Elevada frequência de Aeromonas spp. e genes de virulência em cultivos de tilápia-do-nilo (Oreochromis niloticus) em tanques-rede, na região semiárida de Pernambuco, Brasil / High frequency of Aeromonas spp. and virulence genes in Nile Tilapia farms (Oreochromis niloticus) in semi-arid regions of Pernambuco, Brazil

Objetivou-se avaliar a ocorrência de Aeromonas spp. em peixes e amostras de água na região semiárida de Pernambuco e avaliar a frequência de aerolissina (aerA), enterotoxina citotóxica (act), enterotoxina citotônica (alt) e serina protease (ahp) nesses isolados. Foram analisados 70 peixes vivos e oito mortos com sinais clínicos de aeromoniose e 16 amostras de água. Aeromonas spp. foram identificadas por análises microbiológicas (provas bioquímicas) e molecular, usando-se primers específicos para a região 16S rRNA, e a distribuição dos quatro fatores de virulência (aerA, alt, act e ahp) foi investigada por ensaio de PCR. Cento e cinquenta e cinco (84,7%) isolados foram confirmados como Aeromonas spp. na análise molecular. Os genes de virulência mais frequentes foram act (53,55%) e aerA (51,61%). De acordo com o tipo de amostra, observou-se maior frequência do gene aerA (87,5% P=0,0474) em isolados de peixes mortos e a menor frequência do gene act (47,73% P=0,0002) em peixes vivos. Este estudo demonstrou a presença de aeromoniose no cultivo de tilápias em tanques-rede, nos municípios de Jatobá e Petrolândia, na região semiárida de Pernambuco. A detecção de aerA, act e alt pode ser utilizada na tipagem de virulência de Aeromonas spp.(AU)

The purpose of this study was to evaluate the occurrence of Aeromonas spp. from fishes and tilapia net-cage farm water in semi-arid regions of Pernambuco and to evaluate the frequency of the aerolysin (aerA), cytotoxic enterotoxin (act), cytotonic enterotoxin (alt) and serine protease (ahp) genes in Aeromonas isolates. 70 live and eight dead fish with aeromoniosis clinical signs and 16 water samples were analyzed. Aeromonas spp. isolated were identified by microbiological (biochemical evidence) and molecular analysis using specific primers for 16SrRNA region, while the distribution of four virulence factors, including aerA, alt, act and ahp, was investigated by PCR assay. One hundred fifty-five (84.7%) isolates were confirmed as Aeromonas spp. by molecular analysis. The most frequent virulence genes in isolates were act (53.55%) and aerA (51,61%). According to the kind of sample, the higher frequency of aerA gene (87.5% P= 0.0474) was observed in isolates from dead fish and the lowest frequency of act gene (47.73% P= 0.0002) from live fish. This study found the presence of aeromoniosis on tilapia farming in net-cages on Jatobá and Petrolândia counties in the semiarid Pernambuco region. The detection of aerA, act and alt can be used for virulence typing of Aeromonas spp. isolates.(AU)

Contagens de bactérias aeróbias mesófilas e psicrotróficas em filés de tilápias comercializados em dois supermercados de Uberlândia-MG / Counting of aerobic mesophilic and psychrotrophic bacteria in tilapia fillets marketed in two supermarkets of Uberlândia-MG

O objetivo do trabalho foi avaliar as contagens de bactérias aeróbias mesófilas e psicrotróficas em filés de tilápias de dois supermercados de Uberlândia-MG. 30 filés frescos oriundos do estabelecimento A e 29 do B foram amostrados por esfregaço superficial (50 cm2) para contagens de bactérias Aeróbias Mesófilas (AM) (Pour Plate -37°C/ 48h) e Psicrotróficas (PSI) (Plaqueamento em superfície – 7°C/ 7dias) em Plate Count Agar. Comparou-se as médias de contagens por Mann-Whitney (P<0,05). Os filés do estabelecimento A apresentaram média de contaminação superior à encontrada no estabelecimento B para AM (5,54 e 3,74 UFC/ cm2 respectivamente) e PSI (7,41 e 5,78 UFC/ cm2, respectivamente). Os altos níveis de contagens indicam a necessidade de melhorias nas boas práticas de fabricação para reduzir a contaminação dos filés comercializados.

