Eficiencia del cultivo bacteriológico y de la inmunofluorescencia en la detección de Campylobacter fetus en fluidos genitales bovinos / Efficiency of bacteriological culture and the immunofluorescent assay to detect Campylobacter fetus in bovine genital fluids

La campilobacteriosis genital bovina es una enfermedad reproductiva que afecta la producción bovina. Es causada por las subespecies de Campylobacter fetus, C. fetus fetus (Cff) y C. fetus venerealis (Cfv). El objetivo de este estudio fue identificar la presencia de C. fetus en fluidos genitales mediante cultivo bacteriológico e inmunofluorescencia directa (IFD) y comparar los resultados. Se conformaron 2 grupos de 6 vaquillonas y 5 toros cada uno. Uno se infectó con Cff (grupo Cff) y el otro con Cfv (grupo Cfv). Dos vaquillonas y 2 toros sin infectar conformaron el grupo control. Periódicamente se tomaron muestras de mucus cervicovaginal y fluido prepucial, las que se procesaron por cultivo e IFD. En el grupo Cff se infectó el 100 % de las vaquillonas y el 80 % de los toros, mientras que en el grupo Cfv se infectó el 50 y el 60 %, respectivamente. Los valores de concordancia (Kappa) obtenidos al comparar las técnicas diagnósticas fueron de 0,57 para las vaquillonas del grupo Cff y 0,52 para las del grupo Cfv, y para los toros fueron de 0,17 y 0,27, respectivamente. En las vaquillonas, la IFD arrojó más resultados positivos que el cultivo, un 5,6 % más para el grupo Cff y un 7,4 % más para el grupo Cfv. El menor porcentaje de resultados positivos por IFD en los toros, un 40 % menos que por cultivo para el grupo Cff y un 5,3 % menos para el grupo Cfv, podría deberse a un muestreo incorrecto. Los valores de Kappa indican una concordancia moderada en las vaquillonas y baja en los toros.

Bovine genital campylobacteriosis is a reproductive disease that affects cattle production. It is caused by Campylobacter fetus subspecies, C. fetus fetus (Cff) and C. fetus venerealis (Cfv). The aim of this study was to identify the presence of C. fetus in genital fluids by bacteriological culture and direct immunofluorescence (DIF) and to compare the results. Two groups of 6 heifers and 5 bulls, one infected with Cff (Cff group) and the other with Cfv (Cfv group) were formed. Two heifers and 2 bulls, all of them uninfected, made up the control group. Samples of cervicovaginal mucus and preputial fluid were processed by culture and DIF. In the Cff group, 100 % of the heifers and 80 % of the bulls were infected, while in the Cfv group, 50 % of the heifers and 60 % of the bulls were infected. The degree of agreement (Kappa values) from benchmarking diagnostic techniques were 0.57 for heifers in the Cff group and 0.52 for heifers in the Cfv group, whereas the values for bulls were 0.17 and 0.27, respectively. Heifers yielded more positive results in the DIF assay than in the culture, exhibiting 5.6 % increase in the Cff group and 7.4 % in the Cfv group. The lowest percentage of positive results for DIF in bulls, 40 % less for the Cff group and 5.2 % for the Cfv group, could be due to improper sampling. Kappa values showed moderate agreement for the heifers and low for the bulls.

Production and characterization of monoclonal antibodies against Campylobacter fetus subsp. venerealis / Produção e caracterização de anticorpos monoespecíficos contra Campylobacter fetus subsp. venerealis

Myeloma cells Sp2/0-Ag14 and spleen cells from BALB/c mouse immunized with sonicated Campylobacter fetus subsp. venerealis NCTC 10354 were fused with polyethylene glycol (PEG) for the selection of clones producing antibodies. Clones were obtained by limiting dilution and screened for the production of specific antibodies to C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354 by indirect ELISA and western blot against a panel of bacteria: C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354, C. fetus subsp fetus ADRI 1812, C. sputorum biovar sputorum LMG 6647, C. lari NCTC 11352, and Arcobacter skirrowii LMG 6621 for the ELISA and C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354 and C. sputorum biovar sputorum LMG 6647 for the western blotting. Fifteen clones producing monoclonal antibodies (MAbs) anti-C. fetus subsp. venerealis of the IgM (1) and IgG (14) classes were further screened for species-specificity. Four clones of the 15 obtained were producers of species-specific monoclonal antibodies (MAbs): two were specific for C. fetus subsp. venerealis and two were specific for C. fetus subsp. fetus. None of the clones were reactive against C. sputorum biovar sputorum LMG 6647. All clones recognized a protein with molecular mass of approximately 148 kDa from lysed C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354.

