dengue é uma infecção viral que apresentem quatro sorotipos distintos, DENV-1 a -4, sendo recentemente relatado o quinto sorotipo, DENV-5, na Malásia. Estes são transmitidos pela picada de mosquitos infectados do gênero Aedes, sendo o Aedes aegypti o principal vetor. Atualmente, a prevenção e controle da dengue dependem exclusivamente de medidas de combate ao vetor, e estas apresentam-se ineficientes, principalmente em países em desenvolvimento. Nesse contexto, há a necessidade da busca de novas estratégias que possam ser utilizadas concomitantemente com as formas de controle já existentes. A Wolbachia é uma bactéria intracelular, amplamente conhecida por promover o fenótipo de bloqueio do vírus dengue em mosquitos A. aegypti. Apesar disto, não se conhece se a Wolbachia é capaz de interferir na infecção da progênie de mosquitos infectados com o vírus dengue, fenômeno conhecido como transmissão vertical. A transmissão vertical pode estar associada com a manutenção do vírus em períodos inter-epidêmicos ou em locais nos quais a transmissão ativa está diminuída.

Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar se a Wolbachia introduzida na linhagem brasileira de A. aegypti influencia a transmissão vertical da dengue. Duas metodologias de infecção foram utilizadas: infecção oral e nanoinjeção intratorácica, onde utilizou-se o DENV-4 e DENV-1,-3 e -4, respectivamente. Para estes experimentos, foram comparados mosquitos com Wolbachia (Mel) e uma linhagem de mosquitos tratada com antibiótico e portanto, livre da bactéria (Tet). Os ovos dos mosquitos infectados foram coletados em um período de 20 e 11 dias após a infecção, oral e injeções, respectivamente. A fecundidade e fertilidade, de forma geral, foram diminuídas na co-infecção da Wolbachia com o vírus dengue. Em todos os mosquitos infectados, não se observou diferenças na suscetibilidade ao vírus, porém a carga viral foi diminuída pela Wolbachia no DENV-4, em ambas as formas de infecção.

Foi possível a detecção de pools positivos independente da forma de infecção, demonstrando que a transmissão vertical do vírus dengue ocorreu, porém a proporção de pools positivos entre os grupos Mel e Tet não foi alterada. Entretanto, pudemos observar uma diminuição da carga viral nos pools positivos Mel. Os ovários na infecção oral, interessantemente, tiveram uma forte diminuição da suscetibilidade conferida pela Wolbachia. A carga viral dos ovários foi diminuída em DENV-1 e DENV-4, em ambas as formas de infecção. Os dados obtidos nestes experimentos apontam que a transmissão vertical do vírus dengue ocorreu em pequenas taxas. Independente da forma de infecção utilizada, as taxas não variaram, mostrando que os mecanismos que regulam a ocorrência da transmissão vertical precisam ser explorados. Concluímos que, a Wolbachia pode potencialmente ser responsável pela redução da transmissão vertical em campo. Isto é considerado um grande avanço no controle da dengue, se realmente for comprovada que a transmissão vertical é a responsável pela manutenção do vírus em períodos inter-epidêmicos.

Avaliação da influência da Wolbachia na infecção e transmissão vertical do vírus dengue em mosquitos Aedes aegypti / Evaluation of the influence of the Wolbachia infection and vertical transmission of dengue virus in Aedes aegypti mosquitoes

