Phenotypic profiles and detection of target genes by PCR in isolates from different sources and reference strains, identified as Cronobacter spp. (Enterobacter sakazakii)

Cronobacter, formerly known as Enterobacter sakazakii, is a novel genus of the Enterobacteriaceae family recognized as a cause of high number of fatal cases in neonates, after consuming infant formula. The conventional methods for detecting these organisms are time-consuming and lack sensitivity. The ISO/TS 22964:2006 is the most recently standardized methodology for detecting Cronobacter in powderedinfant formula. This study aimed at confirming the Brazilian isolates previously identified as E. sakazakiias Cronobacter spp. by biochemical assays, and also to compare characteristics of 37 Cronobacter andnon-Cronobacter isolates; and the miniaturized kits and the ISO/TS methodology were evaluated. A conventional PCR protocol targeting dna G was also developed and a previously described gluA targeting protocol was used. The majority of the Brazilian isolates were not confirmed as Cronobacter spp., and the selective enrichment step of ISO/TS methodology was inhibitory to some Cronobacter strains. The ID 32 Ewas the most reliable kit. The PCR protocol targeting gluA showed consistent results with ID 32E and the developed dnaG PCR protocol was 100% sensitive and specific. Thus, the PCR protocols targeting gluA and dnaG might be used to complement the Cronobacter spp. detection or identification after performing the conventional isolation and identification methods.

Characterization of Listeria monocytogenes isolated from a fresh mixed sausage processing line in Pelotas-RS by PFGE / Caracterização de Listeria monocytogenes isoladas em uma linha de processamento de lingüiça mista frescal em Pelotas-RS por PFGE

Listeria monocytogenes is a bacterium capable to adhere to the surfaces of equipment and utensils and subsequently form biofilms. It can to persist in the food processing environmental for extended periods of time being able to contaminate the final product. The aim of this study was to trace the contamination route of L. monocytogenes on a fresh mixed sausage processing line, from raw material to the final product. The isolates obtained were characterized by serotyping and molecular typing by pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) using the restriction enzymes ApaI and AscI. L. monocytogenes was detected in 25 percent of the samples. The samples of raw material were not contaminated, however, the microorganism was detected in 21 percent of the environmental samples (food contact and non-food contact), 20.8 percent of the equipments, 20 percent of the food worker's hands, 40 percent of the mass ready to packaging and in all the final products samples, demonstrating that the contamination of final product occurred during the processing and the importance of cross contamination. PFGE yielded 22 pulsotypes wich formed 7 clusters, and serotyping yielded 3 serotypes and 1 serogroup, however, the presence of serotypes 4b and 1/2b in the final product is of great concern for public health. The tracing of contamination showed that some strains are adapted and persisted in the processing environment in this industry.

Listeria monocytogenes é uma bactéria com capacidade de formar biofilmes e de colonizar superfícies de equipamentos e utensílios. Esse microrganismo pode persistir por longos períodos em plantas de processamento de alimentos, sendo capaz de contaminar o produto final. O objetivo deste estudo foi traçar a rota de contaminação de L. monocytogenes em uma linha de processamento de lingüiça mista frescal, desde a matéria-prima até o produto final. Os isolados obtidos foram caracterizados por sorotipagem e por tipagem molecular, através de Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE), usando as enzimas de restrição ApaI and AscI. L. monocytogenes foi detectada em 25 por cento das amostras. Nenhuma amostra da matéria-prima apresentava o patógeno, entretanto, o microrganismo foi detectado em 21 por cento das amostras ambientais (com e sem contato com o alimento), 20,8 por cento dos equipamentos, 20 por cento das amostras de mãos de manipuladores, 40 por cento da massa pronta para o embutimento, e em todas as amostras do produto final. Isso demonstra que a contaminação do produto final ocorreu durante o processamento, e a importância da contaminação cruzada. PFGE produziu 22 pulsotipos e a sorotipagem produziu 3 sorotipos e 1 sorogrupo, entretanto, a presença dos sorotipos 4b e 1/2b no produto final é de grande importância para a saúde pública. Os perfis de macrorestrição mostraram que algumas cepas são adaptadas e persistiram no ambiente de processamento dessa indústria.

