Fluorescence in situ hybridization (FISH) as an irreplaceable diagnostic tool for Williams-Beuren syndrome in developing countries: a literature review / Hibridização in situ fluorescente (FISH) como ferramenta diagnóstica insubstituível para a síndrome de Williams-Beuren em países em desenvolvimento: uma revisão de literatura

ABSTRACT Objective: The aim of this study was to sum up and characterize all Williams-Beuren syndrome cases diagnosed by fluorescence in situ hybridization (FISH) since its implementation, as well as to discuss FISH as a cost-effective methodology in developing countries. Data source: From January 1986 to January 2022, articles were selected using the databases in PubMed (Medline) and SciELO. The following terms were used: Williams syndrome and In Situ Hybridization, Fluorescence. Inclusion criteria included Williams-Beuren syndrome cases diagnosed by FISH with a stratified phenotype of each patient. Only studies written in English, Spanish, and Portuguese were included. Studies with overlapping syndromes or genetic conditions were excluded. Data synthesis After screening, 64 articles were included. A total of 205 individuals with Williams-Beuren syndrome diagnosed by FISH were included and further analyzed. Cardiovascular malformations were the most frequent finding (85.4%). Supravalvular aortic stenosis (62.4%) and pulmonary stenosis (30.7%) were the main cardiac alterations described. Conclusions: Our literature review reinforces that cardiac features may be the key to early diagnosis in Williams-Beuren syndrome patients. In addition, FISH may be the best diagnostic tool for developing nations that have limited access to new technologic resources.

RESUMO Objetivo: Caracterizar todos os casos de síndrome de Williams-Beuren (SWB) diagnosticados por hibridização in situ fluorescente (FISH) desde sua implementação, assim como discutir a relação custo-benefício da metodologia de FISH em países em desenvolvimento. Fontes de dados: Entre janeiro de 1986 e janeiro de 2022 foi realizada uma busca nas bases de dados PubMed (Medical Literature Analysis and Retrieval System Online — Medline) e Scientific Electronic Library Online (SciELO) usando os seguintes termos: síndrome de Williams e hibridização in situ fluorescente. O critério de inclusão utilizado foi conter a descrição detalhada de caso(s) de SWB por FISH. Apenas estudos escritos em inglês, espanhol e português foram incluídos. Trabalhos que apresentavam sobreposição de síndromes/condições genéticas foram excluídos. Síntese dos dados: Após os processos de inclusão, 64 artigos e 205 indivíduos com SWB diagnosticados por meio do método de FISH foram incluídos. O achado mais frequente entre os indivíduos foi a presença de algum tipo de malformação cardíaca (85,4%). A estenose aórtica supravalvar (62,4%) e a estenose pulmonar (30,7%) foram as alterações cardíacas mais descritas. A maioria dos estudos era proveniente dos continentes Europa, Ásia e América do Norte. Conclusões: A presente revisão de literatura reitera que as malformações cardíacas podem ser a chave para o diagnóstico precoce em pacientes com SWB. Ainda, a técnica de FISH parece ser a melhor ferramenta de diagnóstico para os países em desenvolvimento, cujo acesso às novas tecnologias ainda é escasso.

Assessment of the nitrification process in a culture of pacific white shrimp, using artificial substrate and bacterial inoculum in a biofloc technology system (BFT) / Avaliação do processo de nitrificação no cultivo do camarão branco do pacífico Litopenaeus vannamei com uso de substrato artificial e inóculo de bactérias em sistema de bioflocos (BFT)

Litopenaeus vannamei is the most cultured marine shrimp in all types of systems including the Bioflocs Technology System (BFT). Bioflocs are formed by microorganisms, among these, autotrophic bacteria are responsible for the nitrification process. This study aimed to identify and promote the development of nitrifying bacteria by adding artificial substrates and biofloc inoculum in L. vannamei culture in a BFT system. The experiment consisted of four treatments with three replics (4x3) as follows: (1) Control: clear water in which bioflocs were formed; (2) IN (10%): clear water with biofloc inoculum (10%); (3) IB: clear water with substrate (immature bioballs); and (4) MB: clear water with mature bioballs inoculum from a recirculation system. Treatments were stocked with shrimp juveniles (4.92±0.45 g) in 12 tanks with 200 L working volume at a stocking density of 200 shrimp/m³. Shrimps were fed twice a day with a commercial feed (38% CP) following a feeding table, and daily observations intake were made over the four weeks of the experiment. Biofloc and bioballs samples were collected to detect the growth of the population of nitrifying and heterotrophic bacteria by FISH. There was no significant difference between treatments (P>0.05) for survival, obtaining mean values greater than 88%. The IN (10%) treatment had lower concentrations of ammonia and nitrite, and nitrate concentration increased, while MB had a higher weight and biomass final, productivity, weekly weight gain and lower conversion of apparent feed for production performance results.(AU)

Litopenaeus vannamei é o camarão marinho mais cultivado em todos os tipos de sistemas, incluindo o Sistema de Tecnologia de Bioflocos (BFT). Os bioflocos são formados por microorganismos, entre estes, bactérias autotróficas que são responsáveis pelo processo de nitrificação. Este estudo teve como objetivo identificar e promover o desenvolvimento de bactérias nitrificantes pela adição de substratos artificiais e inóculo de bioflocos no cultivo de L. vannamei em sistema BFT. O experimento consistiu de quatro tratamentos com três repetições (4x3), sendo: (1) Controle: água limpa, na qual foram formados os bioflocos; (2) IN (10%): água limpa com inóculo de bioflocos (10%); (3) BI: água limpa com substrato (bioballs imaturos); e (4) BM: água limpa com inóculo de bioballs maduros de um sistema de recirculação. Para tanto, os tratamentos foram estocados com juvenis de camarão (4,92±0,45 g) em 12 tanques com 200 L de volume útil com densidade de 200 camarões/m³. Os camarões foram alimentados duas vezes ao dia com ração comercial (38% PB) seguindo uma tabela de alimentação, e observações diárias foram feitas ao longo das quatro semanas de experimento. Amostras de bioflocos e bioballs foram coletadas para detectar o crescimento da população de bactérias nitrificantes e heterotróficas por FISH. Não houve diferença significativa entre os tratamentos (P>0,05) para sobrevivência, obtendo-se valores médios superiores a 88%. O tratamento com IN (10%) apresentou menores concentrações de amônia e nitrito, e a concentração de nitrato aumentou, enquanto o BM apresentou maior peso e biomassa final, produtividade, ganho de peso semanal e menor conversão alimentar aparente para resultados de desempenho zootécnico.(AU)

Chromosomal distribution of the retroelements Rex 1, Rex 3 and Rex 6 in species of the genus Harttia and Hypostomus (Siluriformes: Loricariidae)

The transposable elements (TE) have been widely applied as physical chromosome markers. However, in Loricariidae there are few physical mapping analyses of these elements. Considering the importance of transposable elements for chromosomal evolution and genome organization, this study conducted the physical chromosome mapping of retroelements (RTEs) Rex1, Rex3 and Rex6 in seven species of the genus Harttia and four species of the genus Hypostomus, aiming to better understand the organization and dynamics of genomes of Loricariidae species. The results showed an intense accumulation of RTEs Rex1, Rex3 and Rex6 and dispersed distribution in heterochromatic and euchromatic regions in the genomes of the species studied here. The presence of retroelements in some chromosomal regions suggests their participation in various chromosomal rearrangements. In addition, the intense accumulation of three retroelements in all species of Harttia and Hypostomus, especially in euchromatic regions, can indicate the participation of these elements in the diversification and evolution of these species through the molecular domestication by genomes of hosts, with these sequences being a co-option for new functions.(AU)

Os elementos transponíveis (TE) têm sido amplamente aplicados como marcadores cromossômicos. Contudo, em Loricariidae, há poucas análises de mapeamento físico destes elementos. Considerando a importância de elementos transponíveis para a evolução cromossômica e organização genômica, este trabalho realizou o mapeamento físico cromossômico dos retroelementos (RTEs) Rex1, Rex3 e Rex6 em sete espécies do gênero Harttia e em quatro espécies do gênero Hypostomus, com o intuito de melhor compreender a organização e dinâmica dos genomas das espécies de Loricariidae. Os resultados evidenciaram um intenso acúmulo dos RTEs Rex1, Rex3 e Rex6 e distribuição dispersa em regiões heterocromáticas e eucromáticas no genoma das espécies estudadas. A presença de retroelementos em algumas regiões cromossômicas sugere sua participação em vários rearranjos cromossômicos. Além disso, o intenso acúmulo dos três retroelementos em todas as espécies de Harttia e Hypostomus, especialmente em regiões eucromáticas, pode indicar a participação destes elementos na diversificação e evolução destas espécies através da domesticação molecular pelo genoma dos hospedeiros, com estas sequências sendo co-optadas paras novas funções.(AU)

