Effect of EDTA on TGF-ß1 released from the dentin matrix and its influence on dental pulp stem cell migration

Abstract: Bioactive molecules stored in dentin, such as transforming growth factor beta1 (TGF-b1), may be involved in the signaling events related to dental tissue repair. The authors conducted an in vitro evaluation of the amount of TGF-b1 released from dentin slices after treatment with 10% ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA), 2.5% sodium hypochlorite (NaOCl) or phosphate-buffered saline (PBS), and the effect of this growth factor on stem cell migration from human exfoliated deciduous teeth (SHED). Sixty 1-mm-thick tooth slices were prepared with or without the predentin layer, and treated with either 10% EDTA for 1 minute, 2.5% NaOCl for 5 days or kept in PBS. Tooth slice conditioned media were prepared and used for TGF-b1 ELISA and migration assays. Culture medium with different concentrations of recombinant human TGF-b1 (0.5, 1.0, 5.0 or 10.0 ng/mL) was also tested by migration assay. The data were evaluated by ANOVA and Tukey's test. Optical density values corresponding to media conditioned by tooth slices either containing or not containing the predentin layer and treated with 10% EDTA were statistically greater than the other groups and close to 1 ng/mL. Increased rates of migration toward media conditioned by tooth slices containing the predentin layer and treated with PBS, 10% EDTA or 2.5% NaOCl were observed. Recombinant human TGF-b1 also stimulated migration of SHED, irrespective of the concentration used. EDTA may be considered an effective extractant of TGF-b1 from the dentin matrix. However, it does not impact SHED migration, suggesting that other components may account for the cell migration.

EVIDENCE OF Leishmania (Leishmania) infantum INFECTION IN DOGS FROM JUIZ DE FORA, MINAS GERAIS STATE, BRAZIL, BASED ON IMMUNOCHROMATOGRAPHIC DUAL-PATH PLATFORM (DPP®) AND PCR ASSAYS / Evidência de infecção por Leishmania (Leishmania) infantum em cães de Juiz de Fora, Minas Gerais, Brasil, detectada pelo teste imunocromatográfico rápido DPP e PCR

In Brazil, domestic dogs are branded as the primary reservoir for zoonotic visceral leishmaniasis, due to the clear positive correlation observed between human and canine infection rates. This study aimed to carry out a serological survey of canine visceral leishmaniasis (CVL) in dogs housed at a public kennel in the municipality of Juiz de Fora, Minas Gerais State, Brazil, using the immunochromatographic TR DPP® CVL rapid test. Additionally, conventional and/or real time PCR assay was used to detect and confirm L. infantum infection in the DPP positive dogs only. Of the 400 dogs studied, most did not present clinical signs for CVL (p < 0.05), and fifteen (3.8%) were seropositive in the DPP test. There was no statistically significant difference between the DPP seropositive dogs and the clinical signs of the disease (p > 0.05). Both conventional and real time PCR tests confirmed L. infantum infection in nine (75.0%) of the twelve DPP seropositive dogs that remained alive during the follow-up period. This study is the first seroepidemiologic survey of CVL held in the city of Juiz de Fora, and the results reinforce the idea that this disease is currently in a process of expansion and urbanization in Brazil. Furthermore, this study highlights the use of the DPP test as an alternative for diagnosing CVL in large and mid-sized cities, due to its ease of implementation.

No Brasil, cães domésticos são considerados como os principais reservatórios da leishmaniose visceral zoonótica, devido à clara correlação positiva existente entre as curvas de infecção humana e canina. Este estudo objetivou a realização de um inquérito sorológico da leishmaniose visceral canina (LVC) em cães abrigados em um canil público de Juiz de Fora, Minas Gerais, Brasil, através do teste rápido imunocromatográfico TR DPP®. Adicionalmente, a PCR convencional e/ou em tempo real foi usada para detectar/confirmar a infecção por L. infantum apenas nos animais DPP positivos. Dos 400 cães estudados, a maioria não apresentou sinais clínicos para a LVC (p < 0,05) e quinze (3,8%) foram sororreativos ao DPP. Não houve diferença estatisticamente significativa entre os cães com DPP positivo e os sinais clínicos para a doença (p > 0,05). PCR convencional e em tempo real confirmaram a infecção por L. infantum em nove (75,0%) dos doze animais DPP positivos que permaneceram vivos durante o estudo. Este é o primeiro estudo soroepidemiológico sobre LVC realizado no município de Juiz de Fora, e os resultados reforçam a idéia de que esta doença está em processo de expansão e urbanização no Brasil. Além disto, este estudo destaca o uso do DPP como uma alternativa para o diagnóstico da LVC em cidades de médio e grande porte, devido à facilidade de execução.

