Estudo da interação entre neutrófilos, células dendríticas humanas e L. braziliensis / Study of the interaction between neutrophils, human dendritic cells and L. braziliensis

Os neutrófilos são essenciais para a resposta imune inata contra uma variedade de patógenos. Eles são capazes de modular a resposta imune através da produção de citocinas e quimiocinas, degranulação e a sua interação direta com outras células no local da infecção, tais como as células dendríticas. A interação entre as células do sistema imune inato é essencial para direcionar a resposta imune adaptativa, a qual é responsável pela eliminação de microrganismos e manutenção de memória imunológica. Objetivo: Este estudo avaliou a interação de neutrófilos humanos com Leishmania braziliensis, através da análise da expressão de moléculas de superfície, liberação de enzimas presentes nos grânulos e produção de espécies reativas de oxigênio (ROS). Também foi avaliada a interação entre neutrófilos humanos infectados e células dendríticas, a fim de se observar o efeito desta interação na indução da ativação das células dendríticas. Metodologia: Os neutrófilos foram purificados a partir do sangue periférico de doadores saudáveis e as células dendríticas foram geradas in vitro. Os neutrófilos foram infectados ou não com L. braziliensis e co-cultivados com as células dendríticas. Em seguida, os sobrenadantes e as células foram coletadas para avaliar a liberação de enzimas, tais como mieloperoxidase (MPO) e metaloproteinase 9 (MMP-9). O fenótipo e a função dos neutrófilos foram analisados através da expressão de Mac-1 (CD18 e CD11b), CD16, CD62-L e produção de ROS...

Neutrophils are essential in the innate immune response against a variety of pathogens. They are able to modulate immune response by cytokine and chemokine production, release of granules and their direct interaction with other cells at the infection site. Dendritic cells are recruited in response to cytokines and chemokines produced by neutrophils. The interaction between cells of the innate immune system is essential for targeting the adaptive immune response, which is responsible for eliminating microorganisms and the maintenance of immunological memory. Objective: Evaluate the interaction of human neutrophils with Leishmania braziliensis, through the analysis of surface molecule expression, release of granules enzymes and production of reactive oxygen species (ROS). We also evaluated the interaction between human infected neutrophils and dendritic cells, in order to observe the effect of this interaction on dendritic cells. Methodology: Neutrophils were purified from peripheral blood of healthy donors and dendritic cells were generated in vitro. Neutrophils were infected or not with L. braziliensis and cocultured with DC. Afterwards, supernatants and cells were harvested to evaluate the release of granules enzymes, such as myeloperoxidase (MPO) and metalloproteinase 9 (MMP-9). Neutrophils phenotype and function were analyzed by the expression of Mac-1 (CD18 and CD11b), CD16 and ROS production...

Avaliação da capacidade protetora de antígenos recombinantes contra a Leishmaniose Tegumentar / Protective capacity of recombinant antigens against tegumentary leishmaniasis

A leishmaniose é uma doença de escala global, que afeta 12 milhões de pessoas e pode causar um espectro de doenças que vai desde a forma cutânea localizada, que tende para a cura espontânea, até a forma visceral que é fatal. Apesar da gravidade da doença, até o momento não existe uma vacina efetiva para prevenir a leishmaniose. Dentre os antígenos promissores para o desenvolvimento de uma vacina, destacam-se as proteínas ribossomais (S4, S6, L3 e L5) e a KMP-11, uma proteína de superfície presente nos membros da família tripanosomatidae. Nosso estudo consistiu em avaliar os efeitos da imunização com estes antígenos frente ao desafio com L. major e com L. braziliensis, empregando modelos experimentais de infecção. Primeiramente, avaliamos a capacidade protetora dos antígenos ribossomais frente à infecção por L. major. Dos quatro antígenos avaliados, apenas L3 ou L5 foram capazes de prevenir o desenvolvimento da lesão e de diminuir a carga parasitária. A vacinação de camundongos com estes antígenos, na presença de CpG, induziu um perfil de resposta Th1, com elevada produção de IFN-γ, baixa produção de IL-10 e presença de anticorpos IgG2a. Em seguida, avaliamos a capacidade protetora dos antígenos L3 e L5...