Gene floR e a resistência ao florfenicol em isolados de Aeromonas spp. autóctones de organismos aquáticos / Gene floR and resistance to florfenicol in isolated Aeromonas spp. indigenous aquatic organisms

O gene floR descrito é descrito pela literatura como o responsável pela resistência ao florfenicol, que é um antimicrobiano amplamente utilizado na aquicultura. Esse gene já foi relatado em muitas espécies de bactérias, inclusive no gênero Aeromonas. Essas bactérias causam alta mortalidade na piscicultura trazendo prejuízos econômicos. É importante que haja estudos sobre esse gene e possíveis mutações que possam levar a alterações na estrutura e função da proteína. Os objetivos desse estudo foram caracterizar o gene floR em isolados de Aeromonas spp. obtidas do Vale do São Francisco e verificar se a presença desse gene está associada com a resistência ao florfenicol. Foram realizadas reações em cadeia da polimerase (PCR) para a presença do gene floR em 27 isolados de Aeromonas spp.. Amostras positivas para a presença do gene foram sequenciadas e analisadas quanto à presença de polimorfismos por meio de alinhamentos. Os diferentes haplótipos detectados foram utilizados para análises com os programas SIFT e PolyPhen para predição de alteração de função proteica. A modelagem estrutural da proteina codificada pelo gene floR foi realizada com o programa Modeller e, os modelos foram avaliados pelo Procheck, Verify3D e Whatif. A similaridade da estrutura tridimensional da proteína referência com as estruturas tridimensionais das proteínas codificadas pelos diferentes haplótipos foi comparada através do TM-align. A resistência das bactérias ao florfenicol foi avaliada através do teste de microdiluição em caldo, o qual também foi realizado na presença do carbonil cianeto m-clorofenil hidrazona para verificar o efeito da inibição da bomba de efluxo sobre tal resistência. Dos vinte e sete isolados avaliados quanto a presença do gene floR, 14 isolados foram positivos e 10 foram sequenciados, o que permitiu a identificação de três polimorfismos no gene floR, que levaram a construção de três haplótipos diferentes (TAA, TTA e CTG). As análises realizadas com os programas SIFT e PolyPhen apontaram que os haplótipos TTA e TAA provavelmente poderiam alterar a estrutura e função da proteína. As proteínas modeladas para os três haplótipos demonstraram possuir praticamente a mesma conformação estrutural entre si. Todos os isolados que apresentaram o gene foram resistentes ao florfenicol e aqueles que não apresentavam foram sensíveis. O teste na presença do Carbonil Cianeto m-Clorofenil Hidrazona foi realizado para três isolados, cada isolado representando um haplótipo, sendo possível observar a inibição do crescimento bacteriano em todas as concentrações independente do haplótipo. Os resultados obtidos nesse estudo mostram que a resistência ao flofenicol em Aeromonas spp. pode ser explicada pela presença do gene floR, e que esse gene está relacionado com uma bomba de efluxo. As mutações verificadas no gene floR, parecem não estar envolvidas com alteração de estrutura e função da proteína codificada por esse gene.(AU)

The floR gene is described in related literature as responsible for resistance to florfenicol, which is a widely used antimicrobial agent in aquaculture. This gene has been reported in many species of bacteria, including the genus Aeromonas. These bacteria cause high mortality in fish farming bringing economic losses. It is important that studies of this gene and possible mutations that can lead to changes in the structure and function of the protein. The aim of this study was to characterize the floR gene in isolates of Aeromonas spp. and check if the presence of this gene is associated with resistance to florfenicol in Aeromonas spp. obtained from the San Francisco Valley. PCR (Polymerase Chain Reaction) were also performed to verify the presence of the floR gene in 27 isolates of Aeromonas spp. Positive samples for the presence of the gene were sequenced and analyzed for the presence of polymorphisms using alignments. Different haplotypes detected were used for analysis with the SIFT and PolyPhen programs for prediction of changes in protein function. The structural modeling of protein encoded by the floR gene was performed using the Modeller software, and the models were evaluated by Procheck, Verify3D and Whatif. The similarity of the dimensional structure of reference protein with the dimensional structures of the proteins encoded by the different haplotypes was compared by TM-align. Bacterial resistance to florfenicol was assessed by the microdilution test, which was also performed in the presence of carbonyl cyanide m-chlorophenyl hydrazone to verify the effect of inhibiting the efflux pump. 14 isolates were positive for the presence of floR gene and 10 were sequenced and allowed the identification of three polymorphisms in the floR gene, which led to construction of three different haplotypes (TAA TTA and CTG). The analyzes carried out with the SIFT and PolyPhen programs showed that the TTA and TAA haplotypes could probably change the protein structure-function. Proteins modeled for the three haplotypes were found to have substantially the same structural conformation with each other. All isolates presenting the gene were resistant to florfenicol and those who did not have were sensitive. The test in the presence of carbonyl cyanide m-chlorophenylhydrazone was conducted for three isolates, representing each single haplotype and was observed inhibition of bacterial growth at all concentrations independent of the haplotype. The results of this study show that resistance to flofenicol in Aeromonas spp. may be explained by the presence of floR gene and that this gene is associated with an efflux pump. Mutations observed in floR gene do not appear to be involved with chenges in structure and function of the protein encoded by gene.(AU)