Effect of Low-Level Laser Therapy (660 nm) on Angiogenesis in Wound Healing: A Immunohistochemical Study in a Rodent Model

The aim of the present investigation was to evaluate the angiogenesis on dorsal cutaneous wounds in a rodent model treated with λ660 nm laser light. New vessel formation is a multistep process involving vessel sprouting, endothelial cell migration, proliferation and tube formation. Although several in vivo studies have shown that laser phototherapy influences tissue repair, a fully understanding of angiogenesis mechanisms are not yet known. Twenty-four young adult male Wistar rats weighing between 200 and 250 g were used. Under general anesthesia, one excisional wound was created on the dorsum of each animal and they were randomly distributed into two groups: one control and one treated with laser (λ660 nm, 16 mW, 10 J/cm2). Each group was subdivided into three subgroups according to the animal death timing (2, 4 and 6 days). Laser irradiation started immediately after surgery and was repeated every other day during the experiment and marked with Sirius Red, specific for collagen, and immunomarked with anti-TGF-β and anti-von Willebrand factor. Marked sections underwent histological analysis by light microscopy and the mean area of the wound of each animal was calculated and analyzed by ANOVA and Tukey's test (α=0.05). Although at some death periods, collagen expression and number of blood vessels on irradiated animals were higher than in the control ones, no significant differences were found at any time in relation to TGF-β expression (p>0.05). It was concluded that laser treatment (λ660 nm) contributed to increase angiogenesis.

O objetivo do trabalho foi avaliar a angiogênese em feridas cutâneas no dorso de ratos tratados com o laser de λ660 nm. A neovascularização é um processo que envolve o aparecimento vascular, a migração das células endoteliais, a proliferação e a formação tubular. Embora diversos estudos in vivo demonstrem que a fototerapia laser influencia no reparo tecidual, uma compreensão completa dos mecanismos da angiogênese ainda não é conhecida. Foram utilizados 24 ratos Wistar novos, machos e adultos pesando entre 200 e 250 g. Uma ferida excisional foi criada no dorso de cada animal sob anestesia geral e os animais foram distribuídos aleatoriamente em dois grupos: G0 (controle) e G1 (laser λ660 nm, 16 mW, 10 J/cm2). Cada grupo foi subdividido em três subgrupos de acordo com o sincronismo da morte dos animais (2, 4 e 6 dias). A irradiação laser foi iniciada imediatamente após a cirurgia, sendo repetida diariamente durante a experiência, avaliada por meio de vermelho de Sirius, específico para o colágeno e avaliação imunológica com anti-TGF-β e o Fator anti-von Willebrand. As seções marcadas foram submetidas à análise histológica no foto-microscópio, onde a área média de cada subgrupo foi calculada e analisada usando o teste ANOVA e de Tukey (α=0,05). Os valores dos animais irradiados foram maiores em certos períodos da morte, na expressão do colágeno e no número de vasos em comparação com os grupos controles. Nenhuma diferença significativa foi encontrada na expressão do TGF-β entre os grupos nos períodos. Conclui-se que o tratamento com laser λ660 nm contribuiu para o aumento da angiogênese.

Detecção de RNA de Leischmania(Leishmania) infantum chagasi em pulgas e carrapatos coletados de cães naturalmente infectados e padronização de uma PCR em tempo real para diagnóstico e diferenciação de espécies de Leishmania / Detection of RNA of Leishmania(Leishmania) infantum chagasi in fleas and ticks collected from naturally infected dogs and standardization of a real-time PCR for diagnois and differentiation of leishmana species