Chromosomal distribution of the retroelements Rex 1, Rex 3 and Rex 6 in species of the genus Harttia and Hypostomus (Siluriformes: Loricariidae)

The transposable elements (TE) have been widely applied as physical chromosome markers. However, in Loricariidae there are few physical mapping analyses of these elements. Considering the importance of transposable elements for chromosomal evolution and genome organization, this study conducted the physical chromosome mapping of retroelements (RTEs) Rex1, Rex3 and Rex6 in seven species of the genus Harttia and four species of the genus Hypostomus, aiming to better understand the organization and dynamics of genomes of Loricariidae species. The results showed an intense accumulation of RTEs Rex1, Rex3 and Rex6 and dispersed distribution in heterochromatic and euchromatic regions in the genomes of the species studied here. The presence of retroelements in some chromosomal regions suggests their participation in various chromosomal rearrangements. In addition, the intense accumulation of three retroelements in all species of Harttia and Hypostomus, especially in euchromatic regions, can indicate the participation of these elements in the diversification and evolution of these species through the molecular domestication by genomes of hosts, with these sequences being a co-option for new functions.(AU)

Os elementos transponíveis (TE) têm sido amplamente aplicados como marcadores cromossômicos. Contudo, em Loricariidae, há poucas análises de mapeamento físico destes elementos. Considerando a importância de elementos transponíveis para a evolução cromossômica e organização genômica, este trabalho realizou o mapeamento físico cromossômico dos retroelementos (RTEs) Rex1, Rex3 e Rex6 em sete espécies do gênero Harttia e em quatro espécies do gênero Hypostomus, com o intuito de melhor compreender a organização e dinâmica dos genomas das espécies de Loricariidae. Os resultados evidenciaram um intenso acúmulo dos RTEs Rex1, Rex3 e Rex6 e distribuição dispersa em regiões heterocromáticas e eucromáticas no genoma das espécies estudadas. A presença de retroelementos em algumas regiões cromossômicas sugere sua participação em vários rearranjos cromossômicos. Além disso, o intenso acúmulo dos três retroelementos em todas as espécies de Harttia e Hypostomus, especialmente em regiões eucromáticas, pode indicar a participação destes elementos na diversificação e evolução destas espécies através da domesticação molecular pelo genoma dos hospedeiros, com estas sequências sendo co-optadas paras novas funções.(AU)

Assessment of the nitrification process in a culture of pacific white shrimp, using artificial substrate and bacterial inoculum in a biofloc technology system (BFT) / Avaliação do processo de nitrificação no cultivo do camarão branco do pacífico Litopenaeus vannamei com uso de substrato artificial e inóculo de bactérias em sistema de bioflocos (BFT)

ABSTRACT: Litopenaeus vannamei is the most cultured marine shrimp in all types of systems including the Bioflocs Technology System (BFT). Bioflocs are formed by microorganisms, among these, autotrophic bacteria are responsible for the nitrification process. This study aimed to identify and promote the development of nitrifying bacteria by adding artificial substrates and biofloc inoculum in L. vannamei culture in a BFT system. The experiment consisted of four treatments with three replics (4x3) as follows: (1) Control: clear water in which bioflocs were formed; (2) IN (10%): clear water with biofloc inoculum (10%); (3) IB: clear water with substrate (immature "bioballs"); and (4) MB: clear water with mature "bioballs" inoculum from a recirculation system. Treatments were stocked with shrimp juveniles (4.92±0.45 g) in 12 tanks with 200 L working volume at a stocking density of 200 shrimp/m³. Shrimps were fed twice a day with a commercial feed (38% CP) following a feeding table, and daily observations intake were made over the four weeks of the experiment. Biofloc and "bioballs" samples were collected to detect the growth of the population of nitrifying and heterotrophic bacteria by FISH. There was no significant difference between treatments (P>0.05) for survival, obtaining mean values greater than 88%. The IN (10%) treatment had lower concentrations of ammonia and nitrite, and nitrate concentration increased, while MB had a higher weight and biomass final, productivity, weekly weight gain and lower conversion of apparent feed for production performance results.

RESUMO: Litopenaeus vannamei é o camarão marinho mais cultivado em todos os tipos de sistemas, incluindo o Sistema de Tecnologia de Bioflocos (BFT). Os bioflocos são formados por microorganismos, entre estes, bactérias autotróficas que são responsáveis pelo processo de nitrificação. Este estudo teve como objetivo identificar e promover o desenvolvimento de bactérias nitrificantes pela adição de substratos artificiais e inóculo de bioflocos no cultivo de L. vannamei em sistema BFT. O experimento consistiu de quatro tratamentos com três repetições (4x3), sendo: (1) Controle: água limpa, na qual foram formados os bioflocos; (2) IN (10%): água limpa com inóculo de bioflocos (10%); (3) BI: água limpa com substrato ("bioballs" imaturos); e (4) BM: água limpa com inóculo de "bioballs" maduros de um sistema de recirculação. Para tanto, os tratamentos foram estocados com juvenis de camarão (4,92±0,45 g) em 12 tanques com 200 L de volume útil com densidade de 200 camarões/m³. Os camarões foram alimentados duas vezes ao dia com ração comercial (38% PB) seguindo uma tabela de alimentação, e observações diárias foram feitas ao longo das quatro semanas de experimento. Amostras de bioflocos e "bioballs" foram coletadas para detectar o crescimento da população de bactérias nitrificantes e heterotróficas por FISH. Não houve diferença significativa entre os tratamentos (P>0,05) para sobrevivência, obtendo-se valores médios superiores a 88%. O tratamento com IN (10%) apresentou menores concentrações de amônia e nitrito, e a concentração de nitrato aumentou, enquanto o BM apresentou maior peso e biomassa final, produtividade, ganho de peso semanal e menor conversão alimentar aparente para resultados de desempenho zootécnico.

Mycoplasma hyorhinis infection in early cases of mycoplasmal pneumonia in swine and evaluation of diagnostic assays / Infecção por Mycoplasma hyorhinis em casos precoces de pneumonia micoplásmica em suínos e comparação entre técnicas diagnósticas

Mycoplasmal pneumonia is an important disease in the pig industry. Due to the controversial role of Mycoplasma hyorhinis in this disease, confirmation of the presence of this bacterium and the identification of its roles in respiratory disease remain major challenges. The objectives of this study were to evaluate the presence of M. hyorhinis in early cases of mycoplasmal pneumonia and to determine the usefulness of fluorescent in situ hybridization (FISH) for the diagnosis of respiratory mycoplasmosis in naturally infected pigs. Ninety M. hyopneumoniae and/or M. hyorhinis-infected lung tissue samples based on diagnostic mosaic (DM) were used. The average age of the animals was 116 and 57 days (P<0.01) for groups 1 (positive-M. hyopneumoniae only) and 2 (positive-M. hyorhinis only), respectively. These findings suggest that development of lesions caused by M. hyorhinis occurs earlier than for M. hyopneumoniae. Using the DM as the gold standard, the sensitivity and specificity of FISH for M. hyopneumoniae were 75 and 100%, respectively, and were 40 and 73.3% for the immunohistochemistry (IHC). The sensitivity and specificity of FISH for M. hyorhinis were 76.7 and 100%, respectively. These findings demonstrate that FISH can be a useful tool for diagnosing mycoplasmosis. Viral antigens (PCV2 or influenza A) were detected in 53.3% (16/30) of the samples in group 2 (M. hyorhinis-PCR positive) and 13.3% (4/30) of the samples in group 1 (M. hyopneumoniae-PCR positive). This finding indicates that the association of M. hyorhinis and viral infection in nursery pigs likely starts due to a viral immunosuppressive condition.(AU)

