Addition of synthetic amino acids in sheep semen improves its quality after cryopreservation / Adição de aminoácidos sintéticos no sêmen ovino melhora a qualidade espermática após a criopreservação do sêmen

Some amino acids can protect mammalian sperm cells against oxidation during thermal stress caused by freezing/thawing. Thus, the objective was to evaluate the protective action of the association of the amino acids L-proline (Pro) and L-glutamine (Glu) against the cryoinjury caused to sheep sperm after cryopreservation. Eight ejaculates were collected from four sheep (n=32) and diluted in Tris-Egg Yolk-Glycerol until the final concentration of 200 x106 sptz/mL and kept in a water bath at 32 °C. The amino acids were added as follows: control (without adding amino acids), Pro+Glu 1 (100 M Pro + 500 M Glu), Pro+Glu 2 (300 M Pro + 1000 M Glu), Pro+Glu 3 (500 M Pro + 1500 M Glu) and Pro+Glu 4 (700 M Pro + 2000 M Glu). Afterwards, the semen was cooled to 5 °C for 2 h, after that period, filled in 0.5 mL straws and then placed under liquid nitrogen vapor (N2L), 8 cm from the liquid sheet for 15 min, and then immersed on the N2L. The samples were analyzed for sperm motility, plasma membrane and acrosomal membrane integrity, mitochondrial activity and binding test. The variables were subjected to the normality tests (Lilliefors test) and homoscedasticity tests (Cochran and Bartlett test), afterwards the variables of normal distribution were subjected to analysis of variance and the means compared by the Tukey test with a significance level of 5%. The Pro+Glu 3 group exhibited sp

Alguns aminoácidos podem proteger as células espermáticas de mamíferos contra a oxidação durante o estresse térmico causado na congelação/descongelação. Dessa forma, objetivou-se avaliar a ação protetora da associação dos aminoácidos L-prolina (Pro) e L-glutamina (Glu) contra as crioinjúrias causadas aos espermatozoides de ovino após a criopreservação. Foram coletados oito ejaculados de quatro carneiros (n=32) e diluídos em Tris-Gema de ovo-Glicerol até a concentração final de 200 x106 sptz/mL e, mantidos em banho maria a 32 °C. Os aminoácidos foram adicionados da seguinte forma: controle (sem adição de aminoácidos), Pro+Glu 1 (100 μM Pro + 500 μM Glu), Pro+Glu 2 (300 μM Pro + 1000 μM Glu), Pro+Glu 3 (500 μM Pro + 1500 μM Glu) e Pro+Glu 4 (700 μM Pro + 2000 μM Glu). Depois, o sêmen foi resfriado a 5 °C por 2 h, após esse período, envasado em palhetas de 0,5 mL e então acondicionado sob vapor de nitrogênio líquido (N2L), a 8 cm da lâmina líquida por 15 min, e depois imersos no N2L. As amostras foram analisadas quanto à motilidade espermática, integridade da membrana plasmática e da membrana acrossomal, atividade mitocondrial e teste de ligação. As variáveis foram submetidas aos testes de normalidade (Teste de Lilliefors) e homocedacidade (Teste de Cochran e Bartlett), posteriormente as variáveis de distribuição normal foram submetidas à análise de variância e as médias comparadas pelo teste de Tukey com nível de significância de 5%. O grupo Pro+Glu 3 exibiu espermatozoides com uma maior (P<0,05) motilidade após o descongelamento. Além disso o maior percentual de integridade da membrana plasmatica e acrossomal foram obtidos utilizando Pro+Glu 1, Pro+Glu 2 e Pro+Glu 3; e Pro+Glu 2 e Pro+Glu 3, respectivamente. Os aminoácidos também mantiveram alta a atividade mitocondrial em comparação com o controle, com Pro+Glu 3 resultando numa maior atividade (P<0,05). A viabilidade dos espermatozoides foi maior (P<0,05) com o uso de Pro+Glu 2 e Pro+Glu 3 do que no controle. O número de espermatozoides que apresentaram à capacidade de ligação a membrana perivitelina da gema de ovo foi maior (P<0,05) no sêmen tratado com aminoácidos.