A dengue é um problema médico crescente em países subtropicais e tropicais. A dengue é uma infecção viral que apresentem quatro sorotipos distintos, DENV-1 a -4, sendo recentemente relatado o quinto sorotipo, DENV-5, na Malásia. Estes são transmitidos pela picada de mosquitos infectados do gênero Aedes, sendo o Aedes aegypti o principal vetor. Atualmente, a prevenção e controle da dengue dependem exclusivamente de medidas de combate ao vetor, e estas apresentam-se ineficientes, principalmente em países em desenvolvimento. Nesse contexto, há a necessidade da busca de novas estratégias que possam ser utilizadas concomitantemente com as formas de controle já existentes. A Wolbachia é uma bactéria intracelular, amplamente conhecida por promover o fenótipo de bloqueio do vírus dengue em mosquitos A. aegypti. Apesar disto, não se conhece se a Wolbachia é capaz de interferir na infecção da progênie de mosquitos infectados com o vírus dengue, fenômeno conhecido como transmissão vertical. A transmissão vertical pode estar associada com a manutenção do vírus em períodos inter-epidêmicos ou em locais nos quais a transmissão ativa está diminuída.

Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar se a Wolbachia introduzida na linhagem brasileira de A. aegypti influencia a transmissão vertical da dengue. Duas metodologias de infecção foram utilizadas: infecção oral e nanoinjeção intratorácica, onde utilizou-se o DENV-4 e DENV-1,-3 e -4, respectivamente. Para estes experimentos, foram comparados mosquitos com Wolbachia (Mel) e uma linhagem de mosquitos tratada com antibiótico e portanto, livre da bactéria (Tet). Os ovos dos mosquitos infectados foram coletados em um período de 20 e 11 dias após a infecção, oral e injeções, respectivamente. A fecundidade e fertilidade, de forma geral, foram diminuídas na co-infecção da Wolbachia com o vírus dengue. Em todos os mosquitos infectados, não se observou diferenças na suscetibilidade ao vírus, porém a carga viral foi diminuída pela Wolbachia no DENV-4, em ambas as formas de infecção.

Foi possível a detecção de pools positivos independente da forma de infecção, demonstrando que a transmissão vertical do vírus dengue ocorreu, porém a proporção de pools positivos entre os grupos Mel e Tet não foi alterada. Entretanto, pudemos observar uma diminuição da carga viral nos pools positivos Mel. Os ovários na infecção oral, interessantemente, tiveram uma forte diminuição da suscetibilidade conferida pela Wolbachia. A carga viral dos ovários foi diminuída em DENV-1 e DENV-4, em ambas as formas de infecção. Os dados obtidos nestes experimentos apontam que a transmissão vertical do vírus dengue ocorreu em pequenas taxas. Independente da forma de infecção utilizada, as taxas não variaram, mostrando que os mecanismos que regulam a ocorrência da transmissão vertical precisam ser explorados. Concluímos que, a Wolbachia pode potencialmente ser responsável pela redução da transmissão vertical em campo. Isto é considerado um grande avanço no controle da dengue, se realmente for comprovada que a transmissão vertical é a responsável pela manutenção do vírus em períodos inter-epidêmicos.

Detection of filarial parasites and Wolbachia endosymbiotic bacteria in mosquitoes by PCR

Wuchereria Bancroft; the principal etiologic agent of lymphatic filariasis is mosquito dependant in the biological transmission. Dirofilariasis is essentially a disease of canines which can also be trans-mitted to humans by culicine mosquitoes. Wolbachia are Rickettsia-like, obligatory intracellular bacteria that infect the reproductive and somatic tissues of some arthropods and nematodes. Our study aimed to identify the possible association between filarial parasites and Wolbachia by single and multiplex PCR. 1600 female mosquitoes collected from: four localities in Assiut Governorate, Egypt were microscopically identified and divided into 64 mosquito pools according to their genera and collection site. Single PCR was firstly conducted on mosquitoes followed by multiplex PCR for simultaneous detection of the three filarial parasites [Wucheraria bancrofti, Dirofilaria immitis, and Dirofilaria repens] and Wolbachia in mosquitoes. The results indicated that: Out of 64 mosquito pools, 8 pools were positive for Wuchererio bancrofti with estimated rate of infection [ERI 0.53%], 3 for each of Dirofilaria immitis and Dirofilaria repens [ERI 0.19%] and 6 pools were positive for Wolbachia [ERI 0.39%], five of them with filarial parasites [W. Bancrofti, D. immitis and D repens] [83.3%], with a significant P. value [< 0.05]. We concluded that there was a strong association between the presence of Wolbachia and filarial parasites that should be considered during the treatment of patients with filarial diseases by the use of specific anti-Wolbachia antibiotic in addition to the usual anti-filarial drugs