Para a produção de anticorpos monoclonais contra Campylobacter fetus subsp. venerealis foram utilizadas as linhagens de células de mieloma Sp2/0-Ag14 e células de baço de camundongos BALB/c imunizados com sonicado de C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354. A detecção dos anticorpos monoclonais foi realizada por ELISA indireto utilizando antígeno sonicado de C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354. A clonagem foi realizada por diluição limitante e os clones foram caracterizados por ELISA indireto utilizando um painel de bactérias escolhidas em função da prevalência e habitats: C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354, C. fetus subsp. fetus ADRI 1812, C. sputorum biovar sputorum LMG 6647, C. lari NCTC 11352 e Arcobacter skirrowii LMG 6621; e no "western blotting" utilizando antígenos sonicados de C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354 e C. sputorum biovar sputorum LMG 6647. Foram obtidos 15 clones produtores de anticorpos anti- C. fetus subsp. venerealis das classes IgM (1) e IgG (14). Quatro clones dentre os 15 clones obtidos foram produtores de anticorpos monoclonais espécie-específicos: dois clones reagiram com maior especificidade contra C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354 e dois clones reagiram com maior especificidade contra C. fetus subsp. fetus ADRI 1812. Nenhum dos clones reagiu contra C. sputorum biovar sputorum LMG 6647, comprovando a especificidade dos anticorpos monoclonais testados. Todos os clones reconheceram uma proteína de massa molecular de aproximadamente 148 kDa no sonicado de C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354.

PCR Multiplex fluorescente para detecção de bactérias em sêmen bovino / Fluorescent Multiplex PCR for detection of bacteria in semen bovine

Este estudo teve como objetivo avaliar o limiar de detecção da técnica de PCR multiplex fluorescente aliada a eletroforese capilar na detecção de agentes infecciosos em amostras de sêmen experimentalmente contaminadas com concentrações decrescentes das bactérias Brucella abortus, Leptospira interrogans sorovar pomona, Campylobacter fetus e Haemophilus somnus. Amostras de sêmen bovino foram experimentalmente contaminadas com concentrações decrescentes de bactérias obtidas através de diluições seriadas na base 10 de modo a obter-se amostras contendo desde 1 vez até 10-7 bactérias/mL a partir da concentração inicial de Leptospira pomona, Brucella abortus, Campylobacter fetus e Haemophilus somnus. As diluições foram efetuadas individualmente para cada bactéria, bem como nas diferentes concentrações necessárias para a padronização do teste de multiplex PCR. As extrações de DNA de todas as soluções contendo espermatozóides e bactérias analisadas no presente estudo foram realizadas segundo protocolo descrito por Heinemann et al. (2000). Os produtos de PCR multiplex foram avaliados por eletroforese em gel de poliacrilamida 8% e separação eletroforética por sistema capilar em equipamento automático de análise de fragmentos de DNA MegaBace. Observou-se a amplificação de fragmentos de 193pb, 330pb, 400pb e 415pb a partir do DNA de B. abortus, L. pomona, H. somnus, C. fetus, respectivamente. Na análise por eletroforese capilar de produtos da PCR multiplex do DNA para detecção simultânea dos quatro patógenos observou-se a sinal de positividade até a diluição de 10-3 bactérias/mL vezes da concentração inicial da solução estoque de cada bactéria. A técnica de PCR multiplex aliada à eletroforese capilar foi usada pela primeira vez para o diagnóstico direto de quatro bactérias patogênicas no sêmen, demonstrando ser um método rápido na detecção de bactérias causadoras de doenças reprodutivas.