Avaliação da qualidade da tilápia (Oreochromis sp) comercializada em feiras livres no município de Mossoró, RN / Evaluation of quality of tilapia (Oreochromis sp) commercialized in free markets in the Mossoró, RN

O pescado é um produto de rápida deterioração devido às suas características intrínsecas e a sua microbiota natural, associados ao manejo durante a cadeia produtiva. O Regulamento de Inspeção Industrial e Sanitária de Produtos de Origem Animal (RIISPOA) estabelece padrões de qualidade para peixes destinados ao consumo humano, preconizando parâmetros químicos e sensoriais. O presente trabalho teve por objetivo avaliar a qualidade de tilápia (Oreochomis sp) comercializada em feiras livres. Foram coletadas 36 amostras de tilápia de seis pontos de vendas localizados em feiras livres na cidade de Mossoró, RN.(...) No local de comercialização, foram avaliadas ainda as condições de venda da tilápia e demais peixes comercializados, através de questionários para análise da higiene das instalações, equipamentos e manipulador. Observou-se que 69%, 42% e 59% das amostras avaliadas, apresentaram-se fora dos padrões estabelecidos pela legislação quanto aos valores de pH, teor de bases nitrogenadas voláteis e características sensoriais. Constatou-se que a maioria das tilápias comercializadas em feiras livres é imprópria ao consumo humano.

Corellation between bacteriological infection and chemical changes in fish constituents in Bohira province

This study was applied on 100 fish samples [50 of each, Tilapia and Mugil] either diseased or apparently healthy. The aim of this work is to throw a light on the relation between the bacterial infection and some chemical changes in tissues of the examined fish as an index to quality and freshnes of raw materials. The results of bacteriological examination revealed that out of diseased tilapia[20] 39 bacterial isolates were recorded, but in apparently healthy tilapia[30]isolates were 41, while diseased Mugil [10] showed 13 bacterial isolates, and apparently healthy[40] was had 33 isolates. The rate of isolation was higher in the gills and viscera than the tissues as follow: Gills [80/50%], viscera[70/60%] and tissues[45/26.7%] in diseased/healthy tilapia respectively. In case of Mugil the corresponding ratio were 60/30%, 50/37.5% and20/15. Different microorganisms were isolated, Aeromonas hydrophila, Pseudomonas fluorescens, Vibrio spp., E.coli, Streptococcus iniae, Staph. aureus and Clostridium perfringens at different percentages. Three items were stastically calculated as chemical changes in this work, indicative to spoilage of the fish samples in comparison to control one. Thiobarbituric acid as mg malonaldhyde/ kg[TBA] was not significant<[t.value 0.77], while the FFA[free fatty acids] and Peroxide value, milliquivalent O2/kg [PV] appeared with significant values [6.38 and 21.1], respectively. On the other hand in mugil samples the three items of chemical examination appeared with significant values<[8.31, 4.78 and 40.95 respectively]

Epidemiological studies on the role of fish in transmitting some zoonotic diseases to man