Leishmaniasis is a global disease affecting 12 million people and can cause diseases that range from self-healing localized cutaneous leishmaniasis to fatal visceral leishmaniasis. Despite the severity of the disease, there is no effective vaccine to prevent leishmaniasis. Among the promising antigens for the development of a vaccine, stand out the ribosomal proteins (S4, S6, L3, and L5) and KMP-11, a surface protein, widely found in the members of family Trypanosomatidae. Our study evaluated the effects of immunization with these antigens upon challenge with L. major and L. braziliensis, employing the experimental models of infection. First, we evaluated the protective ability of ribosomal antigens to infection by L. major. Among the four antigens examined only L3 or L5...

Avaliação de interação entre neutrófilos e leishmania braziliensis / Evaluation of interaction between neutrophils and Leishmania braziliensis

A leishmaniose tegumentar americana (LTA) tem como principal agente etiológico a L. braziliensis e é uma das afecções dermatológicas que merece mais atenção, por seu alto coeficiente de detecção e sua capacidade de produzir deformidades. O neutrófilo é considerado a primeira linha de defesa contra agentes infecciosos ou substâncias estranhas e o seu rápido recrutamento para os tecidos é fundamental para o sistema imune inato. No modelo murino de infecção por L. braziliensis, mostramos um constante recrutamento de neutrófilos para o sítio de infecção. Baseados nesses resultados, nós formulamos uma hipótese que os neutrófilos desempenham um papel importante durante os estágios iniciais de infecção com L. braziliensis. Assim, conduzimos experimentos com neutrófilos recrutados com tioglicolato e neutrófilos derivados de medula óssea. Inicialmente, observamos que os neutrófilos são prontamente infectados com parasitas opsonizados com soro fresco. O contato entre neutrófilos e L. braziliensis ativou os neutrófilos, aumentando a expressão de CD18 e diminuindo a expressão de CD62L. Essa ativação levou à produção de superóxido, secreção de elastase e liberação de TNF-a. O contato com L. braziliensis não impediu a apoptose dos neutrófilos e a destruição dos parasitas internalizados. Utilizando anticorpos específicos para neutrófilos, observamos o aumento significativo no número de parasitas em animais depletados de neutrófilos. Em paralelo, o contato dos neutrófilos com L. braziliensis levou à secreção de quimiocinas, capazes de induzir o recrutamento de células dendríticas. Os neutrófilos, portanto, desempenham um papel importante no combate ao parasita no período inicial da infecção por L. braziliensis.

Clinical and hematological findings in Leishmania braziliensis-infected dogs from Pernambuco, Brazil / Achados clínicos e hematológicos em cães infectados por Leishmania braziliensis de Pernambuco, Brasil

Canine cutaneous leishmaniasis by Leishmania braziliensis is a neglected, but widespread disease of dogs in South America. This paper describes clinical and hematological alterations in 17 L. braziliensis-infected dogs from Brazil. The most common hematological findings were thrombocytopenia (82.4%), anemia (70.6%), low packed cell volume (52.9%) and eosinophilia (41.2%). Twelve (70.6%) dogs displayed at least one evident physical alteration; 11 dogs (64.7%) presented skin lesions, four (23.5%) had weight loss and two (11.8%) onychogryphosis. L. braziliensis-infected dogs present clinical and hematological signs often observed in dogs infected by other pathogens. This indicates that veterinarians and public health workers should not consider the presence of non-specific clinical signs as diagnostic criteria for visceral leishmaniasis in dogs living endemic areas to avoid misdiagnosis and subsequent elimination of dogs infected by L. braziliensis.(AU)

