Host-parasite relationship between Biomphalaria amazonica (Paraense, 1966) and Schistosoma mansoni (Sambon, 1907) / Relação parasito-hospedeiro entre Biomphalaria amazonica e Schistosoma mansoni

Abstract Biomphalaria amazonica is a planorbid species considered a potential host of Schistosoma mansoni. It is widely distributed in the Neotropical zone, particularly in the North and Centre-West of Brazil and in the North of Bolivia. The aim of the present study was to determine the host-parasite relationship between B. amazonica and S. mansoni (BH and SJ strains). Specimens of B. amazonica and their snail-conditioned water were examined in terms of their ability to attract miracidia. The infectivity of the mollusks was determined by exposing them to 20 miracidia of both strains. Sporocyst development and amebocyte reactions were studied after each mollusk specimen was exposed to 100 miracidia. Although no cercariae were eliminated, specimens of B. amazonica proved capable of attracting 77% of the miracidia they were exposed to. Viable sporocysts with no amebocyte reaction were found 96 hours after the exposure to miracidia. These results indicate the susceptibility of B. amazonica to the BH and SJ strains of S. mansoni, and therefore demonstrate the importance of this planorbid species as a potential vector of the trematode in the areas where it occurs.

Resumo Biomphalaria amazonica é uma espécie de planorbídeo considerada vetora potencial do Schistosoma mansoni. É amplamente distribuída na zona neotropical, especialmente no Norte e Centro-Oeste do Brasil e Norte da Bolívia. O presente trabalho teve por objetivo estudar a relação parasito-hospedeiro entre B. amazonica e S. mansoni (linhagens BH e SJ). Espécimes de B. amazonica e sua água de condicionamento foram examinados em relação à sua capacidade de atração miraxonal. A infectividade dos moluscos foi testada expondo-os a 20 miracídios de ambas as linhagens. A viabilidade dos esporocistos e o desenvolvimento de reações amebocitárias foram estudados após cada molusco ser exposto a 100 miracídios. Apesar de não eliminarem cercárias, B. amazonica provou ser capaz de atrair 77% dos miracídios a que foram expostos. Esporocistos viáveis sem reação amebócitaria foram encontrados 96 horas após a exposição aos miracídios. Esses resultados indicam a suscetibilidade de B. amazonica às linhagens BH e SJ de S. mansoni e, portanto, demonstram a importância desta espécie de planorbídeo como um vetor potencial do trematodeo na área onde ele ocorre.

Conservation and developmental expression of ubiquitin isopeptidases in Schistosoma mansoni

Several genes related to the ubiquitin (Ub)-proteasome pathway, including those coding for proteasome subunits and conjugation enzymes, are differentially expressed during the Schistosoma mansoni life cycle. Although deubiquitinating enzymes have been reported to be negative regulators of protein ubiquitination and shown to play an important role in Ub-dependent processes, little is known about their role in S. mansoni . In this study, we analysed the Ub carboxyl-terminal hydrolase (UCHs) proteins found in the database of the parasite’s genome. An in silico ana- lysis (GeneDB and MEROPS) identified three different UCH family members in the genome, Sm UCH-L3, Sm UCH-L5 and Sm BAP-1 and a phylogenetic analysis confirmed the evolutionary conservation of the proteins. We performed quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction and observed a differential expression profile for all of the investigated transcripts between the cercariae and adult worm stages. These results were corroborated by low rates of Z-Arg-Leu-Arg-Gly-Gly-AMC hydrolysis in a crude extract obtained from cercariae in parallel with high Ub conjugate levels in the same extracts. We suggest that the accumulation of ubiquitinated proteins in the cercaria and early schistosomulum stages is related to a decrease in 26S proteasome activity. Taken together, our data suggest that UCH family members contribute to regulating the activity of the Ub-proteasome system during the life cycle of this parasite.

Schistogram changes after administration of antischistosomal drugs in mice at the early phase of Schistosoma mansoni infection

Mice infected with Schistosoma mansoni were treated with oxamniquine, praziquantel, artesunate at the pre-patent phase, aiming at observing schistogram alterations. Half of the animals were perfused five days post-treatment for counting and classification of immature worms, based on pre-established morphological criteria (schistogram); the remaining animals were evaluated 42 or 100 days after infection and perfusion of the portal-system was performed for collection and counting of adult worms and oogram. It was observed that oxamniquine and artesunate treatment administered at the pre-postural phase causes significant reduction in the number of immature and adult worms. However, there was little reduction with praziquantel when used at the dose of 400 mg/kg for treatments administered 14, 15, 21 or 23 days post-infection. Artesunate was responsible for significant alterations in development of young worms, as well as for a higher number of worms presenting intestinal damages. Immature adult worms were detected in mice treated with artesunate or oxamniquine at the pre-patent phase of infection and recovered by perfusion 100 days after infection. Schistogram proved to be a very useful tool for experimental evaluation of the activity of antischistosomal drugs and a good model to identify the most sensitive stages to drugs.