This study aimed to evaluate the threshold of detection of fluorescent multiplex PCR coupled with capillary electrophoresis for detection of infectious agents in semen samples from experimentally infected with decreasing concentrations of the bacteria Brucella abortus, Leptospira interrogans serovar pomona, Campylobacter fetus and Haemophilus somnus. Samples of bovine semen were experimentally infected with decreasing concentrations of bacteria obtained from serial dilutions in the base 10 so as to obtain samples containing a long time until 10-7 bacteria/mL from the initial concentration of Lepstospira pomona, Brucella abortus, Haemophilus somnus and Campylobacter fetus. The dilutions were made individually for each bacterium, as well as in different concentrations needed to standardize the multiplex PCR test. DNA extractions of all solutions containing sperm and bacteria analyzed in this study were performed according to protocol described by Heinemann et al. (2000). The multiplex PCR products were analyzed by electrophoresis on 8% polyacrylamide gel and capillary electrophoretic separation system for automated equipment in the analysis of DNA fragments MegaBACE. We observed amplification of fragments of 193pb, 330pb, 415pb and 400bp from the DNA of B. abortus, L. pomona, H. somnus, C. fetus respectively. The analysis by capillary electrophoresis of multiplex PCR products of DNA for simultaneous detection of the four pathogens was observed by detecting the dilution of 10-3 bacteria / mL times the initial concentration of the stock solution of each bacterium. The multiplex PCR coupled with capillary electrophoresis was first used for the direct diagnosis of four pathogenic bacteria in semen, proving to be a rapid method to detect bacteria that cause reproductive disorders.

Bacteriemia por Campylobacter fetus aislado mediante métodos convencionales de una paciente inmunocomprometida / Bacteremia due to Campylobacter fetus isolated by conventional methods from an immunocompromised patient

Las bacterias del género Campylobacter son bacilos gram-negativos móviles, helicoidales, que presentan morfologías características. Estos microorganismos requieren una baja tensión de oxígeno y un nivel aumentado de CO2 para su desarrollo. Se presenta un caso de bacteriemia por Campylobacter fetus en una paciente con diagnóstico previo de cáncer de mama, metástasis en columna dorso-lumbar y leucemia promielocítica aguda M3 variante de la clasificación FAB. La paciente ingresó al Hospital Italiano de Córdoba por pérdida de conocimiento y proctorragia de 48 h de evolución. Debido a su pancitopenia severa se le realizaron sucesivas transfusiones de sangre. A los 13 días de internación presentó fiebre permanente. Se tomaron muestras para hemocultivo y urocultivo y se comenzó el tratamiento antibiótico con clindamicina y ciprofloxacina. Los hemocultivos se subcultivaron a las 48 h en agar chocolate. A las 24 h de incubación a 35 °C en atmósfera con 5% de CO2 desarrollaron colonias diminutas. La coloración de Gram reveló en ambas muestras bacilos gram-negativos espirilados, posteriormente identificados como Campylobacter fetus por medio de pruebas bioquímicas convencionales. El esquema antibiótico fue rotado a gentamicina más clindamicina. La paciente evolucionó favorablemente y los hemocultivos resultaron negativos luego de 5 días de tratamiento.

The genus Campylobacter includes gram-negative, motile, curved rods that can evidence characteristic morphologies. These microorganisms require low oxygen tension and an increased level of CO2 for growing. A case of bacteremia due to Campylobacter fetus in a patient with a previous diagnosis of breast cancer with metastases in dorso-lumbar column and acute promyelocytic leukemia (FAB-M3 variant) is presented. The patient was admitted to our institution due to loss of consciousness and a 2 day - history of bloody diarrhea. She received successive blood transfusions on account of her pancytopenia.Thirteen days later she developed high-grade fever. Samples were taken for blood and urine cultures and antibiotic treatment with clindamycin and ciprofloxacin was instituted. Blood culture bottles were subcultivated at 48 hours in chocolate agar. After 24 hours of incubation at 35 °C in a 5% CO2 atmosphere (candle jars), tiny colonies developed. Gram stain showed spiral-shaped gram-negative rods in both samples. The strain was identified as Campylobacter fetus by conventional biochemical tests. The antibiotic therapy was switched to clindamycin and gentamicin. The patient evolved favorably with negative blood cultures after a 5 day- treatment.