A pneumonia micoplásmica causada por bactérias do gênero Mycoplasma é uma enfermidade de grande importância para indústria suinícola, sendo ainda controverso o papel desempenhado por Mycoplasma hyorhinis nessa doença. A confirmação da presença dessas bactérias bem como a identificação de seus papéis em doenças respiratórias continua sendo um grande desafio. Os objetivos desse estudo foram comparar diferentes técnicas, em especial a de hibridização fluorescente in situ (FISH), para diagnóstico de micoplasmoses respiratória em suínos naturalmente infectados e avaliar a presença do M. hyorhinis em casos precoces de pneumonia micoplásmica. Foram utilizadas 90 amostras de tecido pulmonar infectado para cada um ou ambos os agentes (M. hyopneumoniae e M. hyorhinis) determinados pelo mosaico de diagnóstico (sinais clínicos, lesões macroscópicas e microscópicas e pela PCR). No grupo de animais positivos pela PCR apenas para M. hyorhinis (Grupo 2) a média da idade foi de 57,32 dias e no grupo apenas positivo para M. hyopneumoniae (Grupo 1) a média foi de 116,31 dias (P<0,01). Estes achados sugerem que a colonização e o aparecimento de lesões causadas pelo M. hyorhinis seja mais precoce do que aquelas causadas pelo M. hyopneumoniae. As alterações microscópicas foram estatisticamente (P<0,01) mais intensas no grupo 1 do que no grupo 2. Usando o mosaico de diagnóstico como padrão ouro, a sensibilidade e especificidade na FISH para M. hyopneumoniae foi de 75 e 100%, respectivamente, e 40 e 73,3%, na imuno-histoquímica. A sensibilidade e especificidade da FISH para M. hyorhinis foi de 76,7 e 100%. Esses valores demonstram que a FISH pode ser uma ferramenta útil para diagnóstico de micoplasmoses. Foi detectada a presença de agentes virais (PCV2 ou influenza) em 53,3% das amostras do grupo 2 (M. hyorhinis) e em 13,3% das amostras do grupo 1 (M. hyopneumoniae).(AU)

Mycoplasma hyorhinis infection in early cases of mycoplasmal pneumonia in swine and evaluation of diagnostic assays / Infecção por Mycoplasma hyorhinis em casos precoces de pneumonia micoplásmica em suínos e comparação entre técnicas diagnósticas

Mycoplasmal pneumonia is an important disease in the pig industry. Due to the controversial role of Mycoplasma hyorhinis in this disease, confirmation of the presence of this bacterium and the identification of its roles in respiratory disease remain major challenges. The objectives of this study were to evaluate the presence of M. hyorhinis in early cases of mycoplasmal pneumonia and to determine the usefulness of fluorescent in situ hybridization (FISH) for the diagnosis of respiratory mycoplasmosis in naturally infected pigs. Ninety M. hyopneumoniae and/or M. hyorhinis-infected lung tissue samples based on diagnostic mosaic (DM) were used. The average age of the animals was 116 and 57 days (P<0.01) for groups 1 (positive-M. hyopneumoniae only) and 2 (positive-M. hyorhinis only), respectively. These findings suggest that development of lesions caused by M. hyorhinis occurs earlier than for M. hyopneumoniae. Using the DM as the gold standard, the sensitivity and specificity of FISH for M. hyopneumoniae were 75 and 100%, respectively, and were 40 and 73.3% for the immunohistochemistry (IHC). The sensitivity and specificity of FISH for M. hyorhinis were 76.7 and 100%, respectively. These findings demonstrate that FISH can be a useful tool for diagnosing mycoplasmosis. Viral antigens (PCV2 or influenza A) were detected in 53.3% (16/30) of the samples in group 2 (M. hyorhinis-PCR positive) and 13.3% (4/30) of the samples in group 1 (M. hyopneumoniae-PCR positive). This finding indicates that the association of M. hyorhinis and viral infection in nursery pigs likely starts due to a viral immunosuppressive condition.(AU)

A pneumonia micoplásmica causada por bactérias do gênero Mycoplasma é uma enfermidade de grande importância para indústria suinícola, sendo ainda controverso o papel desempenhado por Mycoplasma hyorhinis nessa doença. A confirmação da presença dessas bactérias bem como a identificação de seus papéis em doenças respiratórias continua sendo um grande desafio. Os objetivos desse estudo foram comparar diferentes técnicas, em especial a de hibridização fluorescente in situ (FISH), para diagnóstico de micoplasmoses respiratória em suínos naturalmente infectados e avaliar a presença do M. hyorhinis em casos precoces de pneumonia micoplásmica. Foram utilizadas 90 amostras de tecido pulmonar infectado para cada um ou ambos os agentes (M. hyopneumoniae e M. hyorhinis) determinados pelo mosaico de diagnóstico (sinais clínicos, lesões macroscópicas e microscópicas e pela PCR). No grupo de animais positivos pela PCR apenas para M. hyorhinis (Grupo 2) a média da idade foi de 57,32 dias e no grupo apenas positivo para M. hyopneumoniae (Grupo 1) a média foi de 116,31 dias (P<0,01). Estes achados sugerem que a colonização e o aparecimento de lesões causadas pelo M. hyorhinis seja mais precoce do que aquelas causadas pelo M. hyopneumoniae. As alterações microscópicas foram estatisticamente (P<0,01) mais intensas no grupo 1 do que no grupo 2. Usando o mosaico de diagnóstico como padrão ouro, a sensibilidade e especificidade na FISH para M. hyopneumoniae foi de 75 e 100%, respectivamente, e 40 e 73,3%, na imuno-histoquímica. A sensibilidade e especificidade da FISH para M. hyorhinis foi de 76,7 e 100%. Esses valores demonstram que a FISH pode ser uma ferramenta útil para diagnóstico de micoplasmoses. Foi detectada a presença de agentes virais (PCV2 ou influenza) em 53,3% das amostras do grupo 2 (M. hyorhinis) e em 13,3% das amostras do grupo 1 (M. hyopneumoniae).(AU)

Produção in vitro de embriões bovinos com sêmen congelado após prévia infecção com Herpesvirus bovino tipo 5 / In vitro production of bovine embryos with frozen semen previously infected with bovine Herpesvirus type 5 before sperm freezing

O Herpesvirus bovino tipo 5 (BoHV-5) tem sido recentemente descrito no sêmen contaminado. Apesar de ter sido identificado no sêmen bovino, sua influência na produção de embriões in vitro não foi ainda relatada. O presente estudo teve como objetivo verificar a susceptibilidade de oócitos bovinos maturados e fertilizados invitro, com sêmen congelado, infectado experimentalmente com BoHV-5, antes da congelação, avaliando-se o desenvolvimento embrionário subsequente e o possível carreamento do vírus para o embrião via espermatozoide. Ejaculados de touro foram misturados e divididos em dois grupos: Grupo I, sêmen não exposto ao vírus e, Grupo II, sêmen exposto ao vírus. A presença do BoHV-5 foi investigada através de PCR e teste de hibridização in situ (ISH). Os dados foram analisados através de Teste-t de Student com P< 0,05 considerado como significativo. O vírus foi detectado em embriões avaliados com 168 h pós-inseminação. Não houve diferença significativa entre os diferentes grupos de tratamento para as taxas de produção in vitro de embriões para os respectivos estágios de desenvolvimento. Assim, conclui-se que, o sêmen contaminado com o BoHV-5 pode infectar os oócitos durante a fertilização in vitro, com carreamento do vírus para os embriões, não afetando, porém, o seu desenvolvimento in vitro.(AU)

Bovine herpesvirus type 5 (BoHV-5) has been recently described from contaminated semen. Despite having been identified in bovine semen, its transmission through use of infected fresh semen, just before freezing, on the in vitro embryo production has not yet been reported so far. Thus, this study was carried out to investigate the susceptibility of matured bovine oocytes to BoHV-5 infection after using frozen semen previously exposed to the virus, and their ability to develop for advanced blastocyst stages following in vitro fertilization (IVF). Ejaculates from bulls were mixed and divided into two groups, as follows: Group 1, semen not exposed to the virus, and Group 2, infected sperm. The presence of BoHV-5 was investigated by PCR and in situ hybridization assays. Results were analyzed through use of Student t - test with P < 0.05 considered as significant. The virus was detected in blastocysts evaluated at 168 h post-insemination. There was no significant difference between groups for the in vitro embryo production at any developmental stage. Thus, it is concluded that semen infected with BoHV-5 can infect oocytes during IVF, with the virus transmission to embryos via sperm; however, embryonic development was not impaired, as evidenced by the subsequent blastocyst formation.(AU)

Produção in vitro de embriões bovinos com sêmen congelado após prévia infecção com Herpesvirus bovino tipo 5 / In vitro production of bovine embryos with frozen semen previously infected with bovine Herpesvirus type 5 before sperm freezing

O Herpesvirus bovino tipo 5 (BoHV-5) tem sido recentemente descrito no sêmen contaminado. Apesar de ter sido identificado no sêmen bovino, sua influência na produção de embriões in vitro não foi ainda relatada. O presente estudo teve como objetivo verificar a susceptibilidade de oócitos bovinos maturados e fertilizados invitro, com sêmen congelado, infectado experimentalmente com BoHV-5, antes da congelação, avaliando-se o desenvolvimento embrionário subsequente e o possível carreamento do vírus para o embrião via espermatozoide. Ejaculados de touro foram misturados e divididos em dois grupos: Grupo I, sêmen não exposto ao vírus e, Grupo II, sêmen exposto ao vírus. A presença do BoHV-5 foi investigada através de PCR e teste de hibridização in situ (ISH). Os dados foram analisados através de Teste-t de Student com P< 0,05 considerado como significativo. O vírus foi detectado em embriões avaliados com 168 h pós-inseminação. Não houve diferença significativa entre os diferentes grupos de tratamento para as taxas de produção in vitro de embriões para os respectivos estágios de desenvolvimento. Assim, conclui-se que, o sêmen contaminado com o BoHV-5 pode infectar os oócitos durante a fertilização in vitro, com carreamento do vírus para os embriões, não afetando, porém, o seu desenvolvimento in vitro.