A directed approach for the identification of transcripts harbouring the spliced leader sequence and the effect of trans-splicing knockdown in Schistosoma mansoni

Schistosomiasis is a major neglected tropical disease caused by trematodes from the genus Schistosoma. Because schistosomes exhibit a complex life cycle and numerous mechanisms for regulating gene expression, it is believed that spliced leader (SL) trans-splicing could play an important role in the biology of these parasites. The purpose of this study was to investigate the function of trans-splicing in Schistosoma mansoni through analysis of genes that may be regulated by this mechanism and via silencing SL-containing transcripts through RNA interference. Here, we report our analysis of SL transcript-enriched cDNA libraries from different S. mansoni life stages. Our results show that the trans-splicing mechanism is apparently not associated with specific genes, subcellular localisations or life stages. In cross-species comparisons, even though the sets of genes that are subject to SL trans-splicing regulation appear to differ between organisms, several commonly shared orthologues were observed. Knockdown of trans-spliced transcripts in sporocysts resulted in a systemic reduction of the expression levels of all tested trans-spliced transcripts; however, the only phenotypic effect observed was diminished larval size. Further studies involving the findings from this work will provide new insights into the role of trans-splicing in the biology of S. mansoni and other organisms. All Expressed Sequence Tags generated in this study were submitted to dbEST as five different libraries. The accessions for each library and for the individual sequences are as follows: (i) adult worms of mixed sexes (LIBEST_027999: JZ139310 - JZ139779), (ii) female adult worms (LIBEST_028000: JZ139780 - JZ140379), (iii) male adult worms (LIBEST_028001: JZ140380 - JZ141002), (iv) eggs (LIBEST_028002: JZ141003 - JZ141497) and (v) schistosomula (LIBEST_028003: JZ141498 - JZ141974).

Susceptibility of Argentinean Biomphalaria tenagophila and Biomphalaria straminea to infection by Schistosoma mansoni and the possibility of geographic expansion of mansoni schistosomiasis

Introduction Human migration and the presence of natural vectors (mollusks) of Schistosoma mansoni are the primary causes of the expansion of mansoni schistosomiasis into southern areas of South America. Water conditions are favorable for the expansion of this disease because of the extensive hydrographic network, which includes the basins of the Paraná and Uruguay rivers and favors mollusk reproduction. These rivers also aid agriculture and tourism in the area. Despite these favorable conditions, natural infection by S. mansoni has not yet been reported in Argentina, Uruguay, or Paraguay. Methods Two species of planorbid from Argentina, Biomphalaria straminea and B. tenagophila, were exposed to the miracidia of five Brazilian strains of S. mansoni. Results Biomphalaria tenagophila (Atalaya, Buenos Aires province) was infected with the SJS strain (infection rate 3.3%), confirming the experimental susceptibility of this Argentinian species. Biomphalaria straminea (Rio Santa Lucía, Corrientes province) was susceptible to two Brazilian strains: SJS (infection rate 6.7%) and Sergipe (infection rate 6.7%). Conclusions These results demonstrate that species from Argentina have the potential to be natural hosts of S. mansoni and that the appearance of foci of mansoni schistosomiasis in Argentina is possible. .

The Pampulha reservoir remains a potential urban focus of schistosomiasis mansoni in Brazil: changes in the occurrence patterns of Biomphalaria species and a new record of the parasite

Introduction The Pampulha reservoir has long been a focus of schistosomiasis transmission in Belo Horizonte, State of Minas Gerais, Brazil. The last malacological study conducted in this urban reservoir was more than two decades ago, and thus, an update on the distribution of the species of Biomphalaria as well as new data on the presence of Schistosoma mansoni in this water body are required. Methods The current distribution of Biomphalaria spp. in the Pampulha reservoir and their infection with S. mansoni was evaluated during 55 malacological surveys conducted between 2009 and 2012. Results Biomphalaria straminea displayed a high population density and distribution, and 13.7% (2,233/16,235) of the specimens collected were infected with larval trematodes other than Schistosoma mansoni. Biomphalaria tenagophila and Biomphalaria glabrata, species currently presenting a restricted distribution and small populations, displayed trematode infection rates of 15.2% (98/644) and 13% (83/640), respectively. Thirteen (2%) specimens of B. glabrata were found to be infected with S. mansoni. In addition, a historical review based on previous and new data on the occurrence patterns of Biomphalaria species in this reservoir is presented. Conclusions The results indicate that the Pampulha reservoir remains a potential focus of urban schistosomiasis in Brazil, and significant changes in the occurrence patterns of Biomphalaria species were verified. .