Detecção da bactéria Wolbachia em insetos através da técnica LAMP (amplificação isotérmica mediada por loop)

Wolbachia pipientis é uma bactéria intracelular que infecta cerca de 40% dos artrópodes e alguns nematódeos, causando alterações reprodutivas em seus hospedeiros. Recentemente, duas cepas de Wolbachia (wMelPop e wMel)foram inseridas individualmente em Aedes aegypti (não infectado naturalmente)e os mosquitos adultos contendo a Wolbachia foram menos suscetíveis a diferentes arboviroses (Dengue e Chikungunya) bem como ao Plasmodium sp. Atualmente, mosquitos A. aegypti contendo Wolbachia (wMel) estão sendo liberados a campo em diversos países, pelo Programa Eliminate Dengue, como possível agente de controle biológico de Dengue. Durante o processo de invasão de mosquitos contendo Wolbachia no campo, há a necessidade de realização de coletas e screening semanal de grandes quantidades de mosquitos para detecção de Wolbachia, via PCR quantitativo, técnica ainda bastante onerosa. Diante disto, é imprescindível o desenvolvimento de um método rápido, específico e de baixo custo para detecção de mosquitos infectados com a bactéria, para levantamento e monitoramento da disseminação da Wolbachia em campo. No presente trabalho, desenvolvemos com sucesso um método rápido de detecção através do LAMP (Amplificação isotérmica mediada por loop) que utiliza 3 pares de primers que se ligam em 8 regiões distintas do DNA alvo, o que torna a reação bastante específica. Em nosso caso, desenhamos iniciadores baseando-se na sequência alvo do gene 16S rRNA da bactéria. Para padronização, foram utilizados mosquitos da colônia do Insetário do Laboratório de Malária do CPqRR, infectados e não infectados por Wolbachia, além de insetos de campo (mosquitos e insetos de diferentes ordens) doados por colaboradores. O tempo de incubação estabelecido para a amplificação foi de 90 minutos à 63oC, sendo possível a realização da reação tanto em termociclador, como em banho seco.

Para análise da sensibilidade, foi feita a diluição seriada de plasmídeo contendo a sequência alvo de 109 à 100 cópias, sendo possível a amplificação utilizando apenas 1 cópia do DNA. Para verificar a especificidade, foram utilizadas amostras de diferentes espécies de bactérias e em nenhuma delas ocorreu a amplificação, confirmando que o LAMP é bastante específico. Uma maneira de reduzir os custos foi através da redução da concentração da enzima Bst DNA polimerase por reação e, com apenas 1 unidade, a amplificação ocorreu de maneira eficiente. Para visualização dos resultados, foram utilizados dois corantes, o azul de hidroxinaftol (HNB) e SYBR Green I. Em ambos foi possível diferenciar as amostras positivas das negativas sem a necessidade de géis de agarose, sendo que, com o HNB, não há manipulação de produto amplificado pois é adicionado antes da reação, o que evita possíveis contaminações, e também é possível observar a diferença de cores a olho nu, sem o uso de luz UV. Comparando os custos, em reais, para realização da técnica de PCR e LAMP, esta apresentou um custo de 53,92% menor em relação ao PCR, o que confirma ser uma técnica de baixo custo, já que não requer equipamentos sofisticados e nem eletroforese em gel de agarose para análise dos resultados.Desenvolvemos, neste trabalho, uma técnica para detecção de Wolbachia bastante especifica, rápida, sensível e de baixo custo a qual possibilita seu uso em larga escala para monitoramento de diversas espécies de insetos infectadas no campo.