Bovine herpesvirus type 5 (BoHV-5) has been recently described from contaminated semen. Despite having been identified in bovine semen, its transmission through use of infected fresh semen, just before freezing, on the in vitro embryo production has not yet been reported so far. Thus, this study was carried out to investigate the susceptibility of matured bovine oocytes to BoHV-5 infection after using frozen semen previously exposed to the virus, and their ability to develop for advanced blastocyst stages following in vitro fertilization (IVF). Ejaculates from bulls were mixed and divided into two groups, as follows: Group 1, semen not exposed to the virus, and Group 2, infected sperm. The presence of BoHV-5 was investigated by PCR and in situ hybridization assays. Results were analyzed through use of Student t - test with P < 0.05 considered as significant. The virus was detected in blastocysts evaluated at 168 h post-insemination. There was no significant difference between groups for the in vitro embryo production at any developmental stage. Thus, it is concluded that semen infected with BoHV-5 can infect oocytes during IVF, with the virus transmission to embryos via sperm; however, embryonic development was not impaired, as evidenced by the subsequent blastocyst formation.

Investigação da amplificação do EGFR em carcinoma de células escamosas de boca em pacientes jovens / Investigation of polysomy and amplification of EGFR in oral squamous cell carcinoma

O carcinoma de células escamosas (CEC) de boca é uma neoplasia incomum em pacientes jovens. Na literatura de língua inglesa não há relatos de estudos que investiguem a amplificação do EGFR e a expressão desta proteína neste grupo etário. O objetivo deste estudo foi investigar a amplificação do EGFR através da técnica de hibridização por fluorescência in situ (FISH) e correlacionar os resultados obtidos através da imunomarcação da proteína EGFR com a epidemiologia e com o prognóstico dos pacientes avaliados. Ao final dos testes de FISH e imunohistoquímicos,21 amostras do grupo teste (pacientes ≤ 40 anos) e 39 amostras do grupo controle (pacientes ≥ 50 anos) foram consideradas adequadas para avaliação. As variáveis clínicas e anatomopatológicas foram comparadas pelos testes Qui-Quadrado ou exato de Fisher. A expressão do marcador EGFR e do método de FISH foi comparada entre os grupos por meio do teste não paramétrico de Mann-Whitney. As curvas de sobrevida foram calculadas utilizando o método de Kaplan-Meier e suas curvas foram comparadas através do teste de log-rank. Houve maior número de pacientes do sexo masculino, leucodermas, tabagistas e etilistas.A amplificação do EGFR foi maior no grupo teste (p = 0,018). A amplificação do EGFR associou-se estatisticamente com a variável estadiamento clínico avançado (p = 0,013), independente do grupo. A expressão da proteína EGFR correlacionou-se com tumores bem diferenciados (p = 0,011) e a presença de metástase (p = 0,035),independente da idade. A presença de amplificação foi mais frequente no grupo tese. Alguns casos de pacientes ≥40 anos de idade podem ser adequados ao emprego da terapia anti-EGFR, devido à amplificação do EGFR

Oral squamous cell carcinoma (OSCC) is uncommon neoplasia in young patients. In the English literature, there are no reports of studies that investigate the amplification of EGFR and expression of this protein in this age group. The aim of this study was to investigate the amplification ofEGFR by fluorescence in situ hybridization (FISH) and to correlate the results by immunostaining of EGFR protein with clinico pathological features and prognosis. After FISH and immunohistochemistry, 21 samples of the test group (≤ 40 years) and 39 samples of control group (≥ 50 years) were suitable for evaluating. Categorical variables were compared by the Pearson chi-square test or Fisher's exact test. Associations between protein levels and FISH results with clinicopathological characteristics of the patients were analyzed by Mann-Whitney U test. Survival rates were calculated using the Kaplan-Meier method and the curves were comparedby the log-rank test. There was predominance for male patients,leucoderma, smoking and alcohol consumption. The EGFR amplification was higher in the test group (p = 0.018) and it was associated statistically with advanced clinical stage (p = 0.013), independent of the group. Theexpression of EGFR protein was correlated to well differentiated tumors (p= 0.011) and presence of metastasis (p = 0.035), regardless of age.Presence of EGFR amplification and/or expression. Some cases of patients≥40 years old might be suitable for anti-EGFR therapy because of EGFR amplification

Clinical and cytogenetic features of a Brazilian sample of patients with phenotype of oculo-auriculo-vertebral spectrum: a cross-sectional study / Características clínicas e citogenéticas de uma amostra brasileira de pacientes com fenótipo de espectro óculo-aurículo-vertebral: um estudo transversal

CONTEXT AND OBJECTIVE: Oculo-auriculo-vertebral spectrum (OAVS) is considered to be a defect of embryogenesis involving structures originating from the first branchial arches. Our objective was to describe the clinical and cytogenetic findings from a sample of patients with the phenotype of OAVS. DESIGN AND SETTING: Cross-sectional study in a referral hospital in southern Brazil. METHODS: The sample consisted of 23 patients who presented clinical findings in at least two of these four areas: orocraniofacial, ocular, auricular and vertebral. The patients underwent a clinical protocol and cytogenetic evaluation through high-resolution karyotyping, fluorescence in situ hybridization for 5p and 22q11 microdeletions and investigation of chromosomal instability for Fanconi anemia. RESULTS: Cytogenetic abnormalities were observed in three cases (13%) and consisted of: 47,XX,+mar; mos 47,XX,+mar/46,XX; and 46,XX,t(6;10)(q13; q24). We observed cases of OAVS with histories of gestational exposition to fluoxetine, retinoic acid and crack. One of our patients was a discordant monozygotic twin who had shown asymmetrical growth restriction during pregnancy. Our patients with OAVS were characterized by a broad clinical spectrum and some presented atypical findings such as lower-limb reduction defect and a tumor in the right arm, suggestive of hemangioma/lymphangioma. CONCLUSIONS: We found a wide range of clinical characteristics among the patients with OAVS. Different chromosomal abnormalities and gestational expositions were also observed. Thus, our findings highlight the heterogeneity of the etiology of OAVS and the importance of these factors in the clinical and cytogenetic evaluation of these patients. .

CONTEXTO E OBJETIVO: O espectro oculoauriculovertebral (EOAV) é considerado um defeito de embriogênese envolvendo estruturas originadas a partir dos primeiros arcos branquiais. Nosso objetivo foi descrever os achados clínicos e citogenéticos de uma amostra de pacientes com fenótipo de EOAV. TIPO DE ESTUDO E LOCAL: Estudo transversal em um hospital de referência no sul do Brasil. MÉTODOS: A amostra foi composta de 23 pacientes que apresentaram achados clínicos em pelo menos duas das quatro áreas: orocraniofacial, oculares, auriculares e vertebrais. Os pacientes foram submetidos a um protocolo clínico e avaliação citogenética através do cariótipo de alta resolução, hibridização in situ fluorescente para as microdeleções 5p e 22q11 e pesquisa de instabilidade cromossômica para anemia de Fanconi. RESULTADOS: Alterações citogenéticas foram observadas em três casos (13%) e consistiam de: 47,XX,+mar; mos 47,XX,+mar/46,XX e 46,XX,t(6;10)(q13;q24). Observamos casos de EOAV com história de exposição gestacional à fluoxetina, ácido retinoico e crack. Um dos nossos pacientes foi um gêmeo monozigótico discordante que teve restrição de crescimento assimétrica durante a gravidez. Nossos pacientes com EOAV foram caracterizados por um amplo espectro clínico e alguns apresentaram achados clínicos atípicos como um defeito de redução de membro inferior e um tumor do braço direito, sugestivo de hemangioma/linfangioma. CONCLUSÕES: Verificamos grande variedade de características clínicas entre os pacientes com EOAV. Também foram observadas diferentes anomalias cromossômicas e exposições gestacionais. Assim, nossos achados salientam a heterogeneidade da etiologia do EOAV e a importância desses fatores na avaliação clínica e citogenética desses pacientes. .