Avaliação do polimorfismo genético de TLR9 em pacientes com lúpus eritematoso sistêmico / Evaluation of genetic polymorphism of TLR9 in systemic lupus erythematosus

Lúpus Eritematoso Sistêmico (LES) é uma doença autoimune sistêmica na qual a principal alteração está relacionada à ativação policlonal de linfócitos B com a produção de uma ampla variedade de autoanticorpos dirigidos contra componentes nucleares, citoplasmáticos, de superfície celular e moléculas solúveis do plasma. Fatores genéticos têm sido implicados na patogênese dessa patologia. TolI-like receptor 9 (TLR9) é um importante componente do sistema imune inato que reconhece sequências não metiladas CpG de DNA...

Uptake of macromolecules by cercariae during skin penetration and transformation to schistosomula (Schistosoma mansoni)

Here, we observed the uptake of membrane-impermeant molecules by cercariae as they penetrate the skin and are transformed into schistosomula. We propose that membrane-impermeant molecules, Lucifer Yellow, Propidium iodide and Hoechst 33258 enter the parasite through both thenephridiopore and the surface membrane and then diffuse throughout the body of the parasite. We present a hypothesis that the internal cells of the body of the schistosomulum represent a new host-parasite interface, at which skin-derived growth factors may stimulate receptors on internal membranes during transformation of the cercariae into the schistosomulum.

Associação de Fármacos na terapêutica experimental da Esquistossomose mansoni

A quimioterapia é a medida principal utilizada para o controle de morbidade da. esquistossomose nas regiões endêmicas. Os fármacos esquistossomicidas usados –. oxamniquina e praziquantel – apresentam poucos efeitos colaterais e atividade. esquistossomicida alta, contribuindo para o tratamento da infecção reduzindo a. morbidade, entretanto deixam a desejar no que se refere à erradicação da doença, uma vez que não são capazes de sozinhos, interromper a transmissão. Atualmente o tratamento da esquistossomose é feito quase que exclusivamente pelo praziquantel.. Tendo em vista a notificação cada vez mais freqüente de casos de resistência ao. praziquantel em diversas regiões principalmente da África, e considerando a. possibilidade do aparecimento de resistência do verme ao fármaco, falhas terapêuticas e intolerância do paciente ao tratamento, fica claro o risco de se ter somente um fármaco para o tratamento da esquistossomose. Vários autores têm chamado a atenção para esse fato e a Organização Mundial da Saúde recomenda a busca de novos fármacos para o tratamento da doença. Entretanto, o desenvolvimento de novos medicamentos é um processo demorado e dispendioso. Nesse contexto, a abordagem principal desse trabalho é a de se usar medicamentos já caracterizados do ponto de vista farmacológico, conhecidos em seus princípios ativos e com efeitos colaterais definidos, visando abreviar esse tempo. No presente trabalho, são apresentados dois artigos publicados e um terceiro submetido à publicação. No primeiro artigo foi estudada a associação da lovastatina com oxamniquina ou com o praziquantel. Nos experimentos in vivo, a associação da lovastatina com oxamniquina ou com o praziquantel não apresentou efeito aditivo, mas houve alteração significativa do oograma quando a lovastatina foi associada com a oxamniquina.

Os experimentos in vitro mostraram que a maturação dos ovos não se completa quando os vermes foram. expostos à lovastatina ao contrário daqueles do grupo controle, que passam por todos os estágios, chegando até a eclosão dos miracídios. O processo completo de. maturação dos ovos também foi observado quando vermes tratados in vivo foram. cultivados in vitro em meio de cultura sem adição de lovastatina demonstrando que a exposição dos vermes a lovastatina in vitro é responsável pelo bloqueio do. desenvolvimento dos ovos. No segundo artigo foi avaliada a ação do clonazepam sobre o verme adulto de S. mansoni in vitro, causando paralisia total dos vermes machos e fêmeas, entretanto a associação desse fármaco com oxamniquina ou praziquantel in vivo não mostrou ação aditiva ou sinérgica. No terceiro artigo foi estudada a atividade esquistossomicida da associação entre a oxamniquina e o praziquantel. Esse esquema terapêutico mostrou atividade sinérgica entre os dois fármacos. A associação da oxamniquina com praziquantel se mostrou benéfica quando os dois fármacos foram administrados simultaneamente ou quando o praziquantel foi administrado 4 horas, um ou cinco dias após a oxamniquina. Os resultados desses estudos indicam que se deve dar prosseguimento a essa linha de pesquisa, uma vez que a associação de fármacos. que apresente efeito sinérgico é, no momento, a estratégia ideal para o tratamento da doença, ao considerar-se a inércia atual na busca de novos fármacos ativos e o aparecimento de resistência ao esquistossomicida usado.

