ABSTRACT
Haemophilus influenzae tipo b es un patógeno oportunista responsable de infecciones invasivas y graves como bacteriemia y meningitis bacteriana aguda en poblaciones susceptibles, principalmente en niños menores de 5 años de edad. Su antígeno capsular, el polirribosil-ribitol-fosfato, es un polisacárido específico del serotipo b y ha sido utilizado para la producción de vacunas, inicialmente en forma aislada, con escaso éxito debido a la pobre estimulación inmune en la población objetivo, dando una protección poco sostenida en el tiempo. Surgieron así las vacunas conjugadas, usadas actualmente, donde el polisacárido capsular se une a una proteína carrier para generar una respuesta inmune timo-dependiente, con memoria inmunológica, y apta para el uso en niños a partir de los 2 meses de edad. El polirribosil-ribitol-fosfato se caracteriza por ser una secuencia polimérica del azúcar fosfatado de largo variable, formando una mezcla con diferente abundancia de pesos moleculares. El largo de las cadenas polisacarídicas es un parámetro de calidad del proceso productivo de estas vacunas, y se controla mediante técnicas de cromatografía de exclusión molecular. El presente trabajo consistió en desarrollar una técnica analítica para la determinación de polirribosil-ribitol-fosfato en su forma libre, y conjugado a toxoide tetánico, presentes en vacunas anti Haemophilus influenzae tipo b, utilizando cromatografía de exclusión molecular acoplada a detectores por índice de refracción y por luz ultravioleta a longitudes de onda de 215 y 280 nm. El desarrollo se planteó sobre antecedentes bibliográficos que describen una metodología similar como control de la instancia de conjugación en el proceso productivo del ingrediente farmacéutico activo de vacunas anti Haemophilus influenzae tipo b. En el procedimiento se utilizaron estándares internacionales de los analitos libres y estándares de pesos moleculares, y se evaluó la capacidad del sistema para discriminar los componentes de la vacuna y detectar diferencias que podrían indicar un compromiso en la calidad de la misma.
Haemophilus influenzae type b is an opportunistic pathogen responsible for invasive and severe infections such as bacteremia and acute bacterial meningitis in susceptible populations, mainly children under 5 years of age. Its capsular antigen, polyribosylribitol-phosphate, is a specific polysaccharide of serotype b and has been used to produce vaccines, initially in isolation, with little success due to poor immune stimulation in the target population, and providing little sustained protection over time. Thus, arose the conjugated vaccines currently used, where the capsular polysaccharide binds to a carrier protein to generate a thymusdependent immune response with immunological memory and suitable for use in children from 2 months of age. Polyribosyl-ribitolphosphate is characterized by being a polymeric sequence of the phosphated sugar of variable length, forming a mixture with Emilia Ojeda Zachara*, Gisela Severino*, Ana Carolina Abba*, Patricia Aprea. Departamento del Laboratorio Nacional para el Estudio y Control de Biológicos, Dirección de Evaluación y Control de Biológicos y Radiofármacos, Instituto Nacional de Medicamentos. Administración Nacional de Medicamentos, Alimentos y Tecnología Médica, Buenos Aires. Argentina. Correspondencia: Emilia Ojeda Zachara (emilia.ojeda@anmat.gob.ar) *Estos autores contribuyeron equitativamente al desarrollo de este trabajo. Recibido: 26 de julio de 2021. Aprobado: 1 de diciembre de 2021. Revista Científica ANMAT. Año 5 (vol 2), 2021 different abundances of various molecular weights. The length of the polysaccharide chains is a quality parameter of the production process of these vaccines, and is controlled by size-exclusion chromatography techniques. The presented work consisted in developing an analytical technique for the determination of polyribosyl-ribitol-phosphate in its free form and conjugated to tetanus toxoid present in vaccines against Haemophilus influenzae type b, using size-exclusion chromatography coupled to refractive index and UV detectors at wavelengths of 215 and 280 nm. The development was based on bibliographic backgrounds that use a similar methodology as a control of the conjugation step in the production process of the active pharmaceutical ingredient of anti-Haemophilus influenzae type b vaccines. In the procedure, international standards for free analytes and molecular weight standards were used, and the ability of the system to discriminate the vaccine components and to detect differences that could indicate a compromise in the quality of this vaccine was evaluated
Subject(s)
Spectrophotometry, Ultraviolet , Chromatography, Gel , Haemophilus VaccinesABSTRACT
Las afecciones causadas por el Virus de la Hepatitis B (VHB) constituyen una de las grandes problemáticas de salud pública a nivel mundial. En la actualidad la principal estrategia de prevención es una vacuna obtenida mediante la tecnología de ADN recombinante a partir de la expresión del gen viral que codifica el antígeno de superficie de la hepatitis B (HBsAg). En Argentina, esta vacuna está incorporada en el Calendario Nacional de Vacunación desde el año 2000, y es deber de la Autoridad Reguladora Nacional (ARN) verificar la calidad, seguridad y eficacia de cada lote liberado al mercado. Considerando que la determinación del contenido antigénico en vacunas representa uno de los ensayos esenciales de control de calidad y que, para ello, es necesario contar con metodologías estandarizadas que permitan obtener resultados reproducibles y confiables, en el Laboratorio de Inmunobiológicos del Instituto Nacional de Medicamentos se estandarizó un método para la identificación y cuantificación del HBsAg en vacunas contra la Hepatitis B empleando un kit comercial de ELISA cuyo uso clínico está previsto para la detección de HBsAg en suero o plasma humano. Para ello, se analizaron dos muestras: una preparación de antígeno HBsAg purificado y una vacuna contra la Hepatitis B ADN recombinante comercial y se evaluaron los parámetros de especificidad, exactitud, repetibilidad, precisión intermedia y linealidad. En todos los casos, se cumplieron con los criterios de aceptación establecidos para cada parámetro, por lo cual se concluye que la metodología analítica es adecuada para la identificación y cuantificación del HBsAg.
Subject(s)
In Vitro Techniques , Enzyme-Linked Immunosorbent Assay , Hepatitis B Vaccines , Vaccines, DNAABSTRACT
Las afecciones causadas por el Virus de la Hepatitis B (VHB) constituyen una de las grandes problemáticas de salud pública a nivel mundial. En la actualidad la principal estrategia de prevención es una vacuna obtenida mediante la tecnología de ADN recombinante a partir de la expresión del gen viral que codifica el antígeno de superficie de la hepatitis B (HBsAg). En Argentina, esta vacuna está incorporada en el Calendario Nacional de Vacunación desde el año 2000, y es deber de la Autoridad Reguladora Nacional (ARN) verificar la calidad, seguridad y eficacia de cada lote liberado al mercado. Considerando que la determinación del contenido antigénico en vacunas representa uno de los ensayos esenciales de control de calidad y que, para ello, es necesario contar con metodologías estandarizadas que permitan obtener resultados reproducibles y confiables, en el Laboratorio de Inmunobiológicos del Instituto Nacional de Medicamentos se estandarizó un método para la identificación y cuantificación del HBsAg en vacunas contra la Hepatitis B empleando un kit comercial de ELISA cuyo uso clínico está previsto para la detección de HBsAg en suero o plasma humano. Para ello, se analizaron dos muestras: una preparación de antígeno HBsAg purificado y una vacuna contra la Hepatitis B ADN recombinante comercial y se evaluaron los parámetros de especificidad, exactitud, repetibilidad, precisión intermedia y linealidad. En todos los casos, se cumplieron con los criterios de aceptación establecidos para cada parámetro, por lo cual se concluye que la metodología analítica es adecuada para la identificación y cuantificación del HBsAg.
Subject(s)
In Vitro Techniques , Enzyme-Linked Immunosorbent Assay , Hepatitis B Vaccines , Vaccines, DNAABSTRACT
Las afecciones causadas por el Virus de la Hepatitis B (VHB) constituyen una de las grandes problemáticas de salud pública a nivel mundial. En la actualidad la principal estrategia de prevención es una vacuna obtenida mediante la tecnología de ADN recombinante a partir de la expresión del gen viral que codifica el antígeno de superficie de la hepatitis B (HBsAg). En Argentina, esta vacuna está incorporada en el Calendario Nacional de Vacunación desde el año 2000, y es deber de la Autoridad Reguladora Nacional (ARN) verificar la calidad, seguridad y eficacia de cada lote liberado al mercado. Considerando que la determinación del contenido antigénico en vacunas representa uno de los ensayos esenciales de control de calidad y que, para ello, es necesario contar con metodologías estandarizadas que permitan obtener resultados reproducibles y confiables, en el Laboratorio de Inmunobiológicos del Instituto Nacional de Medicamentos se estandarizó un método para la identificación y cuantificación del HBsAg en vacunas contra la Hepatitis B empleando un kit comercial de ELISA cuyo uso clínico está previsto para la detección de HBsAg en suero o plasma humano. Para ello, se analizaron dos muestras: una preparación de antígeno HBsAg purificado y una vacuna contra la Hepatitis B ADN recombinante comercial y se evaluaron los parámetros de especificidad, exactitud, repetibilidad, precisión intermedia y linealidad. En todos los casos, se cumplieron con los criterios de aceptación establecidos para cada parámetro, por lo cual se concluye que la metodología analítica es adecuada para la identificación y cuantificación del HBsAg.