This study was performed for determination of the role played by fish in transmitting some bacterial and parasitic zoonoses to man. A total of 300 fish of Tilapia spp. were collected [50 from a farm in El-Fayoum Governorate, 100 from a farm in Beni-Suef Governorate and 150 from Beni-Suef markets]. In addition, 73 humans [60 fish sellers and 13 farm workers] were examined. Staph. aureus, Aeromonas hydrophila, Proteus spp., Shigella spp. Pseudomonas aeruginosa and Pseudomonas fluorescence were isolated from the examined fish at percentages of 4.3, 9.7, 3.0, 1.7, 2.0 and 2.0, respectively. Among the isolated bacteria, Staph. aureus, Proteus spp. and Shigella spp. were found restricted to fish skin and gills, while Aeromonas hydrophila and Pseudomonas spp. were isolated from all the examined fish bodyparts [skin, gills, muscles and internal organs] with varying percentages. Out of the examined fish, 26.7% were harboring parasitic cysts including metacercariae of CHnostomum complanatum, Heterophyes heterophyes, Centrocestus armatus and Haplorchis pumilio. Examination of hand swabs obtained from humans demonstrated that 12.3% revealed a positive result for Staph. aureus. Among farm worker stool samples examined, 7.7% tested positively for Staph. aureus and 15.4% were Aeromonas hydrophila-positivQ. None of the parasites recovered from fish was detectable in humans. It was concluded that fish sold in the examined localities may occasionally represent a serious threat to public health as a result of its content of zoonotic fish pathogens

Studies on flavobacterium columnare isolated from fresh water fish

Flavobacterium columnre is one of the most important bacterial pathogens of wild, farmed and ornamental fish in warm, and also in fresh and sea water causing columnaris disease. In the present study one hundred and forty Nile tilapia were collected from different localities of farms from El-Behera governorate and Kafr El-sheikh provinces. The clinical signs of the disease were detected and the pathological lesions were recorded. Bacteriological examination of samples of naturally infected fish with Flavobacterium columnare revealed that the characteristics colonies on cytophaga agar media. Sixty seven suspected isolates were isolated and biochemically identified by API-20 E system. The distribution of the gained isolates among organs denoted 33 isolates from gills [49.25%], 20 isolates from kidneys [29-85%], 12 isolates from deep layer of dorsal musculature [17.91%], one isolate from both spleen and intestine [1.49%], but it was not isolated from the liver. The pathogencity experiment indicated wide variation among Flavobacterium columnare isolates. Isolate number 10 was the most virulent isolate as it caused 100% mortality two weeks post injection followed by isolate number 7, 3 caused 45, 25% mortality. The clinical signs and the post mortem examination revealed the same signs and lesions of natural infection with Flavobacterium columnare beside severe oedematous swelling at site of injection. The median lethal dose [LD50] of the highly virulent isolate was 10[5] viable bacterial cells /ml. Stress factors, temperature, PH, unionized ammonia and dissolved oxygen affects on the pathogencity of the organism. In vitro antibiotic sensitivity test of 5 isolates revealed that the most effective drug Cefotaxime [60%]. While the less effective one, were Neomycin, Norfloxacin and Rifampcin [100%] then Doxycyclin, Cephalexin, Florfenicel, Gentamycin and Marbocyl [80%] then Cefalor, Tetracycline and Ciprofloxacin [60%]. On the other hand, Erthromycin, Ampicillin [80%] had no effect

Some microbial and parasitic investigations in oreochromis species in Elzwaida effluent at Kalubia governorate

Naturally infected Oreochromis species as well as water samples were collected from Elzwaida effluent at Kalubia governorate and examined. The study revealed presence of mixed infection by parasites, bacteria and fungi. 80% of examined fish were suffered from Trichodiniasis. The involved pathogenic bacterial spp. from examined fish were identified as Aeromonas hydrophula, Flavobacteria spp. and Vibrio species. Also Ichthyophonus hoferi was identified in 40% of examined fish. The clinical signs among examined fish varied according to the severity of infection which was summarized as detached scales, black coloration, superficial ulcers, fin and tail rot and or hemorrhagic signs on body surface. Post-mortem findings varied according to type and severity of infection summarized as hemorrhagic signs in internal organs with congested blood vessels of intestine and mesentery

Efeitos do congelamento lento e armazenamento em congeladores domésticos, sobre a microbiota associada a filés de tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus) / Effects of slow freezing and storage in domestic freezers, on the microflora associated with tilapia filets (Oreochromis niloticus)

O presente trabalho teve por objetivo avaliar os efeitos do congelamento lento e armazenamento em congeladores domésticos, sobre a microbiota associada a filés de tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus). Dez espécimes foram capturados em um sistema aqüícola, sendo, posteriormente, processadas em filés. De cada filé fresco foram retiradas, assepticamente, alíquotas necessárias para realização das análises microbiológicas, sendo a porção remanescente congelada e armazenada em freezer doméstico, por um período de 30 dias...