Molecular biology techniques for loss of heterozygosity detection: the glioma example / Técnicas de biologia molecular para avaliação da perda de heterozigosidade: o exemplo em glioma

ABSTRACT In recent years, many oncology institutions have implemented the use of molecular approaches to assess and manage cancer patients. One commonly observed type of genetic alteration in cancer is the loss of heterozygosity (LOH). In the clinical setting, this molecular genetic marker is an important tool for disease prognosis, diagnosis and treatment. For example, the loss of 1p/19q is a classical molecular marker for oligodendroglioma assessment. In addition, this marker is associated with a favorable prognosis and chemosensitivity in oligodendroglial tumors. Interpretation of the clinical significance of molecular markers requires that health professionals and biomedical scientists understand the basic theoretical fundamentals of molecular diagnostic techniques. Although there are different methodologies to assess LOH, including high-performance techniques, this review aims to describe the polymerase chain reaction (PCR)-based LOH assays and fluorescence in situ hybridization (FISH), which are the molecular techniques most used for evaluation of 1p/19q status in pathology laboratories.

RESUMO Nos últimos anos, instituições de oncologia têm implementado o uso de abordagens moleculares para avaliar e conduzir pacientes com câncer. O tipo mais comum de alteração encontrada no câncer é a perda de heterozigosidade (LOH). Na clínica, esse marcador molecular pode ter importância para o prognóstico, o diagnóstico e/ou na decisão do tratamento. Por exemplo, a perda de 1p/19q é um marcador molecular clássico para a avaliação do oligodendroglioma. Além disso, esse marcador está associado ao prognóstico favorável e à quimiossensibilidade em tumores oligodendrogliais. A interpretação do significado clínico dos marcadores moleculares exige que os profissionais da área da saúde entendam os fundamentos básicos teóricos das técnicas de diagnóstico molecular. Embora existam diferentes metodologias para avaliar a LOH, inclusive técnicas de alta performance, esta revisão tem o objetivo de descrever o ensaio de LOH com base na reação da cadeia da polimerase (PCR) e a hibridização in situ fluorescente (FISH), que são as técnicas moleculares mais usadas para avaliação do status 1p/19q em laboratórios de patologia.

Análise do gene PTEN por hibridização in situ fluorescente no carcinoma de células renais / Analysis of PTEN gene by fluorescent in situ hybridization in renal cell carcinoma

OBJETIVO: avaliar a frequência de deleção do gene PTEN no carcinoma de células renais e o impacto da deleção nas taxas de sobrevida global e livre de doença. MÉTODOS: foram analisados 110 pacientes portadores de carcinoma de células renais submetidos à nefrectomia radical ou parcial entre os anos de 1980 e 2007. Em 53 casos foi possível a análise do gene PTEN pelo método de hibridização in situ fluorescente através da técnica de "tissue microarray". Para a análise estatística, os pacientes foram classificados em dois grupos, de acordo com a presença ou ausência de deleção. RESULTADOS: o tempo médio de seguimento foi de 41,9 meses. Deleção hemizigótica foi identificada em 18 pacientes (33,9%), ao passo que deleção homozigótica esteve presente em três (5,6%). Em aproximadamente 40% dos casos analisados havia deleção. Monossomia e trissomia foram detectadas, respectivamente, em nove (17%) e dois pacientes (3,8%). Em 21 pacientes (39,6%), a análise por hibridização in situ do gene PTEN foi normal. Não houve diferenças estatisticamente significativas nas taxas de sobrevida global (p=0,468) e livre de doença (p=0,344) entre os pacientes portadores ou não de deleção. Foram fatores independentes para a sobrevida global: estádio clínico TNM, sintomatologia ao diagnóstico, alto grau de Fuhrmann performance status (Ecog) e recorrência tumoral. A livre de doença foi influenciada unicamente pelo estádio clínico TNM. CONCLUSÃO: deleção do gene PTEN no CCR foi detectada com frequência de aproximadamente 40% e sua presença não foi determinante de menores taxas de sobrevida, permanecendo os fatores prognósticos tradicionais como determinantes da evolução dos pacientes.

OBJECTIVE: To evaluate the frequency of deletion of the PTEN gene in renal cell carcinoma (RCC) and its impact on the rates of overall and disease-free survival. METHODS: We analyzed 110 patients with renal cell carcinoma who underwent radical or partial nephrectomy between 1980 and 2007. In 53 cases it was possible to analyse the PTEN gene by the method of fluorescent in situ hybridization using the technique of tissue microarray. For statistical analysis, patients were classified in two groups according to the presence or absence of the deletion. RESULTS: The mean follow-up time was 41.9 months. Hemizygous deletion was detected in 18 patients (33.9%), while the homozygous one was present in three (5.6%). Deletion was present in approximately 40% of the analyzed cases. Monosomy and trisomy were detected in nine (17%) and two patients (3.8%), respectively. In 21 patients (39.6%) the analysis of the PTEN gene by in situ hybridization was normal. There were no statistically significant differences in overall (p = 0.468) and disease-free (p = 0.344) survival rates between patients with or without deletion. Factors which were independent for overall survival: TNM clinical stage, symptoms at diagnosis, high Fuhrmann grade, performance status (ECoG) and tumor recurrence. Disease-free survival was influenced only by the clinical TNM stage. CONCLUSION: Deletion of the PTEN gene in RCC was detected with a frequency of approximately 40% and its presence was not determinant of lower survival rates, the traditional prognostic factors remaining as determinants of outcome.

Avaliação de diferentes métodos de hibridização in situ para a definição do status de amplificação do gene HER2 em neoplasias da mama / Evaluation of different methods of in situ hybridization to determine the status of HER2 gene amplification in breast neoplasms

Introdução: O método de hibridização in situ fluorescente (FISH), amplamente validado na literatura, representa o padrão de ouro para a avaliação do status de amplificação do HER2 no câncer de mama. Novos métodos baseados em microscopia de campo claro de hibridização in situ de dupla marcação (BDISHs ­ do inglês Brightfield Dual-probe in situ Hybridization) foram desenvolvidos como alternativas para o FISH. O objetivo do presente estudo foi avaliar a aplicabilidade dos métodos de BDISH para a análise do status de HER2 como linha de frente em amostras de câncer de mama. Material e Métodos: 320 amostras de carcinoma ductal invasivo da mama (IDC) que passaram por condições não controladas de fixação e processamento histológico, foram selecionadas dos arquivos de duas instituições diferentes do Brasil. Todos os casos selecionados foram utilizados para a construção de um TMA. O anticorpo 4B5 (Ventana) foi utilizado para a realização da imunoistoquímica (IIQ). FISH (Vysis) foi utilizado como padrão ouro de análise, enquanto as técnicas DuoCISH (DAKO), ZytoDot CISH (ZytoVision) e SISH (Ventana) foram comparadas. Resultados: A maior concordância observada foi entre SISH e FISH. Essa técnica mostrou alta sensibilidade (100%) e alta especificidade (100%) com relação ao FISH, sem ocorrência de casos falso positivos e falso negativos. Além disso, o SISH foi mais facilmente avaliável em casos de baixa amplificação e borderline quando comparado com os outros métodos cromogênicos, devido à nitidez da sua marcação. Essa técnica mostrou também alta sensibilidade (100%) e alta especificidade (100%). O DuoCISH produziu resultados falso-positivos (11,2%), associados à marcação mais intensa e mal definida dos pontos, dificultando a distinção entre baixa amplificação e borderline. O ZytoDot CISH apresentou menor sensibilidade (93,6%), com aumento da incidência de resultados falso-positivos (12,7%). Conclusão: SISH é o mais confiável dos métodos de BDISH, com sensibilidade e especificidade altamente comparável ao FISH. Também é o mais reprodutível entre os métodos de BDISH, produzindo sinais mais distintos e, portanto, mais facilmente analisável, mesmo em tecido mal conservado.