Addition of synthetic amino acids in sheep semen improves its quality after cryopreservation / Adição de aminoácidos sintéticos no sêmen ovino melhora a qualidade espermática após a criopreservação do sêmen

Some amino acids can protect mammalian sperm cells against oxidation during thermal stress caused by freezing/thawing. Thus, the objective was to evaluate the protective action of the association of the amino acids L-proline (Pro) and L-glutamine (Glu) against the cryoinjury caused to sheep sperm after cryopreservation. Eight ejaculates were collected from four sheep (n=32) and diluted in Tris-Egg Yolk-Glycerol until the final concentration of 200 x106 sptz/mL and kept in a water bath at 32 °C. The amino acids were added as follows: control (without adding amino acids), Pro+Glu 1 (100 µM Pro + 500 µM Glu), Pro+Glu 2 (300 µMPro + 1000 µM Glu), Pro+Glu 3 (500 µM Pro + 1500 µM Glu) and Pro+Glu 4 (700 µM Pro + 2000 µM Glu). Afterwards, the semen was cooled to 5 °C for 2 h, after that period, filled in 0.5 mL straws and then placed under liquid nitrogen vapor (N2L), 8 cm from the liquid sheet for 15min, and then immersed on the N2L. The samples were analyzed for sperm motility, plasma membrane and acrosomal membrane integrity, mitochondrial activity and binding test. The variables were subjected to the normality tests (Lilliefors test) and homoscedasticity tests (Cochran and Bartlett test), afterwards the variables of normal distribution were subjected to analysis of variance and the means compared by the Tukey test with a significance level of 5%. The Pro+Glu 3 group exhibited sperm with a greater (P<0.05) motility after thawing. In addition, the highest percentage of plasma and acrosomal membrane integrity were obtained using Pro+Glu 1, Pro+Glu 2 and Pro+Glu 3; and Pro+Glu 2 and Pro+Glu 3, respectively. Amino acids also kept mitochondrial activity high compared to the control, with Pro+Glu 3 resulting in greater activity (P<0.05). Sperm viability was higher (P<0.05) with the use of Pro+Glu 2 and Pro+Glu 3 than in the control. The number of sperm that showed the ability to bind to the egg yolk perivitelline membrane was higher (P<0.05) in semen treated with amino acids. It is concluded that the addition of synthetic amino acids in the semen of sheep before cryopreservation improves sperm quality and fertilization potential and can thus be added in cryopreservation protocols.

Alguns aminoácidos podem proteger as células espermáticas de mamíferos contra a oxidação durante o estresse térmico causado na congelação/descongelação. Dessa forma, objetivou-se avaliar a ação protetora da associação dos aminoácidos L-prolina (Pro) e L-glutamina (Glu) contra as crioinjúrias causadas aos espermatozoides de ovino após a criopreservação. Foram coletados oito ejaculados de quatro carneiros (n=32) e diluídos em Tris-Gema de ovo-Glicerol até a concentração final de 200 x106 sptz/mL e, mantidos em banho maria a 32 °C. Os aminoácidos foram adicionados da seguinte forma: controle (sem adição de aminoácidos), Pro+Glu 1 (100 µM Pro + 500 µM Glu), Pro+Glu 2 (300 µM Pro + 1000 µM Glu), Pro+Glu 3 (500 µM Pro + 1500 µM Glu) e Pro+Glu 4 (700 µM Pro + 2000 µM Glu). Depois, o sêmen foi resfriado a 5 °C por 2 h, após esse período, envasado em palhetas de 0,5 mL e então acondicionado sob vapor de nitrogênio líquido (N2L), a 8 cm da lâmina líquida por 15 min, e depois imersos no N2L. As amostras foram analisadas quanto à motilidade espermática, integridade da membrana plasmática e da membrana acrossomal, atividade mitocondrial e teste de ligação. As variáveis foram submetidas aos testes de normalidade (Teste de Lilliefors) e homocedacidade (Teste de Cochran e Bartlett), posteriormente as variáveis de distribuição normal foram submetidas à análise de variância e as médias comparadas pelo teste de Tukey com nível de significância de 5%. O grupo Pro+Glu 3 exibiu espermatozoides com uma maior (P<0,05) motilidade após o descongelamento. Além disso o maior percentual de integridade da membrana plasmatica e acrossomal foram obtidos utilizando Pro+Glu 1, Pro+Glu 2 e Pro+Glu 3; e Pro+Glu 2 e Pro+Glu 3, respectivamente. Os aminoácidos também mantiveram alta a atividade mitocondrial em comparação com o controle, com Pro+Glu 3 resultando numa maior atividade (P<0,05). A viabilidade dos espermatozoides foi maior (P<0,05) com o uso de Pro+Glu 2 e Pro+Glu 3 do que no controle. O número de espermatozoides que apresentaram à capacidade de ligação a membrana perivitelina da gema de ovo foi maior (P<0,05) no sêmen tratado com aminoácidos. Conclui-se que, a adição dos aminoácidos sintéticos no sêmen de ovinos antes da criopreservação melhora a qualidade espermática e o potencial fecundante, podendo assim serem adicionados em protocolos de criopreservação.