A leishmaniose visceral americana (LVA) é um sério problema de saúde pública. No período de 2003 a 2009 foram registrados no Brasil mais de 34 mil casos de leishmaniose visceral. Até a década de 80, a maioria dos casos concentrava-se em áreas rurais dos municípios. Esse perfil mudou e vários casos são notificados nas áreas urbanas. No Estado de São Paulo a doença é autóctone desde 1998. A partir de 2003 foram registrados também casos autóctones caninos nas redondezas da região metropolitana de São Paulo. Uma das formas de se avaliar a propagação da infecção é o estudo dos transmissores. Embora Lutzomyia longipalpis seja uma espécie prevalente em zonas urbanas, tem sido a única responsável pela transmissão na área urbana dos municípios da região Oeste do Estado. Contudo, na Região Metropolitana de São Paulo a sua presença ainda não foi detectada. Este fenômeno leva a supor que outra espécie de flebotomíneos ou outros ectoparasitas de cães como os carrapatos Rhipicephalus sanguineus e as pulgas Ctenocephalides felis felis possam estar envolvidos na transmissão da LVA. Este estudo mostra que os cães estão densamente infestados por pulgas e carrapatos em todos os estádios evolutivos. Além disso, material genético positivo para L. (L.) infantum chagasi, foi encontrado no interior desses ectoparasitas com uma positividade variando de 53,1% nas pulgas a 77,7% nas ninfas, inclusive após a ecdise de ninfa para o estádio adulto sugerindo a capacidade dos carrapatos de preservar parasitas vivos. Com a utilização da PCR em tempo real, foi possível quantificar o DNA presente no interior dos ectoparasitas. A PCR em tempo real single se mostrou eficiente na detecção de espécies do subgênero Leishmania e com a PCR multiplex foi possíveldiferenciar entre as espécies dos subgênero Viannia e as do complexodonovani. O marcador molecular (CY5) da PCR em tempo real multiplex foicapaz detectar todas as espécies de Leishmania spp analisadas sendo útilpara detectar...

Importance of high IgG anti-Toxoplasma gondii titers and PCR detection of T. gondii DNA in peripheral blood samples for the diagnosis of AIDS-related cerebral toxoplasmosis: a case-control study

BACKGROUND: Cerebral toxoplasmosis (CT) continues to cause significant morbidity and mortality in human immunodeficiency virus (HIV)-infected patients in Brazil. In clinical practice, the initial diagnosis is usually presumptive and alternative diagnosis tools are necessary. Our objective was to evaluate whether the detection of high titers of IgG anti-Toxoplasma gondii and T. gondii DNA in blood samples are associated with the diagnosis of CT. METHODS: In this case-control study we included 192 patients with HIV-1 infection: 64 patients with presumptive CT (cases) and 128 patients with other diseases (controls). Blood samples to perform indirect immunofluorescense reaction (IFI) to detect anti-T. gondii IgG antibodies and polymerase chain reaction (PCR) were collected before or within the first three days of anti-Toxoplasma therapy. Two multivariate logistic regression models were performed: one including the variable qualitative serology and another including quantitative serology. RESULTS: In the first model, positive IgG anti-T. gondii (OR 4.7, 95 percent CI 1.2-18.3; p = 0.027) and a positive T. gondii PCR result (OR 132, 95 percent CI 35-505; p < 0.001) were associated with the diagnosis. In the second model, IgG anti-T. gondii titres > 1:1024 (OR 7.6, 95 percent CI 2.3-25.1; p = 0.001) and a positive T. gondii PCR result (OR 147, 95 percent CI 35-613; p < 0.001) were associated with the diagnosis. CONCLUSIONS: Quantitative serology and molecular diagnosis in peripheral blood samples were independently associated with the diagnosis of CT in HIV-infected patients. These diagnostic tools can contribute to a timely diagnosis of CT in settings where Toxoplasma infection is common in the general population.