Associação de fármacos na terapêutica experimental da esquistossomose mansoni / Association of experimental drugs in the treatment of schistosomiasis mansoni

A quimioterapia é a medida principal utilizada para o controle de morbidade da. esquistossomose nas regiões endêmicas. Os fármacos esquistossomicidas usados –. oxamniquina e praziquantel – apresentam poucos efeitos colaterais e atividade. esquistossomicida alta, contribuindo para o tratamento da infecção reduzindo a. morbidade, entretanto deixam a desejar no que se refere à erradicação da doença, uma vez que não são capazes de sozinhos, interromper a transmissão. Atualmente o tratamento da esquistossomose é feito quase que exclusivamente pelo praziquantel.. Tendo em vista a notificação cada vez mais freqüente de casos de resistência ao. praziquantel em diversas regiões principalmente da África, e considerando a. possibilidade do aparecimento de resistência do verme ao fármaco, falhas terapêuticas e intolerância do paciente ao tratamento, fica claro o risco de se ter somente um fármaco para o tratamento da esquistossomose. Vários autores têm chamado a atenção para esse fato e a Organização Mundial da Saúde recomenda a busca de novos fármacos para o tratamento da doença. Entretanto, o desenvolvimento de novos medicamentos é um processo demorado e dispendioso. Nesse contexto, a abordagem principal desse trabalho é a de se usar medicamentos já caracterizados do ponto de vista farmacológico, conhecidos em seus princípios ativos e com efeitos colaterais definidos, visando abreviar esse tempo. No presente trabalho, são apresentados dois artigos publicados e um terceiro submetido à publicação. No primeiro artigo foi estudada a associação da lovastatina com oxamniquina ou com o praziquantel. Nos experimentos in vivo, a associação da lovastatina com oxamniquina ou com o praziquantel não apresentou efeito aditivo, mas houve alteração significativa do oograma quando a lovastatina foi associada com a oxamniquina.

Os experimentos in vitro mostraram que a maturação dos ovos não se completa quando os vermes foram. expostos à lovastatina ao contrário daqueles do grupo controle, que passam por todos os estágios, chegando até a eclosão dos miracídios. O processo completo de. maturação dos ovos também foi observado quando vermes tratados in vivo foram. cultivados in vitro em meio de cultura sem adição de lovastatina demonstrando que a exposição dos vermes a lovastatina in vitro é responsável pelo bloqueio do. desenvolvimento dos ovos. No segundo artigo foi avaliada a ação do clonazepam sobre o verme adulto de S. mansoni in vitro, causando paralisia total dos vermes machos e fêmeas, entretanto a associação desse fármaco com oxamniquina ou praziquantel in vivo não mostrou ação aditiva ou sinérgica. No terceiro artigo foi estudada a atividade esquistossomicida da associação entre a oxamniquina e o praziquantel. Esse esquema terapêutico mostrou atividade sinérgica entre os dois fármacos. A associação da oxamniquina com praziquantel se mostrou benéfica quando os dois fármacos foram administrados simultaneamente ou quando o praziquantel foi administrado 4 horas, um ou cinco dias após a oxamniquina. Os resultados desses estudos indicam que se deve dar prosseguimento a essa linha de pesquisa, uma vez que a associação de fármacos. que apresente efeito sinérgico é, no momento, a estratégia ideal para o tratamento da doença, ao considerar-se a inércia atual na busca de novos fármacos ativos e o aparecimento de resistência ao esquistossomicida usado.

Ação de esquistossomicidas na fase inicial da esquistossomose experimental

O tratamento da esquistossomose na fase postural da doença é bem estabelecido e tem como drogas disponíveis o praziquantel (PZQ) e a oxamniquina (OXA), que geralmente promovem boa resposta terapêutica. Entretanto, o S. mansoni apresenta diferente susceptibilidade a drogas na fase pré-postural, podendo causar falhas terapêuticas. O PZQ é pouco ativo para esquistossômulos de 2 a 4 semanas, bem como a OXA na 3º semana de infecção. O Artesunato (ART) tem demonstrado boa atividade contra esquistossômulos. Para elucidar estas diferenças, foram avaliados quais estádios evolutivos são mais susceptíveis ao tratamento na fase pré-postural da doença através do schistograma. O tratamento com ART promoveu as maiores alterações no schistograma. Doses de 300 mg/kg ou 600 mg/kg administradas no 15º dpi diminuíram significativamente o número de vermes de 3º e 4º estádios. Dose. de 300 mg/kg no 23º dpi reduziu o número de vermes do 5º e 6º e ART 600 mg/kg reduziu o número de vermes do 4º, 5º e 6º estádios. Tratamentos com ART 600 mg/kg resultaram em grande número de esquistossômulos com intestino degradado impedindo sua classificação no schistograma.