Cryostorage of sunflower seeds / Crioarmazenamento de sementes de girassol

Sunflower seeds present a great economic importance due to the high oil content. The aim of this study to evaluate the effect of storage sub-zero temperatures and the quick and slow thawing methods on the physiologic quality of seeds of Helianthus annuus, cultivars BRS 122 and BRS 324. The experiment was set up in a randomized complete design, in a factorial 2x6 (cultivars x procedures) with four replications; means were compared by the Tukey test at 5%. Were evaluated: first count and percentage of germination, mean time of germination, germination speed index, dry mass seedling, root and shoot length and stability of membranes, through electrical conductivity test solution soaking of seed. Sunflower seeds tolerate storage in sub zero temperatures up to six months; the seeds of cultivars BRS and BRS 324 122 present different answers in relation to the type of freezing and thawing.

As sementes de girassol apresentam grande importância econômica devido ao grande conteúdo de óleo. Objetivou-se neste trabalho avaliar o efeito do armazenamento em temperaturas sub-zero e os métodos de descongelamento rápido e lento sob a qualidade fisiológica de sementes de Helianthus annuus cultivares BRS 122 e BRS 324. Utilizou-se o delineamento experimental inteiramente casualizado, num fatorial 2x6 (cultivares x procedimentos), com quatro repetições; as médias foram comparadas pelo teste de Tukey em nível de 5%. Foram avaliados: primeira contagem e porcentagem de germinação, tempo médio de germinação, índice de velocidade de germinação, massa seca de plântulas, comprimento de raiz e parte aérea e estabilidade das membranas, através de teste de condutividade elétrica da solução de embebição das sementes. As sementes de girassol toleram o armazenamento em temperaturas sub-zero até seis meses; as sementes dos cultivares BRS 122 e BRS 324 apresentam respostas diferentes em relação ao tipo de congelamento e descongelamento.

Cryopreservation of Agaricus blazei in liquid nitrogen using DMSO as cryoprotectant / Criopreservação de Agaricus blazei em nitrogênio líquido usando DMSO como crioprotetor

The preservation of Agaricus blazei is generally done using successive subcultivations that are laborious and are subject to contaminations or genetic degenerations, resulting in loss of biotechnological interest characteristics. An alternative process would be cryopreservation, but there are no reports of methodologies for this basidiomycete in liquid nitrogen. Thus, the objective of this study was to evaluate mycelial viability of A. blazei strains after cryopreservation in liquid nitrogen in order to establish the initial parameters of species preservation. Five strains grown on malt extract agar (MEA) were used. Disks of MEA containing A. blazei mycelium were transferred for screwcap cryovials containing the cryoprotectant, 10% dimethyl sulfoxide. Then, they were cooled at 8 ºC for 30 min and kept at -196 ºC with liquid nitrogen. After 1.5 year of cryopreservation, the cryovials were thawed in water bath at 30 ºC for 15 min. The disks with mycelia were transferred to MEA culture media without cryoprotectant and kept at 28 ºC for 30 days. A. blazei strains respond differently to the cryopreservation method at -196 ºC by varying mycelial viability recovery. Cryopreservation with liquid nitrogen, using dimethyl sulfoxide as cryoprotectant, is not the most appropriate one for A. blazei preservation.

A preservação de Agaricus blazei ocorre usualmente por subculturas sucessivas que são laboriosas e estão sujeitas a contaminações ou degenerações genéticas, com eventual perda das características de interesse biotecnológico. Uma alternativa a este processo é a criopreservação, no entanto não existem relatos de metodologias para este basidiomiceto com uso de nitrogênio líquido. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi avaliar a criopreservação em nitrogênio líquido de linhagens de A. blazei, visando estabelecer os parâmetros iniciais de criopreservação para a espécie. Foram utilizadas cinco linhagens do fungo crescidas em meio de ágar-extrato de malte (MEA). Os discos de MEA contendo o micélio crescido foram transferidos em temperatura ambiente (25 ºC) para criotubos com rosca contendo o agente crioprotetor dimetilsulfóxido a 10%. Em seguida foram resfriados a 8 ºC por 30 min e mantidos a -196 ºC com nitrogênio líquido. Após 1,5 anos de criopreservação os criotubos foram descongelados por imersão em água a 30 ºC por 15 min. Os discos com micélio foram transferidos para meio de cultura MEA, sem o agente crioprotetor, e mantidos por 30 dias a 28 ºC. As linhagens de A. blazei respondem de forma diferente ao processo de criopreservação a -196 ºC com variação na recuperação da viabilidade do micélio. A criopreservação em nitrogênio líquido de A. blazei, com dimetilsulfóxido como crioprotetor, não é a forma mais adequada para a preservação desta espécie.