validated in the literature, is the gold standard for assessment of HER2 amplification status in breast cancer. New methods brightfield microscopybased dual in situ hybridization (BDISH) have been developed as alternatives to FISH. The aim of this study was to evaluate the applicability of BDISH methods for analysis of HER2 status as the front line in breast cancer samples. Material and Methods: 320 samples of breast invasive ductal carcinoma (IDC) that passed through uncontrolled conditions of fixation and histological processing were selected from the files of two different institutions in Brazil. All selected cases were used for the construction of a TMA. The antibody 4B5 (Ventana) was used to perform immunohistochemistry (IIQ). FISH (Vysis) was used as the gold standard of analysis, while DuoCISH (DAKO), ZytoDot CISH (ZytoVision) and SISH (Ventana) techniques were compared. Results: The highest agreement was observed between SISH and FISH. This technique showed high sensitivity (100%) and high specificity (100%) compared to FISH, without occurrence of false positives and false negatives. Furthermore, SISH was easily assessable in borderline and low amplified cases when compared with other chromogenic methods due to the sharpness of their marking. DuoCISH produced false-positive results (11,2%) associated with more intense staining and ill-defined spots, making it difficult to distinguish between low amplification and borderline. ZytoDot CISH showed lower sensitivity (93,6%), with increased incidence of false-positive results (12,7%). Conclusion: SISH is the most reliable BDISH methods, with sensitivity and specificity highly comparable with FISH. It is also the most reproducible between the BDISH methods, producing signals more distinct and therefore more readily analyzable even in poorly preserved tissue.

Buschke -Loewenstein tumor: identification of HPV type 6 and 11 / Condiloma acuminado gigante de Buschke-Lowenstein: identificação dos HPV 6 e 11

The authors report a case of exuberant giant condyloma acuminatum of Buschke-Loewenstein in a male patient, slow-growing, progressive and with locally destructive behavior in the inguinal, body of the penis, scrotum, perineal and perianal regions. After surgery he showed no signs of recurrence in 20 months of follow-up. The identification of HPV types 6 and 11 was performed using in situ hybridization.

Os autores relatam um caso exuberante de condiloma acuminado gigante de Buschke-Lowenstein, em paciente do sexo masculino, de crescimento lento e progressivo e de comportamento destrutivo das regiões inguinal, corpo do pênis, escroto, perineal e perianal. Após tratamento cirúrgico, não apresentou sinais de recidiva em 20 meses de seguimento. A identificação dos HPVs, tipos 6 e 11, foi realizada através da técnica de hibridização in situ.

Avaliação proteica e gênica da família dos receptores EGF/HER e seu prognóstico em pacientes com câncer de endométrio tipo I / [Immunohistochemical expression and gene status of EGF/HER family as prognostic factors in type I endometrial cancer

Introdução: O câncer de endométrio é a terceira neoplasia ginecológica mais frequente, sendo diagnosticados cerca de 287.000 casos no ano de 2011 e responsável por cerca de 33.000 óbitos nos países desenvolvidos. Apresenta heterogeneidade clínica, epidemiológica e genética, e pode ser classificada em tipo 1- adenocarcinomas endometrióides (estrogênio dependente) e tipo 2- adenocarcinomas não endometrióides. Os receptores da família EGF/HER, são proteínas transmembrana responsáveis pelo controle de importantes vias da carcinogênese e são compostos pelo EGFR, HER-2, HER-3 e HER-4. Esses receptores encontram-se com expressão aumentada em várias neoplasias malignas e tem ganhado destaque por serem potenciais alvos para novas drogas de combate ao câncer. Objetivos: O presente estudo tem como objetivos: 1) Avaliar a expressão protéica de EGFR, HER-2, HER-3 e HER-4 através de imunoistoquímica, avaliar e o número de cópias dos genes EGFR, HER-2, HER-3 e HER-4 através de FISH (fluorescent in situ hybridization); 2) Correlacionar a expressão protéica dos receptores e a avaliação do número de copias dos genes de EGFR, HER-2, HER-3 e HER-4 com as variáveis clínico-patológicas; 3) Correlacionar a expressão proteica dos receptores e a avaliação do número de copias dos genes de EGFR, HER-2, HER-3 e HER-4 com sobrevida livre de doença, sobrevida câncer-específica e sobrevida. Material e método: Foi avaliada uma série retrospectiva de 218 pacientes admitidas no Departamento de Ginecologia do Hospital do Câncer A.C. Camargo, no período de 1990 à 2008, com diagnóstico de adenocarcinoma endometrióide do endométrio. Realizou-se a construção de tissue microarray, teste de FISH (hibridação in situ fluorescente), e estudo imunoistoquímico. Resultados: Houve expressão imunoistoquímica para EGFR, HER-2, HER-4 em 0,9%, 1,4%, 6,3% dos casos. No caso do HER-3, houve expressão em citoplasma e núcleo em 60,2% e 37,2% dos casos, respectivamente. O número de cópias dos genes EGFR, HER-2, HER-3 e HER-4 através de FISH foram encontrados alterados em 12,6%, 7,6%, 10,7% e 3,0% dos casos, respectivamente. A expressão imunoistoquímica de EGFR correlacionou-se com presença invasão perineural. Não houve associação entre as expressões de HER-2, HER-3 e HER-4 com as variáveis clínico-patológicas. A presença de alteração do número de cópias do gene HER-2 apresentou associação com a presença de invasão vascular sanguínea e invasão &*8805; 50% do miométrio. A alteração do número de cópias do gene HER-3 apresentou associação com: IMC &*8805; 30, presença de invasão vascular linfática e tamanho do tumor &*8805; 2cm. As alterações no número de cópias de EGFR e HER-4 não tiveram associação com as variáveis clínico-patológicas. A expressão imunoistoquímica positiva de EGFR apresentou associação com pior sobrevida livre de doença (p < 0,001) na análise univariada. As expressões imunoistoquímicas positivas de HER-2, HER-3 e HER-4 não tiveram impacto estatisticamente significativo em sobrevida global, sobrevida câncer-específica e sobrevida livre de doença na análise univariada. A presença de alterações dos números de cópias dos genes dos receptores da família EGF não tiveram impacto nas sobrevida global, sobrevida câncer-específica e sobrevida livre de doença na análise univariada. Porém, a alteração do número de cópias de HER-2 mostrou-se fator de risco independente para recidiva na análise multivariada. Conclusões: Houve expressão imunoistoquímica para EGFR, HER-2, HER-4 em 0,9%, 1,4%, 6,3% dos casos. No caso do HER-3, houve expressão em citoplasma e núcleo em 60,2% e 37,2% dos casos, respectivamente. A expressão imunoistoquímica positiva de EGFR apresentou associação com pior sobrevida livre de doença na análise univariada. O número de cópias dos genes EGFR, HER-2, HER-3 e HER-4 através de FISH foram encontrados alterados em 12,6%, 7,6%, 10,7% e 3,0% dos casos, respectivamente. A alteração do número de cópias de HER-2 mostrou-se fator de risco independente para recidiva na análise multivariada.