Bacteriemia por Campylobacter fetus subsp fetus en un paciente inmunosuprimido / Bacteraemia due to Campylobacter fetus in an immune suppressed patient

We report a case of bacteraemia by Campylobacter fetus subsp. fetus in a 77 year-old woman with immunosuppression secondary to steroid use. Diagnosis was suspected by finding Gram negative curved rods in blood cultures taken after 4 days of a febrile illness without local findings. Diarrhea was not present. There was no consumption of undercooked meat or non-pasteurized milk and no contact with pets. The patient was treated with sulbactam-cefoperazone due to the coexistence of urinary tract infection by multiresistant E. coli. The outcome was favorable and albeit susceptibility was not assessed, quinolone resistance was presumed because illness appeared during ciprofloxacin prophylaxis for urinary tract infection. In contrast to C. jejuni infections, C. fetus infections are associated to debilitated or immunosuppressed patients, bacteraemia is predominant, diarrhea is rarely observed and disease is not self-limited.

Comunicamos un caso de bacteriemia por Campylobacter fetus subsp. fetus en una paciente inmunosuprimida de 77 años, usuaria de corticoesteroides. La sospecha fue planteada por el hallazgo de bacilos gramnegativos curvos en los hemocultivos tomados al cuarto día de evolución de un cuadro febril sin diarrea. La paciente fue tratada con sulbactam/ cefoperazona debido a la coexistencia de una infección urinaria por Escherichia coli multiresistente. No hubo antecedentes de consumo de alimentos crudos o parcialmente cocidos en las semanas recientes y tampoco había contacto con mascotas. La evolución fue favorable. Aunque no se estudió la susceptibilidad del aislado, se presumió resistencia a quinolonas ya que el cuadro apareció durante el uso profiláctico de ciprofloxacina para infección urinaria. En contraste con C. jejuni, las infecciones por C. fetus se asocian a pacientes debilitados o inmunosuprimidos, se manifiestan predominantemente como bacteriemias sin diarrea y no tiene un perfil autolimitado.

Susceptibilidade antimicrobiana de Campylobacter fetus subsp. venerealis isolado de bovinos / Antimicrobial susceptibility of Campylobacter fetus subsp. venerealis isolated from cattle

A campilobacteriose venérea bovina, ocasionada principalmente pelo Campylobacter fetus subsp. fetus e Campylobacter subsp. venerealis, é transmitida através do coito ou por inseminação com sêmen contaminado. O propósito deste estudo foi determinar a susceptibilidade in vitro de isolados de C. fetus subesp. venerealis a agentes antimicrobianos comumente utilizados para o tratamento clínico e de sêmen. Foram testadas duas cepas padrão, sendo uma de C. fetus subsp. fetus e outra de C. fetus subsp. venerealis, bem como 21 amostras de isolados clínicos de C. fetus subsp. venerealis. Os testes foram realizados conforme o método de Kirby-Bauer. A amostra padrão de C. fetus subsp. fetus demonstrou-se resistente à lincomicina, penicilina e ácido nalidíxico, enquanto a de C. fetus subsp. venerealis apresentou susceptibilidade a todos antimicrobianos testados, com exceção do ácido nalidíxico. Todas as amostras de C. fetus subsp. venerealis foram susceptíveis à amicacina, ampicilina, cefalotina, estreptomicina, gentamicina, penicilina e tetraciclina. Foi observada resistência de 42,86 por cento à lincomicina e 4,76 por cento a enrofloxacina, e de 100 por cento ao ácido nalidíxico. Ainda, 4,76 por cento apresentaram susceptibilidade intermediária à enrofloxacina, neomicina e polimixina B e 9,52 por cento à lincomicina. Os resultados evidenciaram a sensibilidade das amostras analisadas aos antimicrobianos comumente utilizados para o tratamento clínico e do sêmen.

