ABSTRACT
Haemophilus influenzae tipo b es un patógeno oportunista responsable de infecciones invasivas y graves como bacteriemia y meningitis bacteriana aguda en poblaciones susceptibles, principalmente en niños menores de 5 años de edad. Su antígeno capsular, el polirribosil-ribitol-fosfato, es un polisacárido específico del serotipo b y ha sido utilizado para la producción de vacunas, inicialmente en forma aislada, con escaso éxito debido a la pobre estimulación inmune en la población objetivo, dando una protección poco sostenida en el tiempo. Surgieron así las vacunas conjugadas, usadas actualmente, donde el polisacárido capsular se une a una proteína carrier para generar una respuesta inmune timo-dependiente, con memoria inmunológica, y apta para el uso en niños a partir de los 2 meses de edad. El polirribosil-ribitol-fosfato se caracteriza por ser una secuencia polimérica del azúcar fosfatado de largo variable, formando una mezcla con diferente abundancia de pesos moleculares. El largo de las cadenas polisacarídicas es un parámetro de calidad del proceso productivo de estas vacunas, y se controla mediante técnicas de cromatografía de exclusión molecular. El presente trabajo consistió en desarrollar una técnica analítica para la determinación de polirribosil-ribitol-fosfato en su forma libre, y conjugado a toxoide tetánico, presentes en vacunas anti Haemophilus influenzae tipo b, utilizando cromatografía de exclusión molecular acoplada a detectores por índice de refracción y por luz ultravioleta a longitudes de onda de 215 y 280 nm. El desarrollo se planteó sobre antecedentes bibliográficos que describen una metodología similar como control de la instancia de conjugación en el proceso productivo del ingrediente farmacéutico activo de vacunas anti Haemophilus influenzae tipo b. En el procedimiento se utilizaron estándares internacionales de los analitos libres y estándares de pesos moleculares, y se evaluó la capacidad del sistema para discriminar los componentes de la vacuna y detectar diferencias que podrían indicar un compromiso en la calidad de la misma.
Haemophilus influenzae type b is an opportunistic pathogen responsible for invasive and severe infections such as bacteremia and acute bacterial meningitis in susceptible populations, mainly children under 5 years of age. Its capsular antigen, polyribosylribitol-phosphate, is a specific polysaccharide of serotype b and has been used to produce vaccines, initially in isolation, with little success due to poor immune stimulation in the target population, and providing little sustained protection over time. Thus, arose the conjugated vaccines currently used, where the capsular polysaccharide binds to a carrier protein to generate a thymusdependent immune response with immunological memory and suitable for use in children from 2 months of age. Polyribosyl-ribitolphosphate is characterized by being a polymeric sequence of the phosphated sugar of variable length, forming a mixture with Emilia Ojeda Zachara*, Gisela Severino*, Ana Carolina Abba*, Patricia Aprea. Departamento del Laboratorio Nacional para el Estudio y Control de Biológicos, Dirección de Evaluación y Control de Biológicos y Radiofármacos, Instituto Nacional de Medicamentos. Administración Nacional de Medicamentos, Alimentos y Tecnología Médica, Buenos Aires. Argentina. Correspondencia: Emilia Ojeda Zachara (emilia.ojeda@anmat.gob.ar) *Estos autores contribuyeron equitativamente al desarrollo de este trabajo. Recibido: 26 de julio de 2021. Aprobado: 1 de diciembre de 2021. Revista Científica ANMAT. Año 5 (vol 2), 2021 different abundances of various molecular weights. The length of the polysaccharide chains is a quality parameter of the production process of these vaccines, and is controlled by size-exclusion chromatography techniques. The presented work consisted in developing an analytical technique for the determination of polyribosyl-ribitol-phosphate in its free form and conjugated to tetanus toxoid present in vaccines against Haemophilus influenzae type b, using size-exclusion chromatography coupled to refractive index and UV detectors at wavelengths of 215 and 280 nm. The development was based on bibliographic backgrounds that use a similar methodology as a control of the conjugation step in the production process of the active pharmaceutical ingredient of anti-Haemophilus influenzae type b vaccines. In the procedure, international standards for free analytes and molecular weight standards were used, and the ability of the system to discriminate the vaccine components and to detect differences that could indicate a compromise in the quality of this vaccine was evaluated
Subject(s)
Spectrophotometry, Ultraviolet , Chromatography, Gel , Haemophilus VaccinesABSTRACT