Introduction: Endometrial cancer is the third more common gynecologic cancer in women. About 287,000 cases were diagnosed in 2011 and it was responsable for 33,000 deaths in the western world. It may be classified as type I ­ endometrioid endometrial cancer, estrogen related; and type II ­ nonendometrioid endometrial cancer. EGF/HER family receptors are transmembrane proteins responsable for important carcinogenic and are divided by: EGFR, HER-2, HER-3 e HER-4. These receptors are overexpressed in various malignant neoplasms are are potential molecular targets. Objectives: 1) Evaluate the immunohistochemical expression of EGFR, HER-2, HER-3 and HER-4, and gene status of EGFR, HER-2, HER-3 and HER-4 using FISH (fluorescent in situ hybridization); 2) Correlate the immunohistochemical expression and gene status of EGFR, HER-2, HER-3 and HER-4 with clinical-pathological variables. 3) Evaluate the immunohistochemical expression and gene status of EGFR, HER-2, HER-3 and HER-4 as prognostic factors. Materials and methods: A retrospective analysis was performed in a series of 218 patients with endometrioid endometrial câncer, admitted in the Gynecologic Department of Hospital do Câncer A.C. Camargo, between 1990 to 2008. Results: The immunohistochemical expression of EGFR, HER-2, and HER-4 were found in 0,9%, 1,4%, 6,3% of cases, respectively. For HER-3, there were cytoplasmic and nuclear expression in 60,2% and 37,2% of cases, respectively. The gene status of EGFR, HER-2, HER-3 e HER-4 by FISH were altered in 12,6%, 7,6%, 10,7%, and 3,0% of cases, respectively. The immunohistochemical expression of EGFR correlated with the presence of perineural invasion. There was no correlation between the immunohistochemical expression of HER-2, HER-3, HER-4 and clinical-pathological variables. The altered number of HER-2 gene copies correlated with the presence of vascular invasion and deep miometrial invasion. The presence of HER-3 altered gene copies correlated with BMI ≥ 30, presence of lymphatic invasion and tumor size of ≥ 2cm. The altered number of EGFR and HER-4 gene copies did not correlate with the clinical-pathological variables. The immunohistochemical expression of EGFR correlated with worse disease free survival in univariate analysis (p < 0,001). The immunohistochemical expressions of HER-2, HER3 and HER-4 had no impact in survival. The presence of EGF family altered gene copies did not correlate with survival in univariate analysis. However, the presence of HER-2 altered gene copies correlated with the increase risk of recurrence in multivariate analysis. Conclusions: The immunohistochemical expression of EGFR, HER-2, and HER-4 were found in 0,9%, 1,4%, 6,3% of cases, respectively. For HER-3, there were cytoplasmic and nuclear expression in 60,2% and 37,2% of cases, respectively. The immunohistochemical expression of EGFR correlated with worse disease free survival in univariate analysis. The gene status of EGFR, HER-2, HER-3 e HER-4 by FISH were altered in 12,6%, 7,6%, 10,7%, and 3,0% of cases, respectively. The presence of HER-2 altered gene copies correlated with the increase risk of recurrence in multivariate analysis.

Avaliação do gene e da proteína TOP2A em leiomiossarcomas uterinos através das técnicas de imunoistoquímica e de FISH / Evaluation of the number of copies of the TOP2A gene and its protein expression in uterine leiomyosarcoma

Leiomiossarcoma corresponde a apenas 1 a 2% das neoplasias uterinas, porém apresenta alta morbimortalidade e seu prognóstico pouco tem mudado nos últimos anos. O quadro clínico assemelha-se com tumores uterinos benignos e exames de imagem ainda não são confiáveis para fazer o diagnóstico. Sua sarcogênese não está compreendida, assim como não está claro qual é a célula progenitora. O tratamento primário permanece cirúrgico e a influência da quimioterapia é incerta. Entre os quimioterápicos mais ativos destacam-se os antracíclicos, que agem no bloqueio do TOP2A. Objetivo: Desta forma objetivamos estudar o gene TOP2A e sua proteína em leiomiossarcomas uterinos e sua relação com características clinicopatológias, bem como com a sobrevida. Metodologia: As informações clínicas de pacientes com leiomiossarcoma uterino foram resgatadas dos prontuários médicos do Hospital A.C. Camargo no período de 1982 a 2010 e o material anatomopatológico foi revisto e reclassificado e posteriormente submetido a estudos imunoistoquímico e de FISH para análise do TOP2A. A casuística compreendeu um total de 37 pacientes. Resultados: A idade mediana foi de 50,2 anos e o seguimento mediano foi de 21 meses. A alta expressão da proteína Top2A estava presente 56,8% das pacientes. O número de cópias do gene TOP2A estava alterado em 36,7% das pacientes, estando a amplificação presente em 72,7% dos casos. A análise univariada mostrou que tamanho do tumor e estadiamento têm impacto na sobrevida global e somente o estadiamento tem impacto na sobrevida livre de doença. Índice mitótico maior do que 20 associ ou-se com alta expressão da proteína em 70,8% dos casos e estádio precoce associou-se com a baixa expressão da proteína Top2A em 61% dos casos. Não houve correlação estatisticamente significativa do número de cópias do gene TOP2A e da sua proteína. Conclusão: Tamanho do tumor e estadiamento mostraram-se indicadores prognósticos válidos de leiomiossarcoma uterino na análise univariada. A expressão da proteína Top2A está associada com índice mitótico e com estadiamento da neoplasia.

Leiomyosarcomas account for only 1-2% of uterine cancers, but have high morbimortality and their prognosis has changed little in recent years. The clinical profile consists of benign uterine tumors and imaging exams are still not reliable for making a definitive diagnosis. The sarcogenesis of leiomyosarcomas is not understood as well as the precise nature of the progenitor cell remains unclear. Primary treatment remains surgical and the influence of adjuvant chemotherapy is uncertain. Standing out among the most active agents are anthracyclines, which act to block TOP2A. Thus, we aimed to study the TOP2A gene and its protein in uterine leiomyosarcoma and their relationship to features clinical and pathology as well as survival. Clinical information of patients with uterine leiomyosarcomas were taken from medical records of Hospital A.C. Camargo in the period from 1982 to 2010 and the anatomopathologic material was reviewed and reclassified and subsequently subjected to immunohistochemistry and FISH studies for the analysis of TOP2A. The cases selected for study consisted of 37 patients. The median age was 50.2 years and the median follow-up was 21 months. The high expression of the protein was present Top2A 56.8% of patients. The number of copies of the TOP2A gene was abnormal in 36.7% of patients, and amplifying present in 72.7% of cases.Univariate analysis showed that tumor size and staging had an impact on overall survival and that only staging had an impact on disease-free survival. Mitotic index greater than 20 was associated with high protein expression in 70.8% of cases and was associated with an early stage with low protein expression Top2A in 61% of cases. There was no correlation between the TOP2A number of copies of the gene and Top2A protein expression. Tumor size and staging proved to be valid prognostic indicators of uterine leiomyosarcoma and Top2A protein expression is associated with mitotic index and staging.

Dermatofibrossarcoma protuberans: análise dos marcadores de proliferação celular, invasividade e apoptose, estudo da fusão de COL-1α1/PDGF--ß; por FISH e correlação com a recidiva / Dermatofibrosarcoma protuberans: analysis of markers of cell proliferation, invasiveness and apoptosis, study of fusion COL1α1/PDGF-ß by FISH and correlation with relapse

Introdução: O dermatofibrossarcoma protuberans é um tumor de baixa incidência e apresenta controvérsias em seu manejo. Não costuma ser letal mas o tratamento pode ser mutilador para o paciente. Objetivos: Avaliar as características dos pacientes, do tratamento realizado, as expressões imunoistoquímicas de marcadores de invasividade, apoptose e proliferação celular, e a presença da fusão dos genes COL-IA1/PDGF-ß por FISH e correlacioná-los com o prognóstico. Métodos: Foi realizado análise retrospectiva de prontuários de 61 pacientes com dermatofibrossarcoma, assim como foi realizado revisão de todos blocos de parafina. As lâminas foram escaneadas no Scanscope e avaliadas pelo software Aperio. Para detecção das translocações foi utilizado fluorescência por hibridização in situ. Resultados: Dos 61 pacientes tratados, apenas 6 apresentaram recidivas. Nenhum paciente operado com margens de segurança de pelo menos 3 cm apresentou recorrência (p=0,014). Nesta análise, houve apenas uma recidiva em pacientes tratados com margem cirúrgica de pelo menos 2 cm, havendo diferença estatística quando comparado com pacientes tratados com margens menores que 2 cm. Dentre os pacientes operados no HACC, os que receberam o primeiro tratamento no HACC apresentaram taxa de recidiva menor do que pacientes recidivados após tratamento em outro hospital, porém não houve significância estatística (p=0,387). A frequência de translocações nestes pacientes foi de 77,8%, valor inferior aos 90% descritos na literatura. Pacientes que apresentavam a translocação tiveram recorrência de 5,7%, enquanto os pacientes sem a translocação tiveram recorrência de 30% (p=0,065). Os marcadores imunoistoquímicos não se relacionaram com a taxa de recorrência, mas quando considerado pacientes tratados com margens menores que 3 cm houve relação com a expressão do FASL (p=0,048). Conclusões: As margens cirúrgicas mostraram correlação com a recorrência em pacientes com dermatofibrossarcoma, porém margens de segurança de 2 cm foram aceitáveis para o tratamento, ao contrário da recomendação tradicional de 3 cm. Margens menores que 2 cm estão relacionadas com maior taxa de recorrência. Dentre os marcadores imunoistoquímicos pesquisados, apenas o FASL correlacionou-se com taxa de recorrência em pacientes com margens de segurança menores que 3 cm. A presença da translocação cromossômica parece ter influência no prognóstico, porém é necessário uma amostra maior para uma análise estatística mais fidedigna.