A leishmaniose cutânea canina causada por Leishmania braziliensis é uma doença negligenciada, mas disseminada entre cães na America do Sul. Este artigo descreve alterações clínicas e hematológicas em 17 cães infectados por L. braziliensis do Brasil. As alterações hematológicas mais comuns foram trombocitopenia (82,4%), anemia (70,6%), baixo valor de hematócrito (52,9%) e eosinofilia (41,2%). Doze (70,6%) cães apresentaram pelo menos uma alteração física; 11 (64,7%) apresentaram lesões cutâneas, quatro (23,5%) perda de peso e dois (11,8%) onicogrifose. Cães infectados por L. braziliensis apresentaram alterações clínicas e hematológicas inespecíficas que são comumente observadas em cães infectados por outros patógenos. Isso indica que veterinários e profissionais de saúde pública não deveriam considerar a presença de tais sinais clínicos como critério de diagnóstico para leishmaniose visceral em cães, em áreas endêmicas, no intuito de evitar um diagnóstico equivocado e a subsequente eliminação de cães infectados por L. braziliensis.(AU)

DNA sequencing confirms the involvement of Leishmania (L.) amazonensis in american tegumentary leishmaniasis in the state of São Paulo, Brazil

INTRODUCTION: American tegumentary leishmaniasis (ATL) represents one of the most important public health issues in the world. An increased number of autochthonous cases of ATL in the Northeastern region of São Paulo State has been documented in the last few years, leading to a desire to determine the Leishmania species implicated. METHODS: PCR followed by DNA sequencing was carried out to identify a 120bp fragment from the universal kDNA minicircle of the genus Leishmania in 61 skin or mucosal biopsies from patients with ATL. RESULTS: DNA sequencing permitted the identification of a particular 15bp fragment (5' …GTC TTT GGG GCA AGT... 3') in all samples. Analysis by the neighbor-joining method showed the occurrence of two distinct groups related to the genus Viannia (V) and Leishmania (L), each with two subgroups. Autochthonous cases with identity to a special Leishmania sequence not referenced in Genbank predominated in subgroup V.1, suggesting the possible existence of a subtype or mutation of Leishmania Viannia in this region. In the subgroup L.2, which showed identity with a known sequence of L. (L.) amazonensis, there was a balanced distribution of autochthonous and non-autochthonous cases, including the mucosal and mucocutaneus forms in four patients. The last observation may direct us to new concepts, since the mucosal compromising has commonly been attributed to L. (V.) braziliensis, even though L. (L.) amazonensis is more frequent in the Amazonian region. CONCLUSIONS: These results confirm the pattern of distribution and possible mutations of these species, as well as the change in the clinical form presentation of ATL in the São Paulo State.

Dissociation between vasodilation and Leishmania infection-enhancing effects of sand fly saliva and maxadilan

In this study, the ability of maxadilan and Lutzomyia longipalpis salivary gland lysate to enhance the infection of CBA mice by Leishmania major and of BALB/c mice by L. braziliensis was tested. No difference was observed between sizes of lesion in CBA mice infected with L. major and treated or not with salivary gland lysate or maxadilan, although they were injected in concentrations that induced cutaneous vasodilation. Although parasites were more frequently observed in foot pads and spleens of animals treated with maxadilan than in the animals treated with salivary gland lysate or saline, the differences were small and not statistically significant. The lesions in BALB/c mice infected with L. braziliensis and treated with maxadilan were slightly larger than in animals that received Leishmania alone. Such differences disappeared 14 weeks after infection, and were statistically significant only in one of two experiments

Force of infection and evolution of lesions of canine tegumentary leishmaniasis in Northwestern Argentina

A clinical-serological follow-up was carried out in a canine population in endemic foci of Leishmania braziliensis spread in northwestern Argentina. Each dog was studied in at least two visits, 309 + or - 15 days (X + or - SE) apart. Some initially healthy dogs (n=52) developed seroconversion or lesions. The clinical evolution of the disease in dogs resembles in many aspects the human disease. Similarities include the long duration of most ulcers with occasional healing or appearance of new ones and the late appearance of erosive snout lesions in some animals. Yearly incidence rates of 22.7 percent for seroconversion and of 13.5 percent for disease were calculated as indicators of the force of infection by this parasite upon the canine population

Effect of Lutzomyia whitmani (Diptera: Psychodidae) salivary gland lysates on Leishmania (Viannia) braziliensis infection in BALB/c mice

