TRAP-silver staining, a highly sensitive assay for measuring telomerase activity in tumor tissue and cell lines

Measurement of telomerase activity in clinically obtained tumor samples may provide important information for use as both a diagnostic marker and a prognostic indicator for patient outcome. In order to evaluate telomerase activity in tumor tissue without radiolabeling the product, we developed a simple telomeric repeat amplification protocol-silver-staining assay that is less time-consuming, is safe and requires minimal equipment. In addition, we determined the sensitivity of the silver-staining method by using extracts of telomerase-positive thyroid carcinoma cell lines which were serially diluted from 5,000 to 10 cells. Telomerase activity was also assayed in 19 thyroid tumors, 2 normal controls and 27 bone marrow aspirates. The results indicate that the technique permits the detection of telomerase activity from 5000 to as few as 10 cells. We propose that it could be immediately applicable in many laboratories due to the minimal amount of equipment required

Estradiol decreases iodide uptake by rat thyroid follicular FRTL-5 cells

Estradiol has well-known indirect effects on the thyroid. A direct effect of estradiol on thyroid follicular cells, increasing cell growth and reducing the expression of the sodium-iodide symporter gene, has been recently reported. The aim of the present investigation was to study the effect of estradiol on iodide uptake by thyroid follicular cells, using FRTL-5 cells as a model. Estradiol decreased basal iodide uptake by FRTL-5 cells from control levels of 2.490 0.370 to 2.085 0.364 pmol I-/æg DNA at 1 ng/ml (P<0.02), to 1.970 0.302 pmol I-/æg DNA at 10 ng/ml (P<0.003), and to 2.038 0.389 pmol I-/æg DNA at 100 ng/ml (P<0.02). In addition, 4 ng/ml estradiol decreased iodide uptake induced by 0.02 mIU/ml thyrotropin from 8.678 0.408 to 7.312 0.506 pmol I-/æg DNA (P<0.02). A decrease in iodide uptake by thyroid cells caused by estradiol has not been described previously and may have a role in goiter pathogenesis

Comparaçäo entre duas estratégias para a detecçäo precoce do hipotireoidismo congênito / Comparison between two strategies for the precocious detection of congenital hypothyroidism

Objetivo. Comparar em recém-nascidos (RN) duas estratégias diferentes para o rastreamento do hipotiroidismo congênito (HC), a dosagem primária de TSH no sangue colhido do cordao umbilical (método 1) e a dosagem primária de T4 no sangue colhido por punçao de calcanhar no 2 dia de internaçao (método 2). Métodos. Os autores compararam as duas estratégias em 10.000 RN. Dosaram o TSH por método imunofluorimétrico sensível em papel de filtro e o T4 por radioimunoensaio em papel de filtro. A coleta de sangue do calcanhar foi realizada no 2 dia de vida. Resultados. Os dois programas diagnosticaram todos os casos de HC nos RN (4 casos, 1/2.500 RN). O índice de rechamada por coleta inadequada foi nulo no método 1 e de 8,5 por cento (850RN) no método 2. O índice de reconvocaçao para confirmaçao de resultados foi de 0,06 por cento (6RN) no método 1 e 2,25 por cento (225 RN) no método 2; quando este método incluía também a dosagem suplementar de TSH, o índice baixou para 1,63 por cento (163 RN). Conclusao. Os dados dos autores evidenciam a superioridade técnica da coleta de sangue a partir do cordao umbilical em relaçao à punçao de calcanhar, assim como da dosagem primária de TSH em relaçao à de T4, uma vez que apresentam índices muito menores de reconvocaçao.

Valor preditivo da dosagem das iodotironinas na avaliaçäo prognóstica de doentes graves / Predictiove value of the measurement of iodotironines on the prognosis of patients with severe nonthyroidal illness

Os valores das dosagens de T3 e de T4 diferenciaram os pacientes com boa e ma evoluçao durante a internaçao em unidade de terapia intensiva. Objetivo. Procurar indicadores para o prognóstico de doentes graves por meio do estudo seqüencial dos níveis séricos dos hormonios tiroidianos. Métodos. Os autores mediram as iodotironinas (T3, T4 e rT3) por ocasiao da entrada e da alta de 42 pacientes internados em unidade de terapia intensiva. Verificaram, também, os dados referentes à última coleta de outros 17 doentes, transferidos para a UTI após o início do quadro clínico. Resultados. Comparando pacientes que evoluíram bem com aqueles que foram a óbito, observaram, nos primeiros, níveis iniciais normais de T4 em 76 por cento dos casos, valores que se mantiveram estaveis ou se elevaram em 65 por cento dos pacientes durante a internaçao, de tal forma que níveis normais de T4 estavam presentes em 70 por cento dos casos por ocasiao de sua alta. Ao contrario, 56 por cento dos pacientes que evoluíram mal ja apresentavam T4 inicial baixo, que diminuiu ainda mais de 95 por cento dos pacientes durante a internaçao, notando-se valores baixos em 81 por cento dos casos por ocasiao da ultima amostra. Os valores de T3 e T4 em conjunto também diferenciaram os pacientes com boa e m evoluçao. Conclusao. Os autores sugerem que a observaçao dos níveis séricos das iodotironinas pode oferecer importante subsídio na avaliaçao prognóstica de doentes em estado grave.

Enzyme-linked thyroglobulin immunoassay

A one-step enzyme linked sandwich immunoassay using Silicone rods coated with rabbit anti-human thyroglobulin anti-Tg) immunoglobulin G (Fab') conjugated with beta-D-galactosidase was established for the measurement of thyroglobulin in human sera. The volume of serum needed for the assay was 2 mul The sensitivity of the assay was 1.52 amol/tube, corresponding to O.5 ng/ml. The precision was proven by coefficients of variation: intra-assay, 7.0 to 9.1 per cent: inter-assay, 5.3 to 7.4 per cent. The correlation between this EIA and RIA was O.91, p < O.O1.

An enzymeimmunoassay for the determination of thyrotropin (TSH) in drieb blood on filter paper: application to a screening program for detection of congenital hypothyroidism

An enzymeimmunoassay (EIA) for H-TSH (human thyrotropin) in dried blood on filter paper using an anti-H-TSH conjugate with ß-D-galactosidase and tubes coated with an anti-H-TSH was performed fo the screening program for detection of congenital hypothyroidism. The blood volume needed in this assay was 8.7 µl. The precision was evaluated by coefficients of variance within and between assays: 11.86 percent and 14.36 percent for H-TSH levels of 18.5 µU/ml and 35 µU/ml. A good correlation was observed between H-TSH concentration measured by EIA and RIA (r=0.91)