Las afecciones causadas por el Virus de la Hepatitis B (VHB) constituyen una de las grandes problemáticas de salud pública a nivel mundial. En la actualidad la principal estrategia de prevención es una vacuna obtenida mediante la tecnología de ADN recombinante a partir de la expresión del gen viral que codifica el antígeno de superficie de la hepatitis B (HBsAg). En Argentina, esta vacuna está incorporada en el Calendario Nacional de Vacunación desde el año 2000, y es deber de la Autoridad Reguladora Nacional (ARN) verificar la calidad, seguridad y eficacia de cada lote liberado al mercado. Considerando que la determinación del contenido antigénico en vacunas representa uno de los ensayos esenciales de control de calidad y que, para ello, es necesario contar con metodologías estandarizadas que permitan obtener resultados reproducibles y confiables, en el Laboratorio de Inmunobiológicos del Instituto Nacional de Medicamentos se estandarizó un método para la identificación y cuantificación del HBsAg en vacunas contra la Hepatitis B empleando un kit comercial de ELISA cuyo uso clínico está previsto para la detección de HBsAg en suero o plasma humano. Para ello, se analizaron dos muestras: una preparación de antígeno HBsAg purificado y una vacuna contra la Hepatitis B ADN recombinante comercial y se evaluaron los parámetros de especificidad, exactitud, repetibilidad, precisión intermedia y linealidad. En todos los casos, se cumplieron con los criterios de aceptación establecidos para cada parámetro, por lo cual se concluye que la metodología analítica es adecuada para la identificación y cuantificación del HBsAg.
Subject(s)
In Vitro Techniques , Enzyme-Linked Immunosorbent Assay , Hepatitis B Vaccines , Vaccines, DNAABSTRACT
Las afecciones causadas por el Virus de la Hepatitis B (VHB) constituyen una de las grandes problemáticas de salud pública a nivel mundial. En la actualidad la principal estrategia de prevención es una vacuna obtenida mediante la tecnología de ADN recombinante a partir de la expresión del gen viral que codifica el antígeno de superficie de la hepatitis B (HBsAg). En Argentina, esta vacuna está incorporada en el Calendario Nacional de Vacunación desde el año 2000, y es deber de la Autoridad Reguladora Nacional (ARN) verificar la calidad, seguridad y eficacia de cada lote liberado al mercado. Considerando que la determinación del contenido antigénico en vacunas representa uno de los ensayos esenciales de control de calidad y que, para ello, es necesario contar con metodologías estandarizadas que permitan obtener resultados reproducibles y confiables, en el Laboratorio de Inmunobiológicos del Instituto Nacional de Medicamentos se estandarizó un método para la identificación y cuantificación del HBsAg en vacunas contra la Hepatitis B empleando un kit comercial de ELISA cuyo uso clínico está previsto para la detección de HBsAg en suero o plasma humano. Para ello, se analizaron dos muestras: una preparación de antígeno HBsAg purificado y una vacuna contra la Hepatitis B ADN recombinante comercial y se evaluaron los parámetros de especificidad, exactitud, repetibilidad, precisión intermedia y linealidad. En todos los casos, se cumplieron con los criterios de aceptación establecidos para cada parámetro, por lo cual se concluye que la metodología analítica es adecuada para la identificación y cuantificación del HBsAg.
Subject(s)
In Vitro Techniques , Enzyme-Linked Immunosorbent Assay , Hepatitis B Vaccines , Vaccines, DNAABSTRACT
Las afecciones causadas por el Virus de la Hepatitis B (VHB) constituyen una de las grandes problemáticas de salud pública a nivel mundial. En la actualidad la principal estrategia de prevención es una vacuna obtenida mediante la tecnología de ADN recombinante a partir de la expresión del gen viral que codifica el antígeno de superficie de la hepatitis B (HBsAg). En Argentina, esta vacuna está incorporada en el Calendario Nacional de Vacunación desde el año 2000, y es deber de la Autoridad Reguladora Nacional (ARN) verificar la calidad, seguridad y eficacia de cada lote liberado al mercado. Considerando que la determinación del contenido antigénico en vacunas representa uno de los ensayos esenciales de control de calidad y que, para ello, es necesario contar con metodologías estandarizadas que permitan obtener resultados reproducibles y confiables, en el Laboratorio de Inmunobiológicos del Instituto Nacional de Medicamentos se estandarizó un método para la identificación y cuantificación del HBsAg en vacunas contra la Hepatitis B empleando un kit comercial de ELISA cuyo uso clínico está previsto para la detección de HBsAg en suero o plasma humano. Para ello, se analizaron dos muestras: una preparación de antígeno HBsAg purificado y una vacuna contra la Hepatitis B ADN recombinante comercial y se evaluaron los parámetros de especificidad, exactitud, repetibilidad, precisión intermedia y linealidad. En todos los casos, se cumplieron con los criterios de aceptación establecidos para cada parámetro, por lo cual se concluye que la metodología analítica es adecuada para la identificación y cuantificación del HBsAg.