Previous reports showed that Lutzomyia longipalpis saliva exacerbate Leishmania braziliensis infection in mice. The sand fly Lu. whitmani is one of the vectors of L. (Viannia) braziliensis (LVb), a causative agent of cutaneous leishmaniasis in the State of Ceará, Brazil. To determine whether saliva of Lu. whitmani could increase the infectivity of LVb in mice, we inoculated groups of BALB/c mice with LVb promastigotes in the presence or absence of the salivary glands lysate from Lu. whitmani. We found that coinjection with Lu. whitmani saliva increased size but not longevity of cutaneous LVb lesions in BALB/c mice, since the formed lesions gradually resolved. The mechanism(s) by which Lu. whitmani saliva might exacerbate LVb infection in BALB/c mice is speculated

Experimental infection of canine peritoneal macrophages with visceral and dermotropic Leishmania strains

A study was carried out using macrophages cultured from the peritoneal exudate of dogs infected in vitro with three species of Leishmania: L. (L.) chagasi, L. (Viannia) braziliensis and L. (L.) amazonensis with the aim of investigating the growth kinetics and infectivity of these species in the host cell. Results were expressed as the percentage of macrophages infected measured at 24 hr intervals over six days in RPMI - 1640 culture medium at a temperature of 34-35oC. The findings open the possibility of using canine peritoneal cells as a model for the screenning of leishmanicide drugs and to study the pathogenesis of these species.

Estudio en condiciones de laboratorio de los ciclos de vida de Lutzomyia torvida y Lutzomyia longiflocosa (Diptera: Psychodidae) posibles vectores de Leishmania braziliensis en la zona cafetera colombiana de vida de Lutzomyia torvida y Lutzomyia longiflocosa (Diptera: Psychodidae) posibles vectores de Leishmania braziliensis en la zona cafetera colombiana / A laboratory study of Lutzomyia torvida and Lutzomyia longiflocosa (Diptera: Psychodidae) Life-cicles, being possible Leishmania braziliensis vectors in Colombia's coffee-growing area

En el presente estudio, se hizo un seguimiento diario en condiciones de laboratorio del ciclo de vida de Lutzomyia torvida y Lutzomyia longiflocosa con el propósito de mejorar el conocimiento de la biología de estas dos especies del grupo verrucarum, serie townsendi. Cada una de ellas es la especie antropofílica más abundante de dos focos diferentes de Leishmania braziliensis localizados en el centro del país sobre la cordillera oriental. L. torvida fue capturada en Reventones (Cundinamarca) y L. longiflocosa en Tello (Huila) con cebo humano y trampa Shannon entre febrero de 1996 y marzo de 1997, principalmente en la época seca. La postura promedio de las hembras capturadas fue de 25,8 para la L. toRvida y 27,6 huevos para L. longiflocosa. El tiempo promedio de duración del ciclo de vida de huevo a adulto fue de 96.8 días para L. torvida y 93,8 días para L. longiflocosa. Los mayores porcentajes de pérdida de individuos para las dos especies se presentaron en la fase de huevo y cuarto estadio larval. Aunque 54.8 por ciento de los insectos de L. torvida y 72 por ciento de L. longiflocosa lograron llegar a la fase adulta, fue difícil alimentar las hembras sobre hámster por que estas se resistieron a picar

Localized cutaneous leishmaniosis using polymerase chain reaction: a Venezuelan family report

In this study, we have tested the sensitivity of a specific probe such as the polymerase chain reaction (PCR), as an altemative approach to parasitological methods to evaluate patients with cutaneous leishmaniosis (CL). The assay was designed to evaluate a familiar group with an infection of 4 months. The patients were diagnosed according to clinical criteria, parasitological, immunological assay and PCR specific probe. Five of the family group reported a clinical picture with a lymphadenopathy, localizad CL lesions with 2, 15, 27, 30 and 60 cutaneous lesions and with different size (mean= 5 x 7 for 27 x 35 mm of diameter), detestable on the exposed body surface: face (cheek, nose, forehead, front), neck, shoulder, hand, forearm and foot. The 6 patients were diagnosed by leishmanin skin test (LST) (mean= 26.2 x 28.4 mm of diameter). Anti-Leishmania specific antibody were detected by serodiagnosis by the direct agglutination test (DAT), immunofluorescence antibody test (IFAT) and Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) in all patients. The Leishmania parasite were evident in the lesions of 5 patients, using Giemsa-stained of smear specimens from the lesion, imprint of biopsies the lesion, culture and inoculation in hamster of lesions material, sections histological by convencional stained, immunostaining techniques and by PCR assay on serum samples. The PCR procedure increased the sensitivity of direct microscopy diagnostic of CL, therefore should be considered as a valuable and sensitive diagnostic tool in the identification of species of Leishmania and in the diagnosis de CL in the asymptomatic patients