Avaliação dos múltiplos ciclos de congelamento e descongelamento na estabilidade dos soros para a detecção de anticorpos anti-HIV / Assessing the effect of multiple freeze-thaw cycles on the stability of serum samples for anti-HIV antibody detection

No presente estudo foi investigado o impacto dos múltiplos ciclos de congelamento e descongelamento na estabilidade das amostras de soro estocadas a -20 °C quanto à reatividade de anticorpos anti-HIV. As amostras analisadas foram provenientes de painéis de soros (constituídos de amostras anti-HIV positivo e negativo), produzidos no Centro de Imunologia – Instituto Adolfo Lutz (IAL), os quais têm sido material de referência para o preparo de amostras do controle de qualidade interno de testes imunodiagnósticos de HIV/Aids. A avaliação da estabilidade dos soros foi efetuada por meio de ELISA/EIA, Western blote imunofluorescência indireta, em amostras submetidas a 11 consecutivos ciclos de congelamento e descongelamento, que variaram de 7 a 60 ciclos. Nenhum efeito estatisticamente significante na reatividade dos anticorpos específicos foi observado. Portanto, o procedimento de congelamento e descongelamento, em até 60 ciclos, não causou efeitos adversos na reatividade das amostras de soro positivas para detecção de anticorpos anti-HIV, sem ocorrência de reações falso-negativas, tampouco de resultados falso-positivos em amostras negativas para HIV.

Avaliação das temperaturas de produtos cárneos, servidos no restaurante de um hotel no município de São Paulo / Evaluation of temperature meat products served in the restaurant of a hotel in São Paulo

No controle de qualidade, o binômio tempo e temperatura é uma das formas mais eficazes para diminuir ou eliminar micro-organismos patogênicos, principalmente em produtos cárneos, cuja composição torna-o excelente meio de cultura. Conhecimentos sobre tal assunto devem ser repassados por meio de treinamentos específicos periódicos, garantindo a qualidade e segurança dos alimentos. O objetivo deste trabalho foi avaliar as condições higiênicossanitárias de um restaurante por meio de aplicação de checklist e monitoramento de temperaturas de produtos cárneos, do recebimento à distribuição, antes e após treinamento específico.

As principais contribuições de Winnicott à prática clínica / Las principales contribuiciones de Winnicott a la práctica clínica / Winnicott's main contributions to clinical practice

O trabalho de Winnicott abre-nos possibilidades de analisar pacientes difíceis, com a teoria do “amadurecimento pessoal” e o uso dos fenômenos de “regressão à dependência” na interação paciente/analista, que fornece o holdingnecessário e deve decidir quando falar e quando silenciar, particularmente nas situações de “descongelamento” do trauma, quando a aceitação das críticas do paciente às falhas do analista, sem revidar ou se justificar, é um importante elemento de retomada do desenvolvimento, sobretudo em casos de pacientes bordelines, esquizóides e narcísicos graves, nos quais o mais importante é a “sobrevivência do analista.

El trabajo de Winnicott abre posibilidades de analizar pacientes difíciles, con la teoría de la “maduración personal” y el uso de los fenómenos de “regresión a la dependencia” en la interacción paciente y analista, que ofrece el holding necesario y debe decidir cuando hablar y cuando silenciar, particularmente en las situaciones de “descongelamiento” del trauma, cuando la aceptación de las críticas del paciente a las fallas del analista, sin retrucar o justificarse, es un elemento importante de retomada del desarrollo, sobre todo en los casos de pacientes bordelines, esquizoides y narcísicos graves, donde lo más importante es la “supervivencia del analista.

Winnicott offers possibilities of analysing difficult patients, with theory on “personal maturation” and the usage of “regression to dependence” phenomenon in the interaction between patient and analyst, which supplies the necessary “holding” and has to decide when to speak and when to be silent, mainly in trauma “defrosting” situations, in which acceptance of patient’s criticism towards the analyst’s faults, lacking revenge or justification, is an important element for reconducting development, mainly in cases of borderline, schizoid and severely narcissistic patients, where the most important aspect is the “analyst’s survival”.