Campilobacteriose genital bovina: ocorrência nos estados do Rio de Janeiro e Minas Gerais / Genital bovine campilobacteriosis: occurrence in Rio de Janeiro and Minas Gerais states

Para verificar a ocorrência de campilobacteriose genital bovina, em rebanhos de bovinos leiteiros do Rio de Janeiro e Minas Gerais, realizou-se a prova de muco-aglutinaçäo lenta para as fêmeas, e o isolamento bacteriológico para os machos. Dos 248 animais examinados durante o período de 1996 a dezembro de 1997, constataram-se 71 animais positivos (28,63 por cento), 33 suspeitos (13,31 por cento) e 144 negativos (58,06 por cento), provenientes de 21 propriedades visitadas nos estados do Rio de Janeiro e Minas Gerais, sendo diagnosticada a campilobacteriose em 20 propriedades (95,2 por cento). A campilobacteriose provavelmente contribuiu para a baixa eficiência reprodutiva verificada nos rebanhos examinados.

Aneurisma de aorta abdominal infectado por Campylobacter fetus spp fetus: relato de cas e revisao de literatura / Abdominal aortic aneurysm infected with campylobacter fetus spp fetus

A infeccao de aneurisma de aorta por Campylobacter fetus spp fetus e rara, sendo o primeiro caso relato em 1971. Apresentamos um caso de aneurisma de aorta abdominal, com historia de dor abdominal, febre e calafrios, em que houve identificacao deste bacilo Gram negativo na cultura de fragmento de aorta colhido na operacao e visualizacao de microrganismo em estudo anatomo-patologico...

Isolamentos bacterianos de fetos abortados bovinos examinados no Instituto Biológico de Säo Paulo, no período de 1985 a 1992 / Bacterial isolations from bovine aborted fetuses examined in Instituto Biologico of Sao Paulo State, Brazil, from 1985 to 1992

No período de 1985 a 1992, foram analisadas bacteriologicamente 544 amostras de órgäos e anexos fetais, provenientes de 282 fetos bovinos, oriundos de rebanhos, na sua maioria leiteiros, procedentes de vários estados do Brasil. Foram consideradas como possíveis causas de abortamento, as bactérias patogênicas e as culturas puras ou preponderantes de bactérias oportunistas. Excluindo-se os materiais impróprios para exame (25/282), dos 257 restantes, em 37,4 por cento foram diagnosticadas causas bacterianas, tais como: Brucella abortus (6,2 por cento), Leptospira spp (6,2 por cento), Staphylococcus aureus (5,4 por cento), Campylobacter fetus (4,7 por cento) e Streptococcus Beta hemolítico (3,5 por cento). Os focos destes agentes apresentavam-se amplamente distribuídos no Estado de Säo Paulo

Occurrence of Campylobacter Jejuni and Campylobacter Coli in retail raw chiken meat and giblets in Säo Paulo, Brazil

Estudou-se a incidência de Campylobacter jejuni e Campylobacter coli em duzentas amostras de carne e de miúdos de frango crus, coletados em supermecados da cidade de Säo Paulo, Brasil. As amostras incluíram carcaças inteiras, pedaços de carne e miúdos (moelas, fígado, coraçäo e pés). Campylobacter foi detectado em 13,5% das amostras estudadas. Maior incidência foi observada nos pedaços de carne. Das 100 cepas de Campylobacter isoladas, 14 foram caracterizadas como C.jejuni e 86 como C.coli

Pyogenic arthritis of the hip due to Campylobacter fetus: a case report

Septic arthritis of the hip caused by Campylobacter fetus subsp. fetusis very rare. The authoris isolated C. fetus subsp. fetus from a specimen of the left hip. The patient was a 53-year old man with a history of heavy drinking, diabetes, and chronic hepatitis, and had been suffering from avascular necrosis of both femoral heads. It was considered that the organism invaded already damaged tissue of the joint. The patient was treated with intravenous antibiotics and later received successful total hip replacement.