Subject(s)
In Vitro Techniques , Enzyme-Linked Immunosorbent Assay , Hepatitis B Vaccines , Vaccines, DNAABSTRACT
This one-day symposium organized by Humane Society International (HSI) brought together 18 international experts from Argentina, Brazil, China, Europe, India, Russia, South Africa and the United States to discuss the elimination of the abnormal toxicity test (ATT) from the testing requirements for human vaccines as well as the target animal batch safety test (TABST) and the laboratory animal batch safety test (LABST) for veterinary vaccines. Participants reported on country-specific regulatory requirements and, where present, the perspectives on waiver and elimination of those tests. In addition, the attendees, with HSI in the role of facilitator, moved to define the barriers to the complete elimination or waiving of these tests. This report expounds the outcomes of the symposium, and introduces a proposed roadmap - populated with country specific activities - for the elimination of these tests.
Subject(s)
Animal Testing Alternatives/standards , Quality Control , Toxicity Tests/standards , Vaccines , Animals , Toxicity Tests/methods , Vaccines/adverse effects , Vaccines/standards , Vaccines/therapeutic useABSTRACT
Las nuevas vacunas profilácticas de ADN son vacunas que se basan en la introducción de ácidos nucleicos en el organismo del huésped a inmunizar, donde dirigen la síntesis de un péptido que luego será capaz de producir una respuesta inmune protectora tanto humoral como celular. Este tipo de vacunas está diseñado para permitir una expresión localizada y breve del antígeno en cuestión y sin integración del material genético. La técnica involucra el uso de plásmidos de ADN que están conformados por un cassette de expresión codificando el/los antígenos de interés (provenientes de virus, bacterias o parásitos). Existen en la actualidad ensayos clínicos activos que evalúan la seguridad y eficacia de las vacunas de ADN tanto terapéuticas como profilácticas, siendo algunas candidatas que han avanzado hacia la fase II. La regulación de este tipo de vacunas, presenta un desafío regulatorio para las autoridades competentes en todo el mundo. Si bien existen guías para su evaluación aún se requieren estudios exhaustivos para la aprobación y uso de las mismas debido a la complejidad que presentan. La disposición vigente en Argentina contempla los requerimientos generales para este tipo de vacunas, sin embargo a futuro sería conveniente establecer nuevos lineamientos específicos para las vacunas de ADN
The new prophylactic DNA vaccines are based on the introduction of nucleic acids into the host to be immunized, in which they induce the synthesis of a peptide that can produce a protective humoral and cellular immune response. This type of vaccine is designed to allow a localized and brief expression of the antigen without genetic material integration. The technique involves the use of plasmid DNA containing an expression cassette that codifies the antigen of interest (associated to viruses, bacteria or parasites). There are many clinical assays that are evaluating safety and efficacy of prophylactic and therapeutic DNA vaccines; some of them have reached phase II trials. The regulation of this kind of vaccines represents a regulatory challenge for the competent authorities worldwide. Even though there are many guides to evaluate them, exhaustive research is still required for their approval and use due to their complexity. The current provision in Argentina considers the general requirements for this type of vaccines, however, in the future it would be advisable to establish new specific guidelines for DNA vaccines.
Subject(s)
DNA , Vaccines , Immunization , Government RegulationABSTRACT
En el ratón la vía de administración de drogas anestésicas es generalmente intraperitoneal, la cual requiere de una sujeción física particular que genera estrés. El objetivo del presente trabajo fue evaluar la vía intra-rectal (IR) para administrar una combinación de fármacos alternativa que permitiera, con bajas dosis de droga, una cómoda manipulación del animal; y además evaluar el impacto que produce la administración repetida de acepromacina/midazolam IR en ratones CF1. En un primer ensayo se emplearon 12 ratones CF1 a los que se le administró acepromazina maleato y midazolam clorhidrato por vía IR, previo vaciamiento manual de la ampolla rectal. En cada caso se registró latencia y duración del efecto. En todos los animales el tiempo de latencia fue de 3 a 5 minutos y la duración del efecto fue entre 30 y 60 minutos. En un segundo ensayo se utilizaron 10 ratones CF1 hembras. El grupo tratado fue de 7 animales a los que se les administró la misma dosis que al grupo anterior y por la misma vía, utilizando los mismos materiales y la misma técnica. El grupo control fueron 3 animales a los que se les administró igual volumen de solución fisiológica. La maniobra se repitió diariamente durante 12 días consecutivos. Al finalizar el ensayo se realizó eutanasia y necropsia de los animales tomándose muestras de recto y colon que fueron procesadas según técnicas de rutina. En los animales tratados no se observaron lesiones a nivel epitelial, reacción inflamatoria, ni congestión y edema vascular. No se observaron diferencias estadísticas significativas entre los animales tratados y los controles. La administración IR es una opción sencilla y rápida para el operador y segura para el animal. Asimismo, el uso de la vía IR para la administración repetida de esta combinación pre-anestésica no ha presentado efectos secundarios que deban ser considerados al momento de su utilización, constituyendo una alternativa que ofrece un excelente margen de seguridad y contribuyendo, por ser menos invasiva, al bienestar animal.
Intraperitoneal is the route of administration for anesthetic drugs generally used in mice. It requires a particular physical restraint that generates stress. The aim of the present work is to evaluate the intra-rectal (IR) route to administer an alternative drug combination that would allow, with low doses of drug, a comfortable handling of the animal and also to evaluate the impact produced by the repeated administration of acepromazine/midazolam IR in CF1 mice. At the initial stage, 12 CF1 mice were used. Each animal was administered acepromazine maleate and midazolam hydrochloride by IR using an intravenous Teflon catheter, previous manual emptying of the rectal ampoule, registering latency and duration of the effect in each case. In all the animals, the latency time recorded was 3 to 5 minutes and the duration of the effect was between 30 and 60 minutes. At the second stage, 10 female CF1 mice were used. The treated group was composed of 7 animals to which were administered the same dose as the previous group and by the same route, using the same materials and the same technique. The control group consisted of 3 animals that were administered the same volume of physiological solution. The maneuver was repeated daily for 12 consecutive days. At the end of the trial, the animals were euthanized. Necropsy examinations were made, taking samples of the rectum and colon that were processed according to routine techniques. There were no lesions at the epithelial level or inflammatory reaction, nor congestion and vascular edema in the treated animals. No significant statistical differences were observed between the treated animals and controls. The IR administration is a simple and fast option for the operator and it is safe for the animal. Additionally, the IR route for repeated administration of this pre-anesthetic combination has not presented side effects that should be considered at the time of use. It constitutes an alternative that offers an excellent margin of safety and contributes to animal welfare, as it is less invasive.
Subject(s)
Animals , Administration, Rectal , Midazolam , Acepromazine , MiceABSTRACT
La infección de hepatitis B, causada por el virus de nombre homónimo, es una de las infecciones virales más graves. Este virus infecta a más de 500 millones de personas en el mundo siendo la causa más frecuente de hepatitis crónica, cirrosis y carcinoma hepatocelular. A pesar de los esfuerzos orientados al desarrollo de terapias eficientes, actualmente no existe un tratamiento específico para esta enfermedad, por lo que constituye un problema de salud a nivel mundial. Por este motivo, la Dirección de Evaluación y Control de Biológicos y Radiofármacos realizó una revisión bibliográfica acerca de los productos comercializados de la vacuna en nuestro país y los ensayos de control de calidad.
Hepatitis B infection, caused by its namesake virus, is one of the most serious viral infections. This virus affects more than 500 million people in the world which is the most frequent cause of chronic hepatitis, cirrhosis and hepatocellular carcinoma. Despite efforts aimed at the development of efficient therapies, there is currently no specific treatment for this disease, which is an important global health problem. For this reason, the Directorate of Evaluation and Control of Biologics and Radiopharmaceuticals carried out a literature review about commercialized hepatitis B vaccines in our country and its quality control assays.
Subject(s)
Vaccines , Hepatitis B , Hepatitis B/history , Hepatitis B Surface AntigensABSTRACT
Injuries caused by venomous animals affect vast areas of Latin America, Southern Asia, Southeast Asia, sub-Saharan Africa, and Oceania, and pose a serious problem for global public health. Based on an analysis of the current panorama of global production of ophidian and arachnid antivenoms, it is concluded that they are semi-orphaned products. This is a favorable scenario in which to strengthen public laboratory production. Governments should make a political decision in this regard in the interest of equity in population health. In the Region of the Americas, these actions could be part of a program led by the Pan American Health Organization to ensure the availability of these biologicals in strategically located health centers. Twelve public facilities producing antivenoms have been identified in the Region, including Brazil and Mexico, which are the biggest public producers. These laboratories should be managed like industrial operations that produce tangible goods without ignoring strategic planning. National regulatory authorities should help the public laboratories that produce them by providing necessary technical assistance and consultancy without any loss of impartiality or rigor in the evaluation of their quality management systems. New superior production technologies using hyperimmune mammalian plasma are in the experimental phase; no information on its production has been found in the literature.
Subject(s)
Antivenins , Drug Industry , Health Services Accessibility , Americas , Antivenins/therapeutic use , HumansABSTRACT
Los accidentes causados por animales ponzoñosos afectan vastas zonas de América Latina, Sur de Asia, Sudeste Asiático, África subsahariana y Oceanía y representan un serio problema para la salud pública mundial. A partir de un análisis del panorama actual en materia de producción global de los antivenenos ofídicos y aracnídicos, se concluye que son productos semi-huérfanos. Esta situación plantea un escenario favorable para fortalecer su producción por parte de los laboratorios públicos. Los gobiernos deberán tomar una decisión política al respecto en aras de la equidad en la salud de la población. En la Región de las Américas, estas acciones podrían enmarcarse en un programa liderado por la Organización Panamericana de la Salud, para garantizar la disponibilidad de estos productos biológicos en centros asistenciales estratégicamente localizados. Se han identificado 12 establecimientos públicos productores de antivenenos en la Región entre los cuales los de Brasil y México son los mayores productores públicos. La gestión de estos laboratorios debe ser la propia de una organización industrial productora de bienes tangibles que no soslaye la planificación estratégica. Las autoridades regulatorias nacionales deberían ayudar a los laboratorios públicos que los producen prestándoles asesoramiento y consultoría sin perder la imparcialidad ni el rigor necesarios en la evaluación de sus sistemas de gestión de la calidad. Las nuevas tecnologías superiores de la producción a partir de plasma hiperinmune de mamíferos se encuentran en fase experimental. No se ha encontrado en la bibliografía información sobre su incorporación en las líneas de producción.
Injuries caused by venomous animals affect vast areas of Latin America, Southern Asia, Southeast Asia, sub-Saharan Africa, and Oceania, and pose a serious problem for global public health. Based on an analysis of the current panorama of global production of ophidian and arachnid antivenoms, it is concluded that they are semi-orphaned products. This is a favorable scenario in which to strengthen public laboratory production. Governments should make a political decision in this regard in the interest of equity in population health. In the Region of the Americas, these actions could be part of a program led by the Pan American Health Organization to ensure the availability of these biologicals in strategically located health centers. Twelve public facilities producing antivenoms have been identified in the Region, including Brazil and Mexico, which are the biggest public producers. These laboratories should be managed like industrial operations that produce tangible goods without ignoring strategic planning. National regulatory authorities should help the public laboratories that produce them by providing necessary technical assistance and consultancy without any loss of impartiality or rigor in the evaluation of their quality management systems. New superior production technologies using hyperimmune mammalian plasma are in the experimental phase; no information on its production has been found in the literature.
Os acidentes causados por animais peçonhentos se distribuem por vastas áreas da América Latina, sul da Ásia, Sudeste Asiático, África subsaariana e Oceania, representando um sério problema à saúde pública mundial. A partir de uma análise do panorama atual da produção mundial de soros antiofídicos e antiaracnídeos se concluiu que são produtos semiórfãos. Tal situação cria um cenário favorável para estimular a produção destes produtos por laboratórios públicos. Os governos devem tomar uma decisão política neste sentido para assegurar a equidade em saúde da população. Na Região das Américas, as ações poderiam englobar um programa encabeçado pela Organização Pan-Americana da Saúde para garantir a disponibilidade dos produtos biológicos em centros de atenção estrategicamente localizados. Existem 12 instituições públicas que produzem soros antivenenos na Região, sendo que os maiores produtores estão no Brasil e no México. Estes laboratórios devem ser geridos como uma indústria produtora de bens tangíveis sujeita a um planejamento estratégico. Os órgãos reguladores nacionais devem auxiliar os laboratórios públicos prestando assessoria e consultoria com a imparcialidade e o rigor necessários para avaliar a gestão da qualidade. Novas tecnologias avançadas de produção de soro baseadas em plasma hiperimune de mamíferos estão em fase experimental. Não há informação na literatura sobre a inclusão destas tecnologias nas linhas de produção.