Estas alterações levaram a diferenças estatísticamente significativas no número total de esquistossômulos e no percentual de redução de vermes adultos recuperados aos 42 dpi. Vale ressaltar que parte dos. vermes recuperados com 100 dias de infecção, principalmente fêmeas, tratados com ART 600 mg/kg apresentavam aspecto de imaturos. Doses de OXA 200 mg/kg e 400 mg/kg administrados no 15º dpi reduziram o número de esquistossômulos do 4º estádio, enquanto o tratamento no 23º dpi de OXA 200 mg/kg reduziu o número de vermes do 6º estádio e de 5º e 6º estádios quando a dose foi de 400 mg/kg. O. tratamento com OXA 400 mg/kg no 23º dpi causou diferenças estatísticamente significativas no percentual de redução de vermes adultos recuperados. Muitos vermes recuperados dos tratamentos com OXA 400 mg/kg tiveram seu desenvolvimento comprometido e estas alterações também foram observadas nos. grupos recuperados 100 dpi. O schistograma de camundongos tratados com PZQ 400 mg/kg permaneceu inalterado. A dose de 800 mg/kg utilizada no 15º dpi reduziu o número de esquistossômulos do 4º estádio e no 23º dpi reduziu o número de vermes de 6º estádio. As associações ART 600 + PZQ 800 mg/kg e ART 300 + PZQ 400 mg/kg não diferiram estatísticamente do grupo tratado com ART 600 mg/kg. isoladamente. Dados sugerem maior dano no tegumento de vermes tratados com OXA 400 mg/kg, ART 300 e 600 mg/kg e PZQ 800 mg/kg.

Estudo dos mecanismos da atividade imunomoduladora de lipídeos de Schistosoma mansoni mediada por receptores TLR2

O acúmulo de eosinófilos é uma característica marcante da inflamação associada com doenças parasitárias helmínticas. Neste trabalho foi avaliado o papel de lipídeosd derivados de S. mansoni nos mecanismos de recrutamento e ativação de eosinófilos nas infecções causadas por S. mansoni. Além disso, foi também investigado o papel de lipídeos esquistossomais na ativação do metabolismo liídico em macrófagos. Foi observado que camundongos com ausência de TRL2 funcional exibiram um reduzido granuloma eosinofílico no fígado de animais infectados quando comparados com os animais selvagens dentro de 95 dias de infecção por S. mansoni. Além disso, a infecção por S. mansoni induziu acúmulo peritoneal de eosinófilos e formação de corpúsculos lipídicos em eosinófilos numa via de sinalização dependente de TLR2. Os resultados mostraram que estimulação de macrófagos peritoneais in vitro por lipídeos esquistossomais, e por lisofosfatidilcolina (LPC), induziu ativação de NF-κb e produção de citocinas. A administração de LPC in vivo também induziu recrutamento e ativação de eosinófilos, bem como produção de IL-5, IL-13 e eotaxina, num mecanismo largamente dependente de TLR2. A estimulação de eosinífilos humanos in vitro por lipídeos esquistossomais induziu produção de mediadores lipídicos, formação de corpúsculos lipídicos e aumento da expressão de TLR2 e MyD88 nessas células. Lipídeos esquistossomais exibiram significativas quantidades de PGD2 detectada por EIA e foi capaz de induzir produção de 14,15L TC4 (eoxina) e LTC4 através de receptores CRTH2.

Um aumento da expressão de PGD sintase em eosinófilos após a estimulação também foi observada, sugerindo que PGD2 endógena também deve participar na reação mediada por eoxina e LTC4. Utilizando anticorpos neutralizantes contra TLR2, foi demontrado que lipídeos esquistossomas, principalmente através de LPC, induziram formação de corpúsulos lipídicos e produção de eoxina e LTC4 depedente de TLR2. em adição, a LPC esquistossomal também induziu aumento da expressão de PPARγ, formação de corpúsculos lipídicos e produção de citocinas mediada por PPARγ, e geração de LTB4, PGE2, 5-LO e COX2 em macrófagos murinos in vitro. Juntos, esses dados mostram que lipídeos esquistossomais, e em particular a LPC, estão nvolvidos na ativação in vivo de eosinófilos através de vias dependentes de TLR2 em infecção por S. Mansoni. De forma similar, lipídeos esquistossomais induzem ativação in vitro de eosinófilos, indicando um papel dessas moléculas na produção de eoxinas proinflamatórias e induzindo imunidade inata através de vias dependentes de TRL2 e PGD2 em eosinófilos humanos. Por fim, vias de PPARγ também são ativadas por liídeos esquistossoais, sugerindo que estes lipídeos poderiam estar modulando o metabolismo lipídico do hospedeiro