Validação dos diagnósticos molecular e sorológico da toxoplasmose cerebral em pacientes com aids

A toxoplasmose é uma das mais comuns infecções parasitárias com alta prevalência em humanos. É uma infecção de caráter oportunista que acomete principalmente mulheres grávidas e pode ameaçar a vida dos pacientes imunocomprometidos, principalmente aqueles com a síndrome da imunodeficiência adquirida (AIDS). Ela é causada por Toxoplasma gondii, um protozoário parasita intracelular obrigatório. A doença pode causar danos graves no sistema nervoso central pela ocorrência da encefalite toxoplásmica. A doença cerebral era uma rara infecção antes da epidemia da AIDS, tornando-se a causa mais comum de lesões expansivas intracranianas e a terceira doença definidora de AIDS. Este estudo avaliou o diagnóstico molecular e imunológico da toxoplasmose cerebral e determinou os perfis sorológicos dos pacientes. Foram analisadas as 256 amostras obtidas de 207 pacientes divididos em dois grupos. O grupo I foi composto de 64 pacientes com toxoplasmose cerebralobtendo um total de 82 amostras (64 de sangue e 18 de LCR). O grupo II foi composto de 143 pacientes com outras doenças oportunistas, sendo 95 neurológicas e 79 doenças sistêmicas, obtendo um total de 174 amostras(128 de sangue e 46 de LCR). A análise molecular das amostras foi realizada pela reação da polimerase em cadeia (PCR), utilizando iniciadores B22 e B23 do gene B1, e a análise imunológica pela imunofluorescênciaindireta (IFI) e pela reação imunoenzimática (ELISA). A PCR mostrou ser igualmente sensível e muito mais específica que os testes imunológicos na análise das amostras de LCR e sangue. O grave envolvimento neurológico na maioria dos pacientes estudados e a altaprevalência de toxoplasmose no Brasil podem ter contribuído para o aumento da sensibilidade da PCR. Os perfis sorológicos dos pacientes do grupo I apresentaram títulos significativamente mais altos daqueles encontrado no grupo II, e sugerem a presença da toxoplasmose cerebral ou um alto risco ...

Validação dos diagnósticos molecular e sorológico da toxoplasmose cerebral em pacientes com aids / Validation of dianosis molecular and serological of the cerebral toxoplasmosis in patients with aids

A toxoplasmose é uma das mais comuns infecções parasitárias com alta prevalência em humanos. É uma infecção de caráter oportunista que acomete principalmente mulheres grávidas e pode ameaçar a vida dos pacientes imunocomprometidos, principalmente aqueles com a síndrome da imunodeficiência adquirida (AIDS). Ela é causada por Toxoplasma gondii, um protozoário parasita intracelular obrigatório. A doença pode causar danos graves no sistema nervoso central pela ocorrência da encefalite toxoplásmica. A doença cerebral era uma rara infecção antes da epidemia da AIDS, tornando-se a causa mais comum de lesões expansivas intracranianas e a terceira doença definidora de AIDS. Este estudo avaliou o diagnóstico molecular e imunológico da toxoplasmose cerebral e determinou os perfis sorológicos dos pacientes. Foram analisadas as 256 amostras obtidas de 207 pacientes divididos em dois grupos. O grupo I foi composto de 64 pacientes com toxoplasmose cerebralobtendo um total de 82 amostras (64 de sangue e 18 de LCR). O grupo II foi composto de 143 pacientes com outras doenças oportunistas, sendo 95 neurológicas e 79 doenças sistêmicas, obtendo um total de 174 amostras(128 de sangue e 46 de LCR). A análise molecular das amostras foi realizada pela reação da polimerase em cadeia (PCR), utilizando iniciadores B22 e B23 do gene B1, e a análise imunológica pela imunofluorescênciaindireta (IFI) e pela reação imunoenzimática (ELISA). A PCR mostrou ser igualmente sensível e muito mais específica que os testes imunológicos na análise das amostras de LCR e sangue. O grave envolvimento neurológico na maioria dos pacientes estudados e a altaprevalência de toxoplasmose no Brasil podem ter contribuído para o aumento da sensibilidade da PCR. Os perfis sorológicos dos pacientes do grupo I apresentaram títulos significativamente mais altos daqueles encontrado no grupo II, e sugerem a presença da toxoplasmose cerebral ou um alto risco de desenvolver a doença. Apenas dois pacientes apresentaram ...

Epidemiología del uso de medicamentos durante el embarazo / Epidemiology of the use of drugs during the pregnancy

Por cuanto concierne a la epidemiología del uso de los medicamentos durante el embarazo en Italia, en los últimos años se llevaron a cabo varias iniciativas, desde el punto de vista metodológico únicas, en este sector. En el presente artículo se reportan tres puntos de observación que le dan un toque original al trabajo desarrollado: se enfocan la prescripción en sí, la población en general y el sujeto en particular