Comportamiento serico de anticuerpos IgG anti Leishmania brsiliensis de pacientes con Leishmaniasis cutanea en Paraguay, pre y post tratamiento / Annual reports 1995 / Serological nehaviour of anti Leishmania Brasiliensis antibodies IgG from patients with cutaneous Leishmaniasis in Paraguay, pre and post treatment

Para analizar las variaciones de los títulos de anticuerpos IgG anti-Leishmania brasiliensis (Ac IgG anti L.B.) se estudiaron 150 casos de pacientes con diagnóstico clínico y parasitológico de leishmaniasis cutáneo (L.C.) registrados en el Departamento de Investigación del L.C.S.P. del M.S.P. y B.S. entre los años 1985 y 1990. El diagnóstico parasitológico se realizó por examen directo, la biopsia y el cultivo de la lesión en medio agar sangre enriquecido con RPMI 1640 y suero fetal bovino. Los pacientes fueron tratados con inyección intramuscular de glucantime (antimoniato de meglumine) o con pentostan (estiboglunato de sodio) en dosis de 20 mg/Kg/día, durante 3 periódos de 20 días con intervalo de 1 semana. Para determinar el título de Ac IgG anti L.b. antes y después de 3 meses de tratamiento se utilizó la Inmunofluorescencia Indirecta (IFI) y promastigotes de Leishmania brasiliensis como antígeno. De los 150 casos analizados antes del tratamiento, 90 casos (60 por ciento) fueron positivos para leishmaniasis, por el método de IFI

In situ hybridization and immunoperoxidase for quick detection and identification of leishmania braziliensis in tissue

The combined used of in situ hybridization and immunoperoxidase techniques applied to histological sections of the biopsy allowed an increment of the efficiency in the detection of Leishmania diagnosis.The molecular basis for DNA diagnosis is to allow labelled single-stranded species or strain-specific DNA sequences, selected from well characterised reference species, to find and hybridize with homologous DNA from or in, the unknown isolates of parasites. The use of immunoperoxidase assay was useful in disclosing the antigen pathways and revealed amastigotes and antigenic material in various morphological patterns

Leishmania braziliensis: aislamiento de lesiones por inoculación de hámsteres con o sin adición de lisado de glándulas salivares de Lutzomyia youngi / Leishmania braziliensis: isolation of lesions by inoculation of hamsters with and without the addition of salivary gland lysates of Lutzomyia youngi

Homogeneizados de biopsias de lesiones cutáneas de 50 casos de leishmaniasis tegumentaria de Trujillo, Venezuela, han sido inoculados en hámsteres machos. Se ha comparado la infectividad de Leishamania braziliensis, de homogeneizados simples, con la de los mezclados con lisado de glándula salival de Lutzomyia youngi, registrandose un 58,5 porcento de infecciones para una media de 12 semanas de prepatencia con los homogeneizados simples, contra 92 porcento de infecciones con una media de 3 semanas de prepatencia, cuando cada uno de los inóculos de homogeneizado se mezcló con lisado equivalente al de una glándula salival de flebótomo

Estudio comparativo sobre el curso de la infección experimental por leishmania SP en varios modelos vertebrados / Comparative study about the course of the experimental infection by leishmania SP in several vertebrate models

En este trabajo, se determinó el curso de la infección por leishmania en tres modelos vertebrados (perro, didelphis marsupialis y hámster). Se estableció una marcada diferencia en la infectividad y en las características de las lesiones. Ulceración, metástasis, visceralización y muerte se produjo en los hámsteres y lesiones discretas en diferentes partes de la piel se observó en los perros y didelphis marsupialis al ser inoculados con L. garnhami, L. braziliensis y L. mexicana. La posibilidad de los hemocultivos y aspirado ganglionar de D. marsupialis inoculado con promastigotos de la cepa OC de L. mexicana permiten además establecer que los patrones de desarrollo de la infección en los animales domésticos y silvestres son distintos al observado en los hámsteres

Leishmaniose cutânea experimental: III. Aspectos histopatológicos do comportamento evolutivo da lesäo cutânea produzida em Cebus apella (Primates: Cebidae) por Leishmania (Viannia) lainsoni, L. (V.) brasiliensis e L. (Leishmania) amazonensis / Experimental cutaneous leishmaniasis: III. Histophatological aspects of the evolutive behavior of the cutaneous lesion induced in Cebus apella (Primates: Cebidae) by Leishmania (Viannia) lainsoni, L. (V.) braziliensis and L. (Leishmania) amazonensis

Estudaram-se os aspectos histopatológicos relativos à evoluçäo da infecçäo experimental produzida em Cebus apella (Primates: Cebidae) por Leishmania (V.) lainsoni, L. (V.) braziliensis e L. (L.) amazonensis. O exame microscópico de biópsias seqüênciais, obtidas dos animais a intervalos definidos d etempo (a primeira, âs 48 ou 72 horas após a inoculaçäo, e as seguintes, a cada 30 dias), mostrou que o desenvolvimento das lesöes, independente da espécie de Leishmania inoculada, pass por uma seqüência de etapas a nível tecidual - 1) infiltrado inespecífico crônico; 2) nódulo macrofágico (com numerosos parasitas); 3) necrose das células parasitadas; 4) granuloma epitelióide; 5) absorçäo da área necrosada (às vezes formando granuloma de corpo estranho); 6) infiltrado inespecífico crônico residual); e 7) cicatrizaçäo - que representaria a formaçäo e a resoluçäo das lesöes. Discutiram-se também os prováveis mecanismso imunopatológicos que determinaram esta seqüência de eventos e sua possível semelhança com a evoluçäo das lesöes na leishmaniose tegumentar humana

Histopatologia da leishmaniose tegumentar por Leishmania braziliensis braziliensis: I - Padröes histopatologicos e estudo evolutivo das lesöes / Histopathology of mucocutaneus leishmaniasis coused by Leishmania braziliensis braziliensis. I - Histological patterns and evolutive study of the lesions

Analisa-se material de biópsias de 378 casos de Leishmaniose Tegumentar, causada por Leishmania braziliensis braziliensis, da localidade endêmica de Três Braços (Estado da Bahia). O parasitos, embora escassos, foram encontrados em 63,7% dos casos da forma cutânea e em 37,5% dos casos da forma mucosa. As alteraçöes dérmicas ou do córion da mucosa permitiram identificar cinco padröes histopatológicos: 1) Reaçäo Exsudativa Celular, constituída por um infiltrado histiolinfoplasmocitário; 2) Reaçäo Exsudativa e Necrótica, na qual ocorre uma necrose no seio do infiltrado inflamatório; 3) Reaçäo Exsudativa e Necrótico-Granulomatosa, que corresponde ao quadro descrito como inflamaçäo crônica granulomatosa com necrose; 4) Reaçäo Exsudativa e Granulomatosa, onde se observa uma reaçäo granulomatosa desorganizada, sem que esteja presente necrose tecidual; 5) Reaçäo Exsudativa e Tuberculóide, caracterizada pelo granuloma tuberculóide. O estudo evolutivo realizado em 49 casos, mostrou que houve uma mudança de padräo histopatológico observada, em biópsias sucessivas, em 63,2% dos casos da forma cutânea e em 45,4% dos casos da forma mucosa. Através desse estudo, é possível afirmar-se que o padräo de Reaçäo Exsudativa Celular constitui o quadro inicial e final da lesäo, com os demais padröes aparecendo interposto durante a evoluçäo da doença