Introduction: Dermatofibrosarcoma protuberans is a tumor with low incidence and present controversies in its management. It is not usually lethal but treatment can be mutilating to the patient. Objectives: To evaluate patient characteristics, treatment performed, the immunohistochemical expression of markers of invasiveness, apoptosis and cell proliferation, and the presence of fusion genes COL-IA1/PDGF-ß by FISH and correlate them with prognosis. Methods: We conducted a retrospective analysis of medical records of 61 patients with dermatofibrosarcoma and all paraffin blocks was reviwed. The slides were scanned by the Scanscope and evaluated by Aperio software. For detection of translocations, it was used fluorescence in situ hybridization. Results: Of 61 patients, only 6 had relapses. No patient operated with a safety margin of at least 3 cm had recurrence (p = 0.014). In this analysis, there was only one recurrence in patients treated with surgical margins of at least 2 cm, with a statistical difference when compared with patients treated with margins smaller than 2 cm. Among patients operated on HACC, those who received first treatment in HACC had lower relapse rate than patients relapsed after treatment at another hospital, but there was no statistical significance (p = 0.387). The frequency of translocations in these patients was 77.8%, lower than the 90% reported in the literature. Patients with the translocation had recurrence of 5.7%, while patients without the translocation had recurrence of 30% (p = 0.065). The immunohistochemical markers did not correlate with the recurrence rate, but when considered patients with margins less than 3 cm there was relation with the expression of FASL (p = 0.048). Conclusions: The surgical margins correlated with recurrence in patients with dermatofibrosarcoma, but a safety margin of 2 cm were acceptable for treatment, unlike the traditional recommendation of 3 cm. Margins smaller than 2 cm are associated with higher recurrence rate. Among the immunohistochemical markers studied, only the FASL correlated with recurrence rate in patients with security margins lesser than 3 cm. The presence of chromosomal translocation seems to influence prognosis, but a larger sample is needed for a statistical analysis more reliable.

Síndrome de deleção 22q11.2 e cardiopatias congênitas / 22q11.2 deletion syndrome and congenital heart defects

OBJETIVO: Revisar as características clínicas, etiológicas e diagnósticas da síndrome de deleção 22q11 e sua associação com as cardiopatias congênitas. FONTES DOS DADOS: Foram pesquisados artigos científicos presentes nos portais Medline, Lilacs e SciELO, utilizando-se descritores específicos como "22q11", "DiGeorge syndrome", "velocardiofacial syndrome", "congenital heart defects" e "cardio-vascular malformations". O período adotado para a revisão foi de 1980 a 2009. SÍNTESE DOS DADOS: As malformações cardíacas são os defeitos congênitos observados mais frequentemente ao nascimento e representam um problema importante de Saúde Pública. Dentre suas principais causas conhecidas destaca-se a síndrome de deleção 22q11, também chamada de síndrome de DiGeorge, síndrome velocardiofacial e CATCH22. Trata-se de uma doença autossômica domi-nante caracterizada por um fenótipo altamente variável, o que dificulta em muito seu reconhecimento clínico. Além disso, a maior parte dos pacientes apresenta uma microdeleção identificada principalmente por técnicas de citogenética molecular, como a hibridização in situ fluorescente, pouco disponíveis em nosso meio. De forma similar a outras síndromes, a síndrome de deleção 22q11 associa-se a certos defeitos cardíacos específicos, no caso os do tipo conotruncal. Apesar disso, não há ainda na literatura um consenso sobre quais os pacientes com car-diopatia congênita que deveriam ser investigados para a síndrome de deleção 22q11. CONCLUSÕES: Cardiologistas e cirurgiões cardíacos, espe-cialmente pediátricos, devem estar cientes das peculiaridades e dos cuidados dispensados à síndrome de deleção 22q11. Os indivíduos com a síndrome apresentam comumente alterações envolvendo vários sistemas, o que pode levar a dificuldades e a complicações durante seu manejo clínico e cirúrgico.

OBJECTIVE: To review clinical, etiological and diagnostic characteristics of the 22q11 deletion syndrome and its as-sociation with congenital heart defects. DATA SOURCES: Medline, Lilacs and SciELO databases were searched from 1980 to 2009 using specific descrip-tors as "22q11", "DiGeorge syndrome", "velocardiofacial syndrome", "congenital heart defects" and "cardiovascular malformations". DATA SYNTHESIS: Heart malformations are the most fre-quent congenital defects at birth and represent an important Public Health problem. The 22q11 deletion syndrome, also called DiGeorge syndrome, velocardiofacial syndrome and CATCH22, stands out as one of the main known causes of congenital heart defects. This is an autosomal dominant genetic disease characterized by a highly variable phenotype, which renders its difficult clinical identification. In addition, the majority of the patients present a microdeletion identified mainly by molecular cytogenetic techniques as fluorescent in situ hybridization, which are rarely available in Brazil. Similarly to other syndromes, 22q11 deletion syndrome is associated to some specific heart defects, espe-cially conotruncal. It is still not clear which patients with congenital heart defect should be screened for 22q11 dele-tion syndrome. CONCLUSIONS: Cardiologists and cardiac surgeons, particu-larly the pediatric ones, must be aware about the features and health care related to 22q11 deletion syndrome. Subjects with the syndrome very often present abnormalities of mul-tiple systems, that could result in difficulties and complica-tions during their clinical and surgical course.

Síndrome de deleção 22q11 e cardiopatias congênitas complexas / 22q11.2 deletion syndrome and complex congenital heart defects

OBJETIVO: Verificar a frequência da síndrome de deleção 22q11 (SD22q11) entre pacientes portadores de cardiopatia congênita do tipo complexa. MÉTODOS: A amostra foi constituída por uma coorte prospectiva e consecutiva de pacientes com cardiopatia complexa em sua primeira hospitalização em uma unidade de tratamento intensivo cardiológica de um hospital pediátrico. Para cada paciente foi preenchida uma ficha de avaliação, com coleta de dados clínicos, e realizado o cariótipo de alta resolução e técnica de hibridização in situ fluorescente (FISH) com pesquisa de microdeleção 22q11. Os defeitos cardíacos foram classificados por um cardiologista participante do estudo. RESULTADOS: A amostra foi composta de 66 pacientes. Quanto à análise cariotípica, alterações foram observadas em cinco pacientes (7,6 por cento); contudo, nenhum deles apresentava deleção 22q11. A avaliação pela técnica de FISH pôde ser realizada com sucesso em 65 pacientes, sendo que a microdeleção 22q11 foi identificada em dois (3,1 por cento). Dos 66 pacientes com defeitos complexos, 52 eram portadores de malformações do tipo conotruncal, sendo que em 51 a pesquisa para microdeleção 22q11 foi realizada. Os dois pacientes portadores da microdeleção 22q11 fizeram parte deste grupo, representando uma frequência de 3,9 por cento. Eles apresentavam tetralogia de Fallot. CONCLUSÃO: A SD22q11 é uma anormalidade frequente entre pacientes com cardiopatias congênitas complexas e conotruncais. Variações da frequência da SD22q11 entre os estudos parecem estar associadas, principalmente, com a forma adotada para a seleção da amostra e às características da população em análise.

OBJECTIVE: Investigate the frequency of 22q11 deletion syndrome among patients with complex congenital heart disease. METHODS: A prospective and consecutive cohort of patients with complex heart defects was evaluated in their first hospitalization at a cardiac intensive care unit of a pediatric hospital. For each patient a protocol of demographic and clinical evaluation was filled. High resolution karyotype and 22q11 microdeletion by fluorescence in situ hybridization was investigated. The heart defects were classified by a cardiologist of the study. RESULTS: The cohort comprised 66 patients. Karyotypic anomalies were observed in 5 patients (7.6 percent), however none of those was the 22q11 deletion. Evaluation by means of FISH was successful in 65 patients and 22q11 microdeletion was identified in 2 (3.1 percent). Of the 66 patients with complex defects, 52 were carriers of conotruncal malformations and in 51 the 22q11 microdeletion analysis by FISH was successful. Both 22q11 microdeletion carriers belonged to this group, representing a frequency of 3.9 percent. They presented tetralogy of Fallot. CONCLUSION: 22q11DS is a frequent abnormality among patients with complex and conotruncal heart defects. Variations of the 22q11DS frequency among studies seem to be mainly associated to criteria for patient selection and specific characteristics of the population in analysis.