Campylobacter jejuni en carne de ave / Campylobacter jejuni in poultry

Se estudiaron 15 procesos de sacrificio de aves (pollos de engorde) para detectar la presencia de Campylobacter jejuni en las canales, después de la evisceración y finalizado el enfriamiento de las mismas; se detectaron el 80% y el 66,67% de muestras positivas respectivamente. En todos los procesos se encontró a este agente en al menos una muestra. Se valoran las medidas higiénicas que se pueden aplicar para evitar la propagación de estos microorganismos

Evaluación de un nuevo medio con lisado globular para aislamiento de Campylobacter jejuni y Campylobacter coli / Evaluation of a new medium with globular lysate for the isolation of Campylobacter jejuni and Campylobacter coli

Se evaluó el rendimiento de un medio de cultivo semipreparado, conteniendo lisado globular equino, para el aislamiento de Campylobacter bajo dos atmósferas de incubación (5% O2 y jarra de vela). Se estudiaron 19 cepas conocidas de C. jejuni, 151 muestras de heces humanas y 230 muestras fecales obtenidas de animales, las que fueron sembradas en medio convencional (MC) y en medio con lisado globular (MLG) e incubadas a 42§C por 24 y 48 horas. El desarrollo de Campylobacter fure significativamente superior, en número y tamaño de las colonias, a las 48 horas de incubación en 5% O2 en ambos medios de cultivo. Todas las cepas que crecieron o fueron aisladas en MC 5% O2, también lo fueron en MLG incubado en jarra de vela. Campylobacter fue aislado en el 5,3% de las muestras de heces humanas tanto en MC como en MLG, independentemente de la atmósfera de incubación. En la smuestras de origen animal el porcentaje de aislamiento fue del 35,2% en medio Skirrow modificado y del 34,3% en MLG con un 99,13% de concordancia entre ambos medios

Campylobacter diarrhea in children in Trivandrum.

One hundred and fifty two stool samples from patients belonging to the pediatric age group clinically diagnosed as acute diarrhea/dysentery were processed for thermophilic campylobacters. C. jejuni was isolated from 9 samples (5.9%). Five of the C. jejuni isolates were from children who presented with bloody diarrhea and 4 were from those who had watery diarrhoea. Though the pathogenic role of C. jejuni in these cases is not proved, this study indicates the prevalence of the organism in Trivandrum district.

Primer aislamiento de campylobacter jejuni en Misiones: importancia de su estudio en pacientes con gastroenteritis severas / First isolation of campylobacter jejuni in Misiones: its importance in patients with severe gastroenteritis

Informa del primer aislamiento de Campylobacter jejuni en un niño con diarrea aguda, internado en el Hospital Ramón Madariaga de la ciudad de Posadas, Misiones. Se trata de un paciente de dos meses de edad que en enero de 1987 presentó un cuadro de diarrea aguda, con temperatura elevada, deshidratación moderada, vómitos y 6 a 8 deposiciones diarias. El estudio microbiológico de sus heces resultó negativo para Escherichia coli enterotoxigénica (ECET), eschirichia coli entero invasiva (ECEI), escherichi coli enteropatógena (ECEP) escherichia coli enterhemorrágica (ECEH), salmonella, shigella, aeromona y rotavirus, aislándose como único agente Campylobacter jejuni. Luego del tratamiento el paciente evolucionó favorablemente

Características bioquímicas de Campylobacter isolados de bezerros com e sem diarréia / Biochemical characters of Campylobacter sp, isolated from calves with and without diarrhea

Sessenta amostras de Campylobacter sp, isoladas de bezerros com e sem diarréia foram testadas frente a 11 testes bioquímicos. Dentro dos critérios propostos, Campylobacter sp, foi classificado, 53,3% como Campylobacter jejuni (biotipo 1 e biotipo 2); 8,4% como Campylobacter coli; 20% Campylobacter jejuni/coli; 15% como NARTC - grupo 3,3% como Campylobacter fetus subsp venerealis. Foram englobadas algumas novas cepas de Campylobacter sp, com determinadas características fenotípicas, obedecendo a nomenclatura aceita pela "Aproved List of Bacterial Names" (1980)