Behaviour of L. monocytogenes in sliced, vacuum-packed mortadella / Comportamento de L. monocytogenes em mortadelas fatiadas e embaladas a vácuo

This study evaluated the growth of naturally occurring L. monocytogenes in sliced, vacuum-packed mortadella samples during storage at 5ºC until the expiration date. Tukey's test indicated that counts of L. monocytogenes on 0, 10, 20, 30 and 40 days of storage were significantly different (p<0.05), indicating growth during shelf life. In three trials, the mean increase was 1.72 log cycles. Vacuum packing and storage under refrigeration were not effective in controlling the growth of L. monocytogenes in sliced mortadella, indicating that good manufacturing practices and implemented HACCP programs are essential to assure safety of this product.

O presente trabalho avaliou a multiplicação de L. monocytogenes naturalmente presente em mortadelas fatiadas, embaladas a vácuo e estocadas a 5ºC durante sua vida de prateleira. O teste Tukey indicou que as populações de L. monocytogenes nos tempos 10, 20, 30 e 40 dias diferiram significativamente (p<0,05) indicando multiplicação durante o armazenamento. Em três repetições, o aumento médio foi de 1,80 ciclos log. A embalagem a vácuo e estocagem sob refrigeração não foram suficientes para o controle da multiplicação de L. monocytogenes em mortadelas fatiadas, indicando que as boas práticas de fabricação e um sistema HACCP implantado são fundamentais para assegurar a segurança desse produto.

Pheno- and genotypic characterization of Listeria monocytogenes clinical isolates from the southwestern region of the State of São Paulo, Brazil

Considering the lack of information available in Brazil concerning listeriosis, the present study aimed to analyze phenotypic and genotypically Listeria monocytogenes clinical isolates from the Southwestern region of the State of São Paulo, Brazil. From January 1995 to May 2005, thirteen isolates of L. monocytogenes from twelve patients with listeriosis were sent to the Adolfo Lutz Institute (Campinas Regional Laboratory, São Paulo, Brazil). The antimicrobial susceptibility of the isolates was evaluated by the microdilution broth method for ampicillin, gentamicin, trimethoprim, sulfamethoxazole and vancomycin. They were also serotyped (Denka Seiken, Japan), and sub-typed by PFGE employing ApaI and AscI and the American CDC protocol. None of the isolates showed resistance to the antibiotics tested; however, seven of them presented increased values for sulfamethoxazole MICs. Ten isolates belonged to serotype 4b, two to serotype 1/2a and only one to serotype 1/2b. After digestion with ApaI and AscI, the strains were distributed in 3 different groups according to their profile. It was observed that the spatial or temporally unrelated strains exhibited similar PFGE profiles, indicating a possible clonal relationship among them.

No Brasil, dados sobre a ocorrência de surtos ou casos esporádicos de listeriose são raros, assim como estudos que tratem da caracterização de cepas de L. monocytogenes isoladas destes episódios. Desta forma, o presente estudo teve por objetivo avaliar feno e genotipicamente 13 cepas de Listeria monocytogenes isoladas de 12 casos clínicos de listeriose ocorridos em 6 municípios da região sudoeste do Estado de São Paulo, Brasil, no período de janeiro de 1995 a maio de 2005. As cepas foram submetidas ao teste de sensibilidade a cinco antimicrobianos (ampicilina, gentamicina, trimetoprim, sulfametoxazol e vancomicina) pelo método de microdiluição em caldo; à sorotipagem (Denka Seiken, Japão) e à determinação do perfil de macro-restrição por eletroforese em campo pulsado (PFGE, Pulsenet, CDC, USA, 2001). Nenhuma das cepas foi resistente aos antimicrobianos testados; entretanto, sete tiveram valores da CIM aumentados para o sulfametoxazol. Dez cepas pertenciam ao sorotipo 4b, duas ao sorotipo 1/2a e apenas uma ao sorotipo 1/2b. Com o emprego da técnica de PFGE e as enzimas Apa I e Asc I as cepas foram separadas em três grupos diferentes, de acordo com seus perfis moleculares. É interessante destacar que cepas não relacionadas (temporal ou espacialmente) apresentaram perfis moleculares semelhantes indicando uma possível relação clonal entre elas.