Influência das condiçöes higiênico-sanitárias no processo de beneficiamento de tilápias (Oreocrhomis niloticus) em filés congelados / Influence of the hygienic-sanitary conditions in the process of tilapia in frozen fillets

Foram analisadas 60 amostras de peixes coletadas ao longo da cadeia de produçäo de filés congelados em um frigorífico de uma fazenda de criaçäo de peixes, situada em Campina Grande-PB (Brasil). Os peixes recém-capturados apresentaram o valor mínimo para NMP de 3,0/g tanto para coliformes totais (CT) como para coliformes fecais (CF) e também para Escherichia coli. Para bactérias aeróbias mesófilas (CPP) esse valor mínimo foi de 0,3x10.000 UFC/g. As concentraçöes de Staphylococcus aureus flutuaram entre o valor Estimado de <10,0 a 10,6x100 UFC/g e Salmonella spp. esteve presente em 8,3 por cento das amostras. A contaminaçäo dos peixes foi crescente ao longo da cadeia de processamento atingindo valores nas amostras comercializadas de 2400,0 NMP/g tanto para CT como para CF como para E.coli, embora maiores valores tenham sido observados para os coliformes em amostras de filés näo congelados. Para CPP esses valores finais foram de 10.000,0 x10.000 UFC/g. Os resultados evidenciaram deficiências higiênicas por parte dos manipuladores na indústria, necessitando de melhorias em todo o processamento, principalmente, na filetagem e retirada da pele, etapas nas quais as amostras se apresentaram mais contaminadas por S. aureus.

Incidencia de Plesiomonas shigelloides en tetrahíbridos de tilapia (Oreochromis sp.) / Incidence of Plesiomonas shigelloides in Tilapia tetrahibrids (Oreochromis sp.)

Plesiomonas shigelloides es un miembro de la familia Vibrionaceae, es un bacilo Gram negativo asociado a gran número de brotes de gastroenteritis, especialmente en países tropicales y subtropicales. De igual manera se ha involucrado en casos en casos de septicemia, meningitis y colecistitis. El microorganismo se encuentra normalmente en aguas dulces, peces y aves. El presente trabajo se hizo con el propósito de estudiar la incidencia de Plesiomonas shigelloides en tetrahíbridos de Oreochromis sp. (Tilapia rosada) cultivados en una laguna artificial en la zona central de Venezuela. Para el aislamiento del microorganismo se utilizaron en forma simultánea las técnicas de siembra directa y enriquecimiento luego del homogeneizado de las muestras. En las muestras de Tilapia analisadas se determinó uma alta incidencia (73 por ciento) de P. shigelloides siendo mayor en el tracto intestinal (60 por ciento), seguido de la piel (36,67 por ciento) y po último las branquias (26,67 por ciento), sin existir correlación alguna entre ellos. En el agua de la laguna de cultivo el microorganismo se aisló con una frecuencia de 41,67 por ciento. La siembra directa presentó los mayores valores de aislamiento (60 por ciento) en los diversos tejidos de Tilapia así como en el agua de cultivo (41,60 por ciento). No se observó diferencias significativas en la efectividad de los agares selectivos utilizados para el aislamiento de P. shigelloides (Agar Plesiomonas y Agar Inositol Verde Brilhante Sales Biliares). Se observó una correlación positiva entre la incidencia del microorganismo y los niveles de pluviosidad. Se apreció una alta incidencia de E. coli en las muestras de los tejidos de Tilapia y el agua de la laguna de cultivo. No se observó correlación entre la incidencia de P. shigelloides encontrada en este estudio es importante asegurar una adecuada evisceración, lavado, almacenamiento a temperaturas inferiores a 8 grados Celsius y una una apropiada cocción del producto con el fin de disminuir los riesgos al consumidor.

Pathogenicity, serum resistance activity and serological relatedness of pseudomonas fluorescens strains recovered from diseased preochromis niloticus in Egypt

Pseudomonas fluorescens [Ps. fluorescens] strains recovered from diseased Oreochromis niloticus [O. niloticus] were studied for their pathogenicity, scrum resistance activities and serological relatedness. The results of experimental pathogenicity in O, niloticus varied and generally ranged from acute septicaemic course to mild slow developing one or even none, suggesting the existence of variable virulence profiles among Ps. fluorescens strains. A correlation was found between serum resistance activity of Ps. fluorescens strains and their corresponding degrees of pathogenicity and virulence profiles as proved by the presence of a shared common resistance to the killing effect of O. niloticus serum among the highly pathogenic virulent strains. In addition, heterogenecity among Ps. fluorescens strains was biochemically and sero logically proved