Estudo dos mecanismos da atividade imunomoduladora de lipídeos de Schistosoma mansoni mediada por receptores TLR2 / Study of the mechanisms of immunomodulatory activity of lipids of Schistosoma mansoni receptor mediated TLR2

O acúmulo de eosinófilos é uma característica marcante da inflamação associada com doenças parasitárias helmínticas. Neste trabalho foi avaliado o papel de lipídeosd derivados de S. mansoni nos mecanismos de recrutamento e ativação de eosinófilos nas infecções causadas por S. mansoni. Além disso, foi também investigado o papel de lipídeos esquistossomais na ativação do metabolismo liídico em macrófagos. Foi observado que camundongos com ausência de TRL2 funcional exibiram um reduzido granuloma eosinofílico no fígado de animais infectados quando comparados com os animais selvagens dentro de 95 dias de infecção por S. mansoni. Além disso, a infecção por S. mansoni induziu acúmulo peritoneal de eosinófilos e formação de corpúsculos lipídicos em eosinófilos numa via de sinalização dependente de TLR2. Os resultados mostraram que estimulação de macrófagos peritoneais in vitro por lipídeos esquistossomais, e por lisofosfatidilcolina (LPC), induziu ativação de NF-κb e produção de citocinas. A administração de LPC in vivo também induziu recrutamento e ativação de eosinófilos, bem como produção de IL-5, IL-13 e eotaxina, num mecanismo largamente dependente de TLR2. A estimulação de eosinífilos humanos in vitro por lipídeos esquistossomais induziu produção de mediadores lipídicos, formação de corpúsculos lipídicos e aumento da expressão de TLR2 e MyD88 nessas células. Lipídeos esquistossomais exibiram significativas quantidades de PGD2 detectada por EIA e foi capaz de induzir produção de 14,15L TC4 (eoxina) e LTC4 através de receptores CRTH2.

Um aumento da expressão de PGD sintase em eosinófilos após a estimulação também foi observada, sugerindo que PGD2 endógena também deve participar na reação mediada por eoxina e LTC4. Utilizando anticorpos neutralizantes contra TLR2, foi demontrado que lipídeos esquistossomas, principalmente através de LPC, induziram formação de corpúsulos lipídicos e produção de eoxina e LTC4 depedente de TLR2. em adição, a LPC esquistossomal também induziu aumento da expressão de PPARγ, formação de corpúsculos lipídicos e produção de citocinas mediada por PPARγ, e geração de LTB4, PGE2, 5-LO e COX2 em macrófagos murinos in vitro. Juntos, esses dados mostram que lipídeos esquistossomais, e em particular a LPC, estão nvolvidos na ativação in vivo de eosinófilos através de vias dependentes de TLR2 em infecção por S. Mansoni. De forma similar, lipídeos esquistossomais induzem ativação in vitro de eosinófilos, indicando um papel dessas moléculas na produção de eoxinas proinflamatórias e induzindo imunidade inata através de vias dependentes de TRL2 e PGD2 em eosinófilos humanos. Por fim, vias de PPARγ também são ativadas por liídeos esquistossoais, sugerindo que estes lipídeos poderiam estar modulando o metabolismo lipídico do hospedeiro

Ação de esquistossomicidas na fase inicial da esquistossomose experimental / Antischistosomal action in the initial phase of experimental schistosomiasis

O tratamento da esquistossomose na fase postural da doença é bem estabelecido e tem como drogas disponíveis o praziquantel (PZQ) e a oxamniquina (OXA), que geralmente promovem boa resposta terapêutica. Entretanto, o S. mansoni apresenta diferente susceptibilidade a drogas na fase pré-postural, podendo causar falhas terapêuticas. O PZQ é pouco ativo para esquistossômulos de 2 a 4 semanas, bem como a OXA na 3º semana de infecção. O Artesunato (ART) tem demonstrado boa atividade contra esquistossômulos. Para elucidar estas diferenças, foram avaliados quais estádios evolutivos são mais susceptíveis ao tratamento na fase pré-postural da doença através do schistograma. O tratamento com ART promoveu as maiores alterações no schistograma. Doses de 300 mg/kg ou 600 mg/kg administradas no 15º dpi diminuíram significativamente o número de vermes de 3º e 4º estádios. Dose. de 300 mg/kg no 23º dpi reduziu o número de vermes do 5º e 6º e ART 600 mg/kg reduziu o número de vermes do 4º, 5º e 6º estádios. Tratamentos com ART 600 mg/kg resultaram em grande número de esquistossômulos com intestino degradado impedindo sua classificação no schistograma.

Estas alterações levaram a diferenças estatísticamente significativas no número total de esquistossômulos e no percentual de redução de vermes adultos recuperados aos 42 dpi. Vale ressaltar que parte dos. vermes recuperados com 100 dias de infecção, principalmente fêmeas, tratados com ART 600 mg/kg apresentavam aspecto de imaturos. Doses de OXA 200 mg/kg e 400 mg/kg administrados no 15º dpi reduziram o número de esquistossômulos do 4º estádio, enquanto o tratamento no 23º dpi de OXA 200 mg/kg reduziu o número de vermes do 6º estádio e de 5º e 6º estádios quando a dose foi de 400 mg/kg. O. tratamento com OXA 400 mg/kg no 23º dpi causou diferenças estatísticamente significativas no percentual de redução de vermes adultos recuperados. Muitos vermes recuperados dos tratamentos com OXA 400 mg/kg tiveram seu desenvolvimento comprometido e estas alterações também foram observadas nos. grupos recuperados 100 dpi. O schistograma de camundongos tratados com PZQ 400 mg/kg permaneceu inalterado. A dose de 800 mg/kg utilizada no 15º dpi reduziu o número de esquistossômulos do 4º estádio e no 23º dpi reduziu o número de vermes de 6º estádio. As associações ART 600 + PZQ 800 mg/kg e ART 300 + PZQ 400 mg/kg não diferiram estatísticamente do grupo tratado com ART 600 mg/kg. isoladamente. Dados sugerem maior dano no tegumento de vermes tratados com OXA 400 mg/kg, ART 300 e 600 mg/kg e PZQ 800 mg/kg.

Desenvolvimento embrionário do ovo de Schistosoma mansoni Sambon, 1907 / Embryonic development of the egg of Schistosoma mansoni Sambon, 1907

Na patogênese da esquistossomose e na continuidade do ciclo de vida do parasito, os ovos possuem um papel central. Tradicionalmente, o amadurecimento dos ovos é classificado a partir da simples relação entre os tamanhos do embrião e do ovo propriamente dito (classificação de Vogel e de Prata, VP). A proporção de cada estádio (oograma) tem sido considerada como um critério confiável para a avaliação de drogas esquistossomicidas. Contudo, pouco se sabe sobre a sua biologia do desenvolvimento propriamente dita. A presente dissertação objetivou descrever os eventos morfológicos durante a embriogênese dos ovos de Schistosoma mansoni através de histologia convencional e análise de preparados inteiros. Os eventos foram divididos em dez estádios, adaptando uma classificação prévia inicialmente introduzida para um rabdocelo de vida livre. O amadurecimento dos ovos no hospedeiro e em cultura (meio RPMI-1640) foi também avaliado por modelagem estatística da área média de cada estádio (considerando a classificação VP) e então, morfologicamente, pela análise de ovos inteiros sob microscopia confocal a laser (nosso sistema de estagiamento aqui proposto). Devido ao difícil reconhecimento dos eventos morfológicos observados em ovos vivos não-corados, uma correlação com a classificação VP é apresentada. De fato, o desenvolvimento embrionário dos ovos de esquistossomose é mais complexo do que considerado previamente (como na classificação de Vogel). A diferenciação das estruturas embrionárias e seus prováveis papéis na granulomatogênese são discutidos. O sistema de estadiamento, aqui proposto, pode contribuir para uma melhor compreensão da biologia do ovo e embasar futuros estudos sobre a produção e difusão dos antígenos do ovo na reação granulomatosa.

Activity of the plant syzygium jumbos against Biomphularia alexandrina snail's reproduction and infection with schistosoma mansoni

The toxic effects of dry powder water suspension [cold and boiled] and methanol extract of Syzygium jambos leaves determined against Biomphalaria alexandrina snails. Snail's fecundity and their infection with Schistosoma mansoni miracidia were evaluated post exposure to sublethal concentrations of methanol extract. In addition, the activities of aminotransferases [ASAT and ALAT] and phosphatases [AcP and A Ik P] enzymes and total protein levels in tissues of snails under such methanol extract concentrations were detected. The methanol extract was more toxic to the snails than both cold and boiled dry powder water suspension with LC[90]- s 17.9, 876 and 388 ppm respectively, after 24- hr of exposure at 25°C +/- 1. Snails exposed to LC[50] of methanol extract [13.4 ppm] for 24 hours followed by 6 weeks of recovery showed a low survival rate by the 6th week, being 23%. The survived snails laid few eggs, being 1.0 eggs/snail at the 5[th] week. However, no eggs were laid by the 6[th] week. This has a negative reflect on the net reproductive rate [Ro] that was reduced by 74.0%. Twenty-four hours in vivo exposure to the same concentration of methanolic extract [LC[50] caused a significant reduction in the activity of AcP while it increased AlkP, ASAT and ALAT activities in snail's tissues. Infection rate of B. alexandrina snails treated with LC[10] [8.7 ppm] during their exposure to S. mansoni miracidia was significantly less than control group being 32% and 67% respectively. The duration of cercarial shedding was shorter than that of control ones and the cercarial production was significantly reduced being 3209 cercariae/shedding snail compared to 13330 cercariae/control infected snails. From the forgoing data, methanol extract from leaves of the plant S. jambos may be suggested as a promising agent for control of medically important snails may be used as an alternative method to control the size of the populations of B. alexandrina