Performance of two ready-to-use systems for enumeration of aerobic mesophilic microorganisms in frozen goat milk

Foi demonstrado que a enumeracão de microrganismos aeróbios em leite bovino brasileiro pasteurizado utilizando-se as placas PetrifilmTM AC e SimplateTM TPC pode ser influenciada pela microbiota autóctone. O presente estudo foi conduzido para se determinar se o mesmo ocorreria com leite de cabra pasteurizado. Foram analisadas 62 amostras de leite pasteurizado e congelado, vendidas no comércio varejista de São Paulo, SP. As amostras foram submetidas à contagem de microrganismos aeróbios mesófilos utilizando-se placas PetrifilmTM AC e SimplateTM TPC, comparando-se os resultados com a semeadura em profundidade. Um índice de correlacão acima de 0,90 foi classificado como excelente, entre 0,80 e 0,89 como bom, entre 0,79 e 0,50 como fraco, e abaixo de 0,50, como ruim. O índice de correlacão para as contagens em placas PetrifilmTM AC foi bom, mas foi ruim quando se usou as placas SimplateTM TPC. A comparacão entre os resultados obtidos com as placas PetrifilmTM AC e SimplateTM TPC também produziu um índice de correlacão ruim. Os resultados sugerem que a microbiota autóctone têm pouca ou nenhuma influência sobre a performance destes dois sistemas, pois boas correlacões foram obtidas com o uso das placas PetrifilmTM AC.

Rapid detection of Salmonella in foods using a combination of 'SPRINT POT TM`, 'MSRV POT TM` and Salmonella Latex 'TEST POT TEM`

A new procedure for rapid detection of Salmonella in foods, based on the combination of 'SPRINT POT.TM`, 'MSRV POT.TM` and Samonella Latex 'TEST POT.TM`, was evaluated. 'SPRINT POT.TM` is a system to reduce the preenrichment and selective enrichment steps to 24 hours. 'MSRV POT.TM`is semi-solid selective media for detection of motile Salmonella. Salmonella Latex 'TEST POT.TM` is a rapid latex agglutination test for Salmonella. Using the three systems in combination, the total time for detection of Salmonella in a food sample is 48h...

Inactivation of Escherichia coli O157: H7 in hamburgers by gamma irradiation

Escherichia coli O157:H7 causes bloody diarrhoea, haemorrhagic colitis and life-threatening complications like haemolytic uremic syndrome and thrombotic thrombocitopenic purpura. Among foods associated with outbreaks caused by this pathogen, hamburger is the most common one. The aim of this research was to determine the radiation dose to reduce the population of E. coli O157:H7 in hamburgers to non-detectable levels in order to render a safer product. Hamburgers, inoculated with Escherichia coli O157:H7, were exposed to gamma radiation (60Co) treatment, with doses ranging from 0 to 0.7 kGy. The average temperature during the process was 5.6§C. Non-inoculated hamburgers were submitted to sensory evaluation after being exposed to irradiation doses of 0.8 kGy and 1.0 kGy. The D10 for the pathogen varied from 0.17 kGy to O.27 kGy in hamburger. Considering the highest D10 value in hamburger, a dose of 1.08 kGy would be sufficient to reduce E. coli O157:H7 contamination in 4 log cycles, without affecting the sensory attributes of the product.

Biochemical characteristics of typical and atypical "Staphylococcus aureus" in mastitic milk and environmental samples of brazilian dairy farms

This study results on the biochemical characteristics of 274 "Staphylococcus aureus" strains isolated from mastitic milk, hands of milkmen and milking machines. Features included colony morphology on Baird Parker agar (BPA), catalase, coagulase, and thermonuclease tests. API-Staph (BioMérieux, France) was used as reference identification system. 39.4(per cent) of the colonies on BPA identified as "S. aureus" were atypical. They were more frequent in milk samples (94.4(per cent)). All "S. aureus" strains were coagulase positive but intensify of the test varied according to the source: enviromental strains were 3+ or 4+, while 17.1(per cent) of strains isolated from milk presented only 1+ or 2+ results. The majority of atypical "S. aureus" strains presented a 4+ coagulase result. 2.2(per cent) of "S. aureus" strains were thermonuclease negative. Sixteen thermonuclease positive and coagulase positive strains were identified as "S. hyicus"