Caracterização citoquímica ultra-estrutural da cercária de Schistosoma mansoni / Cytochemical ultrastructural caracterization of cercaria of Schistosoma mansoni

Uma alternativa para identificar a base de processos críticos necessários ao estabelecimento do parasito no hospedeiro é enfocar o estágio responsável pela invasão primária, ou seja, a estrutura infectante. O principal objetivo do trabalho foi realizar uma caracterização ultra-estrutural da cercária de Schistosoma mansoni, através de técnicas citoquímicas. Para a identificação de lipídios saturados e insaturados foi utilizado, respectivamente, as técnicas de Filipina e do Tampão Imidazol, para localização de proteínas básicas foram empregadas as técnicas do Ácido Fosfotúngstico (PTA) e da Prata Amoniacal. Para localizar sítios de cálcio utilizamos a técnica descrita por Hepler (1980) e para evidenciar grupamentos aniônicos empregamos ferritina cationizada além do tratamento enzimático com tripsina, condroitinase e neuraminidase de Vibrio cholerae. Foi observada a presença de lipídios insaturados de formato globular em toda a região externa da larva infectante, tegumento, glândula da cabeça, glândula pré-acetabular e corpos de inclusão. Utilizando a técnica de filipina, identificamos a presença de colesterol delimitando vários compartimentos da larva e também no tegumento, músculo e membranas de células subtegumentares. Através da técnica de PTA foi identificada a presença de proteínas básicas no tegumento, núcleo e nucléolo de células subtegumentares, corpos de inclusão e glândulas pré-acetabulares. Já na prata amoniacal, identificamos forte marcação em toda larva infectante além de marcações no núcleo das células musculares, tecido muscular circular e glândulas pré-acetabulares. A localização de sítios de cálcio mostrou-se bastante uniforme, demarcando os espaços internos da larva, principalmente, o tecido muscular da larva. As amostras tratadas com ferritina cationizada apresentaram uma forte marcação em nível cuticular. O tratamento das amostras com a neuraminidase não alterou o padrão de marcação dessas partículas na superfície do trematóide. Porém, o tratamento com tripsina ou condroitinase resultou numa ausência de marcação na superfície da larva. O esclarecimento da composição bioquímica da larva infectante de S. mansoni fornece dados para um melhor entendimento a respeito da biologia do parasito bem como a intrigante relação parasitohospedeiro, além de contribuir para um possível controle químico.

Biomphalaria tenagophila potencial vector of Schistosoma mansoni in the Paraná River basin (Argentina and Paraguay)

Susceptibility and compatibility experiments were carried out with 700 Biomphalaria tenagophila from the Paraná River basin exposed to infection with Schistosoma mansoni. Individual infection was performed with 10 miracidia of SJ2 strain from the Paraiba valley (Brazil) originally infective to B. tenagophila. These snails were laboratory-breed progeny of B. tenagophila collected from six localities of Argentina and one from Paraguay. From Argentina: Rincón de Vences (7 percent) and Posadas (11 percent) became infected with S. mansoni and the calculation of Frandsen's index (TCP/100) shows that they were Class II poorly compatible. Those snails from Goya (22 percent), Maloyas (5 percent), and Berón de Astrada (3 percent) were Class III compatible to the S. mansoni. None of the 100 snails exposed from Caá-Catí became infected (Class 0 incompatible). Tested samples from Paraguay (Encarnación) were infected (20 percent) and compatible (Class III). It was also studied the persistence of the infection in 244 snails of the first generation (F1) of those that were susceptible from three places. It was demonstrated an increment of the susceptibility in the F1 from Maloyas (chi2 = 27.22; p = 0.0001) and Posadas (chi2 = 4.24; p = 0.04). The results point out the possibility that schistosomiasis might be able to spread into the Paraná River basin where B. tenagophila exists.

Characterization of the gene expression related to the process of DNA damage tolerance in Schistosoma mansoni

In the course of its complex life cycle, the parasite Schistosoma mansoni need to adapt to distinct environments, and consequently is exposed to various DNA damaging agents. The Schistosoma genome sequencing initiative has uncovered sequences from genes and transcripts related to the process of DNA damage tolerance as the enzymes UBC13, MMS2, and RAD6. In the present work, we evaluate the importance of this process in different stages of the life cycle of this parasite. The importance is evidenced by expression and phylogenetic profiles, which show the conservation of this pathway from protozoa to mammalians on evolution.