Listeria monocytogenes em camarao (Penaeus brasiliensis): marcadores sorologicos e geneticos no monitoramento de sua disseminacao em uma unidade processadora de pescado / Listeria monocytogenes in shrimp (Penaeus brasiliensis): sorologics and genetics markers in the monitoring of the dissemination a processing unit of seafood

Amostras de camarao, ambiente, manipuladores, utensilios, agua e gelo, colhidas em uma unidade processadora de pescado, localizada em Santos, SP foram examinadas para a presenca de Listeria monocytogenes. A seguir empregando-se tecnicas de biologia molecular, como RADP e PFGE, buscou-se tracar a disseminacao do microrganismo na linha de processamento industrial de camarao rosa (Penaeus brasiliensis) da referida empresa. Comparando-se os perfis de DNA encontrados verificou-se que o camarao ja chega a empresa contaminado por L. monocytogenes de um determinado perfil genetico e que bacterias deste mesmo perfil puderam ser isoladas nas diversas etapas do processamento, inclusive do produto final. O mesmo perfil foi identificado em bacterias provenientes das maos dos manipuladores da area de processamento e do produto final. As cepas provenientes do ambiente apresentaram perfil genetico exclusivo, nao estando presente em nenhuma outra amostra

Comparaçäo de dois meios seletivos no isolamento de Listeria sp, a partir de alguns produtos lácteos e cárneos / comparison of two plating media for the isolation of listeria sp from some brazilian dairy and meat products

Resumo: Este trabalho tem por objetivo avaliar o desempenho de dois meios seletivos para o isolamento de listeria e L.monocytogenes.Utilizou-se a metodologia recomendada pelo United States Department of Agriculture-Food Safety and Inspection service(USDA-FSIS) que preconiza para o isolamento o ágar vogeljohnson modificado-MJV.um total de 140 amostras de produtos láteos e cárneos(20 por produto), coletadas em Campinas, SP, Brasil, foram analisadas.Os resultados demonstraram a superioridade do ágar MVJ no isolamento de L.monocytogenes e indicam a necessidade do uso de um meio de isolamento a fim de minimizar a ocorrência de resultados falso negativos.

Estudo da estabilidade de salsicha embalada a vácuo e pasteurizada / Study of stability of sausage vacuum packaging and pasteurized

A estabilidade de porçöes de 400g de salsicha com e sem corante (urucum), embalada a vácuo e pasteurizada, foi avaliada semanalmente durante 35 dias de estocagem sem luz a 3 ñ 2-C. Nesse período, o nível inicial de vácuo de 14 pol de Hg näo se alterou nas embalagens das salsichas sem corante, porém caiu até 10 pol de Hg no produto com corante. O volume de ar residual aumentou no interior das embalagens dos dois produtos, contudo mais intensamente nas embalagens de salsicha com corante, provavelmente devido à maior exsudaçäo, cujo líquido impediu um contato maior da embalagem com o produto, facilitando a entrada do ar. As análises de composiçäo gasosa do espaço-livre das embalagens mostraram uma reduçäo na concentraçäo de oxigênio com a estocagem, que pode ser associada à interaçäo do gás com o produto e o exsudado, mais pronunciada nas embalagens do produto com corante. Simultaneamente, a concentraçäo de nitrogênio aumentou devido à reduçäo no teor de oxigênio e à permeaçäo através da embalagem; o teor de gás carbônico näo se alterou. Quanto à estabilidade microbiológica, as contagens de psicrotróficos, bolores, leveduras e bactérias lácticas foram inferiores a 10* UFC/g de produto. A aparência geral do produto sem corante näo se alterou e a aparência das salsichas com corante atingiu o limite de aceitabilidade após 29 dias de estocagem. Portanto, verificou-se uma vida-de-prateleira de 29 dias para salsichas com corante, embalada a vácuo e pasteurizadas, limitada pela aparência geral do produto e constatou-se que a qualidade das salsichas sem corante se manteve inalterada durante 35 dias a 3 ñ 2-